紫外分光光度法测定未知物
紫外吸收光谱法鉴定未知样及测定苯酚的含量
紫外吸收光谱法鉴定未知样及测定苯酚的含量一、实验目的1、掌握紫外光谱法进行物质定性、定量分析的基本原理；2、学习UV-1700型紫外--可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。
物质结构不同对紫外及可见光的吸收具有选择性。
其中，最大吸收波长/、摩尔吸收系数&及吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。
本实验通过比较最大吸收波长和最大吸收波长与其所对应的吸光度的比值的一致性来鉴定化合物，我们首先从文献上查得这3种物质的紫外紫外吸收光谱数据，现如下表所列。
在紫外分光光度计上分别作3种物质水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出加ax与其对应的吸光度的比值，与表上所列数据进行对照，再比较加ax及吸光度比值是否一致，即可判断是何种物质。
由于在入max处吸光度A有最大值，在此波长下A随浓度的变化最为明显，方法的灵敏度最大，故在紫外分光光度计上作苯酚水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出入max据此对物质进行定量分析。
用紫外分光光度计进行定量分析时，若被分析物质浓度太低或太高，可使透光率的读数扩展10倍或缩小10倍，有利于低浓度或高浓度的分析，其方法原理是依据朗伯-比耳定律：A=g bc。
三、仪器与试剂（1）仪器：UV-1700型紫外-可见分光光度计；1cm石英吸收池2个；50mL比色管5支;5mL、10mL移液管各1支;25mL容量瓶6个；100mL、250mL烧杯各1个；吸耳球2个。
（2）试剂：苯酚标准溶液：100mg/L ;待测苯酚样品溶液（未知浓度）样品溶液：A液、B液、C液（浓度为3X10-3mol/L）四、实验内容与步骤1、定性分析(1)分析溶液的配制用移液管准确移取1mL未知液B液于25mL容量瓶中，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。
取5个25mL的容量瓶，用移液管分别准确加入I.OmL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL浓度为1OOmg/L的苯酚标准溶液，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。
紫外-可见分光光度法测定未知物（中职）
紫外-可见分光光度法测定未知物(中职)一、仪器 1．紫外可见分光光度计(UV-1800PC-DS)；配1cm 石英比色皿2个（比色皿可以自带）；2．容量瓶：100mL10个；50mL10个；3．吸量管：10mL ，6支，二、试剂1．标准溶液：选择水杨酸、苯甲酸、磺基水杨酸、1-10邻菲啰啉、维生素c 五种标准试剂溶液中的三种。
2．未知液：三种标准溶液中的一种。
三、实验操作1．吸收池配套性检查石英吸收池在220nm 装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节τ为100%，测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为校正值。
2．未知物的定性分析将三种标准溶液和未知液配制成约为一定浓度的溶液。
以蒸馏水为参比，于波长200～350nm 范围内测定溶液吸光度，并作吸收曲线。
根据吸收曲线的形状确定未知物，并从曲线上确定最大吸收波长作为定量测定时的测量波长。
3. 标准工作曲线配制分别准确移取一定体积的标准溶液于所选用的容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻线，摇匀。
根据未知液吸收曲线上最大吸收波长，以蒸馏水为参比，测定吸光度。
然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
4．未知物的定量分析确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液于所选用的容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻线，摇匀。
根据未知液吸收曲线上最大吸收波长，以蒸馏水为参比，测定吸光度。
根据待测溶液的吸光度，确定未知样品的浓度。
未知样要平行测定3次。
四、结果处理根据未知溶液的稀释倍数，求出未知物的含量。
计算公式：0X C C n =⨯0C ——原始未知溶液浓度，μg /mL ；X C ——查出的未知溶液浓度，μg/mL ；n ——未知溶液的稀释倍数。
紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
工作中直线经常发生弯曲，这称为朗伯-比
尔定律旳偏离。
原因：
吸光物质浓度较高；非单色光引起；介质
不均匀引起；吸光物质不稳定引起。
摩尔吸收系数ε：
1mol/L浓度旳溶液，液层厚度为1cm时旳吸
收度。
强吸收：ε＞104；
中档强度吸收：102 ＜ ε ＜ 104；
度。（吸收池厚度为10.0mm)。
c.
4、紫外-可见分光光度计旳构成、类型和使用
（1）构成：光源、单色器、吸收池、检测器、
信号处理器、显示屏
可见光源：碘钨灯、钨灯：320-2500nm
紫外光源：氢灯、氘灯、汞灯：150-400nm
玻璃吸收池：仅用于可见光区
石英池：可用于紫外光区和可见光区
选择原则：
能完全溶解样品；
在所用旳波长范围内有很好旳透光性；
纯度为“光谱纯”或经检验其空白符合要求。
处理措施：
蒸馏水煮沸清除气泡；
乙醇清除醛类、苯等杂质；
环己烷、正己烷清除苯；
氯仿预防光和空气破坏；
乙醚清除过氧化物；
烃类吸附除杂
（3）参比溶液旳选择
1）. 溶剂参比：试样构成简朴、共存组份少（基体
注意事项：
粗酶液制备时根据目旳酶旳性质选择缓冲液、温度、
时间等条件；
酶和底物旳反应条件也要恰当；
一般以检测产物变化量居多。
二、紫外-可见分光光度法
在食品检测中旳应用
（一）、食品酶分析
1、-半乳糖苷酶（乳糖酶）
以ONPG（邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷）为
底物测定-半乳糖苷酶活力。
化学分析仪器分析操作规程
化学分析、仪器分析操作规程一、化学分析操作规程题目：0.05mol/LEDTA溶液的标定和Ni2+含量的测定。
1．仪器50mL滴定管1支；250mL容量瓶4个、25mL移液管1支；锥形瓶250mL8支；烧杯100mL5支；表面皿3个；量筒50mL1支；25mL烧杯1支；洗耳球、洗瓶、玻璃棒、10mL量杯、pH试纸、胶头滴管、废液缸1支。
2．试剂EDTA溶液 0.05mol/L；盐酸：1：1；氨水：1：1；氨-氯化氨缓冲溶液(PH=10)；铬黑T指示剂：5g/L；紫脲酸铵指示剂：2%；3．标定、测定过程（1）标定：称取在800±50℃温度下灼烧至恒重的基准试剂氧化锌1.5g（精确至±0.0001g）3份，分别置于100mL烧杯中，加少量水润湿，加10mL盐酸（1：1）溶解，将溶液分别转移至3支250mL容量瓶中定容，再分别从3支250mL容量瓶中移取25mL溶液置于250mL锥形瓶中，用1：1氨水调至溶液pH=7-8，加10mL 氨-氯化铵缓冲溶液及5滴铬黑T指示剂溶液，用0.05mol/LEDTA溶液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，同时作空白试验。
（2）测定精确称取酸性镍盐溶液3份，加50mL水，用1：1氨水调至溶液pH=7-8，加10ml 氨-氯化铵缓冲溶液及0.2g紫脲酸铵混合指示剂，摇匀，用0.05mol/LEDTA标准滴定溶液滴定至溶液呈蓝紫色。
同时作空白试验。
2.考核时间：3.5小时3.评分细则：另附。
二、仪器分析操作规程考核题目：紫外分光光度法测定未知物1仪器1.1紫外分光光度计：1台，配1cm石英比色皿2个。
1.2容量瓶（100mL）：9只。
1.3移液管（25mL）：1支。
1.4吸量管（10mL）：1支。
2试剂2.1标准溶液（100ug/mL）：标准物质为苯甲酸、山梨酸、水杨酸、1，10菲啰啉之中的二种。
2.2未知液（现场给出范围）：为给出的两种标准物质中的一种。
3．实验操作3.1 未知物的定性分析3.1.1分别移取两种标准溶液和未知液25.00mL，置于3个250mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻线，摇匀。
紫外分光光度法测定未知物
紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支2.试剂2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。
2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。
（其必为给出的五种物质之一）3.实验操作3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。
3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。
以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。
五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。
3.3未知物定量分析根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。
推荐方法3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1m g/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200u g/mL）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。
准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
仪器分析_课后答案解析
紫外－可见分光光度法思考题和习题1．名词解释：吸光度、透光率、吸光系数(摩尔吸光系数、百分吸光系数)、发色团、助色团、红移、蓝移。
吸光度：指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，用来衡量光被吸收程度的一个物理量。
吸光度用A表示。
透光率：透过透明或半透明体的光通量与其入射光通量的百分率。
吸光系数：单位浓度、单位厚度的吸光度摩尔吸光系数：一定波长下C为1mol/L ，l为1cm时的吸光度值百分吸光系数：一定波长下C为1%(w/v) ，l为1cm时的吸光度值发色团：分子中能吸收紫外或可见光的结构单元，含有非键轨道和n分子轨道的电子体系，能引起π→π*跃迁和n→ π*跃迁，助色团：一种能使生色团吸收峰向长波位移并增强其强度的官能团，如-OH、-NH3、-SH及一些卤族元素等。
这些基团中都含有孤对电子，它们能与生色团中n电子相互作用，使π→π*跃迁跃迁能量降低并引起吸收峰位移。
红移和蓝移：由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基）或采用不同溶剂后，吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移）；吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移）2．什么叫选择吸收？它与物质的分子结构有什么关系？物质对不同波长的光吸收程度不同，往往对某一波长(或波段)的光表现出强烈的吸收。
这时称该物质对此波长(或波段)的光有选择性的吸收。
?由于各种物质分子结构不同，从而对不同能量的光子有选择性吸收，吸收光子后产生的吸收光谱不同，利用物质的光谱可作为物质分析的依据。
3．电子跃迁有哪几种类型？跃迁所需的能量大小顺序如何？具有什么样结构的化合物产生紫外吸收光谱？紫外吸收光谱有何特征？电子跃迁类型有以下几种类型：σ→σ*跃迁，跃迁所需能量最大；n →σ*跃迁，跃迁所需能量较大，π→π*跃迁，跃迁所需能量较小；n→ π*跃迁，所需能量最低。
而电荷转移跃迁吸收峰可延伸至可见光区内，配位场跃迁的吸收峰也多在可见光区内。
紫外可见分光光度法
紫外可见分光光度法摘要：本文介绍了紫外可见分光光度法的发展、原理、特点及应用，并列举多项实例说紫外可见分光光度法在各个领域中的应用。
关键词有机分析吸收光谱紫外可见分光光度法1．发展人们在实践中早已总结出不同颜色的物质具有不同的物理利化学性质。
根据物质的这些特性可对它进行有效的分析和判别。
由于颜色本就惹人注意，根据物质的颜色深浅程度来对物质的含量进行估计，可追溯到古代及中世纪。
1852年，比尔(Beer)参考了布给尔(Bouguer) 1729年和朗伯(Lambert)在1760年所发表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液层厚度相等时，颜色的强度与呈色溶液的浓度成比例，从而奠定了分光光度法的理论基础，这就是著名的比尔朗伯定律。
1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人将此理论应用于定量分析化学领域，并且设计了第一台比色计。
到1918年，美国国家标准局制成了第一台紫外可见分光光度计。
此后，紫外可见分光光度计经不断改进，又出现自动记录、自动打印、数字显示、微机控制等各种类型的仪器，使光度法的灵敏度和准确度也不断提高，其应用范围也不断扩大。
紫外可见分光光度法从问世以来，在应用方面有了很大的发展，尤其是在相关科学发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光度法的应用更拓宽了范围。
目前，分光光度法己为工农业各个部门和科学研究的各个领域所广泛采用，成为人们从事生产和科研的有力测试手段。
我国在分析化学领域有着坚实的基础，在分光光度分析方法和仪器的制造方面国际上都己达到一定的水平。
2．原理物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据关学科发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
紫外分光光度法测定水杨酸推荐优秀PPT
一定性分析从图1可以看出水杨酸有三个吸收峰由于203nm在紫外光区200400nm的边缘区域误差较大所以选择第二个次峰作为最大波长最大波长为231nm
紫外分光光度法测定水杨酸
专业技能竞赛
一 、定性分析
将标准贮备溶液和未知液配制成约为一定浓度的溶液。以蒸馏水为参比， 于波长200～350nm范围内测定溶液吸光度，并作吸收曲线。根据吸收曲线 的形状确定未知物，并从曲线上确定最大吸收定性分析
绘制水杨酸吸收曲线的浓度约为10µg/mL。例如2mg/mL水杨酸标准 贮备溶液稀释200倍后浓度为10µg/mL。可以用吸量管吸取0.5mL标准贮备 溶液于100mL容量瓶中，稀释至刻度，稀释100倍；也可以用胶头滴管吸取 溶液，滴入大约13滴溶液于100mL烧杯中，大约稀释100倍。用配制好的溶 液进行定性分析。
由于仪器和溶液之间存在着误差，最大波长会在231 nm附近上下波动1～2 nm。
水杨酸标准使用溶液的浓200 µg/mL。
5三m、L标标准准贮工备作溶度曲液线于为的1配00横制mL容坐量瓶标中，，稀释以至刻相度，应稀释的100吸倍；光度为纵坐标绘制标准工作曲线。
也可以用胶头滴管吸取溶液，滴入大约13滴溶液于100mL烧杯中，大约稀释100倍。
根据吸收曲线的形状确定未知物，并从曲线上确定最大吸收波长作为定量测定时的测量波长。
、8.00、10.00 mL于 七个100 绘制水杨酸吸收曲线的浓度约为10µg/mL。
5mL标准贮备溶液于100mL容量瓶中，稀释至刻度，稀释100倍；
mL的容量瓶中（浓度分别为0.00、2.00、4.00
、
根据未知液吸收曲线上最大吸收波长，以蒸馏水为参比，测定吸光度。
从图1可以看出水杨酸有三个 吸收峰，由于203nm在紫外 光区200～400nm的边缘区 域，误差较大，所以选择第 二个次峰作为最大波长，最 大波长为231nm。由于仪器 和溶液之间存在着误差，最 大波长会在231 nm附近上下 波动1～2 nm。
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紫外分光光度法测定未知物
1.仪器
1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个
1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个
1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支
1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支
2.试剂
2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。
2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。
（其必为给出的五种物质之一）
3.实验操作
3.1比色皿配套性检查
石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。
3.2未知物的定性分析
将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。
以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。
五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。
3.3未知物定量分析
根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。
推荐方法
3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。
准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于
最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
由标准曲线上查得未知液的浓度。
3.3.2苯甲酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为1、2、4、6、8、10ug/mL）。
准确移取10.00mL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
由标准曲线上查得未知液的浓度。
3.3.3水杨酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的水杨酸标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容，（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。
准确移取20.00mL水杨酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
由标准曲线上查得未知液的浓度。
3.3.4山梨酸含量的测定准确吸取1mg/mL的山梨酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。
再分别准确移取1、2、3、4、5mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为1、2、3、4、5ug/mL）。
准确移取5mL山梨酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
由标准曲线上查得未知液的浓度。
3.3.5邻二氮菲含量的测定准确吸取1mg/mL的邻二氮菲标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。
再分别准确移取1、2、3、4、5mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为1、2、3、4、5ug/mL）。
准确移取5mL邻二氮菲未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
由标准曲线上查得未知液的浓度。
4、结果计算根据未知液的稀释倍数，可求出样品溶液的浓度。
T6新世纪紫外可见分光光度计操作规程
一、开机自检：打开仪器主机电源，仪器开始初始化；约3分钟时间初始化完成。
初始化完成后，仪器进入主菜单界面。
二、进入光度测量状态：按键，进入光度测量界面。
三、进入测量界面：按键进入样品测定界面。
四、设置测量波长：按键，输入测量的波长，按键确认，仪器将自动调整波长。
五、进入设置参数：按键进入参数设定界面，按键使光标移动到“试样设定”，按键确认，进入设定界面。
六、设定使用样品池个数：按键使光标移动到“使用样池数”，按键循环选择需要使用的样品池个数。
七、样品测量：按键返回到参数设定界面，再按键返回到光度测量界面。
在1号样品池内放入空白溶液，2号池内放入待测样品。
关闭好样品池盖后按键进行空白校正，再按键进行样品测量。
如果需要测量下一个样品，取出比色皿，更换为下一个测量的样品按键既可读数。
如果需要更换波长，可以直接按键，调整波长。
如果每次使用的比色皿数量是固定个数，下一次使用仪器时可以跳过第五、六步骤直接进入样品测量。
注意注意注意注意：：：：更换波长后必须重新按更换波长后必须重新按更换波长后必须重新按更换波长后必须重新按进行空白校正进行空白校正进行空白校正进行空白校正。
八、结束测量：测量完成后记录数据, 退出程序或关闭仪器后测量数据将消失。
确保已从样品池中取出所有比色皿，清洗干净以便下一次使用。
按键直到返回到仪器主菜单界面后再关闭仪器电源.
紫外分光光度法测定水杨酸的含量
1.仪器
1.1紫外分光光度计（T6）
1.2石英比色皿（1cm）：2个
1.3容量瓶（100mL）：7只
1.4吸量管（1 mL、2 mL、5 mL、10mL）：各1只
2.试剂
2.1水杨酸标准溶液（1mg/mL）;
2.2未知液：浓度约为50~55。
3.实验操作
3.1吸收池配套性检查石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节为100%，测定另一吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录第二比色皿的吸光度值作为校正值。
3.2吸收曲线的绘制准确吸取未知液5mL，于100 mL容量瓶中配成浓度约为10的待测溶液，以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内测定吸光度，作吸收曲线，从曲线上查得最大吸收波长（230nm和297nm附近）。
3.3标准曲线的绘制准确吸取水杨酸标准溶液若干体积，稀释成一系列不同浓度的标准溶液（0~16），于最大吸收波长分别测出其吸光度。
然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。
3.4样品测定由步骤3.2的测定结果，从标准曲线查出样品的浓度。
4.结果计算
根据未知液的稀释倍数，可求出未知液的浓度。