地衣芽孢杆菌对有害微生物的拮抗作用
地衣芽孢杆菌W10及其抗菌蛋白对桃褐腐病的抑制作用
园艺学报，2015，42 (10)：1879–1888.Acta Horticulturae Sinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0243；http：//www. ahs. ac. cn 1879地衣芽孢杆菌W10及其抗菌蛋白对桃褐腐病的抑制作用纪兆林1，贺惠文1，周慧娟2，韩峰1，童蕴慧1，叶正文2，徐敬友1,*（1扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州 225009；2上海市农业科学院林木果树研究所，上海 201403）摘 要：地衣芽孢杆菌菌株W10菌液及其产生的抗菌蛋白对贮藏期桃褐腐病都有较好的抑制作用，高浓度（1 × 1010 cfu · mL-1菌液，3.0 mg · mL-1抗菌蛋白）效果更好。
在较低温度（4 ℃）和湿度（RH 70% ~ 75%）条件下，高浓度菌液和抗菌蛋白在病菌定殖前处理桃果能收到较好的防病效果。
钙离子[0.1%Ca(NO3)2]能提高W10菌液及抗菌蛋白对桃果实褐腐病的防治效果，能明显推迟始病时间。
W10菌液和抗菌蛋白浸果处理能显著降低贮藏期的自然腐烂率，与多菌灵效果类似；通过对果肉色差L*值、果实硬度、可溶性固形物含量、失重率等品质指标参数的测定，发现菌液和抗菌蛋白处理均不会影响果实品质。
关键词：桃；地衣芽孢杆菌；抗菌蛋白；桃褐腐病菌；生物防治；果实品质中图分类号：S 662.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）10-1879-10 Preservative Effects of Bacillus licheniformis W10 and Its Antifungal Protein on Storage Peach FruitsJI Zhao-lin1，HE Hui-wen1，ZHOU Hui-juan2，HAN Feng1，TONG Yun-hui1，YE Zheng-wen2，and XU Jing-you1,*（1College of Horticulture and Plant Protection，Yangzhou University，Yangzhou，Jiangsu 225009，China；2Forestry and Fruit Research Institute，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai 201403，China）Abstract：The biocontrol effects of Bacillus licheniformis W10 bacterial suspension and its antifungal protein on peach brown rot caused by Monilinia fructicola in storage peach fruits and the effects on fruit quality were investigated. The results showed that the fruit disease suppression of B. licheniformis W10 bacterial suspension and antifungal protein were significantly higher than that of the control. Inoculation of bacterial suspension and antifungal protein prior to M. fructicola gave a better biocontrol effect，and the higher concentrations of bacterial（1 × 1010 cfu · mL-1）and antifungal protein（3.0 mg · mL-1）performed better control effects. The environmental conditions，such as temperature and humidity，affected biocontrol effects of W10 bacterial suspension and antifungal protein. The influence of environment conditions on the activity of antifungal protein was less than that on bacterial suspension. Moreover，lower temperature（4 ℃）and relative humidity（RH 70%–75%）were favorable to prevent peach brown rot by W10 bacterial suspension and its antifungal protein. The W10 bacterial suspension and antifungal protein amended with收稿日期：2015–06–09；修回日期：2015–09–23基金项目：国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-31-2-02）；江苏省农业科技自主创新资金项目[CX（14）2015，CX（15）1020]；扬州大学高层次人才科研启动基金项目（5018/137010407）* 通信作者Author for correspondence（E-mail：jyxu@）Ji Zhao-lin，He Hui-wen，Zhou Hui-juan，Han Feng，Tong Yun-hui，Ye Zheng-wen，Xu Jing-you.Preservative effects of Bacillus licheniformis W10 and its antifungal protein on storage peach fruits. 1880Acta Horticulturae Sinica，2015，42 (10)：1879–1888. calcium[0.1% Ca(NO3)2] could enhance the biocontrol effects，and obviously put off the occurrence of peach brown rot. In addition，the bacterial suspension and antifungal protein significantly reduced the natural decay rates of peach fruits during storage，and the effects were equal to carbendazim. Moreover，both W10 bacterial suspension and antifungal protein treatments did not have effects on external and internal fruit appearance，such as chromatic aberration parameter L* of flesh，flesh firmness，soluble solids content and weight loss. Therefore，the B. licheniformis W10 is a potential biocontrol factor for peach brown rot.Key words：peach；Bacillus licheniformis；antifungal protein；Monilinia fructicola；biological control；fruit quality褐腐病又称菌核病、果腐病等，是记载最早的果品采后病害（Ogawa et al.，1995）。
最新关于“地衣芽孢杆菌活菌”的认识
2. 特性：地衣芽孢杆菌具 有耐高温、耐酸碱和高盐环 境的特性，能在极端环境中 生存。
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3. 应用：地衣芽孢杆菌在 农业、工业和医药等领域有 广泛的应用，如作为生物农 药、酶制剂等。
2. 发现与研究历程
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1. 地衣芽孢杆菌的发现可以 追溯到20世纪初，当时科学 家们在对土壤微生物进行研 究时首次发现了这种细菌。
2. 食品安全性评估包括对地衣芽孢杆菌活菌的毒性、致病性和 过敏性等进行深入研究和分析。
3. 通过食品安全性评估，可以确保地衣芽孢杆菌活菌在食品中 的使用量和使用方式符合食品安全标准。
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最新关于“地衣芽孢杆菌活菌”的 认识
Contents 目 录
一、地衣芽孢杆菌活菌简介 二、地衣芽孢杆菌活菌的生物学特性 三、地衣芽孢杆菌活菌的应用 四、地衣芽孢杆菌活菌的安全性评估
一、地衣芽孢杆菌活菌简介
1. 定义和特性
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1. 定义：地衣芽孢杆菌 是一种革兰氏阳性、无鞭 毛、不能运动的杆状细菌 ，属于芽孢杆菌属。
三、地衣芽孢杆菌活菌的应用
1. 农业领域的应用
1. 地衣芽孢杆菌活菌在农业领域被广泛应用，如作为生物肥料，可 以改善土壤结构，提高作物产量。
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2. 地衣芽孢杆菌活菌也被用于植物病害的生物防治，通过抑制病原 微生物的生长，降低病害发生的风险。
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3. 此外，地衣芽孢杆菌活菌还可以用于种子处理，增强种子的抗逆
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2. 在工业领域，地衣芽孢杆菌活菌可用于生产酶制剂、生物塑料等，有 助于实现绿色可持续发展。
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3. 地衣芽孢杆菌活菌在医药领域也具有潜在应用价值，如作为益生菌制剂 、抗肿瘤药物等，为人类健康带来新的希望。
地衣芽孢杆菌对畜禽的研究及前景
地衣芽孢杆菌对畜禽的研究及前景唐喜仁，肖苏杭，梁 雨东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150038地衣芽孢杆菌是土壤中常见的一种兼氧型革兰氏阳性菌，通过对老陈醋、窑泥进行微生物分离筛选中也有所发现。
地衣芽孢杆菌生命力极强，可在高温、酸性等严重影响自身生命活动的情况下，以内生孢子的形式来保护自身不受伤害。
内生孢子可存活时间长（不消耗自身养分），当环境条件恢复正常时，其可变回活细胞，继续生长繁衍。
地衣芽孢杆菌属于过路菌，不会在肠道内定植，所以需要不断地去补充，但不宜过量长期喂食动物，否则会产生不良效果。
正是有如此的生存方式，地衣芽孢杆菌被广泛应用于食品加工，饲料配置等多个领域。
下面本文从地衣芽孢杆菌功能、应用、安全、饲喂问题四方面进行综述。
1 地衣芽孢杆菌功能1.1促进动物体对营养物质的消化吸收地衣芽孢杆菌可产生许多有益于动物机体对营养物质消化吸收的代谢产物，包括淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、葡萄糖酶、纤维素酶等。
除了促进动物吸收营养物质外，地衣芽孢杆菌自身也可以产生可被动物体消化吸收的产物，包括促生长因子、氨基酸、维生素等。
其中，β-甘露聚糖酶能水解甘露多糖得到甘露寡糖，而甘露寡糖具有促进益生菌生长、减少便秘、增强营养物质吸收等效果。
而且，地衣芽孢杆菌对抗营养因子有拮抗作用，帮助机体吸收更多的营养物质，进而有效降低养殖的饲料系数，提高经济效益。
1.2 提升免疫力当地衣芽孢杆菌存在于肠道中时，可以刺激肠黏膜上的免疫组织，提高机体内抗体及免疫细胞的含量，同时促进诱导因子的形成，使免疫系统发育更完全，提高机体免疫力。
地衣芽孢杆菌也可产生具有生物活性的物质，包括多糖类、非肽类等，而多糖可以增强免疫应答效果，抗病毒，对肠道内致病菌有抑制作用，减小动物患病的概率。
此外，地衣芽孢杆菌可以产生杆菌肽，其又名枯草菌肽。
杆菌肽具有高校抗菌性，且不会产生交叉耐药性、抗药性等现象，对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌有极强的抑制作用，并广泛应用与养殖业。
各种菌的作用
《各种功能菌的作用》一、枯草芽孢杆菌：增加作物抗逆性、固氮。
二、巨大芽孢杆菌：解磷（磷细菌），具有很好的降解土壤中有机磷的功效。
三、胶冻样芽孢杆菌：解钾，释放出可溶磷钾元素及钙、硫、镁、铁、锌、钼、锰等中微量元素。
四、地衣芽孢杆菌：抗病、杀灭有害菌，五、苏云金芽孢杆菌：杀虫（包括根结线虫），对鳞翅目等节肢动物有特异性的毒杀活性。
六、侧孢芽孢杆菌：促根、杀菌及降解重金属，七、胶质芽孢杆菌：有溶磷、释钾和固氮功能，分泌多种酶，增强作物对一些病害的抵抗力。
八、泾阳链霉菌：具有增强土壤肥力、刺激作物生长的能力。
九、菌根真菌：扩大根系吸收面，增加对原根毛吸收范围外的元素（特别是磷）的吸收能力。
十、棕色固氮菌：固定空气中的游离氮，增产。
十一、光合菌群：是肥沃土壤和促进动植物生长的主力部队。
十二、凝结芽孢杆菌：可降低环境中的氨气、硫化氢等有害气体。
提高果实中氨基酸的含量。
十三、米曲霉：使秸秆中的有机质成为植物生长所需的营养，提高土壤有机质，改善土壤结构。
十四、淡紫拟青霉：对多种线虫都有防治效能，是防治根结线虫最有前途的生防制剂。
三种以上多种复合菌相互促进、相互补充，抗土传病害效果远远大于单一菌种有益菌群相互协同，共同作用，能使作物达到高产丰产的效果.1、促进快速生长：菌群中的巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌等有益微生物在代谢过程中产生大量的植物内源酶，可明显提高作物对氮、磷、钾等营养元素的吸收率。
2、调节生命活动，增产增收：菌群中的胶冻样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等有益菌可促进作物根系生长，须根增多。
有益微生物菌群代谢产生的植物内源酶和植物生长调节剂经由根系进入植物体内，促进叶片光合作用，调节营养元素往果实流动，膨果增产效果明显。
与施用化肥相比，在等价投入的情况下可增产15%—30%。
3、果实品质明显提高：菌群中的侧孢芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌等可降低植物体内硝酸盐含量20%以上，能降低重金属含量，可使果实中Vc含量提高30%以上，可溶性糖提高2—4度。
嗜铁细菌地衣芽孢杆菌CAS20对柿树的防病促生作用
ＥｆｆｅｃｔｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓＣＡＳ２０ｏｎＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄ ＧｒｏｗｔｈＰｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆＰｅｒｓｉｍｍｏｎＴｒｅｅ
山东省农业科学院青年科研基金项目（２０１６ＹＱＮ２８） 作者简介：余贤美（１９７６—），女，副研究员，主要从事果树植物保护和土壤应用微生物研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｘｉａｎｍｅｉ９５＠１６３．ｃｏｍ
侯长明（１９８３—），男，助理研究员，主要从事果树植物保护研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｄｌｙｈｃｍ＠１６３．ｃｏｍ 表示同为第一作者。 通讯作者：艾呈祥（１９７５—），男，副研究员，主要从事柿树资源及育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇｘｉａｎｇ＿１９７５＠１６３．ｃｏｍ
（１．山东省果树研究所，山东 泰安 ２７１０００；２．山东省农业科学院，山东 济南 ２５０１００）
摘要：通过盆栽试验和离体叶片接种试验，研究嗜铁细菌地衣芽孢杆菌 ＣＡＳ２０对柿树的防病促生作用。 经浸种和灌根处理，ＣＡＳ２０可使柿树幼苗分别增高 ７６．７２％和 ５０．００％；在对峙平板中产生的抑菌带宽为 ０．５７ ｃｍ；对柿树炭疽病菌菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为 ９２．９４％和 ８３．９１％。离体叶片接种试验结果显示，先 接种 ＣＡＳ２０菌悬液再接种菌饼和先接种菌饼再接种 ＣＡＳ２０菌悬液，对柿树炭疽病的离体防效分别为 ７７．０１％ 和 ６９．３５％，说明 ＣＡＳ２０可能通过产生诱导系统抗性提 高 对 柿 树 炭 疽 病 的 防 治 效 果。本 研 究 结 果 表 明， ＣＡＳ２０在防病促生方面具有良好的应用潜能。
地衣芽孢杆菌
地衣芽孢杆菌【菌种成分】地衣芽孢杆菌【菌种状态】原菌粉【菌溶解性】可溶【菌种含量】有效活菌数≥2×1010cfu/g【产品规格】2×1010cfu/g、5×1010cfu/g、1×1011cfu/g、2×1011cfu/g【适用范围】制作有机肥料、生物肥料、饲料添加。
【产品概述】地衣芽孢杆菌细胞形态和排列呈杆状、是芽孢杆菌科细菌，为革兰氏阳性杆菌，单生；可调整菌群失调达到治疗目的，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌；能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。
本公司生产的地衣芽孢杆菌具有繁殖快速、生命力强、安全无毒等特点。
【产品功效】种植、肥料制作：1、用于种植可改善土壤团粒结构，提高土壤蓄水、蓄能、和地温，缓解重茬；2、拌种使用可提高种子的出芽率和保苗率；预防种子自身的遗传病害，提高作物成活率，促进根系生长；3、可提高作物抗病能力；抑制土壤中病原菌的繁殖和对植物根部的侵袭，减少植物中土传病害，预防多种害虫爆发；4、可抑制有害菌的能力强；抑制生长环境中的有害菌的滋生繁殖，降低和预防各种菌类病害的发生；5、促进作物生长，成熟，相对降低成本、增加产量、提高收入。
饲料添加:1、用于饲料添加，可促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能；2、对肠道细菌感染具有特效，对轻型或重型急性肠炎、轻型及普通型的急性菌痢等，均有明显疗效；3、能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖；4、有效抑制有害病原菌在养殖品种体内的生长繁殖，控制动物细菌病和真菌病，对动物的肠道疾病预防效果尤其显著；5、可减轻病毒危害：调节动物体内微生态平衡，增强免疫力和抗应激力，提高成活率8-20％。
【产品特点】1、改善土壤微生态环境，促进土里结构形成，改良土壤质地；2、刺激作物根系发育、促进作物生长，增加产量，改善作物品质；3、减轻病虫害、降低农药残留，提高化肥利用率，降低硝酸盐含量；4、耐高温：特有的抗高温活菌菌系，饲料添加中加工后饲料中仍保持活性；5、常温下生长旺盛：本产品的活菌适应性强，从4℃开始就能生长，15-30℃高速生长繁殖，亦可用于水产中，能有效的起到净化水质和增强免疫力的作用；6、高稳定性：对胃的酸性环境有很强的抵抗力，适应PH3.0-9.8，在高污染环境中保持特性不变【用法用量】种植、肥料制作（2×1010cfu/g）：添加比例：最低用量，国家微生物有机肥含菌量标准，按0.2亿/克，以200亿/克的产品为例。
四种芽孢杆菌生防功能初探
铁载体的功能，筛选培养基由三部分组成：MSA培养基、CAS （chromeazurol S）染液和0.1 mol/L的磷酸缓冲溶液。这三部分在 配制过程中必须分开并单独灭菌后，在1.0 L的MSA培养基中先后 加入50 mL CAS染液和50 mL的磷酸缓冲溶液（0.1 mol/L）混匀制 成MSA-CAS检测培养基[9]。
4）CAS（chromeazurol S）染液配方（100 mL）：三氯化铁 0.003 g，十六烷基三甲基溴化铵0.15 g，铬天青0.0653 g，用无菌 水定容至100 mL。
5）0.1 mol/L的磷酸缓冲溶液（1.0 L）：磷酸二氢钠0.5 g，磷 酸氢二钠2.0 g，氯化铵0.25 g，磷酸二氢钾0.075 g，氯化钠0.2 g， 无菌水100 mL。 1.3 室内平板对峙试验
植物病原菌：保存于本实验室的香蕉枯萎病的致病菌尖孢镰 刀菌（Fusarium oxysporum）古巴生理4号小种和水稻纹枯病的致病 菌立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）。
供试菌株：西姆芽孢杆菌（Bacillus siamensis）H1401、地 衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）H2202、解淀粉芽孢杆菌 （Bacillus amyloliquefaciens）H4112、贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis strain）H4309均为芽孢杆菌属，由华南农业大学分子遗 传实验室保存提供。 1.2 试剂及培养基
将试验菌株用平板划线接种至LB培养基进行活化，放置于 35℃培养箱培养24 h，制备成OD600值为0.6的菌悬液。将两种植物 病原菌分别活化至PDA培养基，28℃恒温培养箱培养5天后，用直 径为7 mm 的无菌打孔器打取病原菌饼接种至PDA培养基的一侧， 用无菌接种环取菌悬液在已接种植物病原菌PDA培养基的另一侧 划线，每个供试验菌株设三次重复，以不接种供试菌的PDA培养 基为对照，放置于28℃培养箱中培养5天后观察结果并测量抑制距 离和试验菌株的生长宽度，计算具有抗病功能菌株的抑制力，计 算公式为：
地衣芽孢杆菌复配苯噻酮菌株对脐橙溃疡病的作用机理与控病研究
苯 噻 酮 的纸 碟 放 到 含 有溃 疡 病 菌 的 Ｎ Ａ培 养 基 上 ， ２ ８ ｃ 下 培养 ４ ｄ 后 观察 抑菌结果 。 ④将地衣芽孢 杆菌菌
株 发 酵液 放到 高压 蒸汽灭 菌 锅 内 ， １ ２ １ ｏ Ｃ 灭菌 ２ ０ ｍ ｉ ｎ ， 灭活后 的菌株 采用和②相同的处理方法 。 １ ． ２ ． ２地 衣芽孢 杆菌复 配苯噻酮 菌株对 溃疡 病病菌 生 长作用 的显微 观察。取地 衣芽孢 杆菌复配苯 噻酮和溃 疡病 菌对峙 试验 交合处 ， 用双面胶 带粘样 ， 用Ｉ Ｂ 一 ５型 离 子溅射 仪喷镀 ， 厚 度为 ２ ０ ０ Ａ， 在 日立 Ｓ － ４ ５ ０扫描 电
摇瓶发酵 培养 ３ ｄ ， 保存备用 。 １ ． ２ 地衣 芽孢杆 菌复配 苯噻 酮菌株对 溃疡病病 菌生 长
的影 响
１ ． ３ ． ２ Ｎ 一 乙 酰 氨 基 葡 萄 糖 胺 标 准 曲 线 测 定 。 将 ５ ０ ０ １ ￣ ｇ ／ ｍ ｌ的 Ｎ 一 乙 酰 氨 基 葡 萄 糖 胺 准 确 稀 释 至 １ ０ ｏ ｇ ／ ｍ ｌ ，用此 溶液再稀释成不 同浓度 （ 起始 浓度为 Ｏ ｌ ￣ ｇ ／ ｍ １ ） 。然后 取几支干净试 管 ， 分别加入不同浓度 的 Ｎ 一乙酰 葡萄糖胺溶 液 １ ． ５ ｍ ｌ 、 高铁氰化钾溶 液 ２ ｍ ｌ ， 置 于１ ｏ ｏ ｃ Ｃ 水浴 中 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 冷却 ， 于４ ２ ０ ｎ ｍ处 以蒸 馏水为 空 白对 照读取光密度 值。光 密度值 的下降与糖浓度成 反 比。以光密度 为纵 坐标 ， Ｎ 一乙酰葡萄糖胺浓度为横
基 金项 目 ： 陕 西省教 育厅 专项（ １ ２ Ｊ Ｋ０ ８ ２ ６ ） 和 陕 西省生物技 术重 点实 验 室项 目（ １ １ Ｊ Ｓ ０ ８ ４ ） 共 同资助。 作者 简介 ： 于宏安（ １ ９ ６ ５ 一 ） ， 男， 工程 师 ， 主要从 事植物病 虫害的 防治 及绿 色无公害农药科技推广工作。Ｅ — ｍａ ｉ ｌ ： ｘ ｄ ｓ ｋ ｙ ２ ０ ０ ７ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍ。