PCR操作规范
pcr 操作中最应该注意的事项
pcr 操作中最应该注意的事项1.严格遵守无菌操作规程，避免污染。
Strictly adhere to aseptic operation procedures to avoid contamination.2.注意标本的正确识别和处理，确保实验准确性。
Pay attention to the correct identification and handling of specimens to ensure the accuracy of the experiment.3.定期检查PCR仪器的运行状态，确保设备正常工作。
Regularly check the operation status of the PCR instrument to ensure the normal operation of the equipment.4.认真核对试剂盒的配制和使用说明，保证实验的顺利进行。
Carefully check the preparation and usage instructions of the reagent kit to ensure the smooth progress of the experiment.5.注意控制实验环境温度和湿度，避免影响PCR反应结果。
Pay attention to control the temperature and humidity of the experimental environment to avoid affecting the PCR reaction results.6.遵循PCR反应体系的比例和配制规定，严格按要求操作。
Follow the proportion and preparation requirements of the PCR reaction system, and operate strictly as required.7.防止交叉污染，每次操作需更换吸头和手套。
PCR原理与操作
PCR原理与操作PCR（Polymerase Chain Reaction），也称为聚合酶链反应，是一种重要的分子生物学技术。
它是通过体外复制DNA分子来产生大量DNA分子的方法。
PCR技术在基因工程、医学诊断、犯罪现场调查等领域有广泛应用。
PCR技术依赖于DNA分子的核酸扩增过程。
其基本原理可分为三个步骤：变性、引物的结合和延伸。
1.变性：PCR反应开始时，DNA样本被加热至95℃到98℃的高温。
这个高温的作用是将DNA的两个螺旋链分离，使之成为单链DNA。
2.引物的结合：PCR反应中，引物是一段由合成的DNA片段。
引物的序列与待扩增的DNA序列的两端互补。
引物的加入使得单链DNA在较低的温度下重新连成双链结构。
引物被限制性核酸酶进行体外合成。
这个链合成过程是在一个低于变性温度的温度下进行的。
3.延伸：在第二步引物的结合后，加入了一定浓度的DNA聚合酶。
DNA聚合酶能够扩增引物，使得新的DNA链得以合成。
而且PCR反应中还加入了一定浓度的dNTPs（核苷酸三磷酸聚合物），它们是dATP、dCTP、dGTP和dTTP的混合溶液。
通过这些反应物，DNA聚合酶能够与引物进行大量的扩增。
PCR操作步骤及注意事项：1.样品准备：a.提取待扩增的DNA，保证DNA纯度和浓度。
b.使用无细菌污染的试剂和消毒的实验室设备。
2.PCR体系准备：a.准备PCR反应液，包括模板DNA、引物、酶、缓冲液、dNTP和盐。
b.根据所需扩增的目标序列和引物设计合适的引物。
c.确保PCR反应液没有污染，防止产生假阳性或假阴性结果。
3.PCR反应设置：a.取合适的PCR管，加入PCR反应液。
b.打开PCR仪，将PCR管放入合适的位置，设置温度和时间参数。
c.检查PCR仪的热盖是否正常工作，以确保反应条件的稳定性。
4.PCR反应：a.将PCR管放入预热PCR仪中，并启动程序。
b.进行PCR循环扩增反应，根据需要进行不同数目的循环。
人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测标准操作规程(PCR-反向斑点杂交法)
人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测标准操作规程1.目的：规范人乳头瘤病毒（HPV）反向点杂交（RDB）基因分型检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围: PCR实验室。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献:4.1《中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒说明书》4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书5. 内容：5.1 检测方法：PCR-反向斑点杂交法。
5.2 实验原理：选取人乳头瘤病毒（HPV）基因组保守序列为扩增靶序列，设计通用引物和特异型别探针（包括16种中高危型和3种低危型HPV）,将RNA逆转录为cDNA后，利用生物素标记的通用引物对cDNA进行PCR 扩增，得到的产物与固定在膜上的特异型别探针按照碱基互补配对的原理杂交。
若PCR产物和探针完全配对，则膜条上相应探针位置捕获到标有生物素的PCR产物，并和亲和素–辣根过氧化物酶偶联，再与四甲基联苯胺（TMB）反应呈现较强的深蓝色，若与探针不完全配对，则经严格杂交和洗涤后膜条上相应探针位置不能捕获到标有生物素的PCR产物，结果无显色反应或显很淡的背景色。
5.3 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集。
5.3.1 标本类型：尿道分泌物、宫颈脱落细胞、疣体细胞等。
5.3.2 标本采集：5.3.2.1 道分泌物：在无菌条件下，用棉拭子伸入尿道内,旋转数周并停留片刻后取出。
5.3.2.2 宫颈脱落细胞:在无菌条件下，用宫颈刷伸入宫颈管内2cm,旋转数周并停留片刻后取出。
5.3.2.3 疣体细胞: 用无菌棉拭子在疣体部位刮取上皮细胞。
5.3.3 标本保存：采集的标本置于盛有1ml生理盐水的小试管中，2～8℃保存。
5.3.4 运送条件：标本长途运送时采用冰壶。
5.3.5 标本拒收标准：污染标本。
宏石荧光PCR仪校准操作规程
编制人：日期：年月日审核人：日期：年月日批准人：日期：年月日生效日期：日期：年月日颁发部门：分发部门：1 目的：规范操作流程，确保校准结果的准确性可靠性。
2 范围：宏石荧光PCR仪SLAN 96S/P校准3 操作人：宏石荧光PCR仪校准人员对此规程负责4 内容：4.1 校准试剂和校准仪器的准备4.1.1 校准试剂准备：背景荧光校准试剂、荧光校准试剂、高中低荧光校准试剂4.1.2 校准仪器准备：宏石“PCR Temperature Verify System”温度校准仪4.1.3 校准软件：“宏石SLAN荧光PCR仪校准软件”程序包4.2 校准步骤：4.2.1 将需要校准的PCR仪连接到电脑，将PCR仪和电脑连接电源。
先打开宏石PCR仪，再打开电脑。
4.2.2 打开校准软件程序包里校准软件“”并“新建”一个校准文件。
4.2.3 在“工作环境检测”栏根据实际情况填写，如果有不符合/不正常情况调整合格后进行后续操作。
4.2.4 取出低温（4℃）保存的校准试剂，瞬时离心备用。
4.2.5 将背景荧光校准试剂放入需校准的PCR仪，在“仪器背景测试”栏选中“1、2、3、4”并点击“开始”。
4.2.6 如果背景荧光原始曲线测试值高于50，直接关闭弹出窗口，则需要对仪器检测孔进行清理。
清理时用棉签沾纯化水对每个检测孔旋转擦拭，再用干棉签旋转擦拭干残留水分即可，注意不要有棉絮残留在检测孔内。
4.2.7 清理完反应孔后重新进行“仪器背景测试”，直到每个测试孔荧光值均低于50即可。
取出背景荧光校准试剂，低温保存。
4.2.8 将荧光校准试剂放入需校准的PCR仪，在“荧光信号测量”栏点击开始，检测结束后点击确认。
荧光校准试剂测量值一般在1000-2000。
4.2.9 在“荧光信号校准”栏直接点击开始，运行结束后点击确定。
取出荧光校准试剂，低温保存。
4.2.10 进入“荧光强度重复性检测”栏，点击“生成随机孔”，将高中低荧光校准试剂放到对应的孔位后选择“开始”，运行结束后比对高中低荧光校准试剂生成的荧光强度是否有差异。
PCR实验室标准操作规程SOP
一、基因扩增检验实验室基本情况 （一） 实验室所属法人单位名称：________________________________________________
地址：__________________________________________________________________ 邮编：_____________________________________ 法定代表人：_____________________实验室负责人：_________________________ 联系人：_________________________email：_________________________________ 电话：___________________________传真：__________________________________ （二） 实验室总人数：__________________名 （其中初级职称人数人员___名，占____；中级职称人数人员_____名，占______。）
质量手册
一、 管理性程序： 程序文件的管理和维护 ……………………………………………………………………… 1 PCR 实验室管理制度 …………………………………………………………………………… 2 生物安全准则 ………………………………………………………………………………… 4 实验室生物防护措施 …………………………………………………………………………… 7 实验室传染性废弃物管理制度 ………………………………………………………………… 9 PCR 实验室的人员配置及管理制度 …………………………………………………… 12 PCR 实验室的人员培训计划及措施 …………………………………………………………… 14 PCR 实验记录管理制度 ………………………………………………………………………… 15 惠安县医院 PCR 检验报告单保密制度 ……………………………………………………… 17 检验结果的传送管理制度 ……………………………………………………………………… 19 实验室的清洁制度 ……………………………………………………………………………… 20 化学试剂的管理程序 …………………………………………………………………………… 22 实验室消耗品购买、验收和贮存程序 ………………………………………………………… 23 新项目审批程序 …………………………………………………………………………………… 25 仪器设备的管理制度 …………………………………………………………………………… 26 仪器设备的使用制度 …………………………………………………………………………… 28 仪器设备的标准操作制度 ……………………………………………………………………… 29 仪器设备的维护保养程序和制度 ……………………………………………………………… 31 仪器设备的校准制度 …………………………………………………………………………… 34 仪器设备发生故障的应急处理制度 ………………………………………………………… 35 PCR 检测的标本管理制度 …………………………………………………………………… 36
pcr实验室标准
pcr实验室标准PCR实验室标准。
PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，广泛应用于基因克隆、基因表达分析、疾病诊断等领域。
在PCR实验室中，严格遵循一系列标准操作程序对实验室环境、试剂、设备和操作人员进行管理，对PCR实验的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍PCR实验室的标准操作流程，帮助实验室工作人员规范实验操作，提高实验效率和结果可靠性。
实验室环境管理。
PCR实验室应具备良好的实验环境，包括洁净、无菌、无尘、无霉、无细菌等特点。
实验室内空气应保持流通，避免气味、异物等对实验产生干扰。
实验室内的工作台面、仪器设备、试剂瓶等应定期进行清洁消毒，保持干净整洁。
试剂管理。
PCR实验室应建立完善的试剂管理制度，对试剂的储存、使用、保管和报废进行严格管理。
试剂的储存温度和有效期应进行标注，避免使用过期试剂进行实验。
在使用试剂时，应按照操作规程准确称量、混合和稀释，避免试剂误用或交叉污染。
设备管理。
PCR实验室的设备应定期进行检测和维护，确保设备的正常运行和准确性。
在使用设备前，应进行预热、平衡和校准，避免设备误差对实验结果产生影响。
实验室应建立设备使用记录，及时发现设备故障并进行维修或更换。
操作人员管理。
PCR实验室的操作人员应接受相关的培训和考核，熟悉实验操作流程和安全注意事项。
在进行实验操作时，应严格按照操作规程进行，避免个人操作失误对实验结果产生影响。
操作人员应穿戴实验服、手套、口罩等个人防护用品，避免人为污染对实验产生影响。
实验操作流程。
PCR实验操作流程包括样品处理、反应体系配置、PCR扩增、扩增产物分析等步骤。
在进行实验操作时，应按照标准操作程序进行，避免操作失误对实验结果产生影响。
在每一步操作后，应及时记录实验数据和结果，以备后续分析和验证。
实验结果分析。
PCR实验结果的分析应准确、可靠、重复性好。
在进行实验结果分析时，应对实验数据进行统计和比对，排除实验误差和干扰因素，确保实验结果的准确性和可靠性。
pcr实验室规章制度
pcr实验室规章制度一、实验室守则实验室是进行PCR实验的专门场所，严格的规章制度对于实验室的安全和研究结果的准确性至关重要。
为此，制定以下实验室守则：1. 实验室进入与离开a. 进入实验室前，必须佩戴个人防护装备，包括实验服、手套、护目镜等。
b. 离开实验室前，必须彻底清洁工作台和使用的器具，并将废弃物正确处理。
2. 实验室设备与试剂a. 使用实验室设备前，必须经过相应的培训并取得资质。
b. 试剂的选用和储存必须符合实验要求，并遵守相关法律法规。
3. 实验操作与安全a. 实验前必须认真阅读操作手册，并按照规定的步骤操作。
b. 实验时必须注意个人安全，避免接触有害物质和生物危险。
4. 废弃物处置a. 废弃物必须按照规定分类，放置在指定的容器中。
b. 生物危险废弃物必须遵守特殊处置程序，确保不对环境和人体造成伤害。
5. 突发情况应急处理a. 对于实验室中的火警、泄漏等突发情况，必须迅速采取并熟记应急处理措施。
b. 实验室成员应提前了解实验室相应的逃生通道和避灾区域。
二、实验室操作规范为确保PCR实验的稳定性和准确性，制定以下实验室操作规范：1. 清洁与消毒a. 实验前，工作台面必须经过清洁和消毒处理。
b. 实验结束后，工作台面必须及时清理消毒，保持整洁。
2. 样品处理a. 样品的处理必须在规定的生物安全柜内进行，避免交叉污染。
b. 实验前，样品必须经过标记和记录，确保样品的准确性和追溯性。
3. 试剂调配a. 使用试剂前，必须按照规定的比例正确调配。
b. 试剂瓶盖必须随时紧闭，以防止污染或损失。
4. 器具使用a. 所有使用过的器具必须经过清洗和消毒处理，确保下次使用的安全性。
b. 使用自动取样器等自动化设备时，必须严格按照操作规范操作。
5. 实验数据记录a. 所有实验数据必须按照规定的格式记录，包括实验日期、操作者等信息。
b. 实验数据必须及时保存和归档，确保数据的完整性和可靠性。
三、实验室安全管理为了保障实验室的安全和人员的健康，制定以下实验室安全管理措施：1. 事故与紧急情况处理a. 实验室成员必须了解应对各类事故和紧急情况的处理方法。
pcr金标准
pcr金标准PCR技术是现代生物学和医学研究中最为重要的技术之一。
PCR技术以其高灵敏度、高特异性和高可靠性，已经广泛应用于基因诊断、基因治疗、药物筛选、疾病预后预测等领域。
然而，PCR技术本身的灵敏度、特异性和可靠性却受到了许多因素的影响，如PCR反应条件、试剂质量、样品质量等。
因此，各级标准化机构都出台了相应的PCR金标准，以确保PCR技术的精度、稳定性和可靠性。
以下是PCR金标准的简要介绍。
1.PCR反应条件标准PCR反应条件是影响PCR反应结果的最重要因素之一。
为保证PCR反应条件的准确性和可重复性，PCR金标准规定了PCR反应中的各项参数和标准值。
（1）反应体系：PCR金标准要求PCR反应体系必须包含适当浓度的DNA模板、引物、酶、缓冲液等，其中一些试剂的浓度及质量如下：（a）DNA模板：模板DNA的浓度应该在20-200ng/μl范围内，以避免模板DNA过多或过少导致PCR特异性降低或PCR反应阻碍。
（b）引物：引物的浓度应该在50-200nM之间，过低的引物浓度可能导致PCR反应失败。
（c）酶：PCR反应酶的浓度应该在1单位/50ul-3单位/50ul之间。
过低酶浓度会导致PCR反应时间过长，过高的酶浓度会导致PCR扩增产物异常。
（d）缓冲液：标准PCR缓冲液最常用的成分是Tris-HCl、MgCl2和KCl。
（2）PCR反应温度：PCR金标准规定PCR反应需要分为三个步骤：变性、退火和延伸。
PCR反应温度在不同步骤中的要求如下：（a）变性：反应器应该在95℃左右持续2-5分钟的变性机制使DNA的氢键被打碎，单链DNA得到解离，形成单链模板。
（b）退火：在这个步骤中，引物结合单链模板发生。
引物需要退火至低温，以增强引物与目标序列间的相互作用：退火温度通常在52-60℃之间。
（c）延伸：PCR反应在72℃左右的延伸过程中，DNA聚合酶从引物双端开始在单链模板上合成新的DNA链。
延伸过程的温度通常在68-74℃。
文库Q-PCR定量标准操作规程
文库Q-PCR定量（Taqman探针定量）标准操作规程1.目的明确文库定量的工作职责，规范文库定量的操作流程。
2.应用范围基于AmpliSeq法的Life平台文库测定。
3.职责实验人员对执行本规程负责，主管监督检查，质量部人员抽查执行情况。
4.试剂、耗材和仪器4.1 试剂和耗材4.2 仪器5.建库流程：6. 操作流程6.1 E.coli DH10B文库标准品的梯度稀释6.1.1 将E.coli DH10B文库标准品置于冰上彻底融化，充分振荡混匀，简短离心后置于冰上备用；6.1.2 用Nuclease-free Water将E.coli DH10B文库标准品（68pM）按下表进行10倍梯度稀释，用移液器将稀释的标准品上下吹打至少10次（不要vortex），混匀后简短离心，置于冰上备用，；名称标准品Nuclease-free Water终浓度STD 1 5μL（文库标准品）45μL 6.8 pMSTD 2 5μLSTD1 45μL 0.68 pMSTD 3 STD45μLSTD25 μL STD 345μL45ul0.068 pM0.0068pM6.2 AmpliSeq文库的梯度稀释先将文库按1: 20进行稀释，再按1: 50进行稀释，建议冰上操作：名称文库Nuclease-free Water总稀释倍数Sample 1-1 2μL文库38μL 1: 20Sample 1-2 2μL Sample 1-198μL 1: 1000 6.3 PCR 反应体系的制备6.3.1 试剂准备将2X TaqMan® MasterMix和20X Ion TaqMan® Assay置于冰上融化，将20X Ion TaqMan® Assay涡旋振荡混匀后离心备用，2X TaqMan® MasterMix轻柔颠倒混匀离心备用（MasterMix不能vortex）；6.3.2 反应体系配制：ABI 7500 PCR仪反应体系：1)20μL反应体系配置：每个样品做2个平行实验，每个实验的反应体系20μL，根据反应总数配制MasterMix和Assay混合的总体系（每10个反应多配1个反应体系）：试剂单个反应加入体积2X TaqMan® MasterMix10μL20X Ion TaqMan® Assay1μLH2O 4μL2)将配制好的Mix轻柔颠倒混匀后，取15μL分配至八连排荧光定量PCR管；取5μL的稀释的标准品或样品加入至相应的定量PCR管，盖紧PCR管盖，涡旋振荡混匀后离心，冰上放置备用。
荧光定量PCR仪标准操作规程
编制人：编制日期：年月日颁发部门：品保部
审核人：审核日期：年月日
批准人：批准日期：年月日生效日期：2014年06月01日分发部门：品保部分发号：
1.目的
规范ABI 7500荧光定量PCR仪操作，保证安全操作，延长仪器寿命
2.范围
适用于ABI 7500荧光定量PCR仪
3.职责
操作人负责本规程实施，部门负责人监督实施。
4.规程
4.1 实验程序运行：
4.1.1首先打开电脑，进入操作系统后，打开ABI 7500荧光定量PCR仪电源。
双击桌面上7500 software V2.0.6。
弹出Login对话框，默认的User Name为GUEST，点击Login as GUEST，点击OK运行软件。
4.1.2进入界面，选择Advanced Setup。
4.1.3点击Experiment Properties。
在Experiment Name栏输入实验名称。
4.1.4点击Plate Setup，点击Define Targets as Samples。
设定Target Name的Reporter 为FAM。
4.1.5点击Assign Targets and Samples。
设定96孔板。
4.1.5点击Run Method。
设定反应程序。
4.1.6点击Reaction Setup设定反应体系。
4.1.7点击Run菜单，点击START RUN。
开始运行PCR反应。