简述紫外-可见分光光光度法的定义
仪器分析课件 第3章 紫外分光光度法
检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制
和结果处理
记录装置
二、分光光度计的类型
（一）单光束分光光度计
光源 单色器
参比 样品
检测器
显示器
• 只有一条光路，通过变换参比池和样品池的位 置，使它们分别置于光路来进行测定
国产751型、752型、721型、722型、UV-1100 型、英国SP-500型
E2a ca E2b
(3) 图计算法----两组分吸收光谱完全重叠--混合样品测定 (3)图中，a,b 吸收光谱双向重迭，互相干扰，在最大波长处互相
吸收。处理方法如下：
解线性方程组 过程：
（三）示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量 较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。
第三节 紫外-可见分光光度计
依据朗伯-比尔定律，测定待测液吸光度A的仪器。（选择不同波
长单色光λ、浓度） 分光光度计外观 分光光度原理图:
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器 信号处理及显示
信号处理 显示器
单色器
分光光度计外观
吸收池 检测器
光源
721型可见分光光度计
一、主要部件
1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光
浓度C及液层厚度L的乘积成正比。
注意! 适用范围
①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。 ③吸光度A具有加和性。Aa+b+c= Aa &光系数
A=k c L
k = A /c L
1、摩尔吸光系数或Em： 在一定λ下，c=1mol/L，L=1cm时的吸光度。单位：L/(mol.cm)
紫外分光光度法和荧光分析法
1 Beer-Lambort 定律A=log T =Ecl *A为吸收度；
*T为透光率； *E为吸收系数（以 E *c为溶液浓度； *l为样品总厚度。
1% 1cm
表示，溶液浓度为1%（g/ml），厚度为1cm时的吸光度值）
适用条件：入射光为单色光 溶液是稀溶液 固体、 液体和气体样品在同一波长 下，各组分吸光度具有加和性
吸收光谱
10-4-10-7g/ml
选择性
高
一般
应用
硫色素荧光法测定维生素B1
维生素B1 在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，在紫（365nm）
照射下呈蓝色荧光（435nm）通过与对照品荧光强度比较。即可测得供试 品含量（课本260页）
荧光分光光度法测定维生素E
采用同步荧光扫描法测定血清中维生素E，有效的消除溶剂拉曼 光谱的干扰，提高灵敏度和准确性。（课本277页）
双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两
束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1 作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收 较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、 选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提 高。 ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度 成正比 （例子：课本366页）
其他
卡尔曼滤波法
偏最小二乘法 小波变换
三波长分光光度法
系数倍率法
……
原理 与紫外-可见法异同点
应用
原理
荧光 — 分子吸收电磁波后，从其最低激发 态重新发射紫外线或可见光的现象 利用某些物质被一定波长的光照射后所产 生的，能够反映该物质特性的荧光来进行 定性定量的分析方法——荧光分析法。
紫外 可见分光光度法
12
例子：
1）乙醛分子在160, 180,290nm处产生吸收，它们对应的电子跃迁类型分别是：
2）环戊烯（190nm）、甲醚（185nm）、三乙胺（195nm）分别对应的跃迁类型是： 3）一化合物可能是=N-CH2-CH2-CH3或=N-CH=CH2其紫外吸收光谱为： 该化合物是何种化合物？
<100
吸收带的划分：落在200-780 nm的紫外-可见光区的吸收可以用紫外可见吸收光谱测定，在有机化合物的结构解析以及定量分析中常用。
18
电荷转移吸收谱带
电荷转移吸收谱带涉及的是给予体的一个电子向接受体的一个电子轨道上 的跃迁，激发态是这一内氧化还原过程的产物。电荷转移过程可表示如下：
hv CO R
光的粒子性是指光可以看成是由一系列量子化的能量子（即光子）组成。 光子能量为E＝h= hc/n。h 为Plank常数，h=6.626×10-34Js。
3
➢电磁辐射与光谱分析法
物质具有能量，是诱电体。物质与光的作用可看成是光子对能量的授受，即 h=E1-E0,该原理广泛应用于光谱解析。电磁辐射与物质的作用本质是物质吸 收光能后发生跃迁。跃迁是指物质吸收光能后自身能量的改变。因这种改变 是量子化的，故称为跃迁。不同波长的光,能量不同，跃迁形式也不同，因 此有不同的光谱分析法。
190
280
CO
190
160
COOH
204
9000 20
2000
41
*
n
*
n
*
*
n
*
COOR
205
50
紫外-可见分光光度法在药物检验中的应用
紫外-可见分光光度法在药物检验中的应用摘要：随着我国医疗水平的提高，大众对药物的关注度也在提高，特别是近几年食品药品问题不断被曝光，大众越发重视药物生产的质量问题。
药物是给人们治病、保健的重要物质，能够对人类的身体起到预防、治疗的作用，所以药物的好坏会对人类的身体健康产生直接影响，因此对药物的检验十分重要。
目前我国检测药物的方法主要有气象色谱法、紫外分光光度法、液相色谱法等，本文主要讨论的是紫外可见分光光度法在药物检验中的应用。
关键词：紫外可见分光光度法；药物检验；应用一、我国药物检验现状药物质量问题一直是全民关注的重点问题，为了保证药物的质量，我们对药物的原料来源、生产、运输过程都要严格监管，对生产成成品的药物要进行检验。
药物检验标准具有科学性，我国药品质量标准经过多次修改完善，例如《中国药典》、《中华人民共和国卫生部药品标准》、《国家食品药品监督管理局国家药品标准》等等，都越来越完善、越来越细分、越来越科学。
目前我国药物检验方法不一，有的生产企业使用气相色谱法、有些企业使用紫外分光法，但是目的都是为了保证药物的质量，保障全民的健康。
二、紫外-可见分光光度法（一）紫外-可见分光光度法定义紫外-可见分光光度法的原理是根据物质对不同波长的单色光的吸收程度不同来反映物质的，通过该方法能够对物质进行定性和定量分析。
紫外-可见光分光光度法是基于郎伯-比尔定律上进行的一种测试方法，目前该方法较为成熟，被广泛应用在药物质量的检验和控制上。
（二）紫外-可见分光光度法的特点紫外-可见光分光光度法具有较高的灵敏度，能够适用于微量组分的测定，并且还具有较好的准确性，一般相对误差在2%-5%左右，可以说紫外-可见光分光光度法具有速度快、便捷、操作简单、灵敏度高、准确性好、仪器价格低等特点，是目前技术成熟且应用广泛的一种检测方法。
三、紫外-可见分光光度法在药物检验中的应用（一）用于药物鉴别紫外-可见光分光光度法对药物的鉴别是根据药物的吸收光谱呈现的特征判断的，例如观察吸收光谱的形状、吸收峰值的位置、最大吸收波长等。
紫外可见分光光度法 目的与要求
紫外可见分光光度法目的与要求紫外可见分光光度法（UV-Vis）是一种常用的分析技术，主要用于测定化合物的吸收和发射光谱。
它是一种非破坏性的分析方法，可以快速、准确地获取样品的吸收和发射特性，对于化学、生物、环境等领域的研究具有重要意义。
在进行紫外可见分光光度法分析时，我们需要明确分析的目的和要求。
我们需要明确我们要分析的化合物的特性和性质，例如其吸收峰的位置、强度等。
我们需要确定分析的目的，是为了确定化合物的浓度、纯度，还是为了研究其在不同条件下的光谱特性。
我们需要确定分析的要求，例如分析的灵敏度、准确度、稳定性等。
在进行紫外可见分光光度法分析时，我们首先需要准备好样品和标准溶液，确保它们的浓度和纯度符合分析的要求。
我们需要对仪器进行校准，确保仪器的准确度和稳定性。
接下来，我们将样品和标准溶液分别置于分光光度计中进行测定，获取它们的吸收和发射光谱。
我们根据测定结果，利用Lambert-Beer定律等方法进行数据处理和分析，得出化合物的浓度、纯度等信息。
紫外可见分光光度法具有操作简便、分析快速、结果可靠等优点，适用于各种化合物的分析。
它在药物分析、环境监测、食品安全等领域具有广泛的应用前景。
然而，也需要注意到其在样品制备、仪器校准、数据处理等方面的一些细节和技巧，以确保分析结果的准确性和可靠性。
紫外可见分光光度法是一种重要的分析技术，具有广泛的应用前景。
在进行分析时，我们需要明确分析的目的和要求，合理设计实验方案，严格控制操作流程，以确保分析结果的准确性和可靠性。
希望通过我们的努力，可以更好地发挥紫外可见分光光度法在科学研究和实际应用中的作用。
紫外可见分光光度法，作为一种常用的分析技术，在化学、生物、环境等领域发挥着重要作用。
在研究化合物的吸收和发射光谱时，紫外可见分光光度法可以提供快速、准确的分析结果，因此备受科研人员和工程师的青睐。
在进行紫外可见分光光度法分析时，首先需要明确分析的目的和要求。
紫外分光光度法和可见光分光光度法的异同
紫外分光光度法和可见光分光光度法的异同紫外分光光度法和可见光分光光度法，听起来是不是有点拗口？别担心，咱们慢慢聊。
紫外分光光度法，顾名思义，它主要工作在紫外线区域。
这种方法能让我们“偷窥”到一些肉眼看不见的东西。
比如，想知道水里有没有杂质？紫外分光光度法可以精准地告诉你，不信你试试！而可见光分光光度法呢，主要是用来分析那些能被我们眼睛看到的颜色，像红色、蓝色、绿色这些。
你知道的，水里的红色染料和蓝色染料，都是这玩意儿的“主场”。
紫外光和可见光，都是光谱的一部分，但它们的工作原理和应用却大相径庭。
再说说它们的检测对象，紫外分光光度法常常用来检测一些化合物的浓度，特别是那些在紫外区域有吸收特性的物质。
你可以想象一下，就像侦探在找线索，它能帮助科学家找到隐藏的化学成分。
而可见光分光光度法则更像是舞台上的演员，光彩夺目，专门用来分析那些在可见光区域的物质。
有些化合物在紫外光下可能“失踪”，但在可见光下却能光芒四射。
想想看，这就像是有些人在人群中显得特别突出，格外吸引眼球。
说到应用，紫外分光光度法在医学、环境监测和制药等领域都大显身手。
想要检测血液中的某种药物浓度，紫外分光光度法绝对是个好帮手。
可见光分光光度法则常见于食品和饮料行业，检测饮料的色素含量，保证我们的饮品既好看又安全。
谁会喜欢喝那种颜色怪异的饮料呢？食品中的色素含量与我们的生活息息相关，健康可不能掉以轻心。
这两种方法在仪器上也有点差异。
紫外分光光度计一般比较复杂，光源主要是氘灯，波长范围广，适合各种检测需求。
而可见光分光光度计呢，通常简单很多，光源用的是氙灯或者白炽灯，操作起来轻松愉快，适合日常使用。
就好比，一个是驾校里的赛车，一个是街边的小电动车，各有各的优缺点。
不过，别以为这两者就没有交集。
实际上，很多时候，紫外分光光度法和可见光分光光度法可以相辅相成。
比如，在某些复杂样品的分析中，先用紫外法进行初步筛选，再用可见法进一步确认。
就像侦探小说中，先通过蛛丝马迹找到嫌疑人，再通过细节锁定真相，逻辑清晰，层层推进。
紫外可见分光光度法
棱镜有玻璃和石英两种材料。它们 的色散原理是依据不同的波长光通过 棱镜时有不同的折射率而将不同波长 的光分开。由于玻璃可吸收紫外光， 所以玻璃棱镜只能用于350 ~ 3200 nm 的波长范围，即只能用于可见光域内。 石英棱镜可使用的波长范围较宽，可 从185 ~ 4000nm，即可用于紫外、可 见和近红外三 个光域。
分子吸收光谱类型
远红外光谱
红外光谱
紫外-可见光谱
分子内运动涉及三种跃迁能级，所需能量 大小顺序
E电 E振 E转
E电 1 ~ 20ev 0.06 ~ 1.25 m 紫外 可见吸收光谱 E振 0.05 ~ 1ev 25 ~ 1.25 m 红外吸收光谱 E转 0.005 ~ 0.05ev 250 ~ 25 m 远红外吸收光谱
蓝绿
红
650～760
紫外-可见分光光度 分光光度计的主要部件和工作原理：
0.575
光源
单色 器
吸收 池
检测 器
显 示
（一）光源： 用于提供足够强度和稳定的连续光 谱。分光光度计中常用的光源有热辐 射光源和气体放电光源两类。
(气体放电光源)
氘灯、氢灯 氩灯 氙灯
紫外可见 真空紫外 真空紫外、 紫外、可见
谢
谢！
光谱示意
完全吸收
复合光 表观现象示意
完全透过
吸收黄色光
吸收光 物质颜 色 颜色 紫 蓝 波长范围 （nm） 400～450 450～480 物质颜 色 颜色 绿 黄
吸收光 波长范围 (nm) 560～580 580～600
黄绿 黄
紫 蓝
橙
绿蓝
480～490
绿蓝
橙
600～650
紫外可见分光光度法课件
1
紫外-可见分光光度法
第一节 基本原理
一、紫外-可见吸收光谱（UV-VIS光谱）
• 起源：价电子能级跃迁 由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射，分
子中价电子（或外层电子）的能级跃迁而产生。 紫外光谱—又称为电子光谱—分子吸收光谱
问题1：为何UV-Vis光谱吸收带都比较宽??
pH值降低（加酸）→ E2、B带蓝移，ε减
pH值增大（加碱）→E2、B带红移，ε增大
6
第二节 紫外可见分光光度计
• 仪器校正
1、波长校正
• 苯的吸收峰校正波长（紫外光区）。在25ml容量瓶内，滴入一滴苯(A.R.)， 用无水乙醇稀释至刻度，摇匀后，以无水乙醇为空白，在200～280nm间用 lcm石英池测定吸收度。 如下： 229.2 233.5 238.9 243.2 248.5 254.5 260.6 268.4
图8-4 (+)和(-)丁醇-2的ORD谱线
2）发色团(如羰基) R带：270 nm 。ORD曲线在此处越过零点，进入另一个相
区。形成的一个峰和一个谷组成的ORD谱线—Cotton效应谱线 正的Cotton效应：当波长由长波一端向短波一端移动时， ORD谱线由峰向谷变化 负的Cotton效应： ORD谱线由谷向峰变化 ORD谱线与零线相交点的波长称为λK
2.3.1 蛋白质的圆二色性
在蛋白质或多肽中，主要的光活性基团是肽链骨架中的肽键， 芳香氨基酸残基及二硫桥键。当平面圆偏振光通过这些光活性的 生色基团时，光活性中心对平面圆偏振光中的左、右圆偏振光的 吸收不相同，产生吸收差值。由于这种吸收差的存在， 造成了偏 振光矢量的振幅差，圆偏振光变成了椭圆偏振光，这就是蛋白质 的圆二色性。
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简述紫外-可见分光光光度法的定义
紫外-可见分光光度法，简称UV-Vis，是一种利用紫外-可见光谱技术来测量物质吸收光谱的分析方法。
它是一种在紫外线和可见光波段内测量由物质吸收而形成的光谱信号的技术，可以检测物质在不同波长处表现出的光学性质。
紫外-可见分光光度法运用光谱学中的一般原理，即当一定浓度的溶液中的吸光物吸收紫外线或可见光时，它会将该光谱中的一部分能量转换成其他形式，从而使得测定物质吸收波长的能量减少，而测量的便是溶液的吸光度。
它是由实验室的紫外-可见分光光度仪实现的，它主要是将光发射器灯管发射的涵盖集中波段的光，通过滤光片将被测物质从其他物质中分离出来，并通过两个探测器检测溶液吸收后剩余的紫外-可见光，然后用探测器所获得的信号和实验过程中使用的被测物质的浓度计算出吸收系数。
紫外-可见分光光度法主要用于测定分子中有特定共价键的特征吸收波长，可以根据该吸收波长，判断出不同有机物质含量的大小或分辨出有机物质的种类。
紫外-可见分光光度法延伸到生物分析领域，可以用来测量生物组分，如细胞组织、膜蛋白、血清等，其最终用途是检测人体内物质的含量及特性，以及检测某种物质在特定环境条件下的表现。
紫外-可见分光光度法也用于有机合成的研究。
紫外-可见分光光度法可以根据原料的比例变化，及反应产物的吸收波长谱，使用分子吸收系数的变化，检测合成反应的进行程度，也可以应用于定量分析，
所以有机合成中紫外-可见分光光度法也有重要应用。
紫外-可见分光光度法是分析化学实验中比较常用的一种分析方法，它简便快捷，重复性良好，并且不受有机质种类和结构的影响，可以精确地测量出有机物质的含量，所以被广泛应用于分子吸收光谱上。
紫外-可见分光光度法在生活中也有广泛应用，如诊断检测、食品安全等。
紫外-可见分光光度法不仅可以应用于分析有机物质的含量，还可以分析无机物质的吸收，甚至可以用来检测溶液中的痕量元素。
紫外-可见分光光度法具有许多优点，如快速，准确，重复性好，无毒，不会污染环境，所以受到了广泛的应用。
总结起来，紫外-可见分光光度法是一种基于紫外线和可见光光谱的检测技术，可用于分析有机物质和无机物质的含量，以及痕量元素的检测。
它具有快速、准确、可靠等优点，广泛应用于化学实验、生物分析、有机合成的研究、诊断检测和食品安全等领域，是一种比较重要的分析方法。