高效液相色谱法测定左亚叶酸钙注射液有关物质的条件研究
高效液相色谱法测定叶酸片的含量与有关物质
高效液相色谱法测定叶酸片的含量与有关物质高效液相色谱法测定叶酸片的含量与有关物质吴宏富1，黄卫平2，刘放3【摘要】目的建立测定叶酸片含量及有关物质的高效液相色谱(HPLC)法。
方法采用Hypersil C18(4.6 mm× 250 mm,5 μm)色谱柱,流动相磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾6.8 g与0.1 mol·L-1氢氧化钾溶液70 mL,加水稀释至800 mL,调节pH至6.3,加甲醇80 mL,用水稀释成1 000 mL为流动相),检测波长254 nm。
结果叶酸在19.80～277.24 μg·mL-1浓度范围内,峰面积与浓度呈良好线性关系(r=0.999 9,n=7),平均回收率98.65%～98.95%,RSD= 0.20%～0.60%(n=9)。
叶酸及其有关物质得到基线分离,方法最低检测限0.6 ng,控制总杂质量不得超过2.0%。
结论该方法测定叶酸片的含量及有关物质,方法简便、快速、结果准确,专属性好,适用于叶酸片及其制剂的质量控制。
【期刊名称】医药导报【年(卷),期】2014(033)003【总页数】4【关键词】叶酸；有关物质；质量控制；色谱法,高效液相,反相叶酸(folic acid)是一种抗贫血药物,亦称维生素M或维生素BC,与人体重要的生化过程密切相关,直接影响核酸的合成及氨基酸代谢,对细胞分裂、增殖和组织生长具有极其重要的作用,妇女怀孕早期适量增补叶酸可以降低神经管畸形的发生[1]。
叶酸已成为一种集预防、治疗和保健于一身的多功能药物而越来越受到重视。
有关叶酸分析方法的报道有紫外分光光度法[2]、一阶导数光谱法[3]、流动注射化学发光法[4]以及高效液相色谱法等,其中以高效液相色谱法最常用。
为了控制叶酸制剂的质量,笔者者参考有关文献[5-11],建立了高效液相色谱法测定叶。
高效液相色谱法检查注射用亚叶酸钙降解产物方法研究
高效液相色谱法检查注射用亚叶酸钙降解产物方法研究
丁逸梅;郭平
【期刊名称】《药学与临床研究》
【年(卷),期】2001(009)004
【摘要】采用高效液相色谱法有效地分离了注射用亚叶酸钙的降解产物.用C18柱,以甲醇-水-冰乙醇(15:85:1)为流动相,检测波长为287 nm进行检测,主峰可与辅料及破坏产物完全分离.
【总页数】2页(P24-25)
【作者】丁逸梅;郭平
【作者单位】江苏省药物研究所,南京,210009;江苏省药物研究所,南京,210009【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.注射用亚叶酸钙的细菌内毒素检查方法学研究 [J], 张琴;张丽;朴晋华;王婷婷
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4.注射用卡络磺钠细菌内毒素检查方法研究 [J], 孙智培;何硕;胡翮
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高效液相色谱紫外检测法测定添加剂预混合饲料中叶酸含量
高效液相色谱紫外检测法测定添加剂预混合饲料中叶酸含量冯秀燕;杨宝良;魏秀莲;张亚君【摘要】本实验建立了添加剂预混合饲料中叶酸测定的高效液相色谱紫外检测测定方法。
样品经碳酸钠溶液提取，通过阴离子交换柱净化富集，高效液相色谱紫外法测定。
结果表明：叶酸浓度为0.1~250.0μg/mL时，具有良好的线性关系，样品回收率为79.9%~100.4%，相对标准偏差小于10%，定量限可达0.3 mg/kg，适用于添加剂预混合饲料中叶酸含量的测定。
%A high performance liquid chromatography(HPLC)method was developed for the determination of folic acid in feed additive premix.Sample was extracted by the solution of Na2CO3,and purified by ion exchange column.The results showed that:in the range of 0.1~250.0μg/mL,there was a good linear correlation between the peak area and concentration of folic acid.The average recovery rates in feed were 79.9% ~ 100.4%.The relative standard deviation was below 10%.The quantification limit was 0.3 mg/kg.It was a suitable method for determination of folic acid in feed additive premix.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2016(000)007【总页数】3页(P16-18)【关键词】饲料;叶酸;高效液相色谱法;测定【作者】冯秀燕;杨宝良;魏秀莲;张亚君【作者单位】北京市饲料监察所，北京朝阳 100107;北京市饲料监察所，北京朝阳 100107;北京市饲料监察所，北京朝阳 100107;北京市饲料监察所，北京朝阳100107【正文语种】中文【中图分类】S816.17针对陈粮制定的最新销售政策即定向销售政策近期将启动，许多陈粮销售企业将根据政策开始实行，其主要的销售对象就是规模玉米深加工和饲料企业。
高效液相色谱法测定亚叶酸钙含量的不同色谱柱筛选
79科技资讯 S CI EN CE & T EC HNO LO GY I NF OR MA TI ON 工 业 技 术亚叶酸钙(简称CF 或LV)为抗贫血药,也是抗肿瘤的辅助用药。
它是四氢叶酸钙甲酰衍生物的钙盐,系叶酸在体内的活化形式。
能治疗由于叶酸缺乏,引起的巨幼细胞性贫血,促进骨髓造血细胞的分化、成熟和释放,也常用作氨蝶呤及氨甲蝶呤过量时的解毒及用来增加氟尿嘧啶对消化系统肿瘤的治疗效果[1]。
随着临床用药量的大幅增加对该产品质量要求亦有所提高,对含量测定的方法要求更准确、更精密。
2005版药典要求亚叶酸钙峰柱效不低于1000,2010年出版的药典对亚叶酸钙含量测定的色谱条件和系统适应性试验条件做了修改后要求柱效不低于2000,市面上很多C18柱达不到规定的柱效要求,本文通过比较市面上七种不同的色谱柱柱效,确定了在比较的范围中两种色谱柱能够达到药典的要求。
1 材料仪器:安捷伦高效液相色谱仪(包括UV检测器)。
色谱柱:LUNA C18、XBD C18、Xbridge C18、UK C18、Atlentis C18、Chrom-Ma-trixC18、Chrom-Matrix亚叶酸钙专用柱规格:250m m ×4.6mm ,5μm 。
试剂:四丁基氢氧化铵、磷酸氢二钠、双蒸水、磷酸、甲醇(色谱级)。
样品:亚叶酸钙(99.7%)。
2 方法与结果2.1供试溶液的制备取亚叶酸钙适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1m l中约含0.1m g的溶液[2]。
2.2色谱条件流动相A:取10%四丁基氢氧化铵水溶液8.0mL和磷酸氢二钠2.2g,加双蒸水溶解使成780mL,并用磷酸调节PH值至7.8[3];流动相B:甲醇(色谱级)。
A:B=78:22;流速:1.0mL/min;柱温:40℃;进样量:10ul;检测波长:280nm。
2.3系统适应性试验取配制好的供试品溶液,分别进样同体积(10ul)的溶液于色谱柱内,记录图谱,见以下各图,数据记录见表1。
左亚叶酸钙及其片剂的HPLC测定
左亚叶酸钙及其片剂的HPLC测定
张宇佳;郑稳生
【期刊名称】《中国医药工业杂志》
【年(卷),期】2005(36)9
【摘要】建立了HPLC法测定左亚叶酸钙及其片剂含量与有关物质。
采用ODSC18柱,0.05mol/L氯化铵缓冲液(含溴化四丁铵3.22g,用氨水调至pH7.8)-甲醇-乙腈(18∶2∶3)为流动相,检测波长287nm。
线性范围0.01～0.1mg/ml,检测限1ng。
平均回收率99.6%,RSD0.47%。
【总页数】2页(P568-569)
【关键词】左亚叶酸钙;片剂;有关物质;高效液相色谱;测定
【作者】张宇佳;郑稳生
【作者单位】中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TQ460.72;O657.72
【相关文献】
1.HPLC法测定左亚叶酸钙中的右旋异构体△ [J], 刘凤丽;沈园园
2.高效液相色谱法测定血浆中左亚叶酸钙的含量 [J], 邓富良;陈本美;饶均明;周平;邓世林;陈新;余俊龙
3.HPLC-UV 色谱法检测人血浆中左亚叶酸钙浓度 [J], 罗晨辉;邓富良;李坤艳;陈本美;仇宇;蒋云;林小平
4.HPLC法测定苯丙氨酯原料药及片剂的含量和有关物质 [J], 王昕;王卫;唐素芳
5.流动注射化学发光法快速测定尿液中左亚叶酸钙 [J], 王瑞琪;黄玉明
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高效液相色谱法测定叶酸片的含量
高效液相色谱法测定叶酸片的含量高效液相色谱法测定叶酸片的含量【摘要】叶酸是由喋呤啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物，是一种水溶性B族维生素，相当于蝶酰谷氨酸。
固定相为：依利特hypersil BDSC18 色谱柱（4.6*250*5u ），乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：10：65∶0.1）为流动相，检测波长为254nm；叶酸在20～280μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
叶酸的平均回收率为99.3%。
本法简便、重现性好、回收率高，可用于叶酸片中叶酸的含量测定。
【关键词】叶酸片；叶酸；测定叶酸是由喋呤啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物，是一种水溶性B 族维生素，相当于蝶酰谷氨酸[1-2]。
叶酸从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。
叶酸对孕妇尤其重要。
叶酸用于预防胎儿神经管畸形，准妈妈在备孕期间就服用0.4毫克叶酸可以下降胎儿神经管畸形率85%[3-4]。
如在怀孕头3个月内缺乏叶酸，可导致胎儿神经管发育缺陷，从而增加裂脑儿，无脑儿的发生率。
人类如缺乏叶酸可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症，还会导致身体无力、易怒、没胃口以及精神病症状[5-7]。
本文用高效液相法对叶酸片中的叶酸的进行了含量测定。
1.仪器与试药1.1仪器LC-100（梯度配置）高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；制冷和加热循环槽（上海汗诺仪器有限公司）；UV-1800紫外/可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；ELGA超纯水器（上海澜锐仪器科技有限公司）；ABS 220-4分析天平（德祥科技有限公司）；3升基本型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）；TΜ-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2试药乙腈（杭州兴成化工有限公司）、磷酸（江西省新干县金成化工厂）、盐酸（襄樊金译成精细化工有限公司）、磷酸氢二铵（淄博市淄川区鑫川化工厂）、冰醋酸（吴江市龙申化工有限公司）、甲醇（江西省新干县金成化工厂）、冰乙酸（杭州兴成化工有限公司）、四氢呋喃（吴江市龙申化工有限公司）。
一种快速测定注射用亚叶酸钙中亚叶酸钙含量的方法
一种快速测定注射用亚叶酸钙中亚叶酸钙含量的方法王春怡;任亚东【摘要】目的建立紫外-可见分光光度法测定注射用亚叶酸钙中间体亚叶酸钙含量的方法.方法采用UV法测定亚叶酸钙含量,检测波长为282 nm,并对UV法与HPLC法测定结果进行比较.结果亚叶酸钙质量浓度在1.0～10.0μg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为99.87%,RSD为0.87%.UV 法与HPLC法在测定同一批注射用亚叶酸钙样品时,两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论该方法操作简便、快速、准确,可用于亚叶酸钙中间体质量控制.%Objective To establish ultraviolet spectrometry method to determine the intermediate for calcium folinate injection. Methods Ultraviolet spectrometry was applied with 282 nm detection wavelength, and the determination results with UV and HPLC methods were compared and analyzed. Results The calibration curve of calciun folinate was in a good linearity within the range of 1.0 - 10.0 μg · mL-1 ,and the average recovery was 99. 87％ with RSD of 0. 87％. No significant difference was observed between the determination results with UV and HPLC methods ( P ＞ 0. 05 ). Conclusion This method is convenient,rapid and accurate,and can be used in quality control of calcium folinate intermediate for injection.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2011(027)002【总页数】3页(P154-156)【关键词】注射用亚叶酸钙;亚叶酸钙;UV法【作者】王春怡;任亚东【作者单位】广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006;扬子江药业集团,广东,广州,510663【正文语种】中文【中图分类】R927.1注射用亚叶酸钙为亚叶酸钙的无菌冻干品,为类白色至黄色的疏松块状物或粉末,主要成分为亚叶酸钙,常用作氨蝶呤及氨甲蝶呤过量时的解毒剂,具有对抗叶酸拮抗剂(如氨甲蝶呤、乙胺嘧啶和甲氧苄氨嘧啶等药)毒性作用。
高效液相色谱法测定亚叶酸钙片的含量
高效液相色谱法测定亚叶酸钙片的含量
宋红英;刘放
【期刊名称】《中国新药杂志》
【年(卷),期】2004(13)12
【摘要】目的:建立高效液相色谱法测定亚叶酸钙片的含量.方法:在Spherisorb C18柱(250mm×4.6mm,10μm)上,以乙晴-磷酸盐缓冲液(20∶80)为流动相,紫外检测波长282nm,外标法定量.结果:亚叶酸钙片在20.0～200.0μg·mL-1范围内呈良好线性,回归方程A=25.154 1C-0.196 2,r=0.999 8,平均回收率为97.35%～99.56%(n=3),RSD=0.86%～1.1%(n=3).结论:本法简便、快速、重现性好,可作为亚叶酸钙片含量的测定方法.
【总页数】3页(P1374-1376)
【作者】宋红英;刘放
【作者单位】浙江省医学科学院病病毒研究所,,杭州,310013;浙江省医学科学院病药物研究所,杭州,310013
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2;R979.1
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定血浆中左亚叶酸钙的含量 [J], 邓富良;陈本美;饶均明;周平;邓世林;陈新;余俊龙
2.反相高效液相色谱法测定愈创维林那敏片的含量和含量均匀度 [J], 刘慧颖;陈默;
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3.高效液相色谱法测定亚叶酸钙含量的不同色谱柱筛选 [J], 周芳;崔潇婷;陈未
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5.高效液相色谱法测定格列本脲片和格列齐特片的含量 [J], 黄艳芳;李慧敏
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高效液相色谱法测定左亚叶酸钙注射液有关物质的条件研究【摘要】目的建立左亚叶酸钙注射液有关物质测定方法。
方法采用反相离子对试剂高效液相色谱法，色谱柱为Varian C18 （250mm×4.6mm，5μm），流动相：（磷酸氢二钠2.2g加10%四丁基氢氧化铵8ml，以水稀释到780ml，用1→10磷酸调节pH至7.8）:甲醇为78:22；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长286nm。
结果左亚叶酸钙质量浓度为0.04～120μg/ml内，线性关系良好（r=0.9999）。
结论方法专属性好，准确，灵敏，用于左亚叶酸钙注射液有关物质测定结果可靠。
【关键词】高效液相色谱法；左亚叶酸钙注射液；有关物质；10－甲酰叶酸【Abstract】 Objective To establish the method to determine the related substance in calcium levfolinate injection.Methods The RP-ion pair HPLC methods was used，use a Varian C18 column （250mm×4.6mm，5μm），the mobile phase consisted 0.8mg/ml tetrabutyl aminourium hydroxide acid and 2.2g disodium hydrogen phosphate，adjusted to pH 7.8 with 1→10phosphoric acid：methanol 78:22，at a flow rate of 1.0ml/min，the temperature of the column was 40℃，detection wavelength was286nm.Results The linear calibratien curves obtained in concentration range of 0.04～120μg/ml at calcium levfolinate （r=0.9999）.Conclusion The method is simple，accurate，sensitive and reliable for determination the related substance in calcium levofolinate injection.【Key words】 HPLC；calcium levofolic acid injection； related substance；10-formylfolic acid左亚叶酸钙注射液是采用经手性拆分亚叶酸钙后所得左亚叶酸钙原料药配制而得的一种手性药物注射剂。
其广泛用于贫血、肿瘤的治疗。
该品种是安徽省科隆药物研究所研制的一个新药。
原有的HPLC有关物质测定方法色谱条件为：C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流速1.0ml/min，柱温：40℃，流动相：（磷酸氢二钠2.2g加10%四丁基氢氧化铵2ml，以水稀释到780ml，用1→10磷酸调节pH至7.5）:甲醇为78:22，供试液浓度：0.14mg/ml。
但是在用该色谱条件进行测定左亚叶酸钙注射液有关物质时，发现杂质峰没能得到基线分离，且不能检测到杂质10－甲酰叶酸。
根据同系物HPLC色谱条件相近原则，参考《中国药典》［1］2005年版注射用亚叶酸钙冻干粉针有关物质测定色谱条件及《欧洲药典》［2］左亚叶酸钙原料药有关物质测定色谱条件，在此基础上用四点法求出容量因子对离子对试剂浓度和pH值的回归多项式，进而求得流动相离子对试剂浓度和pH值的最佳值。
1 仪器与试剂1.1 仪器 Agilent1100液相色谱仪，包括Agilent 色谱工作站，单元泵，可变波长紫外检测器，外配AT-130柱温箱，TU-1800紫外可见分光光度计。
1.2 试剂甲醇：色谱纯。
磷酸氢二钠，10%四丁基氢氧化铵水溶液，磷酸，均为分析纯。
左亚叶酸钙对照品（含量99.2%，水分17%，批号20041029）;亚叶酸钙消旋体（含量99.2%，水分11.7%，批号20040820）;10－甲酰叶酸（《美国药典》认可标准品，含量>99.5%）。
左亚叶酸钙注射液（本公司生产，批号050701，50mg/5ml）。
2 色谱条件色谱柱：Varian C18 （250mm×4.6mm，5μm）;流速：1.0ml/min;柱温：40℃;检测波长：286nm;进样量：20ml。
3 四点法求出各组分峰响应面多项式按Schoenmakers公式组分的容量因子k’的对数和常用色谱参数（流动相中强溶剂的比例，pH值，柱温Ｔ-1等）呈一次或二次线性关系［3］，对二参数即二因子体系可采用下列公式Lnk’=β0+β1x1+β2x2+β12x1x2，在本实验中把公式定为Lnk’=A+B［C］+C［pH］+D［C］［pH］其中A、B、C、D为多项式的未定系数，［C］为离子对试剂浓度mg/ml，［pH］为流动相最终pH值，根据亚叶酸钙有关物质测定HPLC色谱条件［C］为0.8mg/ml，［pH］为8.28，取用浓度为0.1 mg/ml的左亚叶酸钙注射液水溶液用该色谱条件进行有关物质测定，色谱图见图1。
（略）发现各杂质峰基本能得到基线分离，并能检测出10－甲酰叶酸杂质峰，设定另三个实验点为［C］：0.8mg/ml，［pH］：8.14，［C］：1.13mg/ml，［pH］：8.28，［C］：1.13mg/ml，［pH］：8.14。
按k’=t-t0/t0，计算出4个实验点各组分峰的k’，代入Lnk’=A+B［C］+C［pH］+D［C］［pH］，求出9个峰的容量因子k’响应面多项式为：Lnk1’=-33.63566+27.13161［C］+4.04900［pH］-3.34589［C］［pH］Lnk2’=-17.41685+14.07742［C］+2.08591［pH］-1.71515［C］［pH］Lnk3’=-16.72214+13.46845［C］+1.99667［pH］-1.61905［C］［pH］Lnk4’=-11.47669+9.01227［C］+1.36901［pH］-1.07591［C］［pH］Lnk5’=-11.98090+8.9332［C］+1.43346［pH］-1.06335［C］［pH］Lnk6’=-9.79820+7.70891［C］+1.17938［pH］-0.91020［C］［pH］Lnk7’=-9.43013+6.88176［C］+1.14269［pH］-0.80801［C］［pH］Lnk8’=-8.84756+6.48648［C］+1.08823［pH］-0.75779［C］［pH］Lnk9’=-6.72357+4.10918［C］+0.84392［pH］-0.44892［C］［pH］其中第五峰为最难分离物质对峰按：σLnk5’ σ［C］=8.9332-1.06335［pH］→0得［pH］=8.40σLnk5’ σ［pH］=1.4336-1.06335［C］→得［C］=1.35mg/ml求得色谱条件中［C］和［pH］的上限值为［C］：1.35mg/ml，［pH］：8.40。
在［C］：1.35mg/ml，［pH］：8.28和［C］：0.8mg/ml，［pH］：8.40条件下对左亚叶酸钙注射液进行有关物质的测定，综合比较已做的四个实验点色谱图，以［C］：0.8mg/ml，［pH］：8.28和［C］：1.13mg/ml，［pH］：8.28两个实验点得出的色谱图各峰均得到较好的分离。
色谱图见图2。
4 方法专属性考察4.1 辅料的干扰性实验按左亚叶酸钙注射液处方比例配制空白样品，用水配制成０.1mg/ml的溶液，吸取20ml进样，记录色谱图见图3－A，可见处方中的辅料对测定无干扰。
4.2 取左亚叶酸钙标准品配制成0.1mg/ml的水溶液，进样20ml，记录色谱图见图3-B。
4.3 氧化破坏实验取0.1mg/ml的左亚叶酸钙注射液水溶液5ml，置10ml 容量瓶内，加双氧水5ml，放置24h后进样20ml，记录色谱图见图3－C。
4.4 酸性破坏实验取0.1mg/ml的左亚叶酸钙注射液水溶液5ml，置10ml 容量瓶内，加1mol/L盐酸5ml，放置24h，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.0，进样20μl，记录色谱图见图3－D。
4.5 碱性破坏实验取0.1mg/ml的左亚叶酸钙注射液水溶液5ml，置10ml 容量瓶内，加1mol/L氢氧化钠5ml，放置24h，用1mol/L盐酸调pH至6.0，进样20μl，记录色谱图见图3－E。
4.6 光照破坏实验取左亚叶酸钙注射液1支，置4500LX的强光下，放置10天，配制0.1mg/ml的水溶液，进样20μl，记录色谱图见图3－F。
图2 ［C］：1.13mg/ml［pH］：8.28所得左亚叶酸钙注射液色谱图Fig2 Calcuim Levofolinate Injection HPLC chromatograms of ［C］：1.13mg/ml［pH］：8.28图3 方法专属性考察图谱Fig3 HPLC chromatograms of the exclution inspection of methodA. 空白溶液（blank solution）；B.对照品溶液（reference solution）C. 氧化破坏试验（the oxidative destroyed test）；D.酸破坏试验（the acid destroyed test）E. 碱破坏试验（the base destroyed test）；F.光照破坏试验（the light destroyed test）5 线性关系考察称取5.03mg 10－甲酰叶酸至50ml容量瓶内，用流动相定容至刻度作为母液，分别量取母液配制成含10－甲酰叶酸0.1、0.2、0.5、1、2、4μg/ml的水溶液，分别取20μl进样，每个样品各进样3次，计算峰面积的平均值，3次峰面积的RSD均小于2%，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C，μg/ml）为横坐标，进行回归处理，标准曲线方程为A=28.812C-0.63894，r=0.9999。
在0.1～4.0μg/ml 浓度范围内线性关系良好。
称取左亚叶酸钙标准品（含量99.2%，水分17%），用水配制成含左亚叶酸钙120、100、4、2、1、0.04μg/ml的水溶液，分别取20μl进样，每个样品各进样3次，计算峰面积的平均值，3次峰面积的RSD值均小于2%，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C，mg/ml）为横坐标，进行回归处理，标准曲线方程为A=79246.3C+0.058548，r=0.9999。