不同品种红葡萄酒花色苷高效液相色谱指纹图谱识别
红葡萄酒中花色苷的超高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测方法建立
红葡萄酒中花色苷的超高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测方法建立陈欣然; 张波; 张欢; 解迎双; 王波; 周小平; 李敏; 韩舜愈【期刊名称】《《食品与发酵工业》》【年(卷),期】2019(045)007【总页数】7页(P262-268)【关键词】花色苷; 超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(UPLC-ESI-QQQ); 检测【作者】陈欣然; 张波; 张欢; 解迎双; 王波; 周小平; 李敏; 韩舜愈【作者单位】甘肃农业大学食品科学与工程学院甘肃兰州 730700; 甘肃省葡萄与葡萄酒工程学重点实验室(甘肃农业大学) 甘肃兰州 730700; 甘肃出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心甘肃兰州 730000【正文语种】中文颜色是评价葡萄酒质量优劣的重要指标之一，花色苷作为颜色的物质基础，在其中发挥着重要的作用。
检测发现，花色苷是一类多酚类物质，作为一种安全性高的天然色素已在食品、医药、化妆品等领域有广泛应用[1]。
红葡萄酒中的花色苷可以从葡萄果皮中浸渍而来，并在生产和贮藏中转化形成以花色苷及其衍生物为主要类型的花色苷体系，从而影响葡萄酒的色泽[2]。
这其中花翠素(delphinidin，Dp)、花青素(cyanidin，Cy)、3’-甲基花翠素(petunidin，Pt)、3’-甲基花青素(peonidin，Pn)和3’, 5’-二甲花翠素(malvidin，Mv)的3-O-单葡萄糖苷形式和其酰化形式(乙酰基、p-香豆酰基和咖啡酰基等)的衍生物是葡萄和葡萄酒中主要的花色苷[3]。
近年来，由于缺乏花色苷标准品，导致可准确鉴定的花色苷数量有限。
因此，建立高灵敏度、高准确度的花色苷分析方法越来越受到人们的关注。
目前，国外对葡萄及葡萄酒中花色苷物质及其衍生物的鉴定研究比较成熟[4-5]，但国内对葡萄及葡萄酒中花色苷的研究却主要集中在对总花色苷的提取及含量测定方面，其中紫外分光光度法最为常见[6]，而对花色苷的定性鉴定则多采用液相色谱技术[7-8]。
不同年份及产区红葡萄酒花色苷组成分析
不同年份及产区红葡萄酒花色苷组成分析张世杰;袁春龙;杨健;杨晓雁;杨丽【摘要】[目的]分析花色苷与葡萄酒年份及产区的关系,为葡萄酒感官品鉴提供依据.[方法]以二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷为标准样品,利用高效液相色谱分析法,对来自不同产区的45款不同年份酿制的红葡萄酒的花色苷组成及其质量浓度进行测定分析.[结果]在45种不同年份酿制且来自不同产区的红葡萄酒中,共测定出花翠素-3-O-葡萄糖苷、花青素-3-O葡萄糖苷、3'-甲花翠素-3-O-葡萄糖苷、甲基花青素-3-O-葡萄糖苷、二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷、甲基花青素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷、二甲花翠素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷、甲基花青素-3-O-(6-O-对香豆酰)葡萄糖苷、二甲花翠素-3-O-(6-O-对香豆酰)葡萄糖苷等9种花色苷,其中二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷和二甲花翠素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷为主要单体花色苷,分别占总花色苷的50％和15％,是葡萄酒的主要2种呈色物质.葡萄酒花色苷与其年份和产区有一定的相关性.[结论]不同酒样单体花色苷组成及质量浓度存在显著差异,其与酒样的生产年份、葡萄品种、产区均有一定相关性.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(044)003【总页数】7页(P160-166)【关键词】葡萄酒;花色苷;酿制年份;葡萄品种【作者】张世杰;袁春龙;杨健;杨晓雁;杨丽【作者单位】西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】TS261.4花色苷是红葡萄酒颜色的最主要组分，对葡萄酒的感官品质，如色泽、苦味、收敛性、澄清度和稳定性具有重要作用。
不同品种山葡萄酒中花色苷的成分分析
不同品种山葡萄酒中花色苷的成分分析赵权;王军;韩富亮【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(041)006【摘要】[目的]分析不同品种山葡萄酒中的花色苷成分,为山葡萄品种选育和山葡萄酒加工提供理论依据.[方法]应用HPLC-MS/MS技术,以左山一、左山二、双红、双优、双丰5个山葡萄品种为试验材料,分析不同品种山葡萄酒中花色苷成分的差异.[结果]同一产地不同品种山葡萄酒中花色苷的种类和总花色苷质量浓度略有差别,左山一、左山二、双红、双优、双丰葡萄酒中的花色苷种类分别有13,14,13,14和14种,其总花色苷的质量浓度分别为1 523.568,1 525.589,1 409.071,1140.323,1 292.324mg/L.[结论]5种山葡萄酒中共检测出15种花色苷,其中左山二葡萄酒中总花色苷质量浓度最高.【总页数】7页(P195-201)【作者】赵权;王军;韩富亮【作者单位】吉林农业科技学院中药学院,吉林吉林132101;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S663.1;Q946.83【相关文献】1.不同品种山葡萄果皮和酒中非花色苷酚的成分分析 [J], 赵权;王军;杨成君2.不同品种紫肉甘薯抗氧化能力及花色苷成分分析 [J], 邹波;曾丹;吴继军;余元善;肖更生;徐玉娟3.HPLC－ESI－MSn分析不同品种山葡萄中花色苷成分 [J], 刘炎;黄鑫;杨义明;艾军4.HS-SPME-GC-MS分析两品种黄花菜中不同花部位挥发性成分 [J], 刘京宏; 刘薇; 卿志星; 曾朝彦; 钟晓红; 曾建国5.气相色谱-质谱联用法分析不同品种苹果酿造蒸馏酒中香气成分及特征 [J], 张志兵;连琛;詹瑞玲;刘美玉;安贵阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
红酒中多酚物质的检测
红酒中多酚物质的检测红酒中的多酚物质是指一类具有多个酚基团的化合物，如类黄酮、原花青素、花青苷等。
这些物质具有抗氧化、抗癌、抗衰老等多种生理活性，对人体健康具有重要意义。
对红酒中多酚物质的检测至关重要。
红酒中多酚物质的检测一般可以从以下几个方面进行。
首先是通过色谱法进行检测。
色谱法是常用的分离和检测技术，可以有效地分离红酒中的多酚物质。
常用的色谱方法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
HPLC是一种在高压下进行的液相色谱法，可以准确测定红酒样品中不同多酚物质的含量。
GC是一种气相色谱法，可以通过分离和检测红酒中的挥发性多酚物质。
其次是通过光谱法进行检测。
红酒中的多酚物质具有较强的吸收和发射光谱特征，可以利用紫外-可见光谱法（UV-Vis）、红外光谱法（IR）和荧光光谱法（FL）等进行检测。
UV-Vis光谱法可以用来测定红酒中的类黄酮等多酚物质的吸收峰和波长，从而推测其含量。
IR光谱法可以通过红酒中多酚物质吸收红外光谱的特点，分析多酚物质的种类和含量。
FL 光谱法则可以利用多酚物质的荧光特性对红酒中的多酚物质进行快速检测。
再次是通过物化性质检测。
红酒中的多酚物质具有一定的物化性质，在检测中可以利用这些性质进行分析。
多酚物质具有强酸性和金属络合性，可以通过酸碱滴定法测定红酒中的多酚物质含量。
多酚物质也具有一定的氧化还原性，可以通过氧化还原滴定法进行检测。
最后是通过质谱法进行检测。
质谱法是一种高灵敏度、高分辨率的分析技术，可以准确测定红酒中多酚物质的种类和含量。
常用的质谱方法有质子核磁共振谱（1H NMR）、质谱（MS）和质谱图谱（MS/MS）等。
质谱法可以通过多酚物质的质荷比来鉴定和测定其含量，是红酒中多酚物质检测的重要手段。
红酒中多酚物质的检测是一项复杂而细致的工作，需要综合运用色谱法、光谱法、物化性质检测和质谱法等多种技术手段，以获得准确和可靠的结果。
这对于红酒行业提高产品质量，满足消费者对健康产品的需求具有重要意义。
不同种类红葡萄酒CIELab参数与花色素苷化合物的相关分析
中国农业科学 2010,43(20):4271-4277 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.20.019收稿日期：2010-05-28；接受日期：2010-09-08 基金项目：国家自然科学基金项目（31000756）、西北农林科技大学科研业务专项（QN2009061） 作者简介：陶永胜，副教授，博士。
E-mail ：taoyongsheng@不同种类红葡萄酒CIELab 参数与花色素苷化合物的相关分析陶永胜，张 莉（西北农林科技大学葡萄酒学院，陕西杨凌 712100）摘要：【目的】分析葡萄酒颜色空间参数与花色素苷化合物的相关性，旨在从颜色角度区分研究不同类型的红葡萄酒。
【方法】采集河北沙城和昌黎两个产区12种年份、品种以及陈酿方式有差异的葡萄酒样品，经反相C 18柱分馏得到9个馏分，然后低压旋转浓缩至干，用与分馏样品等量的模拟酒溶解。
之后，葡萄酒及其分馏物经UV-visible 光谱分析，计算CIELab 颜色空间参数。
透射光谱相关分析表明，4个馏分与供试葡萄酒颜色相关性显著，然后这4个馏分经HPLC 分析鉴定花色素苷化合物。
【结果】数据主成分分析表明，年轻红酒和陈年红酒在主成分图中差异明显，年轻红酒围绕花色素苷化合物呈分散分布；年轻红酒颜色的主要贡献者为花色素苷化合物，陈年红酒的颜色与花色素苷化合物几乎没有联系；CIELab 参数a*与花色素苷化合物含量正相关，L*和b*与之反相关；4个馏分中花色素苷化合物差异明显。
【结论】供试样品分析研究认为，从颜色角度分析花色素苷化合物可以区分不同年份、品种与陈酿方式的红葡萄酒，尤其是区分不同年份的红葡萄酒效果更好。
关键词：CIELab 参数；红葡萄酒；花色素苷；分馏；HPLCCorrelation Analysis of CIELab Parameters andAnthocyanidins of Different Red WinesTAO Yong-sheng, ZHANG Li(College of Enology, Northwest A & F University, Yangling 712100, Shaanxi )Abstract: 【Objective 】 The correlation analysis of color parameters and anthocyanidins was made to find some important information for distinguishing different red wines. 【Method 】 Twelve red wines are different in years, cultivars and ageing method from Changli and Shacheng were sampled. Nine fractions of every wine were collected with C 18 column, and then they were lyophilized. The residue of each fraction was resolved with synthetic wine of the same volume with the fraction sample. The transmittance spectra of wines and their fractions were measured and the CIELab parameters were calculated. The correlation analysis of transmittance spectra between wines and fractions showed that four fractions were significantly correlated with wines. The anthocyanidins in these four fractions were identified by HPLC. 【Result 】 Principle component analysis (PCA) of the data indicated that aged wines were significantly different with young wines in the PCA plot. Young wines were scattered around the anthocyanidin compounds. Anthocyanidins were the main contributors of the colour of young wines, while they played little role in the color of aged wines. The parameter of CIELab a* was related positively with anthocyanidins, and L* and b* were negatively with them. PCA also showed that the four important fractions had their own typical anthocyanidin compounds. 【Conclusion 】 It is suggested that the analysis of anthocyanidins from the color point could distinguish different red wines ，such as vintage, variety and ageing method, especially for wines from different vintages.Key words: CIELab parameters; red wine; anthocyanidin; fraction; HPLC0 引言【研究意义】葡萄酒的感官质量包括葡萄酒颜色、香气和口感，而葡萄酒的颜色是消费者最先感受的葡萄酒特征，他们会根据以往的经验由颜色提前心理感受葡萄酒的香气和风味[1]。
高效液相色谱法同时测定葡萄酒中5种酸性红色素
Ａｂ ｓ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｉ ｃ（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ）ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ａ ｓ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ ｌ ｙ
（ １ ． 山东省食 品药 品检 验研究 院 ， 山东 济南 摘 ２ ５ ０ １ ０ １ ； ２ ． 中海油 山东化学工程 有限责任公司 ， 山东 济南 ２ ５ ０ １ ０ １ ）
要： 通过对提取溶剂 、 流 动相条件 、 最大吸收 波长及色谱条件 的优化 ， 建立 了一种 同时测定葡萄酒 中
为１ ． ５ ％ ～５ ． ８ ％。
关键 词 ： 葡萄酒 ； 酸性红 色素 ； 高效液 相色谱
中图分类号 ： ０ ６ ５ ７ ． ７ ２ 文献标识号 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ — ４ ９ ４ ２ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ９— ０ １ １ ７ — ０ ４
Ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎｅ ｏ ｕｓ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆｉ ｖ ｅ Ａｃ ｉ ｄ Ｒｅ ｄ Ｐｉ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｉ ｎ Ｇｒ ａ ｐ ｅ Ｗ＿ ｉ ｎ ｅ ｂ ｙ Ｈｉ ｇ ｈ Ｐｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ Ｌｉ ｑ ｕ ｉ ｄ Ｃｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ
Ｗａ ｎ ｇ Ｙ ａ ｎ ｌ ｉ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｔ ａ ｏ ，Ｓ ｕ Ｓ ｈ ｕ ￣ｎ ｇ ，Ｙ ｕ Ｗｅ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ， Ｘ ｕ ｅ Ｘ ｉ ａ
（ １ ． Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇＩ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｆ ｏ ｒＦ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄＤｒ ｕ ｇ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ， ／ｎ Ｊ ａ ｎ ２ ５ ０ １ ０ １ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｃ Ｎ Ｏ Ｏ Ｃ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｏ ． ， Ｌ ｔ ｄ ． ， Ｊ ／ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ １ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
红酒中酚物质的检测概述
红酒中酚物质的检测概述因此，在红酒生产和鉴定中，需要对红酒中的酚类物质进行检测，以确认红酒的质量和品质。
本文将对红酒中酚类物质的检测方法进行概述。
一、颜色测定法颜色是红酒中最直观的特征，花青素和其他酚类物质是决定红酒颜色的主要色素。
通过比较红酒样品与标准色卡的颜色差异，可以得出红酒中各种酚类物质的含量。
颜色测定法是最简单、最直观的检测方法之一。
二、高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是目前最为常用的定量检测方法，能够准确地分析红酒中各种酚类物质的含量。
采用逆相色谱技术，可对小分子量且亲水性较强的酚类物质进行分离和定量。
同时，也可通过选择性检测器，如荧光检测器、紫外线检测器等，进一步提高检测灵敏度和选择性。
气相色谱法（GC）主要用于分析红酒中含量较低的天然挥发性香气物质，如香叶醛、香豆素等。
常常结合质谱检测器（MS）使用，以提高检测的灵敏度和准确性。
通过GC-MS可以定性和定量分析红酒中的香气成分和其他有机成分。
四、核磁共振法核磁共振法（NMR）是一种高分辨率、非破坏性的检测方法，可用于分析红酒中绝大部分成分，如糖类、有机酸、氨基酸等。
通过检测样品中的特定核磁共振信号，可确认样品中的化学物质种类和含量，并对成分进行定量分析。
五、基于生物传感器的检测方法基于生物传感器的检测方法是一种新型的检测方法。
将富含特定酶或细胞的生物传感器材料与待检测的红酒样品接触，通过检测生物体系的反应，确定样品中的酚类物质含量。
该方法具有灵敏度高、响应时间快、操作简便等特点，已逐渐得到应用。
综上所述，红酒中酚类物质的检测方法多种多样，各有优缺点。
在实际应用中，可以根据实际需要选择合适的检测方法。
同时，还需要注意检测方法的灵敏度、准确性、重现性等指标，以保证检测结果的可靠性和准确性。
红酒中多酚物质的检测
红酒中多酚物质的检测
红酒中的多酚物质是指红酒中含有的一类具有抗氧化活性的化合物。
这些化合物是由酚类结构单元组成的，常见的多酚物质包括类黄酮、花青素、儿茶素等。
红酒中的多酚物质是由葡萄皮和葡萄籽中提取而来，具有多种生理活性，对人体健康有着重要的保护作用。
红酒中的多酚物质检测是对红酒中多酚物质含量进行定量分析的过程。
这个过程可以通过多种方法进行，包括色谱法、质谱法、紫外-可见光谱法等。
下面将介绍几种常用的检测方法。
一、高效液相色谱法
高效液相色谱法是目前常用的一种多酚物质检测方法。
该方法使用高效液相色谱仪来进行分析，可以对不同种类的多酚物质进行分离和定量。
这种方法具有操作简便、分离效果好、分析速度快等优点，但需要复杂的仪器设备和试剂，所以不适合在普通实验室中进行。
三、紫外-可见光谱法
紫外-可见光谱法是一种简单有效的多酚物质检测方法。
该方法主要是利用多酚物质对紫外-可见光的吸收特性进行分析，通过测量样品对光的吸收强度来确定多酚物质的含量。
这种方法操作简便、成本低廉，适合在普通实验室中进行，但灵敏度较低，对含量较低的多酚物质检测可能不够敏感。
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第22卷第10期2006年10月农业工程学报T ra nsactio ns o f the CS AE V o l.22 N o.10Oct. 2006不同品种红葡萄酒花色苷高效液相色谱指纹图谱识别张军翔1,2,冯长根1※,李 华3(1.北京理工大学机电工程学院,北京100081; 2.宁夏大学农学院,银川750001; 3.西北农林科技大学葡萄酒学院,杨凌712100)摘 要:利用高效液相色谱法建立了9个品种葡萄酒的花色苷指纹图谱,对不同品种葡萄酒进行识别。
HP LC 检测:采用反相C 18柱,调整流动相p H 值1.6,二元梯度洗脱,检测波长518nm 。
指纹图谱建立方法:计算HPL C 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积,按相对保留时间排列相对应的相对峰面积。
采用夹角余弦法计算相关系数,并使用SPSS11.0统计分析软件对指纹图谱进行系统聚类分析。
结果表明:不同品种葡萄酒花色苷的HPL C 指纹图谱存在着差异,山葡萄种及杂种葡萄酒具有区别于欧亚种葡萄酒的特征色谱峰;不同品种葡萄酒花色苷指纹图谱的相似性不同,不同种间品种葡萄酒相似性较差;系统聚类分析初步建立了不同品种葡萄酒花色苷识别模式,对葡萄酒进行了较好的识别。
指纹图谱技术结合聚类分析是识别不同酿造品种葡萄酒的有效方法之一。
关键词:品种葡萄酒;花色苷;高效液相色谱;指纹图谱中图分类号:S633.1;T S261.7 文献标识码:A 文章编号:1002-6819(2006)10-0216-06张军翔,冯长根,李 华.不同品种红葡萄酒花色苷高效液相色谱指纹图谱识别[J].农业工程学报,2006,22(10):216-221.Zhang Junx ia ng ,Feng Changg en ,Li Hua .Recog nition of r ed wines fro m different g rape cultiva rs by high -per fo rmance liquid chr oma tog raphy a ntho cyanins fing erprint [J].Tr ansac tions of th e CSA E,2006,22(10):216-221.(in Chinese with Eng lish abstract )收稿日期:2006-03-30 修订日期:2006-05-21基金项目:宁夏回族自治区重大科技攻关项目作者简介:张军翔(1971-),男,满族,河北清河人,副教授,博士生,主要从事葡萄与葡萄糖的教学和研究工作。
北京 北京理工大学机电工程学院,100081。
Em ail :zhangjunxiang @ ※通讯作者:冯长根(1953-),男,教授,研究方向为应用化学。
北京北京理工大学机电工程学院,100081。
Email :cgfeng @w uma .com .cn0 引 言酿造品种对葡萄酒的特性和质量起着决定性的作用,对于同一类型的葡萄酒酿造品种不同,其特点也不相同。
葡萄酒酿造品种可以通过有经验的品尝者品尝鉴定,但存在一定的主观性,可操作性差。
由于品种的选择和种植受地域的限制,也由于品种葡萄酒在消费者心目中成为质量的代名词,所以一些假冒酿造品种的葡萄酒也因势而生,严重地扰乱了市场秩序。
因此,建立一种客观的,可操作性的方法对葡萄酒酿造品种进行鉴定,是解决问题的关键途径之一。
葡萄品种的区分可以采取DN A 鉴定方法[1],但这种方法应用到葡萄酒的酿造品种的鉴定上是没有意义的,因为很难从葡萄酒中提取出酿造葡萄品种的DN A 。
近些年,许多研究通过对葡萄酒的化学物质,特别是对一些在葡萄酒中含量较少的次生代谢物质的分析,鉴别不同品种葡萄酒[2-4]。
这些研究主要针对葡萄酒中某种或某些成分的差异,对酿造品种进行鉴别,但方法需要对成分进行鉴定和定量分析,比较繁杂,并缺少整体性的鉴别。
指纹图谱技术的优势是不需要测定产物或产品的各种化学成分,而只需要对产物或产品化学成分的含量和组成(比例)利用色谱等现代分析方法反映出来,从宏观上进行分析来确定产物与产物间的差异,具有整体性和模糊性的特点[5]。
指纹图谱在中药质量控制上已得到广泛应用[6]。
红葡萄酒的颜色主要是由花色苷(花色素苷)及其聚合物形成的。
不同品种的葡萄花色苷的含量构成会有一定的差异[7],国外对葡萄及葡萄酒中的花色苷进行了大量的研究和鉴定,并对不同酿造品种的红葡萄酒中花色苷的差异进行了对比研究[8-10],但采用指纹图谱方法从整体性上对葡萄酒花色苷指纹图谱进行研究,并对不同品种葡萄酒进行识别的相关研究并未见报道。
另外,本文首次对山葡萄酒及其杂种葡萄酒花色苷指纹图谱进行了研究。
目前国内葡萄酒市场主要有3个种葡萄酿造的葡萄酒,分别是欧亚种、山葡萄种(或杂交种)、欧美杂交种,其中主要品种有十几个。
本文利用高效液相色谱(HPLC )花色苷指纹图谱方法对国内主要酿造品种的葡萄酒进行了研究,并利用聚类分析初步建立识别模式,对品种葡萄酒进行鉴别。
本研究为葡萄酒化学鉴定提供了新的方法和思路,同时也为鉴别假冒品种葡萄酒提供了手段和依据。
1 材料与方法1.1 材料表1为9个不同酿造品种葡萄酒的15个样品。
样品采用常规工艺酿造[11]:发酵温度26～28℃,浸渍时间5～7d,未经过苹果酸-乳酸发酵。
酒精发酵结束后,大罐储藏,2005年4～5月取样分析。
1.2 试验方法1)仪器AGILEN T 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司),化学工作站,真空脱气装置、自动进样装置、VW D 紫外检测器、真空抽滤机。
216表1 不同品种酿造的葡萄酒样品Ta ble 1 W ine samples fr om v arious gr ape cultiv ars酿造品种产地年份/年备 注赤霞珠(Cabern etSauvignon)1宁夏银川2004欧亚种(V .vinif era )蛇龙珠(Cabern et Gernis ch et )1宁夏银川2004欧亚种(V .vinif era )品丽珠(Cabern et Franc )1宁夏银川2004欧亚种(V .vinif era )梅鹿辄(M erlot )宁夏银川2004欧亚种(V .vinif era )黑比诺(Pinot Noir)1宁夏银川2004欧亚种(V .vinif era )西拉(森哈,Syrah)1宁夏银川2004欧亚种(V .vinif era )双红(Doub le Red)河北承德2004山葡萄种(V .am urensis )左优红(Zuoyou Red)河北承德2003山葡萄×欧亚种(hybridof V .amurensis ×V .vinif era )玫瑰蜜(Ros e Honey)云南弥勒2003美洲种×欧亚种(黑虎香,hyb rid of V .labr us ca ×V .vinif era )解百纳(Cabern et )宁夏银川2004赤霞珠、品丽珠和蛇龙珠品种混合酿造,比例约为5∶2∶3赤霞珠(Cabern etSauvignon )2宁夏银川2003欧亚种(V .vinif era )蛇龙珠(Cabern et Gernis ch et)2宁夏银川2003欧亚种(V .vinif era )品丽珠(Cabern et Franc)2甘肃武威2004欧亚种(V .vinif era )黑比诺(Pinot Noir)2甘肃武威2004欧亚种(V .vinif era )西拉(森哈,Syrah)2宁夏银川2003欧亚种(V .vinif era )2)试剂乙腈:液相色谱试剂,含量≥99.9%,上海润捷化学试剂有限公司;磷酸:优级纯,H 3PO 4含量≥85%,天津市科密欧化学试剂开发中心;KH 2PO 4:分析纯,含量≥99.5%,上海化学试剂有限公司;3)样品处理样品为原酒,经过800m g /L 的皂土和80mg /L 明胶下胶澄清处理,经0.45μm 微孔滤膜过滤。
4)HPLC 分析ZORBAX SB -C 18(4.6×250mm ,5μm )色谱柱。
参考并改进了B álint Berente 等人的方法[10]。
检测波长518nm;流动相:A 液∶乙腈-磷酸缓冲液(v /v =5/95);B 液∶乙腈-磷酸缓冲液(v /v=50/50)。
磷酸缓冲液的配制:10mM 的K H 2PO 4,用磷酸调p H 值为1.6。
配制用水为去离子水。
洗脱梯度:B 液:0时10%;0～30min 时达到45%;30～31min 时45%～100%;31～34min 时保持100%;34～35min 时100%到10%,保持5min 。
流速为1m L /min 。
柱温50℃,进样体积20μL 。
5)仪器精精密度和试验的重复性试验仪器的精密度试验:取同一处理后的葡萄酒样品,连续进样5次。
考察主要色谱峰的相对保留时间T 和相对峰面积S r 的一致性,并计算各自的相对标准偏差(RSD %)。
试验的重复性试验:取同一样品原酒分5份处理样品,分别进样,考察主要色谱的相对保留时间T 和相对峰面积S r 的一致性,并计算各自的相对标准偏差(RSD %)。
6)葡萄酒花色苷HPLC 指纹图谱建立方法将样品中各组分的相对保留时间T 按大小依次排列,并在每个T 下标出该组分的相对面积S r ,比较不同样品中具有相同T 值的S r 。
参照文献[12]方法计算相对保留时间和相对峰面积。
相对保留时间计算公式为:T =t n /t rs 。
其中t n 为待测峰绝对保留时间,t rs 为参考峰的绝对保留时间。
相对峰面积计算公式为:S r =(A i /A ra )×100。
其中A i 为待测峰面积,A ra 为样品参考峰面积。
选择色谱图中较中心位置、具有较高强度和样品共有的峰为参考峰。
2 结果与讨论2.1 仪器精密度和可重复性试验结果使用解百纳葡萄酒(赤霞珠、品丽珠和蛇龙珠混合酿造)。
对主要峰检验仪器的精密度和试验的重现性。
对仪器精密度的试验,主要峰相对保留时间相对标准偏差(RSD)均小于1.0%,相对峰面积RSD 均小于2.0%,说明仪器有很好的精密度。
对试验重复性的试验,主要峰相对保留时间RSD 均小于 1.0%,相对峰面积RSD 均小于 3.0%,说明方法有很好的重复性,图1为解百纳葡萄酒重复性试验花色苷HPLC 图谱。
图1 解百纳葡萄酒重复性试验花色苷HP LC 图谱Fig.1 Antho cyanins HP LC of r epea tingtest o f Ca be rnet wine2.2 葡萄酒花色苷指纹图谱图2为9个品种葡萄酒HPLC 图谱,葡萄酒在上述试验条件下,色谱峰较多,分离效果佳。