自身抗体荧光片判读与讲解
常用自身抗体检查注意事项及分析
２】Ａｌｅｔａｈａ Ｄ，Ｎｃｏｇｌ Ｔ，Ｓｉｌｍａｎ ＡＪ，ｅｔ ａ１．２０１０ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ
ｃａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ：ａｎ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ
ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
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ＣｏＨｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ／Ｅｕｍｐｅａｎ Ｌｅａｇｕｅ ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ．Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ，２０１０。６９：
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Ｄｉｓ．２００７．６６：５３７－５４１．
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ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．
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自身抗体；检测
自身抗体的检测有利于疾病的诊断、临床分型、指 导治疗和判断预后，并有利于疾病发病机制的研究，但 这些都必须建立在检测结果准确的基础上。目前自身 抗体的检测过程主要存在以下３个问题：（１）检测方 法的差异；（２）检测试剂盒不规范；（３）检测人员水平 存在差异。随着免疫学的发展和自身抗体检测方法的 不断改进，必将出现疾病诊断、分型的新变化，因此建 立和规范新的自身抗体检测不仅是临床医生和患者的 需要，也是医学发展的必然趋势…。为了提高我国风 湿病的总体诊治水平，中华医学会风湿病学分会从 ２００２年起，每年对常用的５个项目做了质控检测（见
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《免疫荧光技术》课件
在选择荧光物质时，需要考虑其荧光光谱、稳定 性、溶解度、毒性等因素，以确保实验结果的准 确性和可靠性。
荧光标记
荧光标记
荧光标记是指将荧光物质与抗体、核酸、蛋白质等生物分 子结合，使其具有荧光特性，以便于在实验中检测和观察 。
荧光标记方法
荧光标记的方法主要有直接标记和间接标记两种，直接标 记是将荧光物质直接与生物分子结合，而间接标记则是通 过连接物将荧光物质与生物分子连接。
技术改进与优化
自动化与智能化
提高免疫荧光技术的自动化和智能化水平，减少 人工操作，提高检测速度和准确性。
灵敏度与特异性
进一步优化免疫荧光技术的抗体选择和标记技术 ，提高检测的灵敏度和特异性。
检测通量
开发高通量的免疫荧光技术平台，满足大规模临 床样本检测的需求。
应用领域的拓展
临床诊断
01
将免疫荧光技术应用于更多疾病种类的诊断，提高临床诊断的
《免疫荧光技术》 PPT课件
目录
• 引言 • 免疫荧光技术的原理 • 免疫荧光技术的操作流程 • 免疫荧光技术的应用实例 • 免疫荧光技术的优缺点 • 未来展望
01
引言
什么是免疫荧光技术
免疫荧光技术是一种基于抗原-抗体反应的荧光标记技 术，通过将荧光物质与抗体结合，对细胞或组织中的抗 原进行定位和定性分析。
准确性和可靠性。
药物研发
02
利用免疫荧光技术监测药物对细胞的作用和影响，为新药研发
提供有力支持。
生物科学研究
03
拓展免疫荧光技术在生物科学研究中的应用，如细胞信号转导
、蛋白质相互作用等领域的探究。
THANKS
感谢观看
1980年代至今
cd20结果判读标准
cd20结果判读标准一、绪论在临床医学中，血液样本的检测结果对于疾病的诊断和治疗起着重要的作用。
CD20是一种表面抗原，广泛分布在B细胞的表面。
准确判读CD20结果对于疾病的诊断和治疗选择至关重要。
本文将介绍CD20结果的判读标准，以帮助临床医生准确解读实验室检测结果。
二、CD20阳性判读标准CD20阳性显示为细胞表面出现特定的CD20抗体结合，常用于测量B细胞的存在和数量。
CD20阳性的判读标准主要依据细胞表面抗原的阳性表达，包括以下几个方面：1. 光密度测定：通过流式细胞仪测定CD20抗体的荧光染色强度，通过光密度大小判断CD20的阳性表达程度。
光密度值越高，说明CD20阳性表达越强。
2. 百分比判读：根据受检样本中CD20阳性细胞所占的百分比来判断是否阳性。
一般来说，当CD20阳性细胞百分比超过10%时，可以认为是阳性表达。
3. 细胞形态判读：通过显微镜观察细胞形态，如细胞膜上是否有明显的CD20抗原表达，以及CD20阳性细胞的形态特征是否符合阳性表达的特点。
细胞形态判读是一种常规的判读方法，但可能会受到操作人员主观因素的影响。
三、CD20阴性判读标准CD20阴性表示细胞表面没有CD20抗原的表达，常见于某些疾病的B细胞缺陷或治疗后的恢复期。
CD20阴性的判读标准主要包括以下几个方面：1. 光密度测定：通过流式细胞仪测定CD20抗体的荧光染色强度，通过光密度大小判断CD20的阴性表达程度。
光密度值越低，说明CD20阴性表达越弱。
2. 百分比判读：根据受检样本中CD20阴性细胞所占的百分比来判断是否阴性。
一般来说，当CD20阴性细胞百分比超过90%时，可以认为是阴性表达。
3. 细胞形态判读：通过显微镜观察细胞形态，如细胞膜上是否没有明显的CD20抗原表达，以及CD20阴性细胞的形态特征是否符合阴性表达的特点。
细胞形态判读同样可能受到操作人员主观因素的影响。
四、CD20结果的临床意义CD20结果的判读标准与疾病的诊断和治疗密切相关。
副肿瘤性神经系统相关自身抗体
副肿瘤性神经系统相关自身抗体一、抗-Amphiphysin抗体（一）临床意义：神经疾病：亚急性感觉性周围神经病，多发性感觉运动神经病、副肿瘤性僵人综合征相关肿瘤是：小细胞肺癌、乳腺肿瘤（二）检验方法：方法：间接荧光法基质：大鼠小脑组织观察部位：大鼠额叶组织分子层及颗粒层荧光模型：观察部位显示弥漫性神经毡着色，浦肯野细胞胞浆经度着色，小脑颗粒层细胞核周围区域可见致密颗粒样着色（三）鉴别要点小脑分子层的突触呈致密的荧光着色，在小脑颗粒层的神经毡（神经终末）有斑片样的着色。
二、抗-CV2/CRMP5抗体（一）临床意义：神经相关疾病：亚急性感觉性周围神经病，边缘性脑炎、小脑性共济失调、帕金森综合征、多发性感觉运动神经病、肌病相关肿瘤：小细胞肺癌（77%）、胸腺瘤（6%）（二）检验方法：方法：间接荧光法基质：灵长类（猴）小脑组织观察部位：猴的小脑、脑干、脊髓、视交叉荧光模型：小脑组织上沙粒状荧光，以分子层较为突出（三）鉴别要点小脑全层呈沙粒样荧光三、抗-Ma抗体（一）临床意义：神经疾病：边缘叶脑炎、亚急性小脑变性相关肿瘤：睾丸生殖细胞肿瘤、肺癌、腮腺癌、乳腺癌、结肠癌（二）检测方法：方法：间接荧光法靶抗原：Ma1、Ma2/Ta、Ma3基质：大鼠小脑组织观察部位：神经元的核仁荧光模型:中枢神经系统神经元核仁荧光阳性，而细胞核与细胞浆弱着色（三）鉴别要点：基质上的小脑组织各种神经元核仁均着色（四）注意：抗-Ma2/Ta抗体阳性：（1）年轻人居多，边缘叶脑炎，并78%伴有睾丸生殖细胞肿瘤，预后好；（2）亚急性小脑变形，40%伴有肺癌抗-Ma1与Ma3抗体阳性：老年人常见，小脑功能障碍，睾丸生殖细胞癌，肺癌，腮腺癌，乳腺癌，结肠癌。
四、抗-Ri抗体（一）临床意义:神经相关疾病：躯干性共济失调、眼球活动障碍(眼球阵挛-肌阵挛综合征) 相关肿瘤：乳腺肿瘤，小细胞肺癌，卵巢癌，输卵管癌，膀胱癌，子宫癌（二）检测方法方法：间接荧光法法基质：猴小脑组织冰冻切片观察部位：小脑颗粒层的神经元细胞核荧光模型：神经元细胞核呈颗粒性荧光，小脑颗粒层的荧光较强，但小肠肌层神经元丛细胞无荧光（三）鉴别要点：与抗hu抗体区别：抗hu抗体能与小肠肌层神经元丛细胞核反应，有荧光模型，但Ri 抗体无。
自身抗体检测常见问题及策略20151219广州-周晖
17
问题1
未进一步稀释直接报告自身抗体滴度
建议：报告ANA（IIF）等滴度、荧光模型时，应对阳性样 本进一步稀释检测，或高、低稀释度同时检测。
原因1: 带现象
高倍稀释的血清荧光强度比低倍的更强
18
原因2: 高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖
AMA (鼠肾) pANCA (人中性粒细胞)
22
筛查试验与确认试验 滴度检测与报告 疑难荧光模型判读 抗ds-DNA临床应用 抗体阳性，但无症状
23
1.细胞核致密斑点型
均质？核颗粒?
分裂间期细胞核：致密细颗粒均匀分布 分裂期细胞：浓缩染色体强阳性，核浆其余区域阴性
dense fine speckles ：
uniformly distributed throughout the nucleus and on metaphase chromatin
a number of physiological functions • a cofactor for HIV replication through an interaction with the viral integrase • highly expressed in prostate tumor tissues
抗中性粒细胞浆抗体(ANCA) P-ANCA/C-ANCA
抗线粒体抗体(AMA)
4
筛查试验
检测对象 检测方法 基质/包被物 特异性 敏感性 总抗体 间接免疫荧光法(IIF) 天然抗原(细胞、组织为基质) 高 抗原谱完整、敏感性高； 检测到的抗体种类多 可能漏检部分特异性抗体 抗原分布不均、含量低 固定处理时可能破坏特定抗原
由于 Ro 抗原在细胞核含量较低、以及细胞固定过程可能对 Ro 抗原影 由于 Ro 抗原在细胞核含量较低、以及细胞固定过程可能对 Ro 抗原影 响，因此以细胞为基质的 IFA 方法绝非最好的抗 Ro/SSA 抗体检测方法 响，因此以细胞为基质的 IFA 方法绝非最好的抗 Ro/SSA 抗体检测方法
临床医学检验基础知识讲解抗核抗体检测方法
临床医学检验基础知识讲解抗核抗体检测方法抗核抗体是一种特殊的抗体，其免疫球蛋白IgG/IgM与人体组织细胞核及核抗原结合，形成免疫复合物，参与一系列免疫反应，可在多种自身免疫疾病中产生。
抗核抗体检测是临床自身免疫病的重要辅助诊断方法之一抗核抗体检测根据机制可分为免疫荧光法和酶联免疫吸附试验（ELISA）两种类型。
免疫荧光法是常用于抗核抗体检测的方法之一、其原理是将待测血清与包含有抗人IgG的间接荧光抗体相混合，再与已知含有荧光标记的DNA 等抗原结合，形成免疫复合物，通过荧光显微镜观察荧光信号来确定有无抗核抗体。
这种方法准确性高，敏感性和特异性较好，但病原学意义不明确的成分多，存在一定误诊率。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是另一种常用于抗核抗体检测的方法。
其原理是将待测血清与包含有抗人IgG/IgM的酶标抗体相混合，再与已知含有核抗原的试剂结合，形成免疫复合物。
之后通过加入底物，观察酶活性的变化判断是否存在抗核抗体。
ELISA法具有灵敏度高、特异性好、成本低等优势，被广泛应用于临床诊断。
抗核抗体主要是用于自身免疫性疾病的辅助诊断，如系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征、混合性结缔组织病等。
在系统性红斑狼疮的诊断中，抗核抗体是最为重要的指标之一，其阳性率可高达70-90%。
抗核抗体与系统性红斑狼疮的病情活动度、器官损伤程度相关，故抗核抗体的检测对于系统性红斑狼疮的早期诊断、病情监测和预后评估具有重要意义。
此外，抗核抗体的检测也可用于其他自身免疫性疾病的辅助诊断。
例如，干燥综合征的抗核抗体阳性率为40-70%，混合性结缔组织病的抗核抗体阳性率为60-80%。
通过抗核抗体的检测，可以帮助医生了解疾病的类型、活动程度和预后，并指导临床治疗。
需要注意的是，抗核抗体检测结果需要综合临床症状、体征以及其他实验室检查结果来进行综合分析和判断。
因为抗核抗体的检测结果并不是特异性的，有时可能出现假阳性或假阴性结果。
荧光强弱判读加号代表
荧光强弱判读加号代表案例一：荧光抗体染色与结果判断是什么？为了帮助检验职称考生了解，助力检验职称考生复习，医学教育网为大家整理如下：荧光抗体与抗原反应，一般在25～37℃，30分钟，不耐热抗原的检测则以4℃过夜为宜。
（一）直接法：用特异荧光抗体直接滴加于标本上。
本法操作简便，特异性高，非特异荧光染色因素少；缺点是敏感度偏低，需制备特异性的荧光抗体。
（二）间接法：可用于检测抗原和抗体，普通一抗＋荧光二抗。
灵敏度高，仅需一种荧光抗体。
（三）双标记法：FITC及罗丹明分别标记不同的抗体，而对同一标本做荧光染色。
（四）荧光抗体染色结果判断：在每次实验时均需设立实验对照（阳性和阴性对照）。
阳性细胞的显色分布有胞质型、胞核型和膜表面型三种类型。
临床上根据特异性荧光强度达“＋”（为荧光较弱但清楚可见）以上判定为阳性。
我们大家都知道白癜风这种病是因为黑色素脱失导致的白斑皮肤病，所以只有针对白斑检查才能更好的明确白斑病症。
伍德灯检查白斑还是很科学的，不同的白斑病在伍德灯下的颜色不一样，而且不一样的白斑皮损程度在伍德灯下荧光强弱也是多有差别的。
白斑在伍德灯下显示一个加号可能是早期的白癜风，因为早期的白癜风白斑黑色素损失的不严重，在伍德灯下的荧光颜色也就相对较弱。
三维皮肤CT扫描白斑更全面、细致温馨提示：因为伍德灯了解的只是表面的白斑皮肤病，所以建议患者再做进一步详细的检查，具体的了解白斑基底层的病变。
三维皮肤CT检查白斑更全面、细致。
我们远大白癜风医院引进的三维皮肤CT是美国进口的仪器，很多三甲医院都是不具备的，检查白斑科学细致。
三维皮肤ct是一种新型诊断白斑的设备，是利用计算机三维断层成像技术检查白斑。
美国三维皮肤CT这种设备不仅能全面诊断身上的白斑是不是白癜风，还能深入皮肤基底层，了解黑色素细胞损伤的范围和数量，以直观动态的形式展现，让患者清楚了解自己的具体病情。
早期白癜风尽早治疗、尽早的康复建议患者确诊白斑病情以后，就要及时的治疗，我们远大白癜风医院的进口极速308激光治疗白癜风有着良好的效果，早些时候的白癜风一般针对性照光治疗三个多月就可以康复了。
免疫组织荧光步骤
免疫组织荧光步骤免疫组织荧光是一种常用的实验技术，用于检测和定位特定抗原在细胞或组织中的分布情况。
该技术利用荧光标记的抗体与目标抗原结合，通过荧光显微镜观察荧光信号的强度和位置，从而获得关于抗原分布的信息。
下面将介绍免疫组织荧光的步骤。
第一步：固定和切片在进行免疫组织荧光实验之前，首先需要将待检测的组织固定并制备成切片。
固定可以保持组织结构的完整性，并固定其中的蛋白质，以便后续的抗体结合。
切片是将组织切割成非常薄的片段，以便于抗体的渗透和荧光信号的观察。
第二步：抗原解表为了提高抗体的结合效率和信号强度，需要对组织切片进行抗原解表处理。
抗原解表通过一系列化学或物理方法，使组织中的蛋白质结构发生变化，使得抗体能够更容易地与目标抗原结合。
第三步：抗体孵育在进行免疫组织荧光实验时，需要选择与目标抗原特异性结合的抗体，并将其与组织切片一起孵育。
抗体可以是来自动物（如兔子、小鼠）的多克隆抗体或来自细胞培养的单克隆抗体。
在孵育过程中，抗体会与目标抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
第四步：洗涤为了去除无效的抗体和非特异性结合物，需要对组织切片进行洗涤。
洗涤过程中使用缓冲液，可以有效地去除孵育过程中产生的杂质和未结合的抗体。
第五步：二抗孵育为了增强信号的强度，需要使用荧光标记的二抗与抗原-抗体复合物结合。
二抗是针对来自第一步孵育的抗体的抗体，可以与其特异性结合。
二抗通常标记有荧光物质，如荧光素、荧光蛋白等，通过观察荧光信号可以确定抗原在组织中的分布情况。
第六步：洗涤与第四步类似，需要对组织切片进行洗涤，以去除未结合的二抗和杂质。
第七步：荧光显微镜观察在洗涤完毕后，将组织切片放置在荧光显微镜下观察。
荧光显微镜可以通过激发荧光标记的抗体产生荧光信号，并将其放大和记录下来。
通过观察荧光信号的强度和位置可以确定抗原在组织中的分布情况。
免疫组织荧光技术广泛应用于生命科学研究领域，可以用于检测疾病标志物、研究细胞功能以及探索生物过程的机制。
抗核抗体检测与临床应用PPT【42页】
52KD, 60KD。
健康人
17%
抗SSA抗体阳性SLE和SS一级亲属 25%
• 抗SSB抗体： 常与抗 SSA抗体伴随出现
• Ro-52 为线性结构 ，可以非特异的与血 清中蛋白结合
(3)抗核糖体P蛋白抗体
抗原: 核糖体60S 亚基中的3种蛋白质
SLE
10%～40%
SLE的高特异性血清标志抗体，特异性为100％
抗nRNP/Sm和Sm抗体的结果解释
抗nRNP/Sm抗 体
73KD RNP
阴性
60KD
55KD
52KD
阳性 5 2 K D
D
32KD RNP
RNP
sm 2 9 K D
28KD
阳性
RNP 1 7 .5 K D
13.5KD
阴性 CO
阳性
Sm、 U1R N P、 RA、
SSA抗 体 阳 性
SSA抗 体 阳 性
Stinton et al., Lupus 15: 394-400, 2007
(3)抗组蛋白抗体
抗原: 组蛋白H1, H2A, H2B, H3, H4 (主要的靶抗原为H1和H2B)
功能: 核小体的组成结构
临床意义: 药物诱导性LE: 100%
(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体)
SLE:
40% - 80%
抗原：动粒中的4种蛋白：A (17 kDa), B(80 kDa), C(140 kDa), D蛋白(50 kDa)。 着丝点蛋白B为主要的靶抗原
功能: 分裂期纺锤体的附着点
相关疾病: 硬化症: 局限型: (CREST综合征) 原发性胆汁性肝硬化
18% 80% - 95%
10%～20%
免疫缺陷性疾病的自身抗体检测方法分析
免疫缺陷性疾病的自身抗体检测方法分析一、引言免疫缺陷性疾病是一类免疫系统功能异常引起的疾病，包括原发性免疫缺陷病和获得性免疫缺陷病。
自身抗体检测方法对于免疫缺陷性疾病的诊断和治疗具有重要的意义。
本文将对常用的自身抗体检测方法进行分析。
二、直接免疫荧光法直接免疫荧光法是一种常用的自身抗体检测方法。
该方法通过荧光标记的抗人免疫球蛋白将其与待检测标本中的自身抗体结合，然后利用荧光显微镜观察标本中的荧光信号。
该方法具有灵敏度高、特异性好的优点，但操作比较繁琐且需要专门的设备。
三、酶联免疫吸附试验法酶联免疫吸附试验法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的自身抗体检测方法。
该方法通过将待检测标本中的自身抗体与固相抗原结合，然后加入酶标记的二抗与其结合，最后用底物显色测定酶活性。
ELISA法具有灵敏度高、精确度好、且适用于大规模筛查的优点，但需要比较长的实验时间。
四、免疫印迹法免疫印迹法（Western blotting）是一种常用的自身抗体检测方法。
该方法通过将待检测标本中的自身抗体与分子量已知的蛋白进行电泳分离，然后将分离的蛋白转移到膜上，用特异性抗体结合自身抗体，最后用酶标记的二抗进行检测。
免疫印迹法具有高分辨率、高特异性的优点，但操作复杂且需要较长的实验时间。
五、流式细胞术流式细胞术（flow cytometry）是一种常用的自身抗体检测方法。
该方法通过将待检测标本中的细胞与标记有特异性抗体的荧光探针混合，然后通过流式细胞仪对细胞进行逐个检测。
流式细胞术具有高通量、高灵敏度的优点，且可以同时检测多个指标，但设备比较昂贵且需要专门的培训。
六、免疫组化法免疫组化法（immunohistochemistry）是一种常用的自身抗体检测方法。
该方法通过将待检测标本中的组织切片与特异性抗体结合，然后加入酶标记的二抗进行显色反应。
免疫组化法具有高空间分辨率、可定量的优点，且可以对组织中的特定细胞进行检测定位，但操作复杂且需要较长的实验时间。
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分裂期细胞：纺垂体、中间体、中心粒等
读片要点
HEp-2细胞:选取多个视野判断 HEp-2细胞:分裂间期与分裂期细胞综合看 HEp-2与肝片综合看
核均质型
HEp-2：间期细胞核 呈均匀荧光，分裂期 细胞浓缩染色体荧光 增强
肝片：肝细胞核阳性， 呈均匀荧光。荧光强 度与HEp-2基本一致
靶抗原：dsDNA、 核小体、组蛋白
猴肝
粒细胞 (乙醇固定)
pANCA
HEp-2 细胞
粒细胞 (甲醛固定)
猴肝
粒细胞 (乙醇固定)
关于肝片：
从纯天然的肝组织的肝血窦中找增强的中性粒细胞 在肝组织上撒布中性粒细胞
EUROIMMUN
关于乙醇固定的中性粒细胞：
OK
Maybe
……..
EUROIMMUN
ANA（干扰）
HEp-2 细胞 猴肝
肝片：荧光模式不 典型
模板片示例— 抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫）
抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫）
绿蝇短膜虫模式图
抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫）
阴性
阴性
阳性
抗dsDNA抗体判读要点
全部虫体动基体 表现为均匀的、 有时边缘增强的 荧光。
细胞核与鞭毛基 体的反应没有任 何意义，可不做 结果判断。
光，有时形成小团块或粗大颗粒，
核分叶处有荧光增强
ANCA筛查：推荐基质组合
粒细胞（乙醇固定）→ 粒细胞（甲醛固定）→
←猴肝 ←Hep-2
模板片示例 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）
cANCA
HEp-2 细胞 猴肝
粒细胞 (甲醛固定) 粒细胞 (乙醇固定)
pANCA
HEp-2 细胞
粒细胞 (甲醛固定)
肝片：荧光模式不 典型
靶抗原：波形蛋白
抗中心粒抗体
HEp-2：在细胞核 内可见一或两个荧 光点，分裂期细胞 中荧光点位于细胞 纵向对称的两极
肝片：荧光模式不 典型
抗纺锤体纤维抗体
HEp-2：仅见于分 裂期细胞，纺锤体 部位出现特征性荧 光。
肝片：荧光模式不 典型
抗中间体抗体
HEp-2：分裂中期 细胞中间水平方向 产生带状细颗粒荧 光，半数间期细胞 含有大量粗荧光点， 其余细胞为阴性。
鼠肝
抗肝溶质抗原（LC-1）抗体
鼠肝：肝细胞胞浆荧光阳性，肝小 叶中心区域荧光减弱
相关疾病：为 II - AIH 的血清学标志。
鼠肝
如何综合判读各基质？
Hep-2 鼠肾 鼠胃
猴肝 鼠肝 猴心
注意：
一种抗体不仅限于一种基质表现 一种基质也不仅提示一种抗体
如何综合判读各基质？－ 自免肝
Hep-2 + 猴肝: ANA （PBC-核点/核膜/AMA AIH- ANA/ASMA）
猴肝：LSP、抗胆管抗体、LMA 鼠肾：AMA/LKM 鼠胃：ASMA（actin） 鼠肝：LKM/LC-1
Hep-2 鼠肾 鼠胃
猴肝 鼠肝 猴心
猴心：M7 （横纹肌、润盘）
如何综合判读各基质？
Hep-2 鼠肾 鼠胃
猴肝 鼠肝 猴心
Hep-2 + 猴肝: ANA （ANCA） 鼠肾：AMA 鼠胃+鼠肾+猴肝+Hep-2：ASMA（F-actin）
鼠肾
鼠肾：肾小管周围纤维 肾小球膜细胞 血管肌层
• 相关疾病：为 AIH 的血清学标志
抗肝肾微粒体（LKM-1）抗体
鼠肾：近端肾小管细胞呈
现胞浆颗粒样，核阴性，
而远端肾小管阴性，呈现
半阴半阳模式
鼠肾
鼠肝：肝细胞胞浆呈现荧
光，细颗粒到均质状，荧
光模型不特异
相关疾病：为 II-AIH 的 血清学标志
靶抗原：Scl-70、 PM-Scl、RNA多 聚酶、原纤维蛋白
核仁型的多种模型
PM-Scl
RNA多聚酶
Scl-70
原纤维蛋白
胞浆颗粒型：抗核糖体P蛋白抗体
HEp-2：间期细胞 浆中出现致密的细 颗粒样荧光，并有 空泡现象，部分核 仁阳性；分裂期细 胞浓缩染色体阴性
肝片： 灵长类肝组 织中可能呈现特异 的由几个肝细胞浆 融合形成的岛状荧 光
肝片： 荧光模式不 典型
靶抗原：Jo-1
胞浆颗粒型：抗溶酶体抗体
HEp-2：细胞浆中 出现细小的、中等 大小的、以及粗的 滴状荧光颗粒
肝片： 荧光模式不 典型
靶抗原：溶酶体
胞浆颗粒型：抗高尔基体抗体
HEp-2：间期细胞 核一侧的高尔基体 所在部位呈现网状 的颗粒样荧光；分 裂期细胞无荧光。
抗核抗体（ANA）荧光模型解析及判读
储韬 FAE for AnHui
ANA筛查（间接免疫荧光法）
检测ANA的“金标准” 基质组合：Hep-2+灵长类肝 抗原谱完整 (细胞核、细胞浆)
ANA筛查（基质组合）
Hep-2细胞
灵长类肝
ANA筛查（基质组合）
抗核抗体荧光模型分类
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
肝片： 荧光模式不 典型
靶抗原：高尔基体
胞浆纤维型：抗肌动蛋白抗体
HEp-2：细胞浆中 出现无数束状纤维 样结构，有时可伸 展到细胞核
肝片： 出现 “T” 字或 “丁” 字样荧 光
靶抗原：肌动蛋白
胞浆纤维型：抗波形蛋白抗体
HEp-2：细胞浆中 出现细的纤维网状 荧光；分裂期细胞 浓缩染色体阴性， 染色体周围可出现 无数圆形的荧光点
核粗颗粒型
HEp-2：间期细胞 核呈颗粒样荧光， 核仁阴性；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性，染色体周围呈 颗粒样荧光
肝片：肝细胞核呈 颗粒样荧光。核仁 阴性；荧光强度与 HEp-2基本一致
靶抗原：nRNP、 Sm
核细颗粒型
HEp-2：间期细胞 核呈细颗粒样荧光， 部分核仁阴性；分 裂期细胞浓缩染色 体阴性，染色体周 围呈颗粒样荧光
粒细胞 (甲醛固定) 粒细胞 (乙醇固定)
ANA+pANCA
HEp-2 细胞 猴肝
粒细胞 (甲醛固定) 粒细胞 (乙醇固定)
ANCA产品读片要点：
ANA主要会对乙醇固定粒细胞的基质产生干扰 甲醛敏感的pANCA最易被ANA干扰，从而产生误报。 使用多基质组合（HEp-2/猴肝/乙醇固定/甲醛固定）进
肝片：肝细胞核内 可观察到10-20个荧 光点；荧光强度明 显弱于与HEp-2细胞
靶抗原：着丝点蛋 白
核点型
HEp-2：间期细胞 核内出现大小、数 目、强度不均的点 状荧光；分裂期细 胞浓缩染色体阴性。 周围可见点状荧光
肝片：肝细胞核内 出现大小、数目不 均一的点状荧光； 荧光强度与HEp-2 基本一致
行综合判断，可最大限度降低ANA的干扰。
EUROIMMUN
自身免疫性肝病（ALD）相关抗体 荧光模型解析及判读
抗线粒体抗体（AMA）
鼠肾：肾小管上皮细胞胞 浆颗粒样荧光。
鼠肾
相关疾病：原发性胆汁性 肝硬化（PBC）等。
抗平滑肌抗体（ASMA）
鼠胃
鼠胃：黏膜腺体间收缩蛋白 黏膜下肌层 肌层
靶抗原：核糖体P 蛋白
胞浆颗粒型：抗线粒体抗体
HEp-2：细胞浆内 粗颗粒样荧光
肝片： 肝细胞呈颗 粒样荧光，整个视 野呈细沙状荧光
靶抗原：线粒体
胞浆颗粒型：抗Jo-1抗体
HEp-2：间期细胞浆 中出现颗粒到细块状 荧光，细胞核有时也 出现细颗粒荧光；分 裂期细胞浓缩染色体 阴性，染色体周围区 域呈致密的细颗粒荧 光
靶抗原：Sp100、 PML
核膜型
HEp-2：间期细胞 核呈现均匀荧光， 核周增强；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性
肝片：肝细胞核呈 现特征性环状荧光
靶抗原：板层素、 gp210
核仁型
HEp-2：间期细胞 核仁阳性；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性。
肝片：肝细胞核仁 阳性；荧光强度与 HEp-2基本一致
核均质型： dsDNA、组蛋白和核小体等
核膜型： 板层素、gp210等
细胞核
核颗粒型
核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B 细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型
ANA
Ku 核仁型： Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等
核浆点型： 着丝点、核点等
细胞浆
胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等
肝片：荧光模型不 典型
靶抗原：DNA聚合 酶δ的辅助蛋白
细胞周期蛋白II型
HEp-2：部分间期 细胞核阳性，部分 间期细胞核阴性； 分裂期细胞核均阳 性，呈颗粒样荧光， 浓缩染色体为阴性
肝片：荧光模型不 典型
靶抗原：cyclin蛋白
着丝点型
HEp-2：间期细胞 核内出现大小数目 相同、均匀分布的 点状荧光；分裂期 细胞浓缩染色体处 出现浓缩点状荧光
ANCA荧光模型解析及判读
ANCA筛查：基质
抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） = Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies
ANCA荧光模型
核周型ANCA（pANCA）
胞浆型ANCA（cANCA）
细胞核周围呈现平滑的带状荧光， 细胞浆呈现不均匀的颗粒样荧
细胞核阴性
鼠肾+鼠肝：LKM 猴肝+鼠肝：LSP、抗胆管抗体、LMA
鼠肝：LC-1 猴心：M7 （横纹肌、润盘）
其他：鼠肾：（GBM） 鼠胃：（PCA）
Thanks & any questions
肝片：肝细胞核呈 颗粒样荧光。部分 核仁阴性；荧光强 度明显弱于HEp-2
靶抗原：SS-A、 SS-B
抗Ku抗体
HEp-2：间期细胞 核呈现细颗粒样荧 光；分裂期细胞浓 缩染色体阴性