应用薄层色谱_生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性
中国药科大学中药制剂分析重点
中国药科大学中药制剂分析期末考试by---10级王学姐~回忆了一下本届考试的内容，不太记得了，说下大概。
答案不一定全对。
考试题型：一．填空题（1分*20）1.杂质的检查分为：制剂通则检查，一般杂质检查，特殊杂质检查，残余农药检查，黄曲霉素检查，二氧化硫检查，微生物限度检查。
2.取样的基本原则：代表性，真实性，科学性3.阴性对照溶液是将制剂处方中减去欲鉴定药味后的其它所有各味药材，按制剂方法处理后，再以制备样品供试液相同的比例、方法、条件制成溶液。
4.中国药典的内容一般分为:凡例，正文，附录，索引5.氧化反应，代谢反应为药物代谢第一相反应，结合反应为第二相反应6.挥发油为混合物，含脂肪族，芳香族，萜类类物质。
7.生物碱沉淀试剂：碘-碘化钾，碘化铋钾，碘化汞钾，硅钨酸二．单选题（2*10分）选择题第一题是以下哪项为砷盐检查法，有一题是皂苷的性质，其他有选填题，给了药材名称，让你选鉴别方法，所以要记得药材的主要成分是哪类物质。
三．判断题（2*10）1.取样后的样品要销毁。
错，留样观察。
2.重金属是指能与硫化钠沉淀的物质。
错，硫代乙酰胺，硫化钠。
3.熊胆的主要成分牛磺熊去氧胆酸，朱砂的主要成分Hgs。
4.芦丁与槲皮素在聚酰胺薄层上芦丁的极性大，所以芦丁的Rf小。
错，芦丁酚羟基比例小，Rf大。
5.中药矿物质的处理顺序是混合酸，浓酸，稀酸，水。
错，顺序反过来6.皂苷流动相中加入二乙胺，可以使原本不能分开的有双键等差异的物质分开。
错，加入硝酸银。
7.不记得了，大概是说二至丸的鉴别的试剂有二至丸供试品，不含女贞子的阴性对照溶液，不含熊磺酸的阴性对照溶液。
四．简答题（1*8,1*7,1*10）1.方法学考察的内容：提取条件的选定；净化分离方法的选定；测定条件的选择；空白试验条件的选择；线性关系考察；测定方法的稳定性考察；精密度实验；重复性试验；检测灵敏度及最小检出量；2.中药制剂质量标准的前提：药物组成稳定、原料稳定、制备工艺稳定3.类似上述简答题中的第六题。
薄层色谱生物自显影法筛选新疆莫合烟天然乙酰胆碱酯酶抑制剂的活性成分
薄层色谱生物自显影法筛选新疆莫合烟天然乙酰胆碱酯酶抑制剂的活性成分王健;朱萍萍;倪国柱;温琳豫;支玲;胡曙晨【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2014(000)020【摘要】Objective To explain nicotine in tobacco can reduce the incidence of degenerative diseases,perform the activity screening of acetyl cholinesterase inhibitors of Xinjiang's unique Mohe-tobacco for illuminating the action mechanism. Methods The thin layer chromatography(TLC)bioautographic method combining TLC with biological activity assay was used to conduct the activity screening of extract solution of Xinjiang Mohe-tobacco. Results Nicotine in the extract solution of Xinjiang Mohe-tobacco appeared the white spots on the purple background by the TLC bioautography,indicating that which possesses the activity,but the white spots were weak, indicating that the nicotine content in the extract solution was unable to reach the significant inhibiting concentration,its activity was lower than that of the reference substance huperzine A;the DPPH development method revealed that the extraction solution of Xinjiang Mohe-tobacco simultaneously possesses the better antioxidant activity. Conclusion Nicotine in Xinjiang Mohe-tobacco can be com-bined with acetyl cholinesterase and inhibits its activity. The TLC bioautographic method is easy to operate with high sensitivity andspecificity in the activity screening for natural acetyl cholinesterase inhibitor.%目的：为阐明烟草中的烟碱降低退行性疾病发病率的作用机理，对新疆特有的莫合烟进行天然乙酰胆碱酯酶抑制剂的活性筛选。
薄层鉴别
中药品质评价方法指南
中药品质评价方法指南中药品质评价方法指南中药是我国传统医学的重要组成部分，其药材的品质评价对于保证药效、安全性及稳定性具有重要作用。
本文将介绍中药品质评价的常用方法。
1. 外观鉴别法外观鉴别法是一种直观、简单的方法，通过对药材的外观进行观察和比较，来判断其品质。
主要包括形态、颜色、气味、味道等方面。
例如，黄连的色泽应为黄褐色，气味特异而浓烈，味苦而辛。
2. 抗氧化活性测定法抗氧化活性测定法是通过测定药材中的抗氧化物质含量和活性来评价其品质。
常用的方法有DPPH自由基清除法、还原力法等。
例如，枸杞子中的多糖和黄酮类化合物具有较强的抗氧化活性。
3. 超高效液相色谱法超高效液相色谱法是一种高分辨率、高灵敏度的分析方法，可用于分离和检测药材中的有效成分。
例如，人参中的人参皂苷Rb1、Rg1和Re等成分可通过超高效液相色谱法进行分离和检测。
4. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的分析方法，可用于检测药材中的有效成分含量和纯度。
例如，当归中的川芎素含量可通过高效液相色谱法进行测定。
5. 显微鉴定法显微鉴定法是通过显微镜观察药材的形态、结构和组织等特征，来判断其品质。
例如，当归中的细胞壁厚度、木质部分布等特征可通过显微鉴定法进行判断。
6. 硫酸钾显色法硫酸钾显色法是一种常用的化学试验方法，可用于检测药材中的黄酮类化合物含量。
例如，葛根中的黄酮类化合物含量可通过硫酸钾显色法进行测定。
以上是中药品质评价常用的方法，不同的方法可以相互印证，提高评价结果的准确性。
同时，在实际操作中还应注意保证仪器设备的准确性和操作人员的技能水平，以保证评价结果的可靠性。
《四合木叶中化学成分的分离鉴定及生物活性研究》范文
《四合木叶中化学成分的分离鉴定及生物活性研究》篇一一、引言四合木是一种常见的中草药，具有广泛的药用价值。
近年来，随着人们对中草药研究的深入，四合木的药理作用和化学成分逐渐被揭示。
为了更好地了解四合木的药效及其作用机制，本研究对四合木叶中的化学成分进行了分离鉴定，并对其生物活性进行了研究。
二、材料与方法1. 材料本研究所用四合木叶采自自然环境，经过鉴定为纯种四合木。
2. 方法（1）化学成分的分离：采用常规的柱层析、薄层扫描、重结晶等方法对四合木叶中的化学成分进行分离。
（2）化学成分的鉴定：利用现代分析技术，如紫外光谱、红外光谱、核磁共振等对分离得到的化学成分进行鉴定。
（3）生物活性研究：采用细胞培养、酶活性检测、动物实验等方法对分离得到的化学成分进行生物活性研究。
三、结果与讨论1. 化学成分的分离与鉴定通过柱层析、薄层扫描等方法，我们成功地从四合木叶中分离得到了多种化学成分。
经过紫外光谱、红外光谱、核磁共振等现代分析技术的鉴定，我们确定了这些化学成分的种类和结构。
其中，主要成分为黄酮类化合物、萜类化合物和酚酸类化合物等。
2. 生物活性研究（1）抗氧化活性：本实验采用DPPH自由基清除法对分离得到的化学成分进行抗氧化活性研究。
结果表明，部分黄酮类化合物具有较强的抗氧化活性。
（2）抗炎活性：通过细胞培养和酶活性检测，我们发现部分萜类化合物具有显著的抗炎作用。
这些化合物能够抑制炎症介质的释放，减轻炎症反应。
（3）其他生物活性：此外，我们还发现部分酚酸类化合物具有抗肿瘤、抗菌等生物活性。
这些化合物在肿瘤治疗和抗菌领域具有潜在的应用价值。
3. 讨论本研究成功地从四合木叶中分离得到了多种化学成分，并对其生物活性进行了研究。
结果表明，四合木叶中的化学成分具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等。
这些发现为进一步开发四合木的药用价值提供了重要的依据。
然而，本研究仍存在一些局限性，如未对所有化学成分进行全面研究，未对化学成分的作用机制进行深入探讨等。
中药化学实验指导—实验十一 应用薄层色谱法检识中药制剂
实验十一应用薄层色谱法检识中药制剂（一）目的要求学习中药制剂的鉴别方法，通过实验要求：1．掌握薄层色谱法的操作技术及分离原理。
2．掌握中药制剂鉴别的一般程序及定性检识的原理。
3．熟悉检识其所含化学成分的方法与实验技术。
（二）实验原理本实验是根据中药制剂牛黄解毒片中的主要成分或特征成分的性质，选用适当的溶剂和方法对试样进行预处理，尽量排除干扰物质，达到提高待测成分或特征成分的相对浓度，以利在进行薄层色谱鉴别时提高色谱清晰度，实现应用薄层色谱检测技术鉴别和控制中药制剂质量。
（三）实验内容牛黄解毒片为包衣片。
处方为：牛黄50g，雄黄50g，石膏200g，大黄200g，黄芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。
以上八味药，雄黄水飞或粉碎成极细粉；大黄粉碎成细粉；牛黄、冰片研细；其余黄芩等四味加水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包衣即得。
1．牛黄的鉴别（1）供试液制备；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml氯仿研磨，滤过，再用10ml氯仿浸洗滤渣，合并滤液，浓缩至1ml为供试液。
（2）对照液制备：①取胆酸0.001g溶于1ml氯仿中，作为对照品溶液。
②取缺牛黄的模拟牛黄解毒片（相当于10片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na样品：牛黄解毒片供试液对照品：胆酸对照液模拟牛黄解毒片对照液展开剂：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（6∶32∶1∶1）显色剂：喷雾5％磷钼酸乙酸溶液，110℃加热10分钟2．冰片的鉴别（1）供试液制备：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml甲醇-氯仿（1∶1），室温下浸渍30min，时加振摇，滤过，滤液使成5ml，作为供试液。
（2）对照液制备：①取冰片适量，加甲醇-氯仿（1∶1）溶解，制成1ml含4mg的溶液。
②取缺冰片的模拟牛黄解毒片（相当于2片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。
中药药物的抗氧化与抗衰老研究
中药药物的抗氧化与抗衰老研究随着人类寿命延长和生活品质的提高，抗氧化和抗衰老成为了当今社会广大人们关注的重要话题。
中药药物因其独特的药理作用和安全性受到了广泛的关注和应用。
本文将着重探讨中药药物在抗氧化与抗衰老研究方面的最新进展和应用前景。
1. 中药药物的抗氧化机制抗氧化作用是指中药药物通过清除自由基、抑制氧化反应、提升抗氧化酶活性等方式，延缓氧化反应的进行，从而保护细胞免受自由基损伤。
目前已有研究证实，中药药物具有多种抗氧化机制，包括直接清除自由基、提升细胞内抗氧化酶活性、调节信号通路等。
1.1 直接清除自由基中药药物中的多种活性成分，如黄酮类、多酚类、黄酮苷类等，具有非常强的自由基清除能力。
这些活性成分通过捕捉和中和自由基，从而减少了氧化反应的发生。
1.2 提升细胞内抗氧化酶活性中药药物中的一些成分能够刺激机体自身产生抗氧化酶，如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等。
这些抗氧化酶能够迅速清除细胞内的有害物质，保护细胞免受氧化损伤。
1.3 调节氧化信号通路中药药物中的一些活性成分具有调节氧化信号通路的作用。
这些活性成分能够调控细胞内的氧化还原平衡，限制过度的氧化反应，并保持细胞内稳定的氧化状态。
2. 中药药物在抗衰老研究中的应用随着人类寿命的延长和老龄化人口的增加，抗衰老成为当今社会研究的热点。
中药药物因其丰富的资源和独特的药理效应，成为了抗衰老研究的重要领域。
2.1 抗衰老活性成分的筛选与发现中药药物中存在着大量具有抗衰老活性的活性成分。
通过现代科学技术的手段，可以对中药进行系统筛选和分析，从中挖掘出具有抗衰老活性的活性成分，并进一步研究其机制和应用价值。
2.2 抗衰老机制的研究中药药物在抗衰老研究中的作用机制非常复杂，主要包括抗氧化、细胞修复和基因调节等多个方面。
通过对中药药物的研究，可以深入理解抗衰老的机制，为开发抗衰老药物提供理论依据。
2.3 中药药物的临床应用中药药物在抗衰老方面的研究已经取得了很多突破性的成果。
中药分析章节大题
第三章3.试述薄层色谱法在鉴别中药中有何特点？鉴别时为何需要对照物？为什么鉴别要在同一薄层板上进行？如何保存薄层色谱图？答：特点：设备简单、操作快捷、专属性强、费用低廉。
具有展开剂灵活多变，色谱图新鲜直观、容易识别等特点。
原因：对照物在薄层色谱上通过展开会有相应的斑点，作为中药制剂如果含有对照物的成分，那么在对照物斑点对应的位置上将会有相相应的斑点，可鉴别出中药制剂中含有与对照物一致的成分。
克服薄层板厚薄不均匀而带来的影响以光学照片或电子图像的形式保存，也可用薄层扫描仪记录相应的色谱图。
4.应用薄层扫描法进行中药鉴别的步骤有哪些？答：薄层板制备—点样—展开—显色与检视—记录5.在中药制剂鉴别中，阴性对照试验的目的是什么？答：消除干扰〔考察制剂中其他药味对欲鉴别药味的薄层色谱干扰情况〕6.试分析为什么红外光谱法在中药鉴别中的应用比合成药物少得多？答：红外光谱具有特征性强、取样量小、简便迅速、准确等特点。
中药是多组分的混合物，红外光谱是所含组分各基团吸收峰的叠加；很合物组成的变化一定导致红外光谱谱峰的变化，因此也具有特征性。
中药的傅里叶变换近红外漫反射光谱包含了样品极为丰富的组成信息，图谱具有较强的指纹性。
7.DNA分子遗传标记技术鉴别中药有什么特点？答：具有微量、快速、特异性强、准确可靠、对样本要求较低的特点中药的检查1.中药制剂中杂质分为哪两类？它们主要来自哪些方面？答：常规物质和有害物质〔1〕药材和饮片中引入的杂质〔2〕生产制备过程引入的杂质〔3〕贮藏过程引入的杂质2.为什么中药制剂的杂质只进行限量检查，一般不测定其准确含量？在不影响疗效和不发生毒副作用的原则下，对于中药制剂中可能存在的杂质允许有一定限度，在此限度内，杂质的存在不致对人体有毒害，不会影响药物的稳定性和疗效，因此，对中药制剂中的杂质进行限度检查即可。
3.简述中药检查所包括的主要内容？答：有效性检查、纯度检查〔杂质检查〕、制剂通则检查、安全性检查4.什么是重金属？在重金属检查中，常以铅作为代表，为什么？简述其检查原理？答：重金属是指在规定实验条件下，能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色，生成不溶性硫化物的金属杂质。
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应用薄层色谱2生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性谷丽华1,2,吴 弢1,23,张紫佳2,侴桂新1,2,王峥涛1,23(1.上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室,上海201203;2.上海中药标准化研究中心,上海201203)摘要:目的 采用薄层色谱2生物自显影法研究与评价中药的抗氧化活性。
方法 用1,12二苯基222苦肼基自由基乙醇溶液(1,12di phenyl222p icrylhydrazyl,DPPH)和传统显色剂显色,拍摄图像,采用模拟扫描,获得各抗氧化成分的峰面积。
结果 以总峰面积大小为指标判定不同来源中药的抗氧化能力,结果表明浙江天台产乌药(94340)、四川凉山产厚朴(175647)和收集于上海的紫苏子(153206)清除DPPH自由基能力最强。
以化学对照品峰面积与总峰面积的百分比来判定化合物抗氧化活性,表明去甲异波尔定(4318%～6610%)、厚朴酚与和厚朴酚(7312%～9312%)、木犀草素与芹菜素及成分“U”(4716%～6810%)分别是乌药、厚朴和紫苏子的主要抗氧化活性成分。
结论本方法在中药抗氧化活性成分筛选及质量评价方面具有操作简便、选择性高、重现性好等优点。
关键词:薄层色谱2生物自显影;抗氧化活性;乌药;厚朴;紫苏子;DPPH中图分类号:R917;R93 文献标识码:A 文章编号:0513-4870(2006)10-0956-07 Evaluati on of anti oxi dant acti vity of Radi x L i n derae and other two Chi n ese drugs usi n g T LC2bi oautographyG U L i2hua1,2,WU Tao1,23,ZHANG Zi2jia2,CHOU Gui2xin1,2,WANG Zheng2tao1,23(1.Key L aboratory of S tandardization of Chinese M edicines,M inistry of Education,Institute of Chinese M ateria M edica,Shanghai U niversity of T raditional Chinese M edicine,Shanghai201203,China;2.Shanghai R&D Center for S tandardization of Traditional Chinese M edicines,Shanghai201203,China)Abstract:A i m To evaluate the anti oxidant capacity and quality of traditi onal Chinese medicines using T LC2bi oaut ography.M ethods T wo chr omat ogra m s of each crude drug sa mp le were obtained,after devel op ing,by s p raying with1,12di phenyl222p icrylhydrazyl(DPPH)s oluti on in ethanol and classical stained reagents,separately.The i m ages s p rayed with DPPH s oluti on were cap tured under light after thep lates were heated at40℃f or30m in,and scanned using video scan s oft w are t o get peak areas of active compounds.Results T otal peak areas of the s pots on T LC were calculated t o evaluate the anti oxidant capacity of the tested crude drugs fr om different habitats and s ources.The results indicated that RadixL inderae cultivated in Tiantai(Zhejiang p r ovince),Cortex Magnoliae Officinalis cultivated in L iangshan (Sichuan p r ovince),and Fructus Perillae acquired in Shanghai have the highest scavenging p r opertiest owards DPPH in their res pective T LC2aut ographic assays.Noris oboldine,magnol ol and honoki ol, luteolin,ap igenin and an unknown compound“U”p r oved t o be the maj or anti oxidant components in the corres ponding crude drugs as they contribute the dom inating peak areas t o the t otal ones.Conclusi onT LC2bi oaut ography can not only be used f or screening of the components with anti oxidant potency but als of or the pur pose of quality evaluati on of traditi onal Chinese medicines at the sa me ti m e,and the methodp r oved t o be selective,si m p le and rep r oducible.Key words:T LC2bi oaut ography;anti oxidant;Radix L inderae;CortexMagnoliae Officinalis;Fructus收稿日期:2005212219.基金项目:国家中医药管理局中医药科技重大项目(02代08);上海市重点学科建设项目资助(Y0301);上海市科委启明星项目资助(06QA14047).3通讯作者 Tel:86-21-51322513,Fax:86-21-51322519,E2mail:wutao@shutc Perillae;DPPH 自由基与许多病理和生理现象,如肿瘤、炎症、动脉粥样硬化及衰老等有关,故寻找阻断自由基反应的抗氧化物质具有重要意义。
用于筛选抗氧化剂及评价其活性强弱的方法很多,有比色法[1]、荧光法[2]、电子自旋共振(ESR)法[3]、化学发光法[4]等,常以测定清除自由基能力[5,6]或人体自由基代谢酶类活性,如超氧化物歧化酶(S OD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH2px)等[7]为指标。
薄层色谱鉴别多直接观察荧光、荧光淬灭或采用化学显色剂来检查样品色谱与对照物质(对照品、对照提取物、对照药材)色谱之间斑点或谱带的异同,或利用薄层扫描法对特定斑点进行含量测定,并根据某成分的有无或含量高低判别待检中药质量的真伪优劣。
这种方法具有快速、易操作等特点,成为中药质量控制的常用手段,但有一定的局限性。
首先,薄层色谱上显色(或荧光)斑点的有无和强弱只能说明某成分的有无与含量的高低,不能反映其生物活性;其次,常用化学显色剂(如10%硫酸香草醛2硫酸等)多为通用显色剂,缺乏专属性。
薄层色谱2生物自显影技术结合了比色法(或荧光法)与色谱分离技术两者的优点,是一种集鉴定、分离和活性测定于一体的药物筛选方法。
该方法不需要特殊的仪器设备,操作简单,实验耗费低,适合一般实验室操作。
人们最早采用纸色谱2生物自显影技术[8]对抗菌药物进行筛选,而后发展到采用薄层色谱与生物显色剂联合用于食品、工业污染等微生物的测定以及各类天然抗菌成分的筛选[9],此外,在胆碱酶抑制剂[10,11]和抗氧化剂的筛选[12,13]等方面都得到广泛应用。
1967年,Galvind等提出以1,12二苯基222苦肼基自由基(1,12di phenyl222 p icrylhydrazyl,DPPH)为显色剂,定量测定清除自由基活性的想法,而L i等[14]正式在第十届国际油菜籽会议上提出该方法,指出该方法与视频扫描技术联用可以用于油菜籽的抗氧化活性评价。
DPPH是一种很稳定的以氮为中心的自由基,若被测物能清除它,则提示被测物具有降低羟自由基、烷自由基或过氧自由基等自由基的有效浓度,打断脂质过氧化链反应的作用[15]。
DPPH本身显紫色,具有清除DPPH自由基能力的物质能使其还原成DPPH2H而呈现黄色。
目前,国内外广泛采用DPPH分光光度法筛选天然抗氧化剂。
以DPPH乙醇液为显色剂的T LC2生物自显影技术筛选植物中的抗氧化活性成分国外也有报道,但多停留于对单体的筛选,用于中药抗氧化活性成分的筛选和质量评价研究尚未见报道。
乌药、厚朴和紫苏子均为《中国药典》(2005版一部)收载品种。
乌药以乌药醚内酯为指标成分,但该成分药理活性的相关报道甚少,而且乌药醚内酯属脂溶性成分,传统的水煎法不易溶出。
有研究显示乌药醇提取物具有明显的抗炎抗风湿作用[16,17],推测其活性成分可能为中等极性的生物碱类成分。
厚朴以厚朴酚与和厚朴酚为指标成分。
1998年以来,翁新楚等[18]对700余种中药和香辛料的抗氧化活性进行了大规模筛选,发现中药厚朴具有很强的抗氧化作用。
保志鹃等[19]认为厚朴酚及和厚朴酚具有抑制细胞中产生的H2O2,O・-2,HO・及清除DPPH自由基作用。
紫苏子尚没有建立质量评价指标,很多文献以不饱和脂肪酸为其指标成分,也有文献[20,21]报道紫苏子和炒紫苏子醇提物和水提物具有较强的清除自由基作用,并认为该活性成分可能是黄酮等酚类化合物。
本文选此三味中药为研究对象,分别以去甲异波尔定、厚朴酚及和厚朴酚、木犀草素及芹菜素为对照成分,以DPPH自由基为显色剂,研究三味中药抗氧化活性成分的同时,探讨薄层色谱2生物自显影技术在中药质量评价方面的应用。