胃癌细胞三维培养体系的建立
三维细胞培养技术的发展
三维细胞培养技术的发展近年来，三维细胞培养技术（3D cell culture）已经成为细胞生物学领域重要的研究工具。
与传统的二维培养方式相比，三维培养可以更好地模拟生物体内的细胞环境，具有更高的生物学可靠性和生理学逼真度。
在肿瘤学、药物筛选、组织工程等领域，三维细胞培养已经得到了广泛的应用。
本文将探讨三维细胞培养技术的发展历程、技术原理、现状和未来展望。
一、发展历程人类对于三维细胞培养技术的探索可以追溯到上世纪80年代。
当时，一些研究者开始尝试将细胞培养在微孔板或者多孔性材料中，以模拟细胞在组织中的排列方式和相互作用。
这些尝试虽然初步地展示了三维细胞培养的潜力，但是却受到了一些技术限制，比如细胞间的通讯困难、物质交换不足等。
随着材料科学和微纳米技术的发展，人们开始发现一些新的、更有效的三维培养平台，如高分子凝胶、仿生纤维、及微米纳米级别的自组装结构等。
这些新技术的突破使得三维细胞培养的可行性得到了极大的提高，同时也带来了更多的应用前景。
二、技术原理三维细胞培养技术的原理就是将细胞种植在三维空间内的基质中，并模拟相关的生物学和物理学参数来创造细胞在生物体内的自然环境，以更好地还原细胞在体内的行为和物理信息。
与二维培养相比，三维培养能够更好地模拟细胞在组织中的排列与生理功能, 从而更准确地研究细胞毒性、药物筛选、干细胞等肿瘤领域.三、现状目前，三维细胞培养技术已经得到了广泛的研究和应用。
在肿瘤学领域，三维培养可以更好地模拟肿瘤的生长、转移、药物治疗和放疗等过程，为临床治疗提供更准确的信息。
在药物筛选领域，三维培养可以更准确地反映药物在细胞内的作用机制和药效，因此能够更准确地辨别药物的疗效和毒性。
在组织工程领域，三维培养可以模拟人体器官的外观结构和功能，从而为组织修复和再生提供新的途径。
然而，三维细胞培养还存在一些挑战和难点。
比如，如何将不同类型的细胞组织成复杂的结构，如何在三维环境下更好地模拟血流、细胞间的物质交换和信号传递。
新年伊始，让你的细胞变得“立体”起来！
新年伊始，让你的细胞变得“立体”起来！元旦假期一过，很多朋友做的第一件事就是去查看自己养在培养箱里面的“小宝贝们”是否安好。
新的一年，也祝愿大家的细胞可以茁壮成长，然后“生出”优质的data！说起细胞培养，很多人第一反应就是培养瓶或者培养板中的细胞传代、贴壁、生长这样的循环，确实，大部分实验课题用到的都是这样成熟的平面二维培养。
但是，今天小编想和大家聊一聊的，却是一些三维培养的故事。
▼细胞的三维立体培养，其实并不是什么太新鲜的事情了，人类很早早就发现，平面上生长的细胞，其实并不能很好的反应人类体内实际的细胞生长情况。
虽然有像皮肤细胞这类，本身就是在类平面上生长的，但是人体内的大部分组织，譬如各种器官又或是神经系统，都是在一个三维立体的环境中生长的，他们生长发育往往是受细胞间的物理压力信号或是通过细胞间质调控的。
所以说，有相当一部分的细胞研究，如果建立在一个三维的环境中，会更加有说服力。
最早的细胞三维培养，往往是基于一个立体的支架去完成的，这个支架的材料有许多种，包括：水凝胶，商品化定制的支架，纤维支架，多孔支架，微球以及天然组织支架等。
但是由于实际操作上的许多不可控性以及重复性上的问题，细胞三维培养有一段时间并非研究的热门。
但是自从胚胎干细胞发现以来，加上肿瘤药物的研发的发展，三维细胞培养在近几年也越来越被重视。
首先是胚胎干细胞的研究，众所周知，胚胎干细胞被称为“万能细胞”，可以分化为各种不同的器官组织。
已经有研究表明，胚胎干细胞在不同硬度的介质上生长，也就是物理信号可以影响胚胎干细胞的分化。
比如说，在比较软的介质上，我们可以将胚胎干细胞诱导分化为有功能的脊髓细胞。
Sun, Y., Yong, K. M. A., Villa-Diaz, L. G., Zhang, X., Chen, W., Philson, R., ... & Fu, J. (2014). Hippo/YAP-mediated rigidity-dependent motor neuron differentiation of human pluripotent stem cells. Nature materials, 13(6), 599.但是如果是要完全模拟胚胎干细胞在生物体内发育，那么培养环境就应该是悬浮的，近期，就有团队发表了通过胚胎干细胞的悬浮培养成功在体外构建类囊胚的文章。
三维细胞培养技术及其应用前景
三维细胞培养技术及其应用前景在医学研究领域中，细胞培养技术一直都是一个非常重要的研究方向。
在20世纪早期，二维细胞培养技术成为了主流的细胞培养方式。
然而，和真实情况不同的是，二维细胞培养技术无法完全重现和模拟细胞在体内的行为，这已经成为一个广泛关注的问题。
因此，近年来，三维细胞培养技术渐渐开始引起人们的关注。
下面，本文将探讨什么是三维细胞培养技术，以及它的应用前景。
一、三维细胞培养技术的概念三维细胞培养技术是指细胞在三维空间中进行的培养方法，与二维细胞培养技术相比，三维细胞培养技术更能模拟细胞在体内的真实行为。
在三维细胞培养技术中，细胞可以自由扩散和聚合，同时也可以形成细胞-细胞和细胞-基质之间的相互作用。
另外，三维细胞培养技术可以更准确地模拟细胞生长的微环境，包括细胞外基质的柔软和硬度、细胞生长的空间限制等等。
因此，三维细胞培养技术在预测细胞行为、疾病的建模以及药物筛选等方面具有非常广泛和重要的应用前景。
二、三维细胞培养技术的应用前景1.癌症研究在癌症研究中，三维细胞培养技术可以更好地模拟肿瘤的生长和发展过程。
在三维环境中，细胞能够形成肿瘤球，并根据外部信号进行自我组织和分化。
这种模拟可以更好地解释肿瘤的生长和发展，为癌症的预测和治疗提供了新的思路。
同时，三维细胞培养技术还可以更准确地预测癌症药物的有效性，从而提高治疗效果和患者的生存率。
2.器官损伤和再生在器官损伤和再生的研究中，三维细胞培养技术也有着广泛的应用前景。
比如，在肝细胞培养中，三维环境可以更好地模拟肝脏的结构和功能，从而有效地模拟肝细胞在体内的生理行为。
研究者可以探究肝细胞在三维环境下的增殖和分化行为，为器官损伤和再生提供新的思路和方法。
3.药物筛选另外，由于三维培养技术更能模拟细胞在体内的行为，因此它的应用前景在药物筛选中也非常广泛。
三维培养技术可以更准确地预测药物分子和细胞之间的相互作用，以及药物分子在三维环境中的扩散和效果。
三维细胞培养技术培训ppt课件
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① 什么是三维细胞培养 ② 如何实现三维细胞培养 ③ 水凝胶三维细胞培养 ④ 更多问题
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1 什么是三维细胞培养
——Kenneth M. Yamada, and Edna Cukierman. Modeling Tissue Morphogenesis and Cancer in 3D. [J]cell. 130, 601-610.
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3 水凝胶三维细胞培养
观察与检测
免疫荧光观察蛋白定位
不去胶
去胶
DAPI
β-tublin
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3 水凝胶三维细胞培养
观察与检测
免疫荧光观察蛋白定位
Confocal Fluorescence Microscopy
S1 cell
T4-2 cell
CAR
精E选-C版a课d件hpeprt in
观察与检测
Western blot检测蛋白 若检测大分子蛋白，一定要除去
凝胶，回收细胞后提取蛋白 细胞回收液或酶消化均可
不去胶 去胶
GAPDH
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3 水凝胶三维细胞培养
观察与检测
细胞增殖检测（MTT法） 不需要除去凝胶，可直接加入
MTT孵育 一定要设不含细胞，只含有凝
胶的空白对照孔
② 使用慢病毒or 腺病毒感染
胶内培养：
使用慢病毒or 腺病毒感染
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3 水凝胶三维细胞培养
3d细胞培养步骤
3d细胞培养步骤3D细胞培养步骤3D细胞培养是一种模拟人体组织或器官微环境的方法，可以更真实地研究细胞行为和生物学过程。
相比于传统的2D细胞培养，3D细胞培养提供了更好的模拟生理环境的能力，有助于更准确地了解细胞的功能和相互作用。
下面将介绍3D细胞培养的具体步骤。
1. 选择合适的细胞株在进行3D细胞培养之前，首先需要选择合适的细胞株。
不同类型的细胞具有不同的生长特性和适应性，因此需要根据研究目的选择合适的细胞株。
常用的细胞株包括肝细胞、肺细胞、肾细胞等。
2. 制备细胞悬浮液在进行3D细胞培养之前，需要将细胞制备成悬浮液。
首先将培养皿中的细胞用PBS洗涤去除培养基，然后用胰酶等酶溶解细胞层，得到细胞悬浮液。
为了保持细胞的完整性，可以使用低速离心的方法分离细胞。
3. 选择合适的支架材料在进行3D细胞培养时，需要选择合适的支架材料。
支架材料可以提供细胞附着和生长的支持，并且可以模拟组织的结构和功能。
常用的支架材料包括生物降解聚合物、海藻酸钠、胶原蛋白等。
4. 制备支架将选择的支架材料制备成适当的形状和尺寸。
可以使用模具或3D 打印技术来制备支架。
制备好的支架要进行消毒处理，以确保细胞培养的无菌条件。
5. 细胞与支架的共培养将制备好的细胞悬浮液与支架进行共培养。
可以将细胞悬浮液滴在支架上，或者将支架浸泡在细胞悬浮液中。
细胞会附着在支架上并逐渐生长形成组织结构。
6. 优化培养条件为了促进细胞的生长和功能发挥，需要优化培养条件。
这包括培养基的选择、培养温度、气体气氛等。
可以根据不同细胞类型的特点进行相应的优化。
7. 细胞培养的长期维持为了保持细胞培养的长期稳定，需要定期更换培养基，以供细胞继续生长和分化。
同时还需要进行细胞的传代，以保持细胞的活力和功能。
8. 细胞功能和相互作用的研究通过3D细胞培养可以更真实地模拟组织和器官的微环境，有助于研究细胞的功能和相互作用。
可以通过染色、免疫组化、基因表达分析等方法来研究细胞的生理活动。
生物科学中的三维细胞培养技术
生物科学中的三维细胞培养技术随着科学技术的不断发展和进步，生物中的三维细胞培养技术正在逐渐被广泛应用于生物学、医学、药理学等领域。
三维细胞培养技术是一种体外培养细胞的方法，用于模拟细胞在生物体内的三维环境，并探究其生理和病理过程的机制。
一、三维细胞培养技术的概述三维细胞培养技术是一种针对二维细胞培养的补充，它可以更加真实地再现细胞在活体中所处的三维环境。
一般情况下，三维细胞培养技术分为两种类型。
一种是“组织球”（spheroid）的培养，另一种则是“生物纳米技术”（bio-nanotechnology）。
组织球培养法是指直接在培养基中培养细胞，形成一定大小的细胞聚合物，被称为“组织球”，因而也常被称为“多小球体法”（multicellular spheroid method）或“细胞小球法”（cellular spheroid method）。
而生物纳米技术则是指通过生物成分的组装，构建出仿生环境。
生物体内主要由三种主要的细胞外基质成分组成：蛋白质、多糖和透明质酸。
在生物纳米技术中，这些生物成分被加工处理成结构性的生物材料，模拟出细胞周围的三维环境。
二、三维细胞培养技术的应用三维细胞培养技术已经被广泛应用于科研、医学、药理学等领域。
其主要的应用方向包括肿瘤研究、疾病治疗、药物筛选等。
1.肿瘤研究三维细胞培养技术被广泛应用于癌症研究。
多数癌症细胞在二维环境下生长的模型仅仅只能反映细胞的某些方面，不利于深入研究肿瘤的发生、发展和治疗。
而三维细胞培养模型则能在造血干细胞、肿瘤细胞的分化机制、肿瘤抗药性、肿瘤微环境、药物筛选等多个领域中作出更加贴近真实的模拟。
2.疾病治疗三维细胞培养技术在医学和疾病治疗方面的应用已经逐渐成熟。
例如，在器官细胞培养中，可将诱导后的干细胞转化为所需的细胞类型。
这些转化出来的细胞可以被用于疾病的治疗，例如：肝细胞、胰岛细胞、心肌细胞、神经细胞等等。
3.药物筛选最近几年，人们对三维细胞培养技术在药物筛选方面的应用越来越广泛。
《胃癌放射抗拒细胞株BGC823-IR的建立》
《胃癌放射抗拒细胞株BGC823-IR的建立》胃癌放射抗拒细胞株BGC823-IR的建立一、引言胃癌是一种常见的恶性肿瘤，其治疗方式包括手术、化疗和放射治疗等。
然而，部分胃癌细胞对放射治疗产生抗拒，导致治疗效果不佳。
为了研究胃癌放射抗拒机制并开发新的治疗策略，建立胃癌放射抗拒细胞株显得尤为重要。
本文旨在介绍胃癌放射抗拒细胞株BGC823/IR的建立过程及其在科研中的应用。
二、材料与方法1. 材料本实验所需材料包括胃癌细胞株BGC823、放射线设备、培养基、血清等。
2. 方法（1）细胞培养：将BGC823细胞在适宜的培养基中培养，并定期传代。
（2）放射线处理：使用放射线设备对BGC823细胞进行不同剂量的照射。
（3）筛选抗拒细胞株：通过长期、多次的放射线处理，筛选出对放射线产生抗拒的细胞株。
（4）细胞鉴定：对筛选出的抗拒细胞株进行形态学、生物学及遗传学鉴定，确保其为胃癌放射抗拒细胞株。
三、BGC823/IR细胞株的建立过程1. 初始阶段首先，将BGC823细胞在培养基中培养至一定密度，然后使用不同剂量的X射线进行照射。
此后，继续培养并观察细胞的生长情况。
2. 筛选阶段经过多次照射后，部分细胞表现出对放射线的抵抗能力，这些细胞被挑选出来进行进一步的培养和扩增。
3. 鉴定与确认阶段通过形态学观察、生物学特性分析以及遗传学鉴定等方法，确认筛选出的细胞株为胃癌放射抗拒细胞株BGC823/IR。
四、BGC823/IR细胞株的特性BGC823/IR细胞株具有以下特性：1. 放射抗拒性：BGC823/IR细胞株对放射线的抵抗能力明显增强，表现出对放射治疗的抗拒。
2. 增殖能力：BGC823/IR细胞株具有较强的增殖能力，能够在体外培养中迅速扩增。
3. 遗传稳定性：经过长期培养和传代，BGC823/IR细胞株的遗传特性保持稳定，便于科研实验的重复性。
五、BGC823/IR细胞株在科研中的应用1. 研究胃癌放射抗拒机制：通过比较BGC823/IR细胞株与亲本细胞株的基因表达、信号通路等方面的差异，揭示胃癌细胞对放射线产生抗拒的机制。
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CHINESEJOURNAL()FANATOMYV01．38No．52015解剖学杂志2015年第38卷第5期
胃癌细胞三维培养体系的建立+翟文龙1杨继要2叶健文1傅哲1周闯1冯若2△(1郑州大学第一附属医院肝胆胰外科，河南省高等学校肝胆胰外科与消化器官移植重点实验室，郑州450052；2郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室，郑州450001)
EstablisllIIlentof3一dimeI坞ionalg嬲tricc锄cercellcultm．esyst锄+ZhaiWenlon91，YangJiya02，YeJianwenl，FuZhel，ZhouChuan91，FengRu02(1．Depnrt7nentofHepatobi￡iQr≯nndPamre口tics托rgery，theFirstAffi}i。tedHospi亡口￡ofZhengzhouUhiw"缸y；K已yL曲o，HP户口￡o良Z缸删n行dP口竹c心口f站S“rge删&DigP剜优()rg口卵n诅咒s户缸行施￡io咒。厂H棚n竹Pro西竹ce，拐P扎g办o“450052；2．眈加以础耐o，His￡ozo删彻d勘6r妒zo删，
CDZZPgeo，BⅡs站胁dif口ZSfiP行Ⅲ，劢e卵g咖oM溉i优"叻，Z^已行g娩o“45000】，吼i九n)
一直以来，二维细胞培养体系是体外研究细胞生物学特性的主要实验平台，但由于该培养体系的局限性等因素，使得细胞的极性、形态、功能以及基因表达均与人在体内细胞的实际生长情况差别很大，致使二维培养体系下的细胞对外界刺激做出的反应与在体细胞相差甚远[1{]。因此，利用二维细胞培养体系探讨肿瘤细胞的生物学特征及肿瘤发生、发展的机制面临越来越多的质疑。而三维细胞培养体系则是基于立体培养模式的细胞培养体系，它能更好地模拟在体细胞的生长微环境，在研究肿瘤细胞的生物学特征等方面显示出了明显的优势[4。6]。本研究拟模拟在体胃癌细胞的生存状态，在琼脂表面或以胶原混合物为依托建立胃癌细胞的三维培养体系，为体外研究胃癌细胞的生物学特征提供新的实验平台。1材料和方法1．1主要试剂DMEM、RPMll640干粉培养基及胎牛血清购自美国Gibco公司；琼脂购自美国Sigma公司；I型牛胶原购自美国organogenesis公司；1ive／dead试剂盒及谷氨酰胺均购自美国Invitrogen公司。1．2二维贴壁细胞培养BGC823为人低分化胃腺癌细胞株，购自美国模式培养物集存库(Americantypeculturec01lection，ATCC)。用RPMll640培养基(含10％胎牛血清)贴壁培养BGC823胃癌细胞，于含5％C02饱和湿度的37℃恒温培养箱内生长。1．3建立生长于琼脂上的三维细胞培养系统贴壁培养BGC823细胞至铺壁率达到50％左右时，制备细胞悬液，密度为2．5×103／ml，将其加至1．5％的琼脂预处理96孔培养板，每孑L200灶I，继续于恒温培养箱内培养48h，细胞在琼doi：10．3969／j．issn．1001—1633．2015．05．027+河南省留学回国人员科研资助项目(豫留学函[2012]5号)；河南省基础与前沿技术研究计划资助项目(132300410109)第1作者E-mail：zhai—wl@hotmail．com△通讯作者，E-mail：fr@zzu．edu．cn收稿日期：2015一01一12；修回日期：2015一06—26—618一脂表面形成类球体。1．4建立以胶原混合物为依托的三维细胞培养体系制备胶原混合物(924肛1胎牛血清，820弘l10×DMEM，150肚17．5％NaHC03，76“l200mmol／LL一谷氨酰胺及7m1I型牛胶原)，置冰上待用；选用1ml的枪头将长在琼脂表面的胃癌细胞类球体及部分培养基一同吸出，并移至无菌的15ml试管内，弃去培养基后，吸取适量的胶原混合物与类球体混匀，再将该混合物转移至24孔培养板内，每孔500“1，每孔内含类球体1～5个，静置约2min，待胶原混合物变成胶冻样后，加入RPMll640培养基，每孔1000肚l，置于恒温培养箱内，用显微镜观察其内类球体的生长状态。1．5普通显微镜观察不同培养体系下BGC823胃癌细胞的生长状态1．5．1运用二维细胞培养技术，培养BGC823胃癌细胞，在普通光学显微镜下观察该细胞的形态与生长情况；1．5．2制备生长在琼脂表面的BGC823胃癌细胞类球体，将B(E823胃癌细胞悬液移至琼脂预处理过的96孔培养板中，肉眼观察BGC823胃癌细胞类球体的形成时间，普通光学显微镜下观察该类球体的形态与生长情况；1．5．3制备以胶原混合物为依托的BGC823类球体，在普通光学显微镜下观察该类球体的形态与生长情况。1．6Live／deadasSa)卜_荧光显微镜观察二维及三维细胞培养体系下胃癌细胞的存活情况配备1ive／deadassay染液：于5mlPBS溶液中加入10出乙啶同型二聚体(ethidiumhomOdimer，EthD)及1肛l钙黄绿素一AM，避光保存待用；吸弃二维及三维培养系统下的培养基，加人live／deadassay染液，于恒温培养箱内孵育1h，荧光显微镜下观察，活细胞显示为绿色荧光，死细胞显示为红色荧光。
2结果2．1普通光学显微镜检测BGC823胃癌细胞悬液培养在琼脂预处理过的培养板中24～48h后，细胞汇聚成类球体，并生长于孔中心的琼脂表面；
将琼脂表面的BGC823胃癌细胞类球体转移至胶原混合物内，继续生长，可观察到类球体长于胶原凝胶中，24h后可观察到部分细胞从类球体边缘向周围胶原凝胶迁移。48h、96h及144h后仍见细胞牛长状态良好．并继续向凝胶中迁移(图1)。⑥图l不同培养体系中的BGC823细胞，×1∞Figl删：C823∞lIs铲们订ngiIIdiffer朗tcllIturesyst印罄，×l∞A：BC；C823cellsgrowingadherently；B：BGC823spheroidgrowingonthetopofagar；
C，D，E。F：BGC823spheroidgrowinginthecollagenmixturefor24，48，96，144h，respectiVely
2．2荧光显微镜检测BGC823胃癌细胞以单层方式生长，形态呈多边形，绝大部分细胞内可见绿色荧光，红色荧光极少，提示细胞的生长状态好；置于琼脂预处理过的培养板中的BGC823胃癌细胞悬液，于48h内形成类球体，该类球体内绿色荧光较强，红色荧光较少，提示该类
3讨论
球体内大多数细胞生长状态良好，死细胞较少；将琼脂表面形成的类球体移至胶原凝胶中生长48h、96
h及144h后，可见类球体
内部绿色荧光较强，红色荧光较弱，且在类球体边缘可见绿色荧光，提示在胶原凝胶中BGC823胃癌细胞类球体生长状态良好，死细胞较少，且类球体边缘的部分细胞向胶原凝胶中迁移(图2)。
图2不同培养体系中的BGc823细胞，×l∞Fig2BGC823傀IlsFmVingindiffe咖tclllturesyst删皓．×100A：BGC823ceIlsgm、^ringadherently；B：BGC823spheroidgro谢ngonthetopofagar；C，D，E：BC；C823spheroidgrowinginthec01lagenmixturefor48，96，144h，respectively
细胞培养是模拟体内细胞生长环境，体外培养细胞的一项技术，是体外研究细胞生物学特性的主要实验平台。在体外细胞实验中，二维细胞培养体系一直占着主导地位。然而，在传统的二维细胞培养体系中，缺乏立体的细胞间相互作用，细胞性状较为单一，细胞的形态、极性及其他一些生物学特性与在体细胞存在显著差异。因此，通过二维细胞培养体系获得的实验数据常常遭受各种质疑。研究显示与二维培养体系相比，三维培养体系下细胞对药物的反应更接近于临床试验结果，其主要原因在于二维细胞培养体系不能很好地模拟在体细胞的生长状态，而三维细胞培养一6】9～体系则能较好地模拟组织细胞在体生长微环境，较真实地再现在体细胞的生存状态，在研究肿瘤细胞生物学特征等方面具有独特的优势m]。Hongisto等[8]研究显示三维细胞培养体下，细胞的基因表达谱与移植瘤组织细胞的表达谱更为相似。weigelt等[1。]研究显示在乳腺癌细胞中，HER2信号通路的激活以及对其靶因子的作用也与细胞的立体生长环境关系密切。因此，与传统的二维培养体系相比，基于立体培养模式的三维细胞培养体系能更为准确地反映在体细胞的生存状态，以该体系为实验平台可为体外研究在体细胞的生物学特性提供更为可靠的实验数据。目前，关于肝癌、肺癌、乳腺癌及黑色素瘤等肿瘤细胞的三维培养体系报道较多口111’13]，而胃癌细胞的三维培养体系则鲜有报道。本研究选用基质支持培养系统，在琼脂上或胶原混合物内建立胃癌细胞三维培养体系，为胃癌细胞研究提供一个便于操作且更为可靠的实验平台。由于细胞问的黏附力大于细胞与其附着物之间的黏附力是多细胞类球体形成的前提。因此，在培养孔中铺软琼脂可阻断培养板壁与细胞的相互接触，达到细胞不能贴壁生长的效果；此外，琼脂在凝固过程中形成一个中间低、周围高的表面，使细胞借重力作用向琼脂的中部集聚，有利于多细胞类球体形成。本研究将含有B(七一823胃癌细胞的悬液加至铺有琼脂的培养孔培养一段时间后，可在琼脂表面的中央形成一个多细胞类球体。I型胶原是在体组织中重要的细胞间质组成部分，它在细胞的增殖、生长、迁移及分化等方面均起到重要的调控作用[I“。故以I胶原混合物为依托的多细胞类球体的生长微环境更接近在体组织细胞。因此，利用该三维细胞培养体系探讨胃癌细胞生物学特性时更具有说服力。有学者以胶原凝胶为支撑，在其表面形成多细胞类球体，亦有学者将细胞弥散于胶原凝胶内生长。本实验将在琼脂上形成的胃癌细胞类球体移至胶原混合物中继续培养。该体系除具备细胞间立体框架下的相互作用外，还增加了细胞外基质成分如工型胶原的作用，能较好地模拟在体细胞的生存微环境，较为真实地再现在体细胞的生长状态。此外，还可根据胃癌细胞从类球体边缘向胶原凝胶中迁移的情况来较为直观地观察其迁移能力，可为探讨胃癌细胞的迁移及浸润转移机制提供一个新的较为直观的实验平台。本研究成功建立了生长于琼脂表面的胃癌细胞三维培养体系及以胶原混合物为依托的胃癌细胞培养体系。与二维细胞培养体系相比，在三维细胞培养体系下的细胞生存状态及各种生物学特征与在体组织细胞更为相似；与动物实验相比，在三维细胞培养体系下没有诸多体内因素的干扰，随时可观察细胞的变化，且可操作性强。因此，生长于琼脂上的类球体，尤其是以胶原混合物为依托的胃癌细胞培养体系在探讨胃癌细胞生物学特征方面有着独特的优势．为探讨胃癌细胞的生物学特征提供了新的实验平台。