抑制SOD1调节上皮间质转化抑制鼻咽癌细胞迁移
白细胞介素6受体拮抗剂治疗甲状腺眼病的实验研究
承担单位
范江涛 范余娟 冯青 冯旭 冯震博 顾永耀 桂春 郭建极 郭灵 郭盛兰 郭云 韩萍 韩蕴丽 何剑峰 何克新 何萍 何少健 何涛 何巍 何燕 何云 何志义 黄东萍 黄高明 黄华 黄杰安 黄巨恩 黄力毅 黄龄瑾 黄明汉 黄秋嫔 黄素华
血清甲壳质酶蛋白40在子宫内膜癌诊治中的价 值 FHIT基因与女性外阴癌和外阴尖锐湿疣的相关 性研究 放疗对牙体硬组织黏结剂黏结强度的影响 食管癌相关基因表达的临床研究 EZH2和PTEN 基因在肝细胞癌中表达的意义及其 相关性的研究 Livin在淋巴瘤中表达和反义Livin抑瘤作用的 研究 Neuregulin1/ErbB信号传导在糖尿病心肌病中 的改变 LUNX-mRNA联合MAGE-mRNA检测非小细胞肺癌淋 巴结微转移 海马齿状回神经发生在糖尿病脑病发病中的作 用及其机制 超声心动图对结构性心脏病的临床应用基础研 究 新辅助治疗在低位直肠癌术前的应用研究 内镜治疗食管静脉曲张及胆总管结石的临床研 究 托吡酯、丙戊酸钠对癫痫患儿体质量及糖脂代 谢指标的影响 多元醇通道代谢异常与糖尿病视网膜组织中细 胞凋亡的关系的研究 广西甜茶护齿含片的研究 吗啡急、慢性给药对大鼠交感神经节突触传递 的影响及信号转导机制 癌-睾丸抗原SSX4蛋白的表达、纯化及其血清学 分析 制备大鼠心肌梗死模型影响因素及甘蔗叶多糖 对梗死后缺血损伤心肌保护作用的实验研究 vIL-10基因修饰骨间质干细胞诱导非协调性心 脏移植免疫耐受的研究 非诺贝特对心力衰竭大鼠心肌能动力学对甲状腺癌早 期诊断的研究 不同阶段慢性阻塞性肺疾病肺血管炎症特征及 其影响因素的研究 应用分子生物色谱法研究玉米须中降血糖活性 成分 基于自组织影射网络的冠心病高血压预测模型 及其候选基因筛选研究 广西南宁市儿童氟化牛奶防龋可行性研究 鞘氨醇激酶-1在结肠癌细胞生长、运动和侵袭 中的作用及机制研究 碱性成纤维细胞生长因子拮抗肾毒性作用机理 研究 TNF-a基因多态性对乙肝病情进展影响的研究 中医药防治多器官功能障碍综合征的系列研究 血管抑素和白介素在抑制鼠角膜新生血管中的 作用及相关研究 红霉素对香烟暴露大鼠Th1/Tc1介导气道炎症及 调节性T细胞变化的影响 唇腭裂随访系统的研究与应用
蛹虫草有效成分及药理作用
蛹虫草有效成分及药理作用蛹虫草[Cordyceps militaris(L.ex.Fr)Link]，又名北冬虫夏草，蛹草，北虫草，蛹草菌等，分类学上属于真菌门（EUmycota），子囊菌亚门（AsCOmycotlni8），核菌纲（Pyre nomycetes），球壳目（Sphaeriales），麦角菌科 (Claviciptiaceae)，虫草属(Cordycps)。
赵学敏在《本草纲目拾遗》中把虫草类的药用归之为“能治百虚百损”。
李时珍在《本草纲目》中指出，蝉花能主治“小儿天吊惊痛，夜啼，心悸”。
其中蝉花包括蝉草和蛹草等多种寄生于蝉体上的虫草。
多年来的研究表明，蛹虫草内含有虫草素、虫草酸、多糖、腺苷等多种有效成分，在降血脂，防止动脉硬化，保护心、脑组织，镇静催眠，增强巨噬细胞的活性，抗炎、抗癌、抗菌、抗衰老等方面都有良好功效。
1 有效成分1.1 核苷类化合物蛹虫草子实体及发酵液中含有虫草素（3’脱氧腺昔）、腺嘌呤、脱氧胸苷、尿嘧啶、腺苷、次黄嘌呤、鸟苷、尿苷、N6-甲基腺苷、N6-[β-（乙酰胺甲酰）氧乙基]、 O5-乙酰基虫草素等核苷类化合物，为蛹虫草的主要活性成分之一。
其中虫草素（cordycepin）是195 1年 Cumingham等从蛹虫草的培养物中分离到的一种腺苷类活性物质，它是一种抗菌素，具有抗菌、抗病毒、干扰人体RNA及DNA合成，明显抑制多种肿瘤生长的作用，其在蛹虫草中的含量明显高于冬虫夏草，且人工培养的蛹虫草中的含量也远高于天然蛹虫草。
腺苷具有改善心脑血液循环、防止心率失常等活性，液体培养踊虫草菌丝中的腺嘌呤、腺苷、鸟苷、尿苷的含量均高于固体培养的踊虫草子座。
1.2 虫草多糖类从踊虫草菌丝培养液粗多糖中分离得到一种含有少量蛋白的半乳甘露聚糖CM-1，分子质量为270u, 糖组成半乳糖和甘露糖摩尔比为6:5。
结构研究结果表明，CM-1具有高度分支结构，支链由大量的β-（1 →6）半乳糖和较大量的β-（1→2）呋喃半乳糖构成，分别连接在主干的0～4和0～6上。
虫草素药理学研究进展
ＬＩＳＨＩＺＨＥＮＭＥＤＩＣＩＮＥＡＮＤＭＡＴＥＲＩＡＭＥＤＩＣＡＲＥＳＥＡＲＣＨ２００８ＶＯＬ．１９ＮＯ．１１时珍国医国药２００８年第１９卷第１１期虫草素药理学研究进展王雅玲，王亮，金黎明（大连民族学院，辽宁大连１１６６００）摘要：综述了国内外对虫草素药理学的研究概况，主要介绍了虫草素在调节免疫、抗肿瘤、抗茵抗病毒、抗炎、抗白血病等方面的研究进展，提出了虫草素在临床应用时存在的问题，为今后进一步开展虫草素生物功能研究提供了理论参考。
关键词：虫草素；药理学；抗肿瘤；免疫调节中图分类号：Ｒ２８５．５文献标识码：Ｂ文章编号：１００８－０８０５（２００８）１１－２６６７－０２虫草素（ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｎ）又称虫草莆素、蛹虫草菌素，是蛹虫草中（尤其是核苷类）主要活性成分。
也足第一个从真菌中分离出来的核件类抗生素。
在明确其物理化学性质…的摹础上，对虫草素的功能开展了大量研究，早在２０ｌＩ￡纪７０年代就已被发现有抑制肿瘤、抗疟原虫和抑制ｍＲＮＡ翻译的作用，到２０世纪９０年代，虫草素的研究获得突破性进展，研究人员发现添加腺苷脱氨酶（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＡＤＡ）抑制剂对其抗肿瘤活性的表达起着重要作用【２Ｊ，并且，１９９７年美国已将虫草索用于一期临床实验，治疗急性前Ｂ和前Ｔ淋巴细胞白血病患者。
虫草素的抗肿瘤作用引起全球科学家的关注，对虫草素在抗菌、抗炎、抗ＨＩＶ—Ｉ璎病毒、选择性抑制梭菌以及免疫调节等药理学方面开展了大量研究，并取得ｒ突破性进展。
１虫草素的免疫调节作用近年来，研究人员发现虫草素具有免疫调节作用。
它能够极大地提高了人外周血液单核细胞ＩＬ—１０的分泌和ＩＬ—ＩＯｍＲＮＡ的表达，同时，虫草索对诱导产牛ＩＬ一２的植物血球凝集素和外周血液单核细胞扩增都有抑制作用，抗ＩＬ一１０中性抗体也不能完全阻止虫草素对ｌＬ一２产生的抑制作用ｐ１。
在虫草素作用下，成熟树突状细胞能诱导调节性Ｔ细胞增殖”－，而且还能抑制细胞分裂．促进细胞的分化，改变胞膜上物质结构分布，对１．淋巴细胞转化有促进作用，它还可以提高机体单核巨噬细胞系统的吞噬功能，激活巨噬细胞产牛细胞毒素汽接杀伤癌细胞一Ｊ。
穿破石、石见穿、穿山龙研究概况
穿破石、石见穿、穿山龙研究概况李勇华，杨勤中药穿破石、石见穿、穿山龙从药名看均有“穿”字，均有活血、疏筋、通络、散结功效，常用于治疗痹证、癞瘕、积聚等病证。
现对三药的研究概况综述如下。
1 传统认识穿破石为桑科植物小柘树或柘树的根。
味淡、微苦，性凉，人心、肝二经，功能止咳化痰、祛风清热、利湿通络、活血通经、散瘀止痛、解毒消肿。
主治风湿关节疼痛、黄疸、淋浊、蛊胀、闭经、劳伤咳血、跌打损伤、疔疮痈肿及用于晚期消化道癌肿、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌、鼻咽癌、肺癌、晚期恶性肿瘤等。
内服煎汤9 30g，鲜者可用至120g，或浸酒，外用适量捣敷。
石见穿，为唇形科植物华鼠尾草的全草。
味辛、苦，性微寒，归肝、脾经，功能活血化瘀镇痛、清热利湿解毒、化痰散结消肿、平喘。
主治月经不调、痛经、经闭、崩漏、带下、乳痈、湿热黄疸、便血、热毒血痢、淋痛、噎膈、痰喘、风湿骨痛、瘰疬、疮肿、带状疱疹、麻风、跌打伤肿等。
内服煎汤15 ~30g，或捣汁和服，外用适量捣敷。
穿山龙即薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣，以根状茎入药。
性温，味甘、苦，归肝、肾、肺经，功能舒筋活血、止咳化痰、祛风止痛。
主治腰腿疼痛、风湿痛、筋骨麻木、大骨节病、跌打损伤、咳嗽喘息等。
内服煎汤干品6 ~9g、鲜品30 45g，或浸酒，外用适量鲜品捣敷。
化学成分梁云贞等-t 从穿破石挥发性挥发油成分中鉴定出成分20种，其中正十六烷酸含量最高( 28.41% ) ，l 、2一苯二羧基丁基2一乙基已基酯含量次之( 14.06%) ，其他成分由高到低依次为蒿脑、胡椒基胺、二十六烷、枯茗醛和二丁基邻苯二甲酸酯。
刘建华等在穿破石挥发性成分的研究中，共提取出94个化合物，检测出64个，其中含量较高的是L一芳樟醇( 9.85% ) ，其次是石竹烯氧化物( 6.32% ) ，A 一草烯( 5.50%) ，1一辛醇( 5.06% ) ，草烯环氧化物( 4.23% ) ，橙花醇乙酸酯( 3.69% ) ，B一石竹烯( 3.68% ) 。
解密虫草的八大成分
解密虫草的八大成分冬虫夏草包含有多种对于人体医疗和保健方面有重要价值的生理活性物质。
这些生理活性物质极期丰富多彩，可抗菌、抗癌、抗血小板凝结、抗辐射，改善和提高记忆力、调节机体免疫能力、防治钙离子拮抗、对脑和心脏在常压缺氧下有保护作用，并具有镇静和镇痛等功能。
迄今人们已从冬虫夏草中检测或分离到其特有的活性物质——虫草素、虫草酸、虫草多糖和超氧化物歧化酶(SOD)。
虫草素具有抑制肿瘤、抗病毒、抗氧化以及保护心、脑、肾、肝细胞等作用。
虫草酸具有降低颅内压等作用。
虫草多糖具有提高机体免疫功能等作用。
SOD具有消除自由基防衰老等作用。
冬虫夏草还含有人体必要的氨基酸、微量元素等成分。
因此，冬虫夏草不但可以作为人体疾病的治疗药物，也可以制成功能性食品和饮料等保健佳品。
一、虫草素（腺苷）冬虫夏草素是冬虫夏草中含有的主要生理活性物质，通常称虫草素。
虫草素是一种淡黄色结晶粉末，在试管内能抑制链球菌、鼻疽杆菌、炭疽杆菌、猪出血性败血症杆菌及葡萄梦球菌的生长。
从虫草的培养液中分离出来一种虫草素3’一脱氧腺嘌呤核苷(3’一deoxyadenosine)是一种具有抗菌活性的核苷类物质，对核多聚腺苷酸聚酶有很强的抑制作用，能抑制癌细胞的生长，还有抗病毒、抗癌和抗真菌作用，也有滋肺补肾，促进骨髓造血功能等作用，可辅助治疗久咳、失眠、支气管炎、夜尿等症。
虫草素对癌细胞有抑制作用。
1994年，Yuh—Chi：Kuo等研究认为，虫草素对鸟结核杆菌(协voba~erium avium)和枯草杆菌(．Bucillus subtilis)有拮抗作用，还具有抑制蛋白质激酶的活性、DNA和RNA的合成，促进细胞分化，改变细胞骨架的分布等生物活性作用，所以对多种癌症，如膀胱癌、结肠癌、肺癌和纤维肌瘤、艾氏腹水疣、人咽癌、人表皮样癌，以及子宫颈癌均有抑制作用。
虫草素是一种助阳药。
《中药大全》中记载，虫草素和虫草酸具有益肺肾、补精髓、扩张支气管、镇静、抗菌等的药理作用，所以冬虫夏草可用于止喘咳、止血化痰、虚劳咳嗽、吐血、阳痿、腰膝酸痛、遗精、病后盗汗、自汗或贫血等症，是一种补养药中的助阳药。
补硒知识
补硒知识功能篇1硒应用的演变史是什么？硒作为一种化学元素过去一直被认为是一种对人和动物毒性极强的元素。
直到1957年，Schwarz和Foltz发现从酿酒酵母中分离出的生物活性分子Ⅲ（即硒），能预防大鼠的肝坏死，才首次证明硒对动物具有营养作用。
1973年，Rotruck首次发现了硒是谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的基本组成成分。
于是，联合国世界卫生组织同年宣布，硒是生物体中必需的、不可缺少的营养元素之一。
同年，中国学者首先提出克山病与硒营养关系的报告，为硒的生物功能提供了科学依据。
中国营养学会也将硒正式列为膳食食谱中必需的营养元素。
2 补硒为什么能抗氧化？机体内存在大量的不饱和脂肪酸，当受到具有强氧化力的自由基侵袭时，会发生过氧化反应生成过氧化物。
此反应是一种连锁反应，一旦开始便会与周围各种细胞膜内所含的脂质或其他细胞器产生反应，影响器官的正常代谢功能或其受损时的自我修复功能。
关于自由基引发的脂质过氧化作用的研究已涉及到肿瘤、感染、炎症、自身免疫病、化学中毒、辐射损伤、心血管疾病以及衰老、吞噬杀菌等生理病理过程。
已经证明，硒是谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的重要组成部分，硒的抗氧化作用主要通过GSH-Px酶促反应清除脂质过氧化物，将有害的过氧化物还原成为无害的羟基化合物，从而保护了细胞膜的结构和功能。
能够清除特定自由基或催化特定过氧化物还原的物质还有超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽还原酶(GSH—R)等，与GSH-Px、磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶（PHG-Px）两种含硒酶共同构成了一个抗脂质过氧化作用的有效保护系统。
3 硒与维生素E的抗氧化作用有什么不同？硒与维生素E都是良好的抗氧化剂，但含硒过氧化物酶的抗氧化能力要比维生素E高出500倍。
另外，维生素E控制着体内磷脂上不饱和脂肪酸不被氧化，为抗氧化的第一道防线。
硒以GSH-Px的形式催化脂质过氧化物的还原，将过氧化物迅速分解成醇和水，使细胞中的膜结构免受过氧化物的损害，起到第二道防线的作用。
冬虫夏草药理作用的研究进展
冬虫夏草药理作用的研究进展李如意;宋厚盼;魏艳霞;余黄合;李鑫;蔡雄;黄惠勇;刘平安【摘要】冬虫夏草是冬虫夏草菌子实体和幼虫尸体的结合体，是中国传统的珍稀名贵药材，具有益肺肾、补精髓之功效。
其化学成分主要包含多糖、核苷酸、甾醇等，具备多种药理作用，因对人体健康具有极大的价值而备受国内外学者关注。
本文主要综述了冬虫夏草的药理作用，并展望了冬虫夏草的应用前景。
%Cordyceps sinensis is a combination of Cordyceps sinensis fruitbody and larva body of Cordyceps sinensis ( Berk. ) Sacc. As a rare and valuable herb in Chinese medicine, it has been medicinally used for lung and kidney tonic and replenishing essence. Cordyceps mainly consists of polysac-charides, nucleosides and sterols, and has a variety of pharmacological activities. Cordyceps has attracted much attention of the scholars at home and abroad because of the great value to human health. Here we summarize the research advances on the pharmacological effect of cordycepsin in recent years, and looks ahead the application prospect of Cordyceps sinensis.【期刊名称】《环球中医药》【年(卷),期】2016(009)010【总页数】5页(P1284-1288)【关键词】冬虫夏草;药理作用;综述【作者】李如意;宋厚盼;魏艳霞;余黄合;李鑫;蔡雄;黄惠勇;刘平安【作者单位】410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室; 湖南中医药大学药学院;410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室;410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室;410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室; 湖南中医药大学药学院;410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室;410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室;410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室;410007 长沙，湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室; 湖南中医药大学药学院【正文语种】中文【中图分类】R284冬虫夏草(Cordyceps)，又名夏草冬虫、虫草，属于麦角菌科虫草属，是寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体[1]。
茯苓的药理作用化学成分及临床应用研究
茯苓的药理作用化学成分及临床应用研究曲汉卿田鑫程南针（甘肃中医学院）摘要：茯苓是一味利水渗注药。
传统用于脾胃气应所致的疾饮、水肿等证。
近年来发现有治疗肝炎、心悸、精神分裂症，乙脑后遗症、失语、要幼儿秋季腹泻、斑秃、胃痛等新用途。
现以近几年国内外相关文献为材料，对获菩的化学成分及其药理活性进行了综述，以促进获菩的开发利用。
关键词:综述;茯苓;药理作用;临床应用;茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw·) Wolf的干燥菌核[1],收载于2005版中国药典,具有渗湿利水、健脾宁心之功效。
临床上常用于治疗水肿尿少、痰饮眩晕、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安、惊悸失眠等症。
《神农本草经》将茯苓列为上品,常与其他中药配伍使用,代表方剂有四君子汤、五苓散、桂枝茯苓汤等。
现代药理学研究表明[2-3],茯苓主要化学成分为多糖和三萜类成分,具有抑制肿瘤、抗炎、调节免疫等作用。
1 .化学成分研究1）茯苓糖茯苓的主要化学成分为茯苓糖(Pachymose),含量约为84. 2%,含β-茯苓聚糖(β-pachymose)、葡萄糖、蔗糖及果糖,硬烷(Albuminoid)含0. 68%,纤维素含2. 84%.有研究表明:茯苓聚糖的结构是50个β(1~3)结合的葡萄糖单位中有1个β(1~6)结合的葡萄糖基支链和1~2个β(1~6)结合的葡萄基间隔[4].β-茯苓聚糖并无抗肿瘤成分,但切除β(1~6)支链后,既可得到茯苓多糖.茯苓多糖经羧甲基化得到溶于水的茯苓羧甲基茯苓多糖(CMC),其中β-茯苓聚糖(β-Pachyman)为主成分, 2）茯苓素茯苓素为一组小分子的四环三萜类化合物,它以酸的形式存在于植物中,有报道从云南文山产茯苓(Poria cocos)菌核的外表皮中,用乙酸乙酯提取的部分可分离到6个萜类化合物,含茯苓酸(Pachymic acid)、松苓酸(Pmicoic acid)、块苓酸(Tumulosic acid)、齿孔酸(Eburicoic acid)、松苓新酸等.茯苓素具有免疫调节和抗癌活性,在体内还可拮抗醛固酮活性,另外,对人白血病细胞系HL-60有诱导分化作用.3）其他成分茯苓含麦角甾醇、硬烷(Albuminoid)0. 68%,纤维素2. 84%,还有三萜类、辛酸、月桂酸、十二酸、组氨酸、胆碱、蛋白质、脂肪、酶、腺嘌呤、树胶等成分.胆碱可以增强和改善大脑机能.即茯苓多糖、茯苓糖为其主要活性成分,约占干燥品的93%,具有抗肿瘤、提高免疫力的功能[5].茯苓多糖能增强人体免疫功能,可以提高人体抗病能力,起到防病、延缓衰老的作用,还可以促进细胞分裂,抗诱变、抗肿瘤,对肝炎、鼻咽癌和胃癌患者有一定的疗效[6].随着分离和测定技术的提高,中外学者已从茯苓中分离了3种化学骨架类型的羊毛甾三萜34个化合物,用化学方法合成了一些衍生物,并对其构效关系进行了研究[7]2 药理作用1）抗肿瘤作用茯苓中多种成分均具有抗肿瘤的作用。
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抑制SOD1调节上皮间质转化抑制鼻咽癌细胞迁移付兰燕;邓丽文;戴婷;蒋利玲;龚青;李帅【摘要】Objective]To explore the aberrant expression of SOD1 gene in nasopharyngeal carcinoma tissues and adjacent tissues,as well as in NPC cell lines,then to observe the effect of SOD1 on NPC cells metastatic ability and investigate the intrinsic⁃mechanism.[Methods]Immunohistochemical technique was used to examine SOD1 expression in carcinoma tissues and adjacent tissues(n=10). Small interfering RNAs and inhibitor LCS-1 were used to knockdown of SOD1 expression and inhibit SOD1 activity, respectively. Then,wound healing test and migration assay were applied to detect cell metastatic ability in vitro. Real-time PCR and Western Blot were used to analyze the expression of EMT-related genes(E-cadherin,Vimentin,Twist).[Results]SOD1 was found to be significantly up-regulated in nasopharyngeal carcinoma tissues(n = 7 ,70%),compared to control. SOD1 was also highly expressed in highly metastatic potential NPC cell lines(CNE2,5-8F,S18)compared with low metastatic ability cell lines(6-10B). Knockdown SOD1 expression or inhibit SOD1 activity suppress cell motility in CNE2 and 5-8F cells. Finally,we demonstrate that SOD1 inhibition plays a role in induction of epithelial marker E-cadherin and has an opposite effect on mesenchymal marker vimen tin and transcriptional factor twist.[Conclusion]These results suggest that SOD1 contributes to EMT and might be important for tumor metastasis in NPC.%【目的】探讨鼻咽癌异常表达的SOD1及其对细胞迁移能力的影响和可能的分子机制。
【方法】采用免疫组化技术检测癌和癌旁组织中SOD1的表达（n=10），采用脂质体转染siRNA下调SOD1表达，用抑制剂LCS-1抑制SOD1，划痕实验及迁移实验检测其对鼻咽癌细胞体外迁移能力的影响，定量PCR检测上皮细胞分子标志物E-cadherin及间质型分子Vimentin及转录因子Twist的mRNA水平，Western Blot法检测E-cadherin、Vimentin蛋白水平。
【结果】与癌旁组织相比，7例癌组织中SOD1相对高表达（70%）；在鼻咽癌细胞中，SOD1在高转移细胞系5-8F、S18及CNE2中较低转移细胞系6-10B中高表达。
在5-8F、CNE2细胞中敲低或抑制SOD1后鼻咽癌细胞的迁移力下降，同时上皮型分子E-cadherin的mRNA和蛋白水平被上调、间质型分子Vimentin和转录因子Twist的表达下调。
【结论】SOD1可能通过调控鼻咽癌细胞上皮间质转换（EMT）促进鼻咽癌细胞的迁移。
【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2017(038)001【总页数】7页(P42-48)【关键词】上皮间质转化;鼻咽癌;超氧化物歧化酶1【作者】付兰燕;邓丽文;戴婷;蒋利玲;龚青;李帅【作者单位】广州医科大学生物化学教研室，广东广州511436;广州医科大学生物化学教研室，广东广州511436;广州医科大学生物化学教研室，广东广州511436;广州医科大学免疫研究所，广东广州511436;广州医科大学生物化学教研室，广东广州511436;广州医科大学生物化学教研室，广东广州511436【正文语种】中文【中图分类】R34鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国南方和东南亚地区常见的一种头颈部恶性肿瘤，它具有明显的地域发病差异［1］。
在我国尤其是在广东省，鼻咽癌是高发地区，被称为“广东瘤”。
统计数据显示，全球每年鼻咽癌新发6.5万病例，中国占2.8万例，其中广东鼻咽癌的发病率占全国的60%。
鼻咽癌目前的常规治疗，主要以放疗和化疗为主，并在早期有较好的疗效，但病情复发和肿瘤远处转移仍然是病人死亡的主要原因［2-3］。
因此，开发新的有效对付转移肿瘤细胞的方法和研究思路非常迫切。
在肿瘤细胞转移过程中，上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）与肿瘤细胞转移能力有着密切联系［4］。
上皮-间质转化就是上皮细胞失去细胞极性，细胞间连接的过程，此过程改变细胞的形态和结构并获得间质细胞的特征。
EMT分子标志物最有意义的改变特征是下调上皮钙粘蛋白E-cadherin和上调波形蛋白Vimentin。
高表达的E-cadherin不利于肿瘤细胞的迁移，是肿瘤预后良好的一个生物指标，而Vimentin 则相反。
EMT赋予细胞迁移浸润、诱导细胞干性、阻滞细胞凋亡、衰老和免疫抑制，由此间充质化的细胞具备了迁移到远处器官、维持干性和分化能力及激发肿瘤转移的能力［5］。
同样，EMT与鼻咽癌细胞的侵袭转移也密切相关，抑制鼻咽癌细胞EMT可以显著抑制鼻咽癌的转移［6-7］。
然而肿瘤细胞发生EMT的机制仍不十分清楚，目前认为抗氧化酶可能参与肿瘤EMT的发生发展［8-9］。
超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一种广泛存在于细胞内的消除超氧阴离子自由基的抗氧化酶，SOD根据定位不同共有三种类型：SOD1，主要定位在胞浆中；SOD2即MnSOD，定位在线粒体中；SOD3，细胞外超氧化物歧化酶，主要在血浆等细胞外基质起作用。
研究报道在肺癌，乳腺癌细胞中，SOD1高表达并能促进细胞生长［10-11］。
下调SOD1通过调控PKD2/SOD1信号通路诱导骨髓性白血病细胞调亡及抑制细胞分化［12］。
由此看来，SOD1可能成为治疗肿瘤的一个新靶点。
我们以往研究［13］发现基础水平低表达但因失巢诱导上调的SOD2促进鼻咽癌失巢凋亡抵抗转移。
然而，原本基础水平高表达的SOD1在鼻咽癌转移过程中的作用尚未阐明，SOD1是否除了调控代谢还是否参与EMT的发生有待阐明。
我们的研究发现SOD1在癌组织标本中高表达，在高转移NPC细胞系中同样高表达，抑制SOD1细胞的迁移能力明显下降，同时调控EMT相关蛋白分子表达改变，提示SOD1可能通过调控EMT促进鼻咽癌细胞迁移。
1.1 癌组织标本和细胞株与试剂本研究所用10对病人组织标本（癌组织与癌旁组织）收集于中山大学肿瘤医院2014-2015年病例标本，NPC细胞系由中山大学生化教研室高国全教授惠赠。
细胞常规培养于体积分数为5% CO2，100 mL/L胎牛血清DMEM条件（含双抗），细胞处理详见方法。
siRNA-SOD1及阴性对照siRNA-negitive control由广州锐博公司合成，PCR引物由广州生物工程公司合成。
OPti-MEM培养基，DMEM培养基，0.25%胰酶均购于美国GBICO公司。
LipofectamineTM2000购于life公司。
Trizol，BCA蛋白定量试剂盒购于天根公司。
RIPA裂解液购于鼎国公司。
RT-PCR试剂盒，Real time-PCR试剂盒购于TaKaRa公司。
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒，结晶紫染色剂购于碧云天公司。
ENVISION试剂盒购于基因公司。
SOD1抑制剂LCS-1购于Sigma公司。
蛋白Maker购于Threom公司。
SOD1抗体，E-cadherin抗体，Vimentin抗体购于CST公司，内参β-actin抗体，二抗抗鼠、抗兔抗体均购于proteintech公司。
1.2 方法1.2.1 免疫组织化学染色组织切片采用基因公司ENVISION试剂盒说明书进行操作，大概步骤如下：首先进行组织切片脱蜡处理，二甲苯脱蜡：20 min×3次，无水乙醇：10 min×1次。
水化100%、95%、90%、80%、70%乙醇各5 min。
PBST洗清洗3次后进行抗原修复，使用枸橼酸盐缓冲液，然后封闭使用免疫组化笔画圈，加3%H2O2约30～50 μL/片，室温1 h。
PBST清洗3次后孵一抗SOD1（1:200），4℃过夜。
使用基因公司ENVISION试剂盒的A液（二抗），30 min。
PBST洗后DBA显色：使用基因公司ENVISION试剂盒用B液以1:50比例稀释C液，约30～50 μL/片，显色时间15 s，水洗20 min苏木素复染：30～50 μL/片25 s，水洗后封片，光学显微镜下观察，拍照，分析结果。
1.2.2 siRNA干扰及抑制SOD1用含100 mL/L血清DMEM培养液培养鼻咽癌细胞系，放置于37℃，体积分数为5%CO2密闭式培养箱内培养。
选取对数生长期细胞，用胰酶消化后重悬接种于6孔板，待细胞融合密度达到60%左右，换液，Lipo2000进行转染4～6 h后换液。
siRNA干扰分组：对照组NC，实验组siRNA1#-SOD1，siRNA2#-SOD1。
抑制剂分组：对照组为DMSO，实验组为1.5 μmol/L、3 μmol/L SOD1抑制剂LCS-1。