肉毒芽孢杆菌的检验
食品安全检验的指标
色香味形
• 对食品色香味形的基本要求是在能够满足人们生理需要的 基础上，满足人们的感官需求。如鲜美的滋味，诱人的香 气，鲜艳协调的色彩和具有美感的外观形状。这些都能引 起人们的食欲，刺激人们消化液的分泌，如再配上精美的 餐具和优雅就餐环境，那么饮食不但可以满足人们的生理 需要，还可以得到文化精神上的享受。因此色香味形俱佳 的食品才能称为优良食品。
• 3 生物学检验 • 食品微生物学检验包括杂菌总数、大肠菌 群、致病菌检验、霉菌总数、产毒霉菌鉴 定等项目的检验。 • 4 生理学检验：主要包括消化率、发热量、 外来毒性试验等。
食品标签标注规定
食品标签标注的基本要求、必须标注的内容、 可以选择标注的内容、特殊营养膳食用食品标 签标注的特殊要求等方面进行解读，以期让消 费者和企业更好地利用食品标签标注规定保护 自己的合法权益。
食品中有害、有毒物质的来源
• 一是食品在生产、加工、包装、运输、贮藏、销售等各个 环节中受到化学、生物性的污染。如食品加工中各种添加 剂的使用，各种农药、化肥的使用以及工业“三废”的排 放造成的环境污染，加工操作人员的卫生健康状况都会使 食品受到不同程度的污染。 • 二是一些天然动植物食品本身含有一些有毒成分，如河豚 鱼中的河豚毒素，发芽马铃薯中的龙葵素，苦杏仁和木薯 中的氰甙，鲜黄花菜中的秋水仙碱等。 • 食品中的这些有害、有毒成分，必须在加工、检验中严格 控制，不能超过标准的规定，否则食品就失去其食用价值。
No.
51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64
前缀码
690-694 70 729 73 740 741 742 743 744 745 746 750 759 760-769
国家或地区
致病菌检验-肉毒梭菌.
三、检验方法
1、检验标准：GB 4789.12-2003
2、培养基和试剂 培养基： 庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。 试剂： 肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰 氏染色液。 另需实验动Байду номын сангаас（小白鼠）。
3、检验程序
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以
及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一
2、培养特性
最严格的厌氧菌 生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适pH为7.8 ~8.2。 产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型 温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。 对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
致病菌检验——
肉毒梭菌
肉毒梭状芽孢杆菌检验
一、肉毒梭状芽孢杆菌的生物学特性 1、形态与染色 肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性， 约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链，两侧平行， 两端钝圆，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度， 位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常 见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚膜。
中毒方式
• 食物媒介 • 吸入：极罕见的中毒类型 • 创伤感染：肉毒梭菌污染创伤部位，在局 部发芽繁殖，产生毒素，引起肉毒中毒。 • 肠道感染：根据肉毒梭菌能否在肠道内产 毒而引起人的都读中毒。
临床症状
• 肉毒中毒的潜伏期短着仅2h，长者可达10 天左右，通常约12-18h • 前期症状可能出现头昏、头痛、恶心、甚 至呕吐、腹泻等。 • 基本属于神经麻痹表现，最早是视觉障碍， 继而全身无力、呛噎、眼睑下垂、伸舌和 张口困难、抬头费力、瞳孔散大、咀嚼障 碍、不能下咽、胸内烦闷、有恐惧感、重 者晚期呼吸困难，最后死于呼吸麻痹。
梭菌属Clostridium的检验
梭菌属Clostridium的检验•该属细菌多数严格厌氧，革兰氏染色阳性，形成芽孢，芽孢直径往往比菌体粗，使菌体膨胀成梭状，但并非梭菌属的细菌均为梭状，如破伤风梭菌，芽孢位于菌体顶端，菌体呈鼓槌状。
•该属细菌能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强，包括产气荚膜梭菌、腐败梭菌、诺维梭菌、肉毒梭菌和破伤风梭菌等。
一、产气荚膜梭菌（Cl. Perfringens）旧名魏氏梭菌，在自然界分布很广。
一定条件下，可引起多种严重疾患，局部组织出现坏死、水肿、产气。
是引起食源性胃肠炎最常见的病原之一，可引起典型的食物中毒暴发。
由产气荚膜梭菌引起的疾病为魏氏梭菌中毒。
1、形态及染色特征革兰氏阳性粗大梭菌，3-4×1-1.5µm。
单独或成双排列，有时成短链。
芽胞卵圆形，宽度不比菌体大，位于中央或末端。
培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。
在脓汁、坏死组织或感染动物脏器涂片可见明显荚膜，无鞭毛，不能运动。
2、培养特性本菌虽属厌氧性细菌,但对厌氧程度的要求并不太严。
厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。
在普通培养基上能生长,若加葡萄糖、血液,则生长更好。
生长适宜温度为37~47℃,多认为43~47℃为最宜本菌生长温度。
繁殖速度极快,在适宜条件下增代时间仅8min,可利用高温快速培养法对本菌进行选择分离,如在45℃下,每培养3~4h传种1次,即可较易获得纯培养。
2、培养特性(1) 血液琼脂平板: 菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状，多数菌株有双层溶血环，内环是θ毒素的作用，而外环不完全溶血是a毒素所致。
(2) 疱肉培养基: 肉渣不被消化，有时呈肉红色。
(3) 牛乳培养基: 分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。
管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为“暴烈发酵”，是本菌的特点之一，主要鉴别的指标。
在乳糖、牛奶、卵黄琼脂平板上培养的菌落周围出现乳光浑浊带。
肉毒杆菌检测与控制技术研究进展
Ｂ０Ｔ Ｕ Ｉ Ｉ Ｎ ＵＭ ＯＬＵＭ Ｎ
国
肉毒杆 菌检测与控制技术研究进展
刘继超 ，姜铁民 ，陈历俊
（ 北京三元食 品股份有 限公 司，北京 ｌ ０ ０ ０ ７ ６ ）
中图分类号 ：Ｔ Ｓ ２ ５ ２ ． ７ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ ０ ４ — ４ ２ ６ ４（ ２ ０ １ ３）１ ４ — ０ ０ ０ ７ — ０ ４
肉毒梭状芽孢杆菌 （ Ｃ ｌ ｏ ｓ ｔ ｒ ｉ ｄ ｉ ｕ ｍ Ｂ ｏ ｔ ｕ ｌ ｉ ｎ ｕ ｍ） 简称 １ ． １ 肉毒杆 菌
肉毒 梭 菌或 肉毒 杆菌 ，是 一种 只 能在 厌 氧 条件 下 生长 的 肉毒梭 菌 属于 厌 氧性 梭状 芽 孢杆 菌 属 ，具 有该 菌 属
细 菌 ，在 日益 普及 的真 空 包装 、冷 冻 食 品及 罐 装 食 品 中 的基本 特 性 ， 即厌 氧性 的杆 状 菌 ，形 成 芽孢 ，芽孢 比繁 具 有 生长 优 势 ，其低 温 生长 所 产 生 的毒 素 是发 生 这 类食 殖体 宽 ，呈梭 状 ，新鲜 培 养基 的培 养 物 革兰 氏染色 为 阳 品 中毒 的主 要 原 因之 一 。 肉毒 杆菌 大量 繁殖 时所 分泌 外 性 ，产 生剧 烈细 菌 外毒 素— — 肉毒 毒 素 。 肉毒 梭茵 为多 毒 素 为 肉毒毒 素 （ ｂ ｏ ｔ ｕ ｌ ｉ ｎ ｕ ｍ ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｎ ｓ ，Ｂ ｏ Ｎ Ｔ ｓ）， 形 态细 菌 ，约 为４ ｕ ｍ Ｘ １ ｍ的大杆 菌 ，两侧 平 行 ，两
５～１ ５ ｍｉ ｎ 可 杀 死 芽孢 。分 解 蛋 白型 的 肉毒 梭 菌 芽孢 比
圈 卞 Ｂ 圈 ０ 觚 Ｔ 才 Ｕ ２ Ｉ ０ １ Ｉ ３ ・ Ｕ １ ４ Ｍ Ｃ （ ） １ Ｕ ｝ Ｎ
C型肉毒梭菌的分离及鉴定
Ｃ型 肉毒梭 菌 的 分离 及 鉴定
吴 伟 ， 刘 志龙 ， 张 晶 ， 薛 正坤 ， 李超 毅 ， 吴 辉 ， 李 莲 瑞 ，
（ １ ． 塔 里 木 大学 动 物科 学 学 院 ， 新 疆 阿拉 尔 ８ ４ ３ ３ ０ ０ ； ２ ． 塔 里 木 畜牧 科 技 兵 团重 点 实验 室 ， 新 疆 阿拉 尔 ８ ４ ３ ３ ０ ０）
摘
要： 【 目的】 肉毒毒素是梭状芽孢杆菌属 肉 毒梭菌在专性厌氧环境中产生 的一系列极强 烈的外毒素 。【 方
法】 通过革兰 氏染色 、 生化鉴定等方法 ， 参照伯杰 氏细菌鉴定手册 ， 鉴定分离 的细菌。【 结 果】 根据 《 常见 细菌
鉴定手册》 …对其进行生化鉴定 ， 最终鉴定其为 Ｃ型 肉毒梭菌。【 结论 】 分离和鉴定 Ｃ型肉毒梭菌 ， 为今后 ｃ
Ｃ ｌ ｏ ｓ ｔ ｒ ｉ ｄ ｉ ｕ ｍ ｂ ｏ ｔ ｕ ｌ ｉ ｎ ｕ ｍ ｆ ｏ ｒ ｆ ｕ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｃ ｔ ｙ ｐ ｅ Ｃ ｌ ｏ ｓ ｔ ｒ ｉ ｄ ｉ ｕ ｍ ｂ ｏ ｔ ｕ ｌ ｉ ｎ ｕ ｍ ｗ ｉ ｌ ｌ ｌ ａ ｙ ｔ ｈ ｅ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｆ ｕ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ．
新疆农 业科 学 ２ ０ １ ３ ， ５ ０ （ ４ ） ： ７ ６ ６— ７ ７ ３ Ｘ ｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ａ ｇ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ６ ０ ４ ８ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ １－ ４ ３ ３ ０ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ４ ． ０ ２ ６
型 肉毒梭菌 的进一步研究奠定基础 。 关键词 ： ｃ型肉毒梭菌 ； 分离 ； 鉴定
肉毒芽孢杆菌的检验
5）小白鼠的饲料与水必须及时添加，充分供应。
6）食物中发现毒素，表明未经充分的加热处理，可能引起肉毒中 毒。
7）检出肉毒梭菌，但未检出肉毒毒素，不能证明此食物会引起肉 毒中毒。
8）肉毒中毒的诊断必须以检出食物中的肉毒毒素为准。
9）中和试验可以为毒素定型。
一 肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌，在 罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能 力，是目前毒性最强的毒素之一。肉毒杆菌是 一种致命病菌，在繁殖过程中分泌毒素，是毒 性最强的蛋白质之一。军队常常将这种毒素用 于生化武器。人们食入和吸收这种毒素后，神 经系统将遭到破坏，出现头晕、呼吸困难和肌 肉乏力等症状。
样品制备
检出 肉毒毒素检测
实验
确证实验
毒力测定
定型试验
样品处理 增菌培养 分离培养
肉毒梭菌检验
1)典型的肉毒中毒，小白鼠会在4——6h内死亡，而且98%—— 99%的小白鼠会在12h内死亡，因此，实验前24h内的观察是非常重 要的。
2)24h后的死亡是可疑的，除非有典型症状出现。
3）如果小白鼠注射经1：2或1：5倍数稀释的样品后死亡，但注射 更高稀释度的样品后未死亡，这也是非常可疑的现象，一般为非特 异性死亡。
二 肉毒棱菌（cl.botulinum）为腐物寄生菌， 广泛分布于土壤和动物粪便中。革兰氏阳 性粗大杆菌。单独或成双排列，有时可见 短链状。有周身鞭毛，无荚膜。芽胞椭圆 形，大于菌体，位于次极端，使菌体似网 球拍状，芽胞抵抗力甚强。严格厌氧，在 普通琼脂培养基上形成直径3～5mm不规 则的菌落，血液琼脂平板上有β溶血。能 消化肉渣，使之变黑，有腐败恶臭。分解 葡萄糖、麦芽糖及果糖，产酸产气。液化 明透过机体各部的粘膜。肉毒毒 素由胃肠道吸收后，经淋巴和 血行扩散，作用于颅脑神经核 和外周神经肌肉接头以及植物 神经末梢，阻碍乙酰胆碱释放 ，影响神经冲动的传递，导致 肌肉的松弛性麻痹。
肉毒杆菌
生物分型
肉毒杆菌菌家族分为A、B、C、D、E、F、G七个 亚型。根据生理学特征，可分为蛋白分解高株和非蛋白分解菌株。前者包括A型及某些B、F型肉毒杆菌；后者包 括B型及部分E、F型肉毒杆菌。
生长繁殖
通常，肉毒杆菌在有氧环境中、低于4°C或pH<4.5条件下不生长。只有在厌氧、低盐、偏酸的特殊条件下， 才可生长繁殖并产生肉毒毒素。其中，具有蛋白分解功能的肉毒杆菌最适产毒培养温度为37°C，不具有蛋白分 解功能的菌株最适产毒培养温度为30°C，甚至在3~4℃的低温条件下也可产生肉毒毒素。
科学家和美容学家正是看中了肉毒杆菌毒素能使肌肉暂时麻痹这一功效。医学界原先将该毒素用于治疗面部 痉挛和其他肌肉运动紊乱症，用它来麻痹肌肉神经，以此达到停止肌肉痉挛的目的。可在治疗过程中，医生们发 现它在消除皱纹方面有着异乎寻常的功能，其效果远远超过其他任何一种化妆品或整容术。因此，利用肉毒杆菌 毒素消除皱纹的整容手术应运而生，并因疗效显著而在很短的时间内就风靡整个美国。
肉毒中毒
婴儿肉毒中毒
食源性肉毒中毒
伤口肉毒中毒
最早出现在18世纪初，因食入被肉毒毒素污染的食物引起。这些食物在制作过程中被肉毒杆菌或其芽孢污染， 制成后又未彻底灭菌，导致肉毒杆菌或芽孢在厌氧环境中发芽繁殖产生毒素。食源性肉毒中毒的临床表现与其他 食物中毒不同，胃肠道症状很少见，不发热，主要为神经末梢麻痹。临床典型症状包括视力模糊、复视、眼睑下 垂等眼麻痹症状，以及张口、伸舌、吞咽困难等肌肉麻痹症状，后期出现膈肌麻痹、肌肉松弛，直至呼吸困难死 亡。潜伏期从2h到10d以上，一般为12~48h。在国外引起中毒的食物以罐头、香肠、海产品和蔬菜为主，国内则 以发酵豆制品、面制品为主。但近年来随着生活水平提高，因香肠、火腿、罐头等动物毒性食品引起的肉毒中毒 在我国也时有发生。
进行肉与肉制品中常见的微生物检验的必要性
进行肉与肉制品中常见的微生物检验的必要性健康禽畜的肉、血液与脏器组织一般是无菌的，但禽畜的长期运输、疲劳、饥饿等，能降低机体的抵抗力，是造成细菌由肠道侵入血液和组织的有利条件；在禽畜屠宰加工过程中会沾染环境中的各种微生物，而且随着加工过程的顺序，愈到最后的工序和最后的肉包装之前，微生物污染愈严重；除屠宰中不同程度的使肉污染微生物外，肉的运输和保藏，也可使肉继续受到污染。
通常，对屠宰中的肉进行检验可检出亿万个微生物，少者也有几万个微生物，在表面上往往也有数万至数千万个微生物。
如果空气不洁净，周围温度又相当高时，微生物在营养丰富的条件下能迅速繁殖，肉面上的微生物可达亿万个。
肉制品也有类似情况。
尽管肉面上存在大量的微生物，但微生物侵入到肉的深部却是很少很慢的。
只有在深部肌肉组织受到破坏时，微生物才能很快侵入。
肉肉食品上的菌群，主要是肠道细菌，肉的需氧性腐败是由肉的表面开始的，逐渐扩散至深部，这时可见到厌氧性腐败。
引起需氧性腐败的细菌，主要是革兰氏阴性菌，如变形杆菌，阴沟杆菌，产气杆菌等。
肉深部可见到的厌氧菌有腐败杆菌，产芽孢梭状杆菌和溶组织杆菌等。
有时需氧和厌氧腐败菌同时并存。
肉的发霉多在空气湿度高时发生，肉面上常见的霉菌有曲霉、毛霉、根霉等。
鲜肉在冷库内储存较久，往往可以使霉菌在肉面上繁殖。
在肉与肉制品上栖息的霉菌，有的能起腐败变质作用，有些霉菌，如黄曲霉菌、杂色曲菌等，能产生毒性物质。
禽畜的肉，除污染较多的非致病微生物外，还可以污染各种不同的致病微生物。
禽畜肉上污染的致病菌，是由于健康禽畜与病畜病禽混宰造成的。
家畜家禽的传染病相当多，有些（如炭疽病、结核病、布氏杆菌病、钩端螺旋体病、口蹄疫等）都是人畜共患的传染病，都能通过肉制品传染给人。
沙门氏菌是自然界分布最广泛的肠道致病菌，而且对人类、家畜家禽、野生禽兽能引起不同的沙门氏菌病，并造成人、畜、禽之间的循环污染。
沙门氏菌作为食品传播疾病的重要致病因子，已引起世界各国越来越多的注意。
(完整版)食品微生物检验技术课程标准
《食品微生物检验技术》课程标准课程名称：食品微生物检验技术课程代码：0803003课程类别：专业课课程性质：必修课课程学分：4 课程学时：64适用专业：食品营养与检验开课学期：第二学期一、课程定位《食品微生物检验技术》为食品营养与检验的专业课，属于职业发展平台中的必修课。
通过学习，学生能够掌握食品微生物检验的基本理论知识、实验操作技术能力，具备食品微生物检测职业素质。
《食品微生物检验技术》是在《分析化学》、《食品生化》等基础上开设的。
为后续的专业课程《食品理化检测技术》、《食品质量管理》、《食品安全控制》、获得食品检验员职业资格证书以及毕业后从事食品检测、食品品质控制等奠定坚实的基础。
二、课程目标食品营养与检验专业开设《食品微生物检验技术》，该课程是我院食品营养与检测专业的必修课程之一，也是核心课程。
安排在第二学期开设，是学生今后从事食品检验工作的必备知识。
本课程总学时数为4×16=64学时，其中理论课时24学时，实验40学时。
通过以基础知识和基本技能、食品微生物形态观察、食品微生物数量及大小测定、食品微生物培养及分离等典型实验项目为载体，进行任务型的学习教学设计。
在微生物实验中结合企业目前的检测规范，培养学生的管理能力。
（一）知识目标1.掌握食品微生物检验技术的基础理论、。
2.掌握食品微生物检验的基本方法3、掌握食品卫生细菌学的检测方法4、掌握食品中病原微生物的检测方法5、掌握发酵食品微生物的检测方法（二）能力目标1．能熟练使用显微镜及维护、2.能进行微生物的制片及形态观察3.能进行微生物的计数4．能测定微生物的大小5.能进行培养基的制备及灭菌6.能培养微生物7.能对微生物纯种分离（三）素质目标1.团队工作、与人沟通能力。
2.注意工作保护能力。
3.提高学生观察、分析和判断问题的能力。
4.严谨的工作作风、实事求是的工作态度。
5.遵守有关法律法规。
6.具有安全知识与职业道德。
三、教学内容四、教学设计项目一：食品微生物检验基本条件学时：14学时教学目标：知识目标：了解食品中的微生物的主要来源、不同微生物对营养的要求，了解食品质量的主要指标、食品检验中细菌总数、大肠菌群数的定义及其检验意义、微生物检验室和无菌室的基本要求，认识和熟悉微生物检验中常用的仪器设备机器结构与性能认识和熟悉微生物检验中常用的常用玻璃器皿了解染色的基本原理，掌握常用染料的性质，了解培养基的种类及一些常用的培养基的用途。
食品中肉毒梭菌的PCR检测方法
食品中肉毒梭菌的ＰＣＲ检测方法科标检测1、范围本标准适用于食品中Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ型肉毒梭菌的检测。
青岛科标检测研究院通过了山东省质量技术监督局（CMA）和中国合格评定国家认可委员会（CNAS）认证认可，是权威的第三方检测机构。
旗下科标生物实验室在微生物检测领域拥有丰富的经验，可以针对食品、医药、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析，为客户提供快速、高效、权威的第三方微生物检测服务，保证产品质量安全，专业得到了国内、国际知名企业的广泛认可。
可以按照各种标准提供微生物检测服务。
2、规范性引用文件ＧＢ／Ｔ４７８９．１２食品卫生微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验ＧＢ／Ｔ６６８２分析试验室用水规格和实验方法ＧＢ１９４８９实验室生物安全通用要求ＧＢ／Ｔ２７４０３实验室质量控制规范食品分子生物学检测ＳＮ／Ｔ１１９３基因检验实验室技术要求3、术语、定义和略缩语3.1肉毒梭菌肉毒梭菌为梭菌科梭菌属革兰氏阳性芽孢杆菌，厌氧，在适宜的培养基及特定的环境条件下产生一类具有很强毒性的神经麻痹毒素，即肉毒毒素。
3.2聚合酶链式反应模板ＤＮＡ先经高温变性成为单链，在ＤＮＡ聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板ＤＮＡ两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合，接着在ＤＮＡ聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸（ｄＮＴＰ）为底物，使退火引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使位于两段已知序列之间的ＤＮＡ片段呈几何倍数扩增。
3.3缩略语Bp 碱基对DNA 脱氧核糖核酸dNTP 脱氧核苷三磷酸dATP 脱氧腺苷三磷酸dCTP 脱氧胞苷三磷酸dGTP 脱氧鸟苷三磷酸dTTP 脱氧胸苷三磷酸Taq 水生栖热菌Tris 三（羟甲基）氨基甲烷EDTA 乙二胺四乙酸4、生物安全措施为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测肉毒梭菌，所有培养物和废弃物应小心处置，并按照ＧＢ１９４８９和ＧＢ／Ｔ２７４０３中的有关规定执行。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
样品制备 检出 肉毒毒素检测 实验 确证实验 毒力测定 定型试验
样品处理 增菌培养 分离培养
Байду номын сангаас
肉毒梭菌检验
1)典型的肉毒中毒，小白鼠会在4——6h内死亡，而且98%—— 99%的小白鼠会在12h内死亡，因此，实验前24h内的观察是非常重 要的。 2)24h后的死亡是可疑的，除非有典型症状出现。 3）如果小白鼠注射经1：2或1：5倍数稀释的样品后死亡，但注射 更高稀释度的样品后未死亡，这也是非常可疑的现象，一般为非特 异性死亡。 4）小白鼠要用不会抹去的染料加以标记。 5）小白鼠的饲料与水必须及时添加，充分供应。 6）食物中发现毒素，表明未经充分的加热处理，可能引起肉毒中 毒。 7）检出肉毒梭菌，但未检出肉毒毒素，不能证明此食物会引起肉 毒中毒。
观察生长性状、染色镜检 报告（二） 分离培养
增菌产毒培养30度5天
观察菌落性状，染色镜检
毒素检测
培养检查
报告（三）
培养基和试剂：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、 明教磷酸盐缓冲液、肉毒分型抗 毒诊断血清、胰酶、革兰氏染色 液等。 设备和器材：离心机及离心管、研波及细砂、培 养箱、显微镜、厌氧培养装置、1ml 和10ml吸管、1ml注射器、平皿、接 种环、载玻片、小白鼠等。
三 肉毒毒素是一种神经毒素，能 透过机体各部的粘膜。肉毒毒 素由胃肠道吸收后，经淋巴和 血行扩散，作用于颅脑神经核 和外周神经肌肉接头以及植物 神经末梢，阻碍乙酰胆碱释放 ，影响神经冲动的传递，导致 肌肉的松弛性麻痹。
的
显微 镜下
肉毒 杆菌
样品（食品）
消毒检测 报告（一） 毒素检测
增菌、产毒培养30度5天
二 肉毒棱菌（cl.botulinum）为腐物寄生菌， 广泛分布于土壤和动物粪便中。革兰氏阳 性粗大杆菌。单独或成双排列，有时可见 短链状。有周身鞭毛，无荚膜。芽胞椭圆 形，大于菌体，位于次极端，使菌体似网 球拍状，芽胞抵抗力甚强。严格厌氧，在 普通琼脂培养基上形成直径3～5mm不规 则的菌落，血液琼脂平板上有β溶血。能 消化肉渣，使之变黑，有腐败恶臭。分解 葡萄糖、麦芽糖及果糖，产酸产气。液化 明胶，产生hzs，不形成吲哚。
一 肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌，在 罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能 力，是目前毒性最强的毒素之一。肉毒杆菌是 一种致命病菌，在繁殖过程中分泌毒素，是毒 性最强的蛋白质之一。军队常常将这种毒素用 于生化武器。人们食入和吸收这种毒素后，神 经系统将遭到破坏，出现头晕、呼吸困难和肌 肉乏力等症状。
8）肉毒中毒的诊断必须以检出食物中的肉毒毒素为准。
9）中和试验可以为毒素定型。