HPLC-NMR在线联用系统及其应用
中药指纹图谱的原理与应用
气相色谱(GC)以气体为流动相，对于含挥发性 成分中药的鉴别具有一定优势。由于裂解气相 色谱具有操作简便、样品无须化学前处理、提 供信息量大等优点而格外引人注目。该方法将 样品故人裂解器内，在一定的条件下将样品加 热使其瞬间裂解，生成可挥发性的小分子物质， 立即被载气带人气相色谱系统的分析柱上，分 离后得到具有指纹性质的裂解气相色谱图。如 果将气相色谱与质谱、傅立叶变换红外光谱联 用，则不但可以知道不同中药中挥发性成分的 差别，而且可以对这些成分进行鉴定。
高速逆流色谱指纹图谱(HSCCC fingerprintspectrum， 即调整逆流色谱法) HSCCC利用动态液-液分配原理分 离样品，其分离度和重现性与HPLC类似，但样品前处 理简单。具体地说它是一种基于液-液多级逆流萃取建 立的色谱体系，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作分离柱，
在行星式运动中连续地完成整个分配、传递、分离过
中药指纹图谱，即中药身份证，主要指中 药化学指纹图谱，实际上是一种保证中药质量 的措施，是指对某种中药材或中成药等运用现 代分离分析科学的手段，得到能够标示该中药 的色谱或光谱的图谱，最终用来对中药质量评 价的科学性方式。它有两个显著特点，一是通 过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪 或产地。二是通过指纹图谱主要特征峰的面积 或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保 产品质量的相对一致。
对这种中药材的分子遗传标记的研究，找到具有该种高度特异性
的片段，便可以此为基础，制备出对该种高度特异性的寡核苷酸 探针，再经分子杂交进行指纹分析，即可达到鉴别目的。DNA指 纹图具有高度的个体特异性。DNA指纹图谱技术包括AP-PCR(arb itrary primer PCR，任意引物聚合酶链式反应)和RAPD(随机扩增 多态性DNA，randomly amplified polymorphic DNA)两种指纹图谱 技术。RFLP (限制性[内切酶]片段长度多态性，restriction fragment length polymorphism)是最常用的构建DNA指纹图的方法，但该法 费时费力，使应用受到限制。随机扩增多态DNA(RAPD)标记，可 以在特异DNA序列尚不清楚的情况下，检测DNA的多态性，这是
现代分析方法和技术在药物分析中的应用
现代分析方法和技术在药物分析中的应用摘要：在目前阶段，现代分析技术变得更加科学化、高效化，其在药物分析中的作用也越来越大，可以更好地帮助药物分析过程更加高效、实时以及快捷。
药品的鉴别和检测是关系到国家医药卫生事业发展和药品使用安全性的一个关键问题。
伴随着现代分析技术的持续发展，它不仅为医药分析技术的迅速发展奠定了基础，而且在药物的临床研究和中药成分的分析方面也发挥了很大的作用。
关键词：分析技术；药物分析；应用1色谱技术在药物分析中的研究与应用1.1高效液相色谱法（HPLC）在药物的研究中，HPLC是最为常用的一种，它的功能是对药物进行检测和分离。
主要内容包括：原辅料、药材、不同类型的制剂、中成药等。
其分析流程是：高压输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将被测样品导入，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中，被测样品分子与固定相分子之间相互作用，发生吸附、解吸附等过程，使得不同的物质在色谱柱中的移动速度不同，从而得到分离，并依次随流动相流至检测器，转化为可供检测的信号，送至工作站记录、处理和保存，完成定性定量分析。
在对现有药品进行检验时，采用《国家药典》规定的常规检验方法；在新药开发过程中，需要通过改变各种色谱条件，摸索分析方法，以获得最佳的分离效果。
1.2超高效液相色谱法（UPLC）UPLC是在HPLC的基础上开发出来的一种用于对热不稳定性、极性和大分子物质进行分离和分析的新方法。
超高效液相色谱柱的特征在于降低了柱子填充粒子的尺寸，并基于柱子的高效性，实现了高精度的高分离性和快速的分析。
特别是在对注射剂中的酸醛和醛进行分析和测量的时候，只需要一次进样，就能对两个数据进行分析。
并能确保在分析过程中，各成分都能有较好的分析效果，其特征是：分离度高，敏感性高，分析时间短，重复性好。
1.3气相色谱法（GC）GC和HPLC在于多方面有相似之处。
工作原理是：试样气体由载气携带进入色谱柱，与填料之间发生相互作用，这种相互作用大小的差异使各组分互相分离而按先后次序从色谱柱流出，转变为电信号，进行鉴定和测量。
核磁共振的原理及其应用发展
核磁共振的原理及其应用发展摘要:核磁共振是能够深入到物质内部而不破坏被测量对象的一种分析物质构造的现代技术，它通过利用原子核在磁场中的能量变化来获得关于原子核的信息，具有迅速、准确、分辨率高等优点，因而在科研和生产中获得了广泛的应用。
本文主要介绍了核磁共振技术的基本原理，以及核磁共振在化学化工、生物化学、医药等方面的应用，并指出核磁共振波谱技术将成为21世纪一个异常广阔的谱学研究领域.关键词：核磁共振：NMR谱仪引言核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance, NMR)波谱学是一门发展非常迅速的科学。
核磁共振是根据有磁的原子核，在磁场的作用下会引起能级分裂，若有相应的射频磁场作用时，在核能级之间将引起共振跃迁，从而得到化学结构信息的一门新技术。
最早于1946年由哈佛大学的伯塞尔(E. M. Purcell)和斯坦福大学的布洛赫(F. Bloch)等人用实验所证实川。
两人111此共同分享了1952年诺贝尔物理学奖⑵。
核磁共振技术可以提供分子的化学结构和分子动力学的信息，已成为分子结构解析以及物质理化性质表征的常规技术手段⑶，在物理、化学、生物、医药、食品等领域得到广泛应用，在化学中更是常规分析不可少的手段。
从70年代开始，在磁共振频谱学和讣算机断层技术等基础上，乂发展起一项崭新的医学诊断技术，即核磁共振成像技术，并在医学临床上获得巨大成功。
本文主要介绍了核磁共振技术及其在化学领域的应用进展。
1•核磁共振原理泡利(W.Pauli)在1924年首先提出原子核具有磁矩，并认为核磁矩与其本身的自旋运动相联系，用此理论成功地解释了原子光谱的超精细结构国。
核磁矩卩与核自旋角动量L之间的关系为：e 厂⑴式中是质子质量，e为单位电荷，g称为朗德因子(Landefactor),对于不同的核它有不同的值，它反映核内部自旋和磁矩的实验关系。
实验工作中，常常用磁旋LL(Magnetogyric-ratio)y这个物理量表示核磁矩与核自旋的关系，其定义为：A = Y L（2）Y随核的结构不同而不同，对于氢核，即质子，核磁矩比电子的自旋磁矩小得多，一般要小三个数量级。
现代仪器分析技术在中药领域中的应用
现代仪器分析技术在中药领域中的应用一、本文概述随着科学技术的不断进步，现代仪器分析技术在各个领域的应用日益广泛。
特别是在中药领域，这些技术的应用为中药的研发、质量控制以及药效评价提供了强有力的支持。
本文旨在全面综述现代仪器分析技术在中药领域中的应用，包括其在中药成分分析、质量控制、药效评价以及新药研发等方面的具体应用，以期对中药现代化和国际化进程中的关键问题提供科学解决方案。
通过深入探讨现代仪器分析技术在中药领域的应用现状和发展趋势，本文旨在为中药行业的研究人员、技术人员和管理人员提供有益的参考和启示，推动中药行业的科技进步和产业升级。
二、现代仪器分析技术概述现代仪器分析技术，涵盖了从微观到宏观、从静态到动态、从无机到有机的广泛领域，其深度和广度不断扩展，为中药领域的研究提供了强有力的技术支持。
这些技术不仅能够提供中药的化学组成、结构、形态、性能等多方面的信息，而且能够揭示中药作用机理、药效物质基础、质量控制与评价等关键问题。
现代仪器分析技术主要包括光谱分析、色谱分析、波谱分析、质谱分析、热分析、电化学分析、显微分析、联用技术等。
其中，光谱分析如紫外-可见光谱、红外光谱、拉曼光谱、核磁共振等能够提供化合物的结构信息；色谱分析如高效液相色谱、气相色谱等则常用于中药成分的分离与鉴定；质谱分析如质谱联用技术可以直接测定化合物的分子量及分子结构；联用技术如色谱-质谱联用、色谱-光谱联用等则能够同时提供化合物的多种信息，大大提高了分析的准确性和效率。
现代仪器分析技术还具有高度的自动化、智能化和精准化特点。
随着计算机技术的快速发展，许多现代仪器分析设备已经实现了自动化控制和数据处理，大大提高了分析的效率和准确性。
现代仪器分析技术还能够与其他技术如分子生物学技术、计算机模拟技术等相结合，为中药领域的研究提供更加全面和深入的信息。
在中药领域，现代仪器分析技术的应用不仅有助于揭示中药的化学成分和药理作用，还能够为中药的质量控制、新药研发、药物作用机理研究等提供有力的技术支持。
最全色谱联用技术汇总
最全色谱联用技术汇总人类进入21世纪,科学技术高度发展,先进的分析仪器不断涌现,每一类分析仪器在一定范围内起独特作用,并且要求在一定的条件下使用。
如色谱作为一种分析方法,其最大特点在于能将一个复杂的混合物分离为各自单一组分,但它的定性、确定结构的能力较差,而质谱(MS)、红外光谱(IR)、紫外光谱(UV)、等离子体发射光谱(ICP—AES)和核磁共振波谱(NMR) 等技术对一个纯组分的结构确定变得较容易。
因此,只有将色谱、固相(微)萃取、膜分离等分离技术与质谱等鉴定、检测仪器联用才能得到一个完整的分析,取得丰富的信息与准确的结果。
分析仪器联用技术已在全行业样品分析中得到应用,并有广阔的发展前景。
随着新物质不断出现,以及科技的进步,对分析工具的技术要求更高,仪器联用将发挥重要的作用。
1色谱—色谱联用技术样品组分较简单时,通常用一根色谱柱,一种分离模式即可以得到很好的分离,但对于某些较复杂的组分,无论如何优化色谱条件、参数也无法使其中一些组分得到较好的分离,这时可采用色谱—色谱联用技术。
色谱—色谱联用技术也称为多维色谱。
气相色谱—气相色谱(GC—GC)联用该联用技术已有30多年的历史,在工业分析中得到广泛的应用,GC—GC联用仪已商品化。
如采用SE-52毛细管柱分析柠檬油时,采用二级GC联用能将化合物的对映异构体得到很好分离。
液相色谱—液相色谱(LC—LC)联用Hube于20世纪70年代提出LC—LC联用,技术的关键是柱切换,通过改变色谱柱与色谱柱、进样器与色谱柱、色谱柱与检测器之间的连接,以改变流动相的流向,实现样品的分离、净化、富集、制备和检测。
液相色谱有多种分离模式,可以灵活选用分离模式的组合,其选择性调节能力远大于GC—GC联用技术,具有更强的分离能力。
该接口技术比GC—GC联用的要复杂得多,至今市场上尚未见商品化的LC—LC 联用系统,分析工作者多是自行组装LC—LC系统,适用于特定组分的分离和分析。
高效液相色谱-核磁共振联用技术及其应用
高效液相色谱-核磁共振联用技术及其应用
高效液相色谱-核磁共振联用技术是一种将高效液相色谱（HPLC）与核磁共振（NMR）联用的技术，它能够同时进行未知混合物的分离和结构鉴定。
在HPLC-NMR联用技术中，核磁共振通常作为在线检测器使用，可以实时监测色谱分离过程中的组分浓度变化，提供组分的分子量、分子结构等信息。
高效液相色谱则可以提供色谱图，将混合物中的各个组分按顺序分离出来，然后通过核磁共振技术对每个组分进行详细的化学成分分析。
高效液相色谱-核磁共振联用技术的应用范围广泛，包括但不限于化学、生物、医药等领域。
例如，在化学领域中，可以利用该技术对未知有机化合物进行定性和定量分析；在生物领域中，可以用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离和鉴定；在医药领域中，可以用于药物代谢、药物动力学等研究。
此外，高效液相色谱-核磁共振联用技术还可以用于混合物中已知成分的定量分析，例如对中药材中的生物碱、黄酮等成分进行定量分析。
同时，该技术也可以用于新化合物的结构鉴定和代谢产物分析等。
总之，高效液相色谱-核磁共振联用技术是一种非常强大的分析工具，能够提供丰富的化学信息和物理信息，对于研究未知混合物的组成和性质具有重要意义。
HPLC指纹图谱在中药制剂质量研究中的应用
HPLC指纹图谱在中药制剂质量研究中的应用叶婷;粱文仪;梁林金;李师;吴玲芳;亓旗;崔雅萍;陈文静;张兰珍【摘要】High performance liquid chromatography (HPLC) fingerprint technology is an important means of quality control of traditional Chinese medicine (TCM) preparations,which can reflect the whole process of raw materials as well as the whole process and quality of finished products.It has become the primary quality control method of modern TCM preparations.In this paper,recent advances in HPLC fingerprints and their combination techniques in the quality control of TCM preparations were reviewed,which provided the basis for quality control of TCM preparations.%高效液相色谱指纹图谱技术是中药制剂质量控制的重要手段,可较全面地反映原料药材、制剂工艺全过程及成品的质量,已成为现代中药制剂质控的重要方法.本文主要对近几年HPLC指纹图谱及其联用技术在中药制剂质量控制过程中的研究进展进行综述,为中药制剂后期质量控制研究提供依据.【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》【年(卷),期】2017(019)011【总页数】7页(P1794-1800)【关键词】高效液相色谱;指纹图谱;中药制剂;质量控制【作者】叶婷;粱文仪;梁林金;李师;吴玲芳;亓旗;崔雅萍;陈文静;张兰珍【作者单位】北京中医药大学中药学院北京 100102;北京中医药大学中药学院北京 100102;北京中医药大学中药学院北京 100102;北京中医药大学中药学院北京100102;北京中医药大学中药学院北京 100102;北京中医药大学中药学院北京100102;北京中医药大学中药学院北京 100102;北京中医药大学中药学院北京100102;北京中医药大学中药学院北京 100102【正文语种】中文【中图分类】R284中药制剂是以中药材为原料制成的适用于应用的剂型，因中药药性温和、毒副作用小、不良反应轻，逐渐被视为较安全的预防和治疗疾病的药物。
高速逆流色谱溶剂体系筛选及其联用技术
02 03
拓展高速逆流色谱与其他技术的联用范围
将高速逆流色谱与更多的分析技术联用，如红外光谱、拉 曼光谱等，以实现对复杂样品中目标化合物的更全面、更 准确的分析和鉴定。
拓展应用领域
将所建立的方法应用于更多领域的实际样品中，如环境污 染物、生物大分子等，以拓展其应用范围和应用价值。同 时，积极探索高速逆流色谱技术在其他领域中的潜在应用 前景。
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研究高速逆流色谱溶剂体系筛选及其联 用技术，对于提高天然产物、药物等复 杂体系的分离纯化效率具有重要意义。
溶剂体系筛选是HSCCC技术中的关键 环节，直接影响分离效果和分离纯度。
国内外研究现状及发展趋势
01
国内外学者在HSCCC溶剂体系 筛选方面进行了大量研究，涉 及不同类型的溶剂体系和实验 条件。
时监测和分离纯化。
案例分析：成功应用实例分享
中药活性成分分离纯化
利用HSCCC-MS联用技术，成功从中药复杂体系中分离出多种活性ห้องสมุดไป่ตู้分，并进行结构鉴定和定量 分析。
天然产物化学成分研究
利用HSCCC-NMR联用技术，对天然产物中的化学成分进行在线结构解析和定量分析，为天然产 物的开发利用提供有力支持。
分离等。
实验结果可靠性
对实验结果的重复性、稳定 性和准确性进行评估，确保 实验结果的可靠性。
存在问题及改进方向
实验操作问题
反思实验过程中可能存在的操作不规范、误差较大等问题， 提出改进措施，提高实验操作的准确性和可重复性。
溶剂体系选择局限性
讨论当前溶剂体系选择的局限性，探索更多可能的溶剂组 合，以扩大高速逆流色谱的应用范围。
02 高速逆流色谱技术基础
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通常与HPLC联用的技术
常用的分析手段： HPLC-RI: 通用型检测器，灵敏度差，不适合梯度洗脱 HPLC-ELSD：通用型检测器，灵敏度差，不能提供结构信息 HPLC-UV ： ①对不具有发色基团的有机化合物响应差 ②提供的化学结构信息远不够丰富 HPLC-MS ： ① 由于离子化问题,对部分化学成分的响应差,不能分析所有结构类型的化合物; ②对色谱流动相的组成有限制,不宜使用非挥发性缓冲盐; ③所提供的化学结构信息尚不足以彻底解决化合物的鉴定问题,尤其对阐明基 团连接位置和立体构型等缺乏证据。 HPLC-NMR
HPLC-NMR
NMR的优势： 高度的通用性 不破坏样品 最强大的结构解析能力 LC与NMR 直接联用的设想始于70 年代， 90 年代后期逐渐发展成熟。
离线接口和连续流动接口
Flow cell: U-shaped, 2-4mm i.d.,30-200ul
灵敏度
提高灵敏度的方法： 1. 2. 3. 利用SPE等方法浓缩样品 提高磁场强度 （９００MHz NMR已经商品化） 降低探头温度 （商品化的低温探头）
溶剂抑制技术
由于常用的MeOH-H2O和MeCN-H2O体系在 NMR中有很强的响应值，可能掩盖分析对 象，因此必须采取一些方法来抑制溶剂干 扰。 1. 采用氘代溶剂
价格昂贵－－适合于µHPLC
2. 3.
通过不同频率通道进行多重溶剂峰预饱和 脉冲梯度场的相位离散而消除溶剂干扰
常见HPLC-NMR的示意图
LC-NMR 的基本操作模式
连续流动模式(on-flow)
优点：一次分析可得到所有组分的 NMR 信息 缺点：所获得的NMR 图谱质量较差
停流模式(stop-flow)
优点：NMR谱图质量较好 缺点：存在明显的峰展宽，而且分析时 间较长 色谱峰被收集并暂时贮存到不同的毛 细管回路内,由NMR 谱仪逐一测定各 流分。
峰存贮模式(peak
parking or loop-collection)
停流模式流程
固定时间间隔 峰强度，保留时间 色谱峰切割 流动探头
优化后NMR参数 目标峰
NMR system
NMR试验： A 完成计算机匀场 B 优化溶剂峰抑制 C 调节接收增益 D 采一维谱 E 按信噪比阀值终止采样 F 如果需要，进一步采样(二维)
峰存贮模式
应用领域
药物杂质鉴定 环境样品 聚合物产物
药物体内外代谢产物的结构鉴定
组合化学合成产物分析
天然产物研究
维生素E异构体分离图
RP-HPLC-1H-NMR on-flow method
Journal of Chromatography B, 748 (2000) 233–258
组合肽库的分离检测
600 MHz H NMR . The labels at the right hand side denote the classes of tripeptide, A2M refers to the three compounds: A–A–M–NH2 , A–M–A–NH2 , M–A–A–NH2. 丙胺酸(A) 蛋氨酸(M) 酪氨酸(Y)
Mag. Reson. Chem. 33 (1995) 857.
Analysis of an unstable derivative
Phytochem. Anal. 14 (2003) 73
HPLC-UV-NMR-MS平台
Analysis of Hypericum perforatum L. with HPLC-NMR-MS
利用这种联用装置，Hansen等人鉴定出了该萃取物中的所有已报道的化合物，而 且得到了两种新的化合物。 Anal. Chem.1999, 71,5235-5241
RP-HPLC combined with on-line DAD, FT-IR and 1H-NMR and TOF-MS: Application to a mixture of nonsteroidal anti-inflammatory drugs
Flurbiprofen
Ibuprofen
Indomethacin
Naproxen
Anal. Chem.2000, 72,3922-3926
HPLC-NMR在线联用系统在复杂体系分离检
测中表现出了强大的生命力，以后必然能
够得到更广泛的应用。
The end
Thanks!