第二章微生物的培养
第二章微生物纯培养
毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微 生物。
显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢 子以获得纯培养。
小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在
显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的
分离。
第二章微生物纯培养
五、选择培养
为了从混杂的微生物群体中分离出某种 微生物，可以根据该微生物的特点，包括营 养、生理、生长条件等，采用选择培养的方 法进行分离。
1、涂布平板法（Spread Plate method）
步骤： 制板 稀释 加菌液 涂布 特点：简单易行，但易造成机械损伤
培养 挑菌落
第二章微生物纯培养
2、稀释倒平板法
步骤： 稀释 加菌液 浇培养基 培养
挑菌落
第二章微生物纯培养
1.取样
25g或25ml 检样
稀释样品的取样和倾注平皿
1mL
1mL
第二章微生物纯培养
2、富集培养
主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同， 制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物 旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，更 容易从混杂的群体中分离到特定的微生物。
富集条件可从多方面选择，如温度、pH、紫外 线、高压、光照、氧气、营养等等。
例如：分离产芽孢细菌，可以对样品进行高温处 理，然后再进行培养。
第二章微生物纯培养
第二章微生物纯培养
六、微生物的保藏技术
基本要求：
保证菌种经过较长时间后仍保持生活能力，防止被 杂菌污染，形态特征和生理形状尽可能不发生变异。
用于长期保藏的原始菌种称为
保藏菌种或原种（stoch culture）。
第二章微生物纯培养
第2章 微生物的纯培养和显微技术
荧光显微镜
荧光：荧光素吸收紫外线会转放出可 见光，这就是荧光 荧光显微技术：把标本用不同的荧光 素作标记，在荧光显微镜下，经 过紫外线照射，标本会在黑暗背 景下表现出有光亮的物体。使标 本更便于观察。
透射电子显微镜
用电子波代替光源，最短波长的可见光 λ=450nm；而电磁波的波长最短可以达到 λ=0.005nm。所以，电镜的分辨率远高于光 学显微镜。
通冰箱冷冻室保存。
干燥保藏——砂土管保存法和冷冻真空干燥
保藏法
纸片保藏法、薄脉保藏法、寄主保藏法等
第二节 显微镜和显微技术
决定显微观察效果的两个重要因素：
分辨率：指能辨别两点之间最小距离的 能力 反差：指样品区别于背景的程度
一、显微镜的种类及原理
普通光学显微镜
光学显微镜的分辨率(最小分辨距)：
D=0.5λ/n sinθ
式中λ为光源波长； n为玻片到物镜介质的
折射率； θ为物镜镜口角的半数，它取决于物镜 的直径和工作距离。 n sniθ叫作数值孔径。不 同介质的折射率：空气为n=1.0 ；水n=1.33；香 柏油n=1.55。因此，油镜的分辨率高。
暗视野显微镜
暗视野显微镜利用特殊聚光器实现 给样品斜射照明，由样品反射或折射的
非细胞型微生物：病毒、类病毒、朊病毒
一、细菌和古生菌
•细菌的形态和排列
形态：球状—球菌，杆状—杆菌，螺旋状——螺菌和 弧菌。 排列：单个、成对、链状、成簇 特殊形态的细菌 如柄细菌有柄、菌丝、附器等 球衣菌有衣鞘 支原体无细胞壁，只有细胞膜，故柔软形态多变 有些细菌不同生长阶段具有不同形态：如放线菌 形成营养菌丝、气生菌丝和孢子丝。 细菌的形态也受环境条件的影响，培养时间、培 养温度等均能引起形态的改变。
第二章_培养基灭菌1
不同种的微生物的热死 灭反应的△E各不相同， 对于某种微生物，在一 定的T下作灭菌实验， 求得相应的K值 ，按lnK——1/T作图， 从直线的斜率可求出△E。
微生物的热死灭动力学
（2）K、△E、T三者之间的关系
K=f(△E、T) K A e 一定温度下，对特定的菌体来说△E是定值，那么 在热灭菌过程中能控制的因素是什么： 温度 T 那么温度高一些灭菌好呢？还是温度低一些好 呢？ （这是要讨论解决的问题） 从式子ln K = - △E /RT + ln A来看，T升高，K增大 灭菌的目的：有效杀灭杂菌，同时尽可能降低对营养 的破坏程度。 对培养基进行灭菌，培养基中营养物质和微生物的△E 不同。 K增大的幅度还取决于△E 。
例：
嗜热脂肪芽胞杆菌孢子 和 维 生 素 B1 的 热 处 理 数 据 （一定 T 下， ln(N/N0 ) = - K t ），就不同的 T，求 得前者的比热死亡速率常数 KBS 和后者的比破坏速率常 数 KVB， 按 lnK——1/T 标 会 ， 得图，由图算出： • △EBS=67000×4.184 J/mol • △EVB=22000×4.184 J/mol • ln K = - △E /RT + ln A
微生物的热死灭动力学
K除了决定于菌体的种类或存在的方式以外，更 重要的是温度 T 对 K 的影响，这是热灭菌工程设计 中的核心问题。（在什么温度下灭菌好？） K随着温度的变化而变化。研究结果表明，温度 和菌种与K的关系可用阿伦尼乌斯方程来表示：
K A e
E / RT
式中 A：频率因子，min-1 △E：菌体死灭反应活化能，J/mol R：气体常数 8.28J/mol· K T：绝对温度
进行培养基灭菌的操作方式 • 分批（间歇）灭菌 • 连续灭菌
沈萍微生物学第二章
放线菌形态
放线菌生活史
放线菌孢子丝
2、古细菌
3. 原核生物的细胞大：纳米（nm10－9m） 细胞大小的形象比较
大肠杆菌：0.5×2um 芝麻：3mm
常见细菌的大小
球菌：直径 0.5×2um 杆菌：宽×长 0.5～1×1～5um 螺形菌：宽×长 0.5～1×1～50um
六，微生物的保藏技术 1.保藏的目的 2.保藏的原理 3.保藏的方法 传代培养 4℃ 冷冻保藏 -196℃， - 70℃ ， -20~-30℃ 干燥保藏 沙土管，安瓿管 其他方法
第三节
显微镜下的微生物
一， 细菌
细菌的定义： 以二分裂为主要繁殖方式的单细胞原核 微 生物。 1.细菌的形态和排列 三种基本形态：
杆菌
杆菌的基本形态
短杆状、长杆状、棒杆状、梭状杆状、月亮状、竹节状 等；按杆菌细胞繁殖后的排列方式则有链状、栅状、 “八”字状等
杆菌细胞的排列方式
链杆、栅状、八字状、鞘衣包裹的丝状等
短杆菌
长杆菌
梭状芽孢杆菌
Scanning electron micrographs illustrating external features of the rodshaped bacterium E. coli.
球状
一个分裂面 二个分裂面 三个分裂面 无定向分裂面
单杆，链杆，栅状 ，八字 弧菌，螺旋菌
杆状， 螺旋状
单球菌
细胞分裂沿一个平面进行， 新个体分散而单独存在. 如尿素微球菌
显微镜下示意图
双球菌
细胞沿一个平面分裂， 新个体成对排列. 如肺炎双球菌
四联球菌
细胞分裂是沿两个相垂直的平 面进行，分裂后每四个细胞特 征性地连在一起，呈田字形. 如四联微球菌
第二章--微生物的纯培养和显微技术
第二节 显微镜和显微技术
一、显微镜的种类及其原理 二、显微观察样品的制备 三、显微镜下的微生物
几个基本概念：
一、显微镜的种类及原理
1.普通光学显微镜（复式显微镜）
机械装置: 镜座、支架、载物台、调焦螺旋等 光学系统: 物镜、目镜、聚光镜等
使用油镜时加镜油的目的: (1)增加照明亮度 (2)增加显微镜的分辨率
细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线 照射后可激发荧光；另有一些物质本身虽 不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗 体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧 光显微镜就是对这类物质进行定性和定量 研究的工具之一
105
荧 光 显 微 镜 观 察
5、 透射电子显微镜（transmission electron microscope, TEM)
原理：用一束电子作为它的能源，电子的波长很短，能够 检测极细微的物体，如病毒和分子。
应用：通过细胞超薄切片，观察细胞内部的详细结构如细 胞膜、细胞核等。（可放大几万倍）
6、 扫描电子显微镜（scanning electron microscope, SEM)
原理：类似于电视或电传真照片。即利用电子“探针”，在 样品表面进行“扫描”，激发样品表面放出二次电子，二次电子由 探测器收集，并转变为光信号。
光学显微镜
光学理论依据
德国理学家Ernst Abbe，在19世纪70年代建立的 在Abbe的公式中，两物体之间的最小可分辨距 离被称为最小距离（d）
最小距离=0.5/nsin= 0.5/NA
分辨率（R) ∝ 1/d
分辨率(最小可分辨距离)=0.5λ∕ n sinθ = λ∕2NA
波长与分辨率
高压蒸汽灭菌锅
2、接种操作
接种工具： 白金or镍铬合金接种针/环
第二章微生物育种的原理和方法
第二章 微生物育种的原理和方法微生物育种原理和方法微生物育种筛选方法微生物育种原理和方法一、微生物育种原理方法：突变、体内重组体外重组（基因工程）1、从自然界中获得新菌种微生物资源分布：土壤、水、空气、动植物及其腐败残骸都是微生物的主要栖居和生长繁殖场所2、分离微生物新种的步骤 采样、增殖、纯化和性能测定等步骤3、典型的微生物采样和筛选方法生物进化过程中微生物形成完善的代谢调节机制不会有代谢产物的积累解除或突破微生物的代谢调节控制目的产物积累微生物育种的目的直接从自然界分离得到的菌株为野生型菌株。
往往低产甚至不产所需的产物，只有经过进一步的人工改造才能真正用于工业生产二、诱变育种方法1、物理诱变：紫外线2、化学诱变：5-溴尿密啶1）紫外线诱变机理：造成DNA链的断裂，或使DNA分子内或分子之间发生交联反应2）诱变过程中需要注意光复活作用：微生物等生物的细胞内存在光复活酶，光复活酶识别胸腺嘧啶二聚体，并与之结合形成复合物（此时的光复活酶没有活性），可见光光能（300-500nm）激活光复活打开二聚体，将DNA复原。
暗修复：细胞内还存在另一种修复体系，它不需要光激活，可修复由紫外线、γ射线和烷化剂等对DNA造成的损伤。
暗修复体系有四种酶参与反应。
紫外诱变的特点：方便、诱变效果很好的常用诱变剂由此说明紫外线照射引起微生物突体形成是一个复杂的生物学过程。
紫外线引起DNA结构的改变仅仅使微生物，于亚稳定状态，点亚稳定到稳定的突变体的形成需要“定时间和过程，所以在实际诱变工作中要采取某些措施避免以上的修复作用，要注意避光或加入某些物质，提高突变的频率。
因此，用紫外线进行诱变时，照射或分离均应在红光下进行。
3）化学诱变剂诱变机理：5-溴尿嘧啶诱变——碱基类似物机理：与碱基的结构类似，在DNA复制时，它们可以被错误地掺入DNA，引起诱变效应注意的参数：参数：浓度、时间、缓冲液三、诱变育种的基本过程诱变育种的基本过程如下：1）出发菌株的选择A、一是考虑出发菌株是否具有特定生产性状的能力或潜力，即菌株是否具有产生特定代谢产物的催化酶系的基因。
2018-2019学年人教版高中生物选修一 第二章 微生物的培养与应用 单元测试有解析
第二章微生物的培养与应用一、单选题1.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是（）A.细菌形态B.菌落C.细菌大小D.细菌结构2.下列关于分离技术或方法的叙述，错误的是（）A. 将细胞匀浆放入离心管中进行差速离心可分离各种细胞器B. 用含有刚果红的培养基可分离出能分解尿素的微生物C. 利用DNA和其它杂质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同的特性分离出DNAD. 使用凝胶色谱法可以分离不同相对分子质量的蛋白质3.为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）．下列关于培养基甲和乙是否能用于分离和鉴别纤维素分解菌说法正确的是（）注：“+”表示有，“-”表示无．A. 培养基甲能，培养基乙不能B. 培养基甲不能，培养基乙能C. 培养基甲和乙都能D. 培养基甲和乙都不能4.在“分离土壤中分解尿素的细菌”实验中，为判断是否起到了分离效果，提高实验结果的可信度，需要精心设置对照．对照组的设置方式为（）A. 牛肉膏蛋白胨培养基上接种相同土壤样液B. 牛肉膏蛋白胨培养基上接种无菌水C. 筛选分解尿素细菌的选择培养基不接种D. 筛选分解尿素细菌的选择培养基上接种无菌水5.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（）[注]“+”表示加入，“-”表示不加。
A.AB.BC.CD.D6.下列关于植物组织培养中灭菌操作的叙述中，错误的是（）A. 外植体用酒精消毒B. 镊子等器械需用酒精灭菌C. 操作者双手用酒精消毒D. 培养基需高压蒸汽灭菌7.下列关于微生物的培养和应用的叙述，错误的是（）A. 通过消毒不能杀死物体内所有的微生物B. 利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目C. 平板划线法和稀释涂布法常用于微生物的接种D. 微生物所用的培养基成分和植物组织培养用的培养基成分不同8.关于微生物培养基的说法正确的是（）A. 牛肉膏不能提供碳源B. 培养硝化细菌不加有机碳C. 刚果红使纤维二糖染色D. 酵母菌酿酒时需持续供氧9.下列关于细菌的叙述，正确的是（）A.不同的细菌所需要的碳源是相同的B.常用固体培养基分离获得细菌单菌落C.培养乳酸杆菌时需要将培养基的pH调至酸性D.不同微生物表现出稳定的相同的菌落特征10.下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是（）A. 微生物培养前，需对培养基进行消毒B. 分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度C. 测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法D. 分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源11.某实验小组欲从被石油污染过的土壤中筛选出能分解石油的细菌，下列操作中错误的是A. 利用平板划线法可对细菌进行计数B. 以石油为唯一碳源的培养基可用于筛选C. 目的菌不能利用无机碳源合成有机物D. 稀释土壤时需在火焰旁的目的是防杂菌污染12.要从多种细菌中分离出某种细菌，培养基要用（）A. 加入青霉素的培养基B. 固体培养基C. 加入高浓度食盐的培养基D. 液体培养基二、填空题13.为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌（目的菌）．有人做了如图实验：A、B、C培养基中________ 是唯一氮源，若三次试验结果记录到的菌落数分别为55、56、57，则1ml 土壤浸出液样中含目的菌数为________ 个．14.将醋酸菌突变体中与耐酸有关的ALDH基因导入优良醋酸菌中，选育出高发酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生产．请分析回答下列问题：（1）对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过________ 酶连接形成重组质粒．为获得耐酸的醋酸菌，用________ 法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选．将筛选________ 纯化的菌种用的方法长期保存．（2）图1表示温度尧乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响．①醋酸菌能将乙醇转变为________ ，再将其转变为醋酸．②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为________ ℃，如温度过高，醋酸菌代谢缓慢甚至死亡，原因是________③酒精发酵后通过出料口检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到________ 左右，才接种醋酸菌，较高的酒精浓度会使产酸量下降，不适宜接种，原因是________ ．（3）为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1mL发酵液稀释100倍后，分别取0.1mL稀释菌液均匀涂布在4个平板上曰经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为24、139、140、141，据此可得出每毫升发酵液中的活菌数为________ 个/mL．15.微生物及其培养：重金属嗜好性细菌在饮用水微污染和应急突发事件中能够用于水污染控制处理．获得高纯度、安全、高嗜好重金属的细菌，需要进行系列获取样本及其相关培养的实验．实验室选用铅、汞作为重金属实验剂．（1）为了较快取得高嗜好重金属的细菌样本，一般选择________ 的土壤浸出液．要提纯理想的菌种样本，研究小组将实验分两步，第一步是培养与提纯高嗜好重金属的细菌；由于这种细菌是用于饮用水的抗重金属污染，因此，第二步必须进行抗生素敏感性检测．完成下列有关“培养、获取高纯度、高嗜好重金属细菌”的实验设计思路：Ⅰ配制培养基：（2）分别配制含________ 不同浓度系列的________ 态培养基．Ⅱ灭菌：（3）采用高温、高压灭菌．高温高压灭菌有利于杀死________Ⅲ制备培养平板（培养皿中的培养基）；Ⅳ菌种分离与培养：（4）接种：________ 然后在适宜的环境中培养．Ⅴ菌种选择：（5）选取________ 菌种备用．选取安全性菌种的实验，一般采取抗生素敏感性实验法：（6）对抗生素敏感性越强的细菌安全性越高，其判断理由是________ ．（7）用添加抗生素来筛选对抗生素高敏感的细菌，会由于这些细菌死亡而无法得到，试验时为准确定位和获取对抗生素高敏感的细菌，必须配制________ 培养基，在实验操作上，可采取先________ ，然后通过“印章”法来接种到添加抗生素的培养基中培养，以准确定位和获得理想的菌群．三、解答题16.（2017•新课标Ⅰ）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用．回答下列问题：（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________．能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________．但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________（答出两点即可）．（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是________．（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________（答出两点即可）．四、综合题17.某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能髙效降解脂肪的菌株，请回答：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲，该培养基属于________培养基。
微生物的纯培养和显微技术
只含有两种微生物，且有意识保持二者之间关系的培养物， 这是具有寄生、共生关系微生物的最有效保存途径。
选择培养基分离法
1 ml
1.dilute sample
9 ml
10
100 1000 104 105
106
107
高氏培养基 土豆培养基 牛肉膏培养基
7.微生物保藏技术
微生物纯培养物必须通过各种保藏技术使其在一定时间内 不死亡、不被污染、不变异、生物学性状不丢失，以保证微生 物学研究及应用工作顺利进行，因而微生物保藏技术也是保护 微生物资源的一项重要基础工作。
(1）菌种保藏技术的原理：根据微生物生理、生化特点，人 工创造条件，是微生物的代谢处于不活泼，生长繁殖受抑制的 休眠状态；主要三个条件是：低温、干燥和缺氧。
（2）保藏方法 ①传代培养保藏：斜面，半固体穿刺，液体等，可密封后冷 藏。
②沙土保藏：霉菌孢子及产芽孢细菌。
③真空冷冻干燥法保藏
④冷冻法：低温冷冻（-20℃），超低温，液氮；液体培养 物中常加15%左右甘油，速冻后保藏。
日本大阪发酵研究所(IFO)
斜面低温保藏法－－常用保藏法
• 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全 后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏 期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏， 如此连续不断。 此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏
此法的主要保藏措施是低温。一般可保存1～6个月左右。
培养平板（culture plate，也称平板或平皿）：溶化的培 养基倒入无菌空平皿中，冷却凝固后盛有培养基的平皿。
（1）涂布平板法（Spread plate method） 适于大多数好氧微生物。
（2）稀释倒平皿法（Pour plate method）
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焦作市技师学院教学设计首页微生物细胞像其他生物细胞一样，有多种化学物质组成，这些化学物质主要以水和干物质的形式存在。
水是微生物细胞的重要组成部分，约占细胞重量的70％-90％，干物质主要以有机物和无机物形式存在，有机物主要包括蛋白质、脂质、多糖、核酸、维生素及其降解产物等物质，无机物主要指无机盐等物质。
微生物细胞的化学元素主要包括碳、氢、氧、氮、磷、硫六种元素。
P39 图2-1二、微生物的营养来源：微生物的营养来源分为水、碳源、氮源、无机盐、生长素、能源六大类1．水水对微生物正常生长的意义：⑴、水尤其是结合水是构成微生物细胞结构的重要化学成分。
⑵、自由水是细胞内良好的溶剂。
⑶、水比热大，还可以维持微生物细胞的温度。
⑷、自由水和结合水的比值，可以调节微生物细胞的代谢强度。
⑸、某些细菌具芽孢，荚膜等特殊结构，可以帮助这些微生物适应缺水环境。
2．氮源（1）概念：凡是能为微生物提供所需氮元素的营养物质。
（2）种类：（3）功能：主要用于合成蛋白质，核酸以及含氮的代谢产物。
说明：①对于异养微生物来说，含C，H，O，N的化合物既是碳源也是氮源，还是能源。
②大多数的微生物主要利用无机氮化合物作氮源，也可利用有机氮化合物作为氮源。
③只有少数固氮微生物可利用N2作为氮源，如：根瘤菌，固氮菌，蓝藻。
④对于硝化细菌而言铵盐和硝酸盐既是氮源又是能源。
3．生长因子（1）概念：微生物生长不可缺少的微量有机物。
（2）种类：维生素，氨基酸，碱基等。
（3）功能：一般是酶和核酸的组成成分。
4．无机盐（1）无机盐对微生物正常生命活动的意义：①构成细胞的各种重要的化学成分。
②参与构成微生物的各种细胞结构。
③一些无机盐是构成酶的重要成分，起到调节微生物代谢的作用。
④调节微生物细胞的渗透压和酸碱度。
（2）NH4+，Fe2+，S可分别作为硝化细菌，铁细菌和硫细菌的能源，也可作为硝化细菌的氮源。
提问：1、微生物常用的碳源和氮源有哪些？P40三、微生物的营养类型微生物分为光能无机自养型（光能自养型）、光能有机异养性（光能异养型）、化能无机自养型（化能自养型）、和化能有机异养性。
P42 表2-1四、营养物质进入细胞的方式1、影响营养物质进入微生物细胞的因素主要有三个方面：一是营养物质的性质；二是营养物质与微生物细胞之间的环境条件；三是微生物本身的特性。
2、营养物质进入微生物细胞的方式分为以下4种类型P44 图2-3A、单纯扩散B、促进扩散C、主动运输D、集团转移五、小结：要求学生自己总结本次程课的重内容要六、作业：P61 第2题焦作技师学院教学设计尾页焦作市技师学院教学设计首页的把握，二、是对所配制培养基物理化学条件的把握，三是对培养基杀菌处理的把握。
对于营养物质的选择与利用，要做到“对症下药、营养协调、经济节约”。
1、对症下药所谓“对症下药”，就是说，要培养什么样的微生物，就要选择与之相对应的营养物质。
2、营养协调3、经济节约二、培养基的类型1.按照培养基的成分来分培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。
（1）合成培养基。
合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。
这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。
如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。
（2）天然培养基。
由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。
这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。
（3）半合成培养基。
在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用合成培养基天然培养基主要成分准确测量的化学试剂加蒸馏水化学成分不明确的天然物质优点化学成分明确，精确定量，可重复性强配制方便，营养丰富，原料易得，培养效果好缺点配制繁琐，成本较高，培养效果一般成分不明确，实验重复性差应用用于微生物的分类，鉴定，研究一般用于工业生产2.按照培养基的物理状态分培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。
（1）固体培养基。
是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。
固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。
用于微生物分离，鉴定，计数。
如图，微生物分离成菌落、菌苔。
图中为大肠杆菌菌落，是用涂布平板法得到。
（2）半固体培养基。
是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。
可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。
用于观察微生物运动特征。
如图，左侧试管中微生物不运动，而右侧试管中微生物运动，因而两试管中现象不同（3）液体培养基。
液体培养基中不加任何凝固剂。
这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。
用于观察微生物生长状态。
如图，此例中左侧为表面生长，右侧为沉淀生长，中间两个为均匀混浊生长。
凝固剂含量（以琼脂计）主要用途固体培养基1.5%-2.0% 微生物分离，鉴定，计数等半固体培养基0.5%-0.8% 观察微生物运动特征、鉴定菌种等液体培养基无大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究3.按照微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类（1）常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基。
（2）常用的放线菌培养基为高氏1号培养基。
（3）常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基。
（4）常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖，葡萄糖比较昂贵）琼脂培养基和察氏培养基等。
4.按照培养基用途分培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养培养基用途 原因加入青霉素分离酵母菌，霉菌等真菌青霉素仅作用于细菌，对真菌无作用 加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌细胞壁结构致密，且能分泌血浆凝固酶，分解纤维蛋白原为纤维蛋白，沉积在细胞壁表面形成很厚的一层不透水的膜，不易失水不加氮源分离固氮菌固氮菌能利用空气中的氮气，其他菌类不行不加含碳有机物分离自养型微生物 自养型微生物可利用无机碳源，异养型微生物不行加入青霉素等抗生素分离导入了目的基因的受体细胞导入了目的基因的受体细胞中含有标记基因，对特定抗生素有抗性加入氨基喋呤，次黄嘌呤，胸腺嘧啶核苷酸分离杂交瘤细胞 在该实验上一步得到的细胞中，仅有杂交瘤细胞能完成DNA 复制，正常进行细胞分裂，其他细胞的DNA 复制过程被阻断无法进行分裂三、培养基的制备 P50 图2-41、原料的选择与称量2、混合溶液3、定容4、调整PH值5、过滤6、分装7、灭菌8、保温试验五、小结：要求学生自己总结本次程课的重内容要六、作业：P61 第9题焦作技师学院教学设计尾页焦作市技师学院教学设计首页2、群体微生物的生长提问：1、单细胞微生物的生长曲线分为哪几个阶段？各有什么特点？（1）研究方法：往往是在人工培养的条件下进行的。
如将少量的某种细菌接种到恒定容积的液体培养基中，并置于适当的条件下培养，然后，定期取样测定培养基里的细菌群体的生长情况。
（2）测定方法：（a）测细菌的细胞数量：如将待测样品与等量的已知含量的红细胞混匀后，涂布在载玻片上，经固定染色后，在显微镜下随机选若干个视野进行记数，得出细菌与红细胞的比例，再根据红细胞的含量计算出单位体积内的细菌数目。
（b）测重量：如取一定体积的培养基，经离心分离，反复洗涤后，称菌体的湿重，后烘干后称干重，再由此计算出其中的细胞总重量。
（3）结果：（a）细菌的生长曲线：（2）各时期对比：（c）右图表示某细菌的生长速率曲线，如果在“Ⅱ”时期加入适合细菌生存但营养成分不同的培养基，细胞出现的变化是A．代谢活跃，细胞内物质的合成速度加快B．分裂速度加快，代谢活动加强C．出现芽孢，可以产生大量次级代谢产物D．若为病菌，此时是感染性最强的时期（4）研究微生物群体生长曲线的实践意义：（a）上产上常用对数期的细菌作为菌种，以缩短生产周期。
（b）在稳定期，适当补充营养物质，有助于延长稳定期，提高代谢产物产量。
（c）连续培养，缩短周期，提高设备利用率，便于自动化管理。
【小结】一、微生物的生长规律1、个体微生物的生长规律2、群体微生物的生长【作业】P52 10焦作技师学院教学设计尾页焦作市技师学院教学设计首页1、物理方法A．温度：最适生长温度25~37℃。
A、温度：最适生长温度25~37℃。
B．PH：最适PH，细菌为6.5~7.5，真菌为5.0~6.0C．氧：对不同代谢类型的微生物群体的生长，具有不同的影响。
好氧型微生物：如大多数真菌等。
厌氧型微生物：如某些链球菌，产甲烷杆菌等。
兼性厌氧微生物：如酵母菌。
2、化学因素A.酸性物质与碱性物质B.盐类C.氧化剂D.有机物E.表面活性剂F.抗微生物剂3、生物因素：主要是微生物与微生物、动物、植物之间的相互作用。
三、微生物的控制控制微生物的方法分为物理方法、化学方法和生物方法三大类。
1、物理方法A、温度：最适生长温度25~37℃。
通过温度来杀灭微生物的方法有高温灭菌和低温灭菌两大类①高温灭菌高温灭菌微生物的原理是高温能引起微生物细胞蛋白质变性，从而导致微生物死亡。
a、干热灭菌：直接灼烧法、干热空气灭菌法b、湿热灭菌：煮沸法、高压蒸气灭菌法、间歇灭菌法、巴士消毒法②低温灭菌法低温灭菌法微生物的原理是低温能引起微生物细胞中水的结晶，从而导致微生物死亡。
a、冷藏法b、冷冻法B、水的活度C、过滤D、辐射E、超声波2、化学方法①消毒剂与防腐剂②抗微生物剂3、生物方法P61 表2-11提问：2、控制微生物的物理方法有哪些?四、小结：要求学生自己总结本次程课的重内容要五、作业：P61 第10题焦作技师学院教学设计尾页。