药品无菌检查演示教学
合集下载
药品无菌检查方法的验证试验讲义(ppt 27页)
大豆－胰酪胨培养基
培养基灵敏度检查
与方法验证用菌株 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌、
黑曲霉
检验方法
只要供试品性状允许，
性状允许的样品均可采用薄膜过滤，
应采用薄膜过滤法
利于抗菌影响去除
稀释剂与
薄膜过滤冲洗液 0.1％蛋白胨水溶液； A、D、K
0.1％蛋白胨水溶液（ 0.1％
• 根据上述验证试验结果可知，氯化 钠注射液的无菌检查，不需冲洗，以金 黄色葡萄球菌为阳性对照菌。本方法适 合于氯化钠注射液的无菌检查，即氯化 钠注射液的无菌检查法通过验证。
六、注意事项
1. 预试验 2. 稀释液与冲洗液: 作用、种类、冲洗量 3. 菌液: 保存、加入方式、加入量 4. 具有抗菌活性的供试品 5.滤膜： 选择、种类 6.对照菌: 根据供试品的特性来选择(抗生素根
的。单倍量重试)
二．方法验证试验建立及要求
验证实际是伴随着整个试验过程， 试验过程中的每一个环节都应该有合理 的证明，以确保在实际检验条件下，该 供试品的无菌检查法的可靠性。
主要内容 怎么做: 一选方法二看性质三除
抑菌性四计菌数五定取样量
• 注意什么: 七注意
怎么做
一 选定试验方法: 可靠、稳定、简便
2005年版无菌检查法主要方面与USP、BP的比较
比较项目
ChP2005
USP29
BP2002
检验条件规定
总体10000级、局部100级
无具体规定
无具体规定
人员要求
无具体规定
正确培训和认可
细菌检查培养基 硫乙醇酸盐流体培养基
硫乙醇酸盐流体培养基
硫乙醇酸盐流体培
养基
医疗药品无菌检查法验证(ppt 29页)
B组:对照组,0.1%蛋白胨或PH7.0无菌氯化钠蛋 白胨缓冲液,加少量微生物(接种量少于100cfu).
C组：阳性对照组，不经中和处理，将实验菌株 直接接种于培养基中(接种量少于100cfu)。
b.结果分析:A组与B组微生物生长数量相似，表明中 和剂的中和方式有效消除了样品的抑菌性，如果B 组与C组的微生物数量相似，表明样品预处理用中 和剂的毒性、检测程序和培养条件等均不影响微 生物生长。样品如无抑菌性，省去B组试验，A组 与C组直接比较。A组微生物生长数量不及C组微 生物生长数量，表明试验用器具材料或培养条件 等方面存在对微生物生长不利因素。
5.3.2 参照药典规定确定培养基用量，按无菌检查要求向上 述其中一瓶加入规定量供试品，另一瓶为阳性对照。
5.3.3 将种好的容器按药典规定温度培养14 days。
5.3.4 验证结果评价：
供试品与阳性对照相比、供试品容器内微生物生长不明显， 说明有抑菌性。可使用中和剂如比温-80。 β-内酰胺酶 等消除抑菌效果。中和剂不能消除抑菌作用，适当增加培 养基体积稀释。
3.4.4 灵敏度检查：
3.4.4.1检查用菌株传代不得超过5代。 3.4.4.2常用菌株： 金黄色葡萄球菌（CMCC(B)26003) 铜像假单胞菌[CMCC（B）10104] 枯草芽胞杆菌[CMCC（B）63501] 生孢梭菌[CMCC（B）64941] 白色念珠菌[CMCC（F）98001] 黑曲霉[CMCC（F）98003] 3.4.4.3菌液配制、保存、接种培养按药典要求。 3.4.4.4结果判断：空白对照应无细菌增长，加菌液的培养基管均
的有效性，使用量及微生响。 ③ 不需前处理的供试品免做。
4.5.4 无抑菌性样品的验证方法：依据产品溶解性和 微生物限度选择合适的中性稀释剂溶解和稀释， 用直接接种法验证，常用中性稀释液或淋洗液。
C组：阳性对照组，不经中和处理，将实验菌株 直接接种于培养基中(接种量少于100cfu)。
b.结果分析:A组与B组微生物生长数量相似，表明中 和剂的中和方式有效消除了样品的抑菌性，如果B 组与C组的微生物数量相似，表明样品预处理用中 和剂的毒性、检测程序和培养条件等均不影响微 生物生长。样品如无抑菌性，省去B组试验，A组 与C组直接比较。A组微生物生长数量不及C组微 生物生长数量，表明试验用器具材料或培养条件 等方面存在对微生物生长不利因素。
5.3.2 参照药典规定确定培养基用量，按无菌检查要求向上 述其中一瓶加入规定量供试品，另一瓶为阳性对照。
5.3.3 将种好的容器按药典规定温度培养14 days。
5.3.4 验证结果评价：
供试品与阳性对照相比、供试品容器内微生物生长不明显， 说明有抑菌性。可使用中和剂如比温-80。 β-内酰胺酶 等消除抑菌效果。中和剂不能消除抑菌作用，适当增加培 养基体积稀释。
3.4.4 灵敏度检查：
3.4.4.1检查用菌株传代不得超过5代。 3.4.4.2常用菌株： 金黄色葡萄球菌（CMCC(B)26003) 铜像假单胞菌[CMCC（B）10104] 枯草芽胞杆菌[CMCC（B）63501] 生孢梭菌[CMCC（B）64941] 白色念珠菌[CMCC（F）98001] 黑曲霉[CMCC（F）98003] 3.4.4.3菌液配制、保存、接种培养按药典要求。 3.4.4.4结果判断：空白对照应无细菌增长，加菌液的培养基管均
的有效性，使用量及微生响。 ③ 不需前处理的供试品免做。
4.5.4 无抑菌性样品的验证方法：依据产品溶解性和 微生物限度选择合适的中性稀释剂溶解和稀释， 用直接接种法验证，常用中性稀释液或淋洗液。
药品无菌检查课件
药品无菌检查课件
• 药品无菌检查概述 • 药品无菌检查的方法与流程 • 药品无菌检查的实验操作 • 药品无菌检查的常见问题与解决方案 • 药品无菌检查的案例分析
目录
药品无菌检查概述
定义与目的
定义
药品无菌检查是指对药品中是否 含有微生物的检查，特别是致病 性微生物的检查。
目的
确保药品在生产和处理过程中没 有受到微生物污染，保障药品的 安全性和有效性。
常见问题三：实验操作失误问题
药品无菌检查的案例分析
案例一：某注射液的无菌检查
总结词
操作规范、结果准确
详细描述
某注射液的无菌检查过程严格遵循中国药典规定，采用薄膜过滤法进行检验。 通过控制实验条件，确保了检验结果的准确性和可靠性。
案例二：某胶囊剂的无菌检查
总结词
高效检测、无菌保证
详细描述
某胶囊剂的无菌检查采用了直接接种法，该方法具有较高的检测效率和无菌保证。 在操作过程中，严格控制实验条件，确保了结果的准确性和可靠性。
药品无菌检查的重要性
保障公众健康
无菌药品用于治疗疾病和预防感 染，如果药品中含有微生物，将
给患者带来健康风险。
维护药品质量
微生物污染可能导致药品变质、药 效降低或产生不良反应，因此无菌 检查是保证药品质量的重要环节。
符合法规要求
各国药品监管机构要求对药品进行 无菌检查，确保药品符合相关法规 和标准。
案例三：某原料药的无菌检查
总结词
全面检测、排除污染
详细描述
某原料药的无菌检查采用了多种方法进行全面检测，包括直接接种法和薄膜过滤法等。在操作过程中， 严格控制实验条件，确保了结果的准确性和可靠性，有效排除了污染的可能性。
THANKS
• 药品无菌检查概述 • 药品无菌检查的方法与流程 • 药品无菌检查的实验操作 • 药品无菌检查的常见问题与解决方案 • 药品无菌检查的案例分析
目录
药品无菌检查概述
定义与目的
定义
药品无菌检查是指对药品中是否 含有微生物的检查，特别是致病 性微生物的检查。
目的
确保药品在生产和处理过程中没 有受到微生物污染，保障药品的 安全性和有效性。
常见问题三：实验操作失误问题
药品无菌检查的案例分析
案例一：某注射液的无菌检查
总结词
操作规范、结果准确
详细描述
某注射液的无菌检查过程严格遵循中国药典规定，采用薄膜过滤法进行检验。 通过控制实验条件，确保了检验结果的准确性和可靠性。
案例二：某胶囊剂的无菌检查
总结词
高效检测、无菌保证
详细描述
某胶囊剂的无菌检查采用了直接接种法，该方法具有较高的检测效率和无菌保证。 在操作过程中，严格控制实验条件，确保了结果的准确性和可靠性。
药品无菌检查的重要性
保障公众健康
无菌药品用于治疗疾病和预防感 染，如果药品中含有微生物，将
给患者带来健康风险。
维护药品质量
微生物污染可能导致药品变质、药 效降低或产生不良反应，因此无菌 检查是保证药品质量的重要环节。
符合法规要求
各国药品监管机构要求对药品进行 无菌检查，确保药品符合相关法规 和标准。
案例三：某原料药的无菌检查
总结词
全面检测、排除污染
详细描述
某原料药的无菌检查采用了多种方法进行全面检测，包括直接接种法和薄膜过滤法等。在操作过程中， 严格控制实验条件，确保了结果的准确性和可靠性，有效排除了污染的可能性。
THANKS
药品微生物限度与无菌检查ppt课件
药品微生物实验室 质量管理指导原则
环境保证
对照培养基 培养基保证
无菌性检查 灵敏度检查
SOP操作
有效的方法
方法验证
药品洁净实验室微生物 检测和控制指导原则
有效的结果
可靠的结论
药品微生物检验替代 方法验证指导原则
结果判断
微生物鉴定 指导原则
案例
阳性结果与玻璃安瓿表面采样菌高度相似
al Institutes for Food and Drug Control Nation
非无菌产品微生物检查：控制菌检查法
<1111>Microbiological Attributes of Nonsterile Pharmaceutical Product
非无菌药品微生物限度标准
<63>Mycoplasma Tests
支原体检查法
<71>Sterility Tests
无菌检查法
<1035>Biological Indicators for Sterilization
安瓿折断后，断 面应平整
Luzhou Institutes for Food and Drug Control
玻璃安瓿表面消毒方案比较
• 杀孢子剂（过氧乙酸）喷洒后立即（3min、5min、10min）用 75%乙醇钝化，再用湿棉签擦拭取样
• 酒精灯过火1秒钟（3秒钟、5秒钟、10秒钟）后直接用湿棉签 擦拭取样
药品微生物实验室质量管理指导原则 无菌检查用隔离器系统验证指导原则 灭菌法 药品微生物检验替代方法验证指导原则
/ /（日本药典收载）
L非uzh无ou 菌Ins药ti品tut微es 生for物Fo限od度an检d D测rug指Co导nt原rol则 中药饮片微生物限度检查法？来自药品微生物检验的过程控制
《无菌检查法》课件
在药品无菌检查中，需要采用适当的无菌技术，如薄膜过滤法、直接接种法等，对 药品进行取样和检测，以确保药品的无菌状态。
药品无菌检查的流程包括取样、样品处理、接种、培养和结果判断等步骤，需要严 格遵守相关法规和标准操作规程，确保检查结果的准确性和可靠性。
医疗器械的无菌检查
医疗器械的无菌检查是确保医疗器械在 使用前无菌的重要手段，可以避免医疗 器械在使用过程中对使用者造成感染和
微生物繁殖条件
适宜的温度、湿度、营养物质和酸碱度等 环境条件是微生物繁殖的必要条件。
微生物传播方式
空气传播、接触传播、媒介物传播等是微 生物传播的主要途径。
微生物的检测方法
01
02
03
培养法
通过在适宜的培养基上培 养样品，观察是否有微生 物生长繁殖，从而判断样 品是否无菌。
显微镜检查法
通过显微镜观察样品中微 生物的形态、大小、数量 等特征，从而判断样品是 否无菌。
04
无菌检查法的注意事项与规范
实验环境的要求
实验环境应保持清洁、干燥、通风良好， 并定期进行消毒处理。
实验室内应设置适宜的照明、温度和湿度 ，以满足实验要求。
实验室内应设置防护屏障、缓冲间等设施 ，以降低交叉污染的风险。
实验器材的清洁与消毒
所有实验器材在使用前应 进行清洁处理，确保无残 留物。
《无菌检查法》ppt课件
CONTENTS
• 无菌检查法概述 • 无菌检查法的基本原理 • 无菌检查法的操作流程 • 无菌检查法的注意事项与规范 • 无菌检查法的应用实例
01
无菌检查法概述
定义与目的
定义
无菌检查法是一种检测物品或样 品中是否存在活微生物的方法， 主要用于确保产品无菌、安全、 符合卫生标准。
药品无菌检查的流程包括取样、样品处理、接种、培养和结果判断等步骤，需要严 格遵守相关法规和标准操作规程，确保检查结果的准确性和可靠性。
医疗器械的无菌检查
医疗器械的无菌检查是确保医疗器械在 使用前无菌的重要手段，可以避免医疗 器械在使用过程中对使用者造成感染和
微生物繁殖条件
适宜的温度、湿度、营养物质和酸碱度等 环境条件是微生物繁殖的必要条件。
微生物传播方式
空气传播、接触传播、媒介物传播等是微 生物传播的主要途径。
微生物的检测方法
01
02
03
培养法
通过在适宜的培养基上培 养样品，观察是否有微生 物生长繁殖，从而判断样 品是否无菌。
显微镜检查法
通过显微镜观察样品中微 生物的形态、大小、数量 等特征，从而判断样品是 否无菌。
04
无菌检查法的注意事项与规范
实验环境的要求
实验环境应保持清洁、干燥、通风良好， 并定期进行消毒处理。
实验室内应设置适宜的照明、温度和湿度 ，以满足实验要求。
实验室内应设置防护屏障、缓冲间等设施 ，以降低交叉污染的风险。
实验器材的清洁与消毒
所有实验器材在使用前应 进行清洁处理，确保无残 留物。
《无菌检查法》ppt课件
CONTENTS
• 无菌检查法概述 • 无菌检查法的基本原理 • 无菌检查法的操作流程 • 无菌检查法的注意事项与规范 • 无菌检查法的应用实例
01
无菌检查法概述
定义与目的
定义
无菌检查法是一种检测物品或样 品中是否存在活微生物的方法， 主要用于确保产品无菌、安全、 符合卫生标准。
无菌检查法试验具体操作方法PPT课件
工作环境的污染
实验器材的污 染
培养基的污染
支原体 污染源
操作者本身的污染 某些支原体在人体 是正常菌群
制备细胞的原始组织 或器官的污染
四、具体检测方法
❖ 图为GHK细胞
当支原体污染后，因为它们不 会使细胞死亡可以与细胞长期 共存，培养基一般不发生浑浊， 细胞无明显变化，外观上给人 以正常感觉。
实则细胞受到多方面潜在影响， 如引起细胞变形，抑制细胞生 长等。
❖ 对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。 ❖ 通常，滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。
四、具体检测方法
❖ 细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是 个世界性问题。
❖ 在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，国 内外研究表明，大约有二十多种支原体能污染 细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支 原体。
三、无菌操作要求及注意事项
4.吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留 在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有 害物带入培养基中。 开启、关闭供试品时，火焰灭菌时间要短，防止因 温度过高灭活供试品。 另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有 毒气体，危害供试品。
5.进行试验时，吸管抽取供试品后，要与培养基试管 平行且垂直，动作要准确敏捷，但又不必太快，以 防空气流动，增加污染机会。
无菌试验对培养基的质量要求高，应选用完全透明无 沉淀的培养基，确认检查合格后放入试管架中，置操 作间，方可使用。
二、试验物品准备
❖在选取培养基时，放于眼 前细致观察（包括PH值，装 量是否一致、试管有无裂痕） ❖因培养基在搬运过程中， 容易造成个别试管胶栓松动， 从而影响PH值的细微变化。 ❖如不细致察看，在试验中 会存有很大的隐患，影响结 果的判定。
无菌检查法课件
微生物的检测方法
01
02
03
04
培养法
通过培养基培养微生物，观察 其生长情况，进行检测。
显微镜检查
通过显微镜观察微生物的形态 、大小、染色等情况，进行检
测。
生物发光检测法
利用生物发光原理，检测微生 物的存在。
免疫学方法
利用抗原抗体反应，检测微生 物的存在。
03
无菌检查法的操作流程
样品采集
采样前准备
霉菌
常见的无菌检查对象，包 括酵母菌、霉菌等。
病毒
体积较小的微生物，需要 特殊的方法进行检测。
微生物的生长条件
营养物质
微生物生长需要各种营养 物质，如碳源、氮源、水 、无机盐等。
温度
不同微生物需要在不同的 温度下生长，一般温度范 围在20℃-45℃之间。
pH值
微生物生长的酸碱度条件 ，不同微生物适应的pH值 范围不同。
操作规范
严格遵守无菌操作规程，避免交叉污染。
样本处理
对样本进行适当的处理，以去除杂菌并保留所需检测的微生物。
培养条件
确保培养基处于适宜的温度和湿度条件下，以促进微生物的生长。
观察记录
对实验过程进行详细记录，包括操作步骤、观察结果等。
实验后的处理
器具清洗
实验结束后，对使用过的器具进行彻底清洗 和消毒。
防止污染
在接种和培养过程中，应采取措施防 止培养基和培养物受到污染。
结果观察与判定
观察微生物生长情况
定期观察培养物的生长情况，记录生 长特征和菌落形态等信息。
菌落计数
结果判定
根据检验目的和标准要求，对观察到 的微生物生长情况进行判定，如是否 符合无菌要求或特定微生物的存在与 否。
药品无菌检查ppt课件
物理参数 空气悬浮粒子
空气过滤器完整性，气 流组织、空气流 速，换气次数、压差、 温度和相对湿度
浮游菌
执行标准《洁净室施
工及验收规范》附录 D3 高效空气过滤器现 场扫描检漏方法粒子
计数器法、
附录E12 气流的检测、 附录E1 风量和风速的
检测、
附录E2 静压差的检测、 附录E5 温湿度的检测
微生物
葡萄糖-------2.5g
需氧菌、真菌、专性和兼性 厌氧菌 20-25℃
2015年版药典的变化
• 意义 1、与国际接轨USP\BP 2、培养-观察的体系改变，取消严格意义上
的以真菌、细菌划分的培养，而以需氧、 厌氧的培养体系来划分，是一个更加广泛， 更加互补的体系。
2015年版药典的变化
• 培养基的改变导致阳性菌的培养条件改变 • 培养基灵敏度实验：
沉降菌
表面微生物
洁净实验室
• 2015年版与2010年版的物理指标相比
100级与A级比较，单向流断面风速相差较大，100级洁净区需要增加循
环洁风净量度才级能别 达气到流类A级型，平均10风0速00（级m/洁s）净换区气次空数调（系/h统）压需差要（增pa加） 1温倍度的（℃送）风湿量度，（才%）
能达到AB级 单向流 0.36-0.54
药品无菌检查法
• 特点
• 无菌检验结论为一次性，药典规定为不 得复试，为什么不得复试，菌落的分布 具有不均匀性，检验过程是破坏性的， 不具有重复性。---------------对操作过程的 要求非常高。
• 过程的控制----------1、环境控制；2、操 作影响，人员、物流是否引入外源性污
过程控制
• 国际标准ISO14644-1：空气洁净度分为9个 级别，比美国联邦标准多出3个。
《无菌检查法培训》课件
，定期观察生长情况。
结果记录
详细记录实验过程中的观察结 果，如生长情况、菌落形态等
。
实验后的处理
器材清洁
对使用过的实验器材进行清洁和消毒处理。
实验记录整理
整理实验记录，撰写实验报告，并妥善保存 。
废弃物处理
按照实验室规定正确处理废弃物，避免对环 境造成污染。
总结与改进
对实验过程进行总结，分析实验结果，提出 改进措施，提高实验效率和质量。
详细描述
药品在生产、储存、运输和使用过程中，可能会受到微生物污染，导致药品变质 、失效甚至引发感染。因此，对药品进行无菌检查是非常必要的。无菌检查法可 以检测出药品中是否存在任何微生物，确保药品的安全性和有效性。
医疗器械的无菌检查
总结词
医疗器械的无菌检查是确保医疗器械在 医疗过程中不会引起感染的重要措施。
效性。
无菌检查法广泛应用于药品、医 疗器械、食品、化妆品等领域， 是保证产品质量和安全的重要手
段。
无菌检查法的应用领域
药品
无菌检查法用于检查药品中是 否含有无菌微生物，确保药品
的安全性和有效性。
医疗器械
医疗器械在使用过程中需要严 格控制微生物污染，无菌检查 法可以确保医疗器械的无菌状 态。
食品
食品的无菌检查可以确保食品 在生产和加工过程中的安全性 和卫生质量。
化妆品
无菌检查法用于检查化妆品中 是否含有无菌微生物，确保产
品的安全性和卫生质量。
无菌检查法的目的和意义
目的
无菌检查法的目的是通过检测物 品中是否含有无菌微生物，确保 产品的安全性和有效性。
意义
无菌检查法对于保证产品质量和 安全具有重要意义，是产品生产 和质量控制的重要环节。
结果记录
详细记录实验过程中的观察结 果，如生长情况、菌落形态等
。
实验后的处理
器材清洁
对使用过的实验器材进行清洁和消毒处理。
实验记录整理
整理实验记录，撰写实验报告，并妥善保存 。
废弃物处理
按照实验室规定正确处理废弃物，避免对环 境造成污染。
总结与改进
对实验过程进行总结，分析实验结果，提出 改进措施，提高实验效率和质量。
详细描述
药品在生产、储存、运输和使用过程中，可能会受到微生物污染，导致药品变质 、失效甚至引发感染。因此，对药品进行无菌检查是非常必要的。无菌检查法可 以检测出药品中是否存在任何微生物，确保药品的安全性和有效性。
医疗器械的无菌检查
总结词
医疗器械的无菌检查是确保医疗器械在 医疗过程中不会引起感染的重要措施。
效性。
无菌检查法广泛应用于药品、医 疗器械、食品、化妆品等领域， 是保证产品质量和安全的重要手
段。
无菌检查法的应用领域
药品
无菌检查法用于检查药品中是 否含有无菌微生物，确保药品
的安全性和有效性。
医疗器械
医疗器械在使用过程中需要严 格控制微生物污染，无菌检查 法可以确保医疗器械的无菌状 态。
食品
食品的无菌检查可以确保食品 在生产和加工过程中的安全性 和卫生质量。
化妆品
无菌检查法用于检查化妆品中 是否含有无菌微生物，确保产
品的安全性和卫生质量。
无菌检查法的目的和意义
目的
无菌检查法的目的是通过检测物 品中是否含有无菌微生物，确保 产品的安全性和有效性。
意义
无菌检查法对于保证产品质量和 安全具有重要意义，是产品生产 和质量控制的重要环节。
无菌检查法演示实验PPT优选版
已知信息：
• 上市抽检样品 • 膏剂和粘性油剂供试品 • 规格：：红霉素 • 薄膜过滤法（阳性对照增加1/2最小检验量）
依据以上的检品信息，查表3确定最少检 验数量以及最少取样量
• 本品装量2.5g ：300mg≤ M ＜ 5g • 最少检验数量—— 供试品 + 阳性对照：
10 + 5 = 15 支 • 每支最少取样量 ：150mg
（阴性对照：冲洗液400ml）
小结： • 薄膜过滤法：
阳性对照增加1/2最小检验量 检验数量： 15支，每支取样1克，总接入量15克 • 冲洗液用量：2100ml，（700ml/筒） a.阳性对照—金黄色葡萄球菌（＜100 cfu ） b.供试品 c. 阴性对照 • 硫乙醇酸盐流体培养基 • 改良马丁培养基
35℃,培养48小时.
结论2:
1. 红霉素对生孢梭菌生长无抑制作用. 2. 红霉素对铜绿假单孢菌生长无抑制作用.
＋
1
2
3
直接接种法 （6个菌株） ——考察供试品是否有抑菌作用
取红霉素眼膏一支，无菌操作取出全部内容物，移入含适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，作为供试液；
阳性对照—金黄色葡萄球菌（＜100 cfu ）
3. 在该检验条件下,冲洗400ml,三天内可检 出枯草芽孢杆菌.
＋
1
2
3
+:对照管;
1:没有冲洗;
2:冲洗液体积200ml; 3:冲洗液体积400ml.
500:冲洗液体积500ml; 700:冲洗液体积700ml. 直接接种法or薄膜过滤法 25℃培养3～5天，逐日观察 35℃,培养72小时. 最少检验数量—— 供试品 + 阳性对照： 须重新进行方法验证
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 水溶性的固体----溶取规定量，加适宜的稀 释液溶解或按标签复溶。
• 非水溶性供试品-----直接过滤，或乳化后 （加吐温80等）立即过滤，用含0.1-1%吐温 80的冲洗液冲洗，培养基中可加入吐温80
药品无菌检查法
2、直接接种法 • 培养基的用量符合接种的供试品体积不得
大于培养基体积的10%，同时，流乙醇酸盐 每管装量不少于15ml，TSB不少于10ml • 适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的。
药品无菌检查法
• 供试品的无菌检查
检验数量：一次试验所用供试品最小包装容器的数量 出厂产品按表1，上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量：按表3，采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允 许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查法
• 1、薄膜过滤法 • 封闭式薄膜过滤器 • 只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤 • 抗生素样品选用低吸附的滤膜 • 水溶性供试品过滤前先将少量冲洗液过滤
药品无菌检查及相关 知识
吉林省药品检验所微生物室
主要内容
1、药品无菌检查法基础 2、2015年版药典无菌检查法的变动 3、洁净实验室微生物的监测和控制 4、菌种的管理 5、二级生物安全实验室
药品无菌检查法
• 定义及特点 • 培养基、冲洗液 • 方法学验证 • 供试品的无菌检查 • 无菌检查的要点
药品无菌检查法
药品无菌检查法
• 培养基适用性检查
• 无菌性—每批次培养基取不少于5瓶（支），培养14天， 应无菌生长。
• 灵敏度 6种菌（<100cfu） 金、铜绿、生孢---------流乙醇酸盐流体 7支，12ml/支，每种菌接种2支，阴性一支， 枯草、白念、黑曲----------胰酪大豆胨液体 7支，每种菌接 种2支，9ml/ 支，一支阴性 流乙醇酸盐流体培养3天，胰酪大豆胨液体 5天， 空白对 照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判断该 培养基的灵敏用于检查药典要求无菌的药 品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、 及其他品种是否无菌的一种方法。
• 若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了 供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 也并不表示所有的产品都是无菌的。
• 反之，当供试品中检出微生物污染，则可 以认为批产品的微生物污染风险相当高。
物理变化？化学变化？生物学变化？ • 培养14天，逐日观察并记录，注意和阳性、
环境保证
培养基保证
无菌性检查 灵敏度检查
SOP操作
有效的方法
方法学验证
有效的结果 可靠的结论
结果判断
药品无菌检查法
• 培养基
配制后采用验证合格的灭菌程序灭菌。
什么是验证合格的？
保存条件：2-25℃、避光，非密闭容器在3周内使用， 密闭容器一般在1年内使用。
流乙醇酸盐流体：供试品接种前，培养基氧化层不 超过深度的1/5，否则100℃水浴加热至粉红色消 失（不超过20分钟），只能加热一次，培养结束 后氧化层不超过1/2
取流乙醇酸盐流体培养基（不少于15ml）6管， 分别加入金葡、大肠、生孢各2管，其中一管 接入供试品，另一管作为对照，TSB（不少于 10ml）6管，分别加入枯草、白念、黑曲各2 管，其中一管加入供试品，另一管作为对照， 培养时间不得超过5天。
结果判断：
与对照管比较，试验组的试验菌生长良好， 则说明供试品的该检验量在该检验条件下
• 敷料供试品 以无菌操作拆开每个包装，于
药品无菌检查法
阳性对照 无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的----金
葡 抗革兰氏阴性菌为主的------大肠 抗厌氧菌的------生孢梭 抗真菌的-----白念 阳性对照72小时内生长良好
阴性对照
相应的溶剂、稀释液、冲洗液同法操
药品无菌检查法
• 培养及观察 • 液体培养基浑浊
药品无菌检查法
• 无菌制剂比非无菌制剂存在更高的风险 • 一系列的药品不良事件 • 2006年的“欣弗事件”---安徽华源生产的
“克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液”引起了 11人死亡，93人感染，企业倒闭，总经理 自杀。未按批准的工艺参数灭菌，降低灭 菌温度、缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载 量，影响了灭菌效果，经中检所检验，发 现无菌不合格。 • 2012年10月，美国新英格兰合成制药中心
药品无菌检查法
• 特点
• 无菌检验结论为一次性，药典规定为不 得复试，为什么不得复试，菌落的分布 具有不均匀性，检验过程是破坏性的， 不具有重复性。---------------对操作过程的 要求非常高。
• 过程的控制----------1、环境控制；2、操 作影响，人员、物流是否引入外源性污
过程控制
以润湿滤膜
• 油类供试品的滤膜和滤器在使用前应充分 干燥
• 冲洗量一次一般为100ml，总冲洗量不得超 过1000ml，以免膜上的微生物受损。总冲
药品无菌检查法
• 水溶性的液体-----直接过滤或混合至含不少 于100ml适宜稀释液的无菌容器中，混匀， 立即过滤，如供试品有抑菌作用，须冲洗 一般不少于三次。
2、直接接种
药品无菌检查法
• 薄膜过滤法 • 试验组：取每种培养基规定接种的供试品
总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一 次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。 将培养基加至滤筒内。
• 对照组：另取一装有同体积培养基的容器， 加入等量试验菌，培养时间不得超过5天。
药品无菌检查法
• 直接接种法
药品无菌检查法
• 冲洗液 • 0.1%蛋白胨水溶液 • pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 • 可选用其他经验证过的适宜的溶液
药品无菌检查法
• 方法适用性试验 证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时，应重新进行方法适用性试验。 菌种：金葡、大肠、枯草、生孢、白念、黑 曲 方法：1、薄膜过滤
药品无菌检查法
• 混悬液等非澄清水溶液供试品 取规定量， 等量接种至各管培养基中
• 固体供试品 取规定量，直接等量接种至各 管培养基中，或加入适宜的溶剂溶解，或 按标签说明复溶后，取规定量等量接种至 各管培养基中。
• 非水溶性供试品 加入适量的乳化剂及稀释 剂使其乳化再接种，或直接接种至含乳化 剂的培养基中
• 非水溶性供试品-----直接过滤，或乳化后 （加吐温80等）立即过滤，用含0.1-1%吐温 80的冲洗液冲洗，培养基中可加入吐温80
药品无菌检查法
2、直接接种法 • 培养基的用量符合接种的供试品体积不得
大于培养基体积的10%，同时，流乙醇酸盐 每管装量不少于15ml，TSB不少于10ml • 适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的。
药品无菌检查法
• 供试品的无菌检查
检验数量：一次试验所用供试品最小包装容器的数量 出厂产品按表1，上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量：按表3，采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允 许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查法
• 1、薄膜过滤法 • 封闭式薄膜过滤器 • 只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤 • 抗生素样品选用低吸附的滤膜 • 水溶性供试品过滤前先将少量冲洗液过滤
药品无菌检查及相关 知识
吉林省药品检验所微生物室
主要内容
1、药品无菌检查法基础 2、2015年版药典无菌检查法的变动 3、洁净实验室微生物的监测和控制 4、菌种的管理 5、二级生物安全实验室
药品无菌检查法
• 定义及特点 • 培养基、冲洗液 • 方法学验证 • 供试品的无菌检查 • 无菌检查的要点
药品无菌检查法
药品无菌检查法
• 培养基适用性检查
• 无菌性—每批次培养基取不少于5瓶（支），培养14天， 应无菌生长。
• 灵敏度 6种菌（<100cfu） 金、铜绿、生孢---------流乙醇酸盐流体 7支，12ml/支，每种菌接种2支，阴性一支， 枯草、白念、黑曲----------胰酪大豆胨液体 7支，每种菌接 种2支，9ml/ 支，一支阴性 流乙醇酸盐流体培养3天，胰酪大豆胨液体 5天， 空白对 照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判断该 培养基的灵敏用于检查药典要求无菌的药 品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、 及其他品种是否无菌的一种方法。
• 若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了 供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 也并不表示所有的产品都是无菌的。
• 反之，当供试品中检出微生物污染，则可 以认为批产品的微生物污染风险相当高。
物理变化？化学变化？生物学变化？ • 培养14天，逐日观察并记录，注意和阳性、
环境保证
培养基保证
无菌性检查 灵敏度检查
SOP操作
有效的方法
方法学验证
有效的结果 可靠的结论
结果判断
药品无菌检查法
• 培养基
配制后采用验证合格的灭菌程序灭菌。
什么是验证合格的？
保存条件：2-25℃、避光，非密闭容器在3周内使用， 密闭容器一般在1年内使用。
流乙醇酸盐流体：供试品接种前，培养基氧化层不 超过深度的1/5，否则100℃水浴加热至粉红色消 失（不超过20分钟），只能加热一次，培养结束 后氧化层不超过1/2
取流乙醇酸盐流体培养基（不少于15ml）6管， 分别加入金葡、大肠、生孢各2管，其中一管 接入供试品，另一管作为对照，TSB（不少于 10ml）6管，分别加入枯草、白念、黑曲各2 管，其中一管加入供试品，另一管作为对照， 培养时间不得超过5天。
结果判断：
与对照管比较，试验组的试验菌生长良好， 则说明供试品的该检验量在该检验条件下
• 敷料供试品 以无菌操作拆开每个包装，于
药品无菌检查法
阳性对照 无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的----金
葡 抗革兰氏阴性菌为主的------大肠 抗厌氧菌的------生孢梭 抗真菌的-----白念 阳性对照72小时内生长良好
阴性对照
相应的溶剂、稀释液、冲洗液同法操
药品无菌检查法
• 培养及观察 • 液体培养基浑浊
药品无菌检查法
• 无菌制剂比非无菌制剂存在更高的风险 • 一系列的药品不良事件 • 2006年的“欣弗事件”---安徽华源生产的
“克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液”引起了 11人死亡，93人感染，企业倒闭，总经理 自杀。未按批准的工艺参数灭菌，降低灭 菌温度、缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载 量，影响了灭菌效果，经中检所检验，发 现无菌不合格。 • 2012年10月，美国新英格兰合成制药中心
药品无菌检查法
• 特点
• 无菌检验结论为一次性，药典规定为不 得复试，为什么不得复试，菌落的分布 具有不均匀性，检验过程是破坏性的， 不具有重复性。---------------对操作过程的 要求非常高。
• 过程的控制----------1、环境控制；2、操 作影响，人员、物流是否引入外源性污
过程控制
以润湿滤膜
• 油类供试品的滤膜和滤器在使用前应充分 干燥
• 冲洗量一次一般为100ml，总冲洗量不得超 过1000ml，以免膜上的微生物受损。总冲
药品无菌检查法
• 水溶性的液体-----直接过滤或混合至含不少 于100ml适宜稀释液的无菌容器中，混匀， 立即过滤，如供试品有抑菌作用，须冲洗 一般不少于三次。
2、直接接种
药品无菌检查法
• 薄膜过滤法 • 试验组：取每种培养基规定接种的供试品
总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一 次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。 将培养基加至滤筒内。
• 对照组：另取一装有同体积培养基的容器， 加入等量试验菌，培养时间不得超过5天。
药品无菌检查法
• 直接接种法
药品无菌检查法
• 冲洗液 • 0.1%蛋白胨水溶液 • pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 • 可选用其他经验证过的适宜的溶液
药品无菌检查法
• 方法适用性试验 证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时，应重新进行方法适用性试验。 菌种：金葡、大肠、枯草、生孢、白念、黑 曲 方法：1、薄膜过滤
药品无菌检查法
• 混悬液等非澄清水溶液供试品 取规定量， 等量接种至各管培养基中
• 固体供试品 取规定量，直接等量接种至各 管培养基中，或加入适宜的溶剂溶解，或 按标签说明复溶后，取规定量等量接种至 各管培养基中。
• 非水溶性供试品 加入适量的乳化剂及稀释 剂使其乳化再接种，或直接接种至含乳化 剂的培养基中