单核细胞增多性李斯特菌
单核细胞增生李斯特氏菌检验技术
•小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷
10mLLB2
TSA-YE
鼠李糖
TSA-YE
阳性
选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定
革兰氏染色
单增李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌在刺种点周围产生狭小的透明溶血环；在靠近金黄色葡萄球菌的接种端溶血增强
革兰氏阳性短杆菌
动力试验
MR试验
一、单核增生李斯特氏菌概况
生物学特性
该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和食品中能长期存活；对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌；湿热灭菌（121℃，至少15min）和干热灭菌（160-170℃，至少1hr）可杀灭该菌，对紫外线和γ射线敏感；对青霉素、氨苄青霉素、氨基糖苷类、氯霉素均敏感。
食品中单核增生李斯特氏菌检验
食品微生物检验技术
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类学研究表明，其分为六个 种：单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、绵羊（伊氏）李斯特氏菌、 英诺克（无害）李斯特氏菌、斯氏李斯特氏菌、威氏李斯特氏菌、格氏李斯特氏菌在李斯特氏菌属只有两种致病菌：单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物发病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最有检测意义是单核增生李斯特氏菌。
一、单核增生李斯特氏菌概况
李斯特氏菌属
革兰氏阳性,老龄培养物多转为革兰阴性;兼性厌氧,无芽孢、无荚膜;生长温度范围为2-42℃（也有报道在0℃能缓慢生长）,pH范围pH4.4-pH9.6;LM的幼龄菌（16~24h的培养物），为革兰阳性小杆菌，常呈V字形，成对排列。在22~25℃环境中形成4根鞭毛，故在25℃肉汤培养液中出现轻微旋转或翻滚样的运动。而在32℃时仅形成一根鞭毛，动力缓慢。
单增李斯特氏菌及其检测方法
单增李斯特氏菌及其检测方法一、单增李斯特氏菌单增李斯特氏菌，学名Listeria monocytogenes，一种革兰氏阳性菌，是李斯特菌属。
李斯特菌属(Listeria)共分为2个群，7个种：第一群包括单核细胞增生性李斯特菌(L monocytogenes，LM)(亦称产单核细胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(L innocua)(亦称无害李斯特菌)、韦氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri)，第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)。
其中，单增李斯特菌是唯一能引起疾病的人畜共患病的病原菌。
它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。
二、单增李斯特氏菌检测方法1.细菌培养法该菌营养要求不高，兼性厌氧，最适在含有CO2的微需氧环境中生长，生长温度范围-1.5℃-45℃，最适温度为30℃-37℃，能在普通冰箱冷藏室生长，是一种典型的耐冷性细菌，同时还具有耐盐性。
LM在普通琼脂平板上呈细小直径约0.2-0.4μm、半透明露水样菌落。
在血琼脂平板上有β溶血环。
在显色培养基上呈蓝绿色。
2.生化鉴定法该菌主要生化特性如下：①触酶阳性；②氧化酶阴性；③发酵多种糖类；④产酸不产气；⑤不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二塘；⑥不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解；⑦吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性；⑧VP、甲基红试验和精氨酸水解试验阳性；⑨对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20分钟可杀死，70%酒精5min、2.5%石碳酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min可杀死此菌。
⑩该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。
3.血清凝集法根据菌体抗原和鞭毛抗原，LM分为16个血清型：1／2a、1／2b、1／2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b、7。
单增李斯特氏菌
单增李斯特氏菌
单核细胞增生李斯特菌 (L.monocytohenes)
潜伏期：在感染后3-70天出现症状，健康成人可出现轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、孕妇出现流产。
在食品加工中，中心温度必须达到70℃持续2分钟以上。
李斯特氏菌。
该细菌喜冷不爱热，如果人被感染，将有三成的病死率。
李斯特氏菌。
此菌的特性是喜冷怕热，在低温环境中可大量繁殖。
人们习惯于把电冰箱当作食品的保险箱，将一次吃不完的食物随手放进冷藏室，未经加热消毒就食用，这是李斯特氏菌的一种重要传播途径。
人感染该菌后多表现为脑膜炎、败血症，孕妇感染则可引起流产、早产、死胎和新生儿败血症。
在夏季每个家庭都要格外注意饮食卫生，电冰箱要定期清洗，存放的食物要生熟分开，熟食在食用前要加热消毒，温度必须达到70℃以上且持续2分钟以上。
健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，
4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。
人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。
该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。
单核细胞李斯特菌食品中限量标准
单核细胞李斯特菌，是一种常见的细菌性致病菌，可以存在于各种食品中，对人体健康造成潜在威胁。
为了保障食品安全，许多国家和地区都制定了单核细胞李斯特菌在食品中的限量标准，以此来规范食品生产和销售，保护用户的健康。
1. 单核细胞李斯特菌简介单核细胞李斯特菌属于革兰氏阳性菌，具有厌氧生长的特性，是一种耐热菌。
它可以在低温下生存，并且能够在一些特定的环境中生长，如冷藏食品、腌渍食品、熟食等。
单核细胞李斯特菌感染会引起李斯特菌病，患者通常表现为发热、头痛、肌肉疼痛等症状，严重者甚至会危及生命。
2. 单核细胞李斯特菌在食品中的限量标准针对单核细胞李斯特菌在食品中的含量，各国家和地区均制定了不同的限量标准。
欧盟针对某些食品中单核细胞李斯特菌的限量标准为100个CFU/g（菌落形成单位/克），而加拿大则规定某些冷藏食品的单核细胞李斯特菌限量为100个CFU/g。
这些限量标准的制定是为了避免食品中过多的单核细胞李斯特菌对人体健康造成威胁，保障用户的安全。
3. 单核细胞李斯特菌对食品行业的影响单核细胞李斯特菌在食品中的存在对食品行业造成了一定的影响。
食品生产企业需要严格控制生产过程中的卫生和质量，以确保食品中的单核细胞李斯特菌符合限量标准。
食品监管部门加强了对食品的抽检和监测，一旦发现食品中单核细胞李斯特菌超过限量标准，将会采取相应的措施，如召回产品等。
用户对食品安全的关注也在一定程度上影响了食品行业的发展和销售。
4. 针对单核细胞李斯特菌的食品安全控制措施为了控制食品中单核细胞李斯特菌的含量，食品生产企业采取了一系列的措施。
严格控制原料的质量，确保原料不受污染。
加强生产过程中的卫生管理，包括设施的清洁消毒、员工的个人卫生等。
对易受污染的食品进行适当的加工处理，如高温加热等，以杀灭单核细胞李斯特菌。
食品监管部门也加强了对食品生产企业的监督检查，确保其符合相关的卫生标准和规定。
5. 结语单核细胞李斯特菌是一种常见的食品中病原菌，对人体健康造成潜在威胁。
单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么
龙源期刊网 单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么作者：周林来源：《学习与科普》2019年第31期单核细胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范围当中。
就目前来看，免疫学检测方法和分子学检测方法是很多单增李斯特菌检测方法中使用最频繁的两种方法。
免疫学检测方法具有操作简便、时间短的特点，然而其非常依赖高特异性的抗体，结果容易出现失误，需要对检测结果进行详细判定。
和免疫学检测法相比，分子学检测方法具有灵敏度高、省时省力等特点，然而分子学检测方法在使用过程中需要较多的操作经验，同时不能在大批量检测中应用。
一、单核细胞增生李斯特菌概述（一）生物学特征单核细胞增生李斯特菌是一种革兰阳性短杆菌，其对营养的需求量较少，生长温度通常最低不能低于2摄氏度，最高不能超过42摄氏度，同时可以在弱酸、弱碱和6.5%NaCl肉汤中得到快速成长，并且能够形成β-溶血。
在其生长过程中还可以发酵出很多种糖类物质，按照O抗原以及H抗原能够分解成十三中血清型，其中1/2a与4b这两种类型在致病菌株中的占比最大。
（二）污染源及流行病学单核细胞增生李斯特菌是自然界中常见的一种致病菌，抗冻能力非常强，其主要传播路径是通过粪-口这种方式进行。
健康人粪便中的单核细胞增生李斯特菌携带率通常为0.6%至16.0%，然而奶制品、水产品以及家禽中均携带相应的单核细胞增生李斯特菌。
另外，单核细胞增生李斯特菌通过胎盘、黏膜、性以及产道鞥部位都可以进入到体内，从而导致感染。
单核细胞增生李斯特菌的致病性与其具有的毒作用、宿主的免疫状况以及年龄具有密不可分的关系，宿主的细胞免疫可以有效的解除单核细胞增生李斯特菌中存在的病菌。
各种免疫力弱的人群都属于易感人群，比如新生儿、四十岁以上的成人等。
健康成人感染后会出现和感冒相似的情况，然而其他免疫力功能较低的人可能会出现更加严重的症状，乃至会直接死亡。
二、相关检测技术（一）聚合酶链反应技术就目前来看，聚合酶链反应技术得到了广泛的普及与运用。
单核细胞增生李斯特菌检验 ppt课件
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
表1 单核细胞增生李斯特菌在选择性平板 上的菌落特征
选择性琼脂平板单核细胞增生李斯特菌科 玛嘉显色培养基菌落为:蓝色，周围有白色 晕圈.
PALCAM琼脂菌落:为灰绿色，小的圆形菌落 ，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色 凹陷
L.M在 Chromagar培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
协同溶血试验 (cAMP):
在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种可疑李斯特菌 , 但不要触及它们, 于30℃培养24h～48 h, 检查平板 中垂直接种点对溶血环的影响。靠近金黄色葡萄 球菌接种点的单核细胞增生李斯特菌的溶血增强, 斯氏李斯特菌（L.seeligeri）的溶血也增强, 而伊氏 李斯特菌（L.ivanovii）在马红球菌附近的溶血增 强。
PALCAM琼脂
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。
因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。
本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。
一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。
在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。
由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。
二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。
然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。
三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。
以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。
qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。
2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。
研究人员通过设计特定的探针，可以在芯片上同时检测多种致病菌，包括单核细胞增生性李斯特菌，提高了检测效率和准确性。
食品中单增李斯特菌检测
食品中单增李斯特菌检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测实验目的1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。
2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。
基本原理单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。
单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。
李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。
此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。
人也可作为无症状携带者。
据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。
李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。
多单在，有时是V字型排列。
无芽孢，不产生荚膜。
在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。
在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。
本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。
对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。
加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。
在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。
在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。
在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。
不形成菌环、菌膜。
在营养琼脂上，光滑(S)型可形成直径0.5～1.5mm、圆形、露滴状半透明、低隆起、边缘整齐、表面有细致纹理的蓝灰色菌落，斜射光照射时，菌落呈特征性蓝绿光泽。
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需氧或微需氧菌 生长温度范围：0.5~45 ℃ 一般实验室培养基生长良好 菌落细小，斜射光观察呈现
特殊的蓝绿色
单核细胞增多性李斯特菌
生物学特性
• 该菌对理化因素抵抗力较强：在土壤、粪便、青储 饲料和干草内能长期存活
• 在培养基中放于4℃可存活3～4年 • 对碱和盐抵抗力强，10％～15％NaCl培养基中能生
对氧不稳定的细菌溶血素 LLO可能作用于心肌的收缩和起搏点 LLO是本菌的主要毒力因子，缺失LLO的菌株无毒 由hly基因编码
单核细胞增多性李斯特菌
李斯特菌溶血素O
单核细胞增多性李斯特菌
内在素
• 一种细菌表面蛋白 • 能与上皮细胞、内皮细胞、肝细胞、单核—巨噬
细胞等多种真核细胞结合 • 本菌感染内皮细胞两种机制之一： ① 细菌从感染的单核—巨噬细胞通过细胞与细胞间
长，16％NaCl培养基中可存活一年，25％NaCl环境 中仍可存活 • 60-70℃经5-20min可杀死 • 70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5% 福尔马林20min 可杀死此菌
单核细胞增多性李斯特菌
单核细胞增多性李斯特菌
生物学特性
分型
• 血清型：根据O抗原和H抗原分为16个血清型
单核细胞增多性李斯特菌
致病性
单增李斯特菌进入人体是否得病与菌量和宿主的年龄 免疫状态有关
李斯特氏菌对于高危人群102个/g就可致病，而对于 健康人108个/g也可能安然无恙
易感者为新生儿、孕妇、40岁以上的成人、免疫功能 缺陷者
单核细胞增多性李斯特菌
临床表现：
• 潜伏期：在感染后3-70天出现症状
• 血清型与症状之间无相关性
• 血清型与地理分布似有一定联系，如北美地区以 血清型4b为主
• 目前全世界90%的病例由1/2a、1/2b、4b型引起
• 血清学分类在流行病学研究中作用不大
• 基因DNA型
• 酯酶型
单核细胞增多性李斯特菌
致病性
• 致病物质 ① 李斯特菌溶血素O（listeriolysin，LLO）
• 食品中也可分离到：如生蔬菜、水果、鲜奶、 软奶酪、生肉、肉制品、未加热的热狗、水产 品、鸡肉、肉酱、冷盘甚至米饭中
单核细胞增多性李斯特菌
流行情况
• 1981年首次确定它是一种食源性病原菌
• 1981～1992年10年间即发生4次世界范围的大流行，分 别在加拿大、美国的马萨诸塞州及美国加州地区
• 1999年底，美国发生了历史上因食用带有李斯特菌的 食品而引发的最严重的食物中毒事件，据美国疾病控 制和防治中心资料显示，在美国密歇根州有14人因食 用被该菌污染的 “热狗”和熟肉而死亡，在另外22个 州97人患此病，6名妇女流产
单核细胞增多性李斯特菌
流行情况
• 1992-1995年法国出产的奶酪及猪肉中发现李斯特菌
单核细胞增多性李斯特菌
生物学特性 形态
革兰氏阳性杆菌 形态与培养时间有关：37℃培养3
～6小时菌体杆状，随后呈球杆状 陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰
氏染色阴性 不产生芽孢 穿刺培养2－5天可见倒立伞状生长，
是本菌特征性之一 5-7%的血平板上培养后可产生窄小
的β-溶血环
单核细胞增多性李斯特菌
• 感染后大多为暂时带菌。儿童显性感染主要表现为脑膜 炎及败血症，成人感染表现为各种脏器的实质性病变
单核细胞增多性李斯特菌
临床表现：
① 妊娠感染 ： • 孕妇出现畏寒、发热、头痛、肌痛等类似上呼吸 道感染症状。 • 多发于妊娠26～30周。 • 可致早产、死产或新生儿脑膜炎而死亡
的直接扩散 ② 通过内在素的介导
单核细胞增多性李斯特菌
单核细胞增多性李斯特菌
免疫性 • 本菌在自然界广泛存在，人粪带菌率高达10%
• 肝细胞是本菌主要寄居细胞之一
单核细胞增多性李斯特菌
流行情况
• 李斯特氏菌广泛分布于环境中：灰尘、土壤、 淡水、海水、家畜、饲料、粪便、屠宰污水等 均存在着李斯特氏菌
单核细胞增多性李斯特菌
中国医科大学附属第一医院感染科 李冬
单核细胞增多性李斯特菌
李斯特菌以英国外科医生约瑟夫.李斯特的名字命名
1、 单核细胞增多性李斯特菌 (L.monocytohenes) 2、 绵羊李斯特菌 (L.iuanuii) 3、 英诺克李斯特菌 (L.innocua) 4、 威尔斯李斯特菌 (L.innocua) 5、 西尔李斯特菌 (L.seeligeri) 6、 格氏李斯特菌 (L.grayi) 7、 默氏李斯特菌 (L.murrayi)
李斯特菌属中仅单核细胞增多性李斯特菌对人类致病
单核细胞增多性李斯特菌
李斯特菌在环境中无处不在
灰尘、土壤、淡水、海水、家畜、 饲料、粪便、屠宰污水等均存在着李 斯特氏菌
单核细胞增多性李斯特氏菌是 一种人畜共患病的病原菌 ，引 起李斯特菌病(Listeria)，主要 表现为脑膜炎和败血症等
单核细胞增多性李斯特菌
流行病学
• 人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未 再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、 生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法 式馅饼、冻猪舌等而感染
• 约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的
单核细胞增多性李斯特菌
流行病学
• 该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造 成感染；孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿 或新生儿；栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起 感染；性接触也是本病传播的可能途径，且有 上升趋势
• 2001年11月以来，我国质检部门多次从美国、加拿大、 法国、爱尔兰、比利时、丹麦等二十多家肉类加工厂 进口的猪腰、猪肚、猪耳、小排等三十多批近千吨猪 副产品中检出单增李斯特菌、沙门氏菌等致病菌
1996年至1999年，因单核增生李斯特氏菌回收的食 品种类（来源：USDA及FDA报告）
单核细胞增多性李斯特菌
② 内在素
③ 磷脂酶C
④ 其他
• 毒力基因 ① hly
⑥mpB
⑤ prf A
单核细胞增多性李斯特菌
李斯特菌溶血素O（listeriolysin，LLO）
为SH活化的细胞溶素，有α和β两种 类似链球菌溶血素、肺炎链球菌溶血素、产气荚膜梭菌溶血素等