猪脾脏多肽的酶法制备及其生物活性研究
脾多肽注射液
脾多肽注射液Piduotai ZhusheyeLienal Polypeptide Injection本品系由健康小牛脾脏提取物（附件4）制成的含分子量小于6000道尔顿的多肽、氨基酸、核酸类和糖类物质的无菌水溶液。
本品每1ml中含多肽以牛血清白蛋白计应为3.2～4.8mg，含游离氨基酸应为，5μl和【检查】pH值应为5.5～7.5（中国药典2015年版四部通则0631）。
蛋白质取本品2ml，加30%磺基水杨酸溶液2ml，摇匀，不得发生混浊。
高分子量物质取本品，用流动相稀释并制成每1ml中含多肽1mg的溶液，作为供试品溶液。
取胰岛素（分子量5800）适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照溶液。
照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。
用凝胶色谱柱（如TSK GEL2000SW柱7.8mm×300mm，5μm或其他适宜的色谱柱）；流动相为三氟醋酸-乙腈-水（0.05:10:90）；检测波长为214nm。
理论板数按胰岛素峰计算不得低于3000。
取对照溶液适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含1μg的溶液，作为灵敏度溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，胰岛素峰高的信噪比应不小于10。
取对照溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
按面积归一化法计算，保留时间小于胰岛素峰的所有峰面积之和不得过3.0%。
氨基酸精密量取本品适量，照异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法（附件2）或其它适宜的氨基酸分析方法测定，以16种氨基酸（门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、盐酸赖氨酸）计，每1ml 中含游离氨基酸应为4.0～6.0mg，每1ml中水解氨基酸与游离氨基酸之差不得少于3.2mg。
生物活性取本品适量，照T细胞活性测定法-脱E受体法（附件1）测定，供试品测定管E玫瑰花结百分率与脱E受体胸腺T细胞对照管E玫瑰花结百分率之差不低于10.0%。
阿胶多肽的组成及功能研究进展
山东农业大学学报(自然科学版),2024,55(2):288-294Journal of Shandong Agricultural University ( Natural Science Edition )VOL.55 NO.2 2024 doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2024.02.019阿胶多肽的组成及功能研究进展陈瑛琪1，任世利2，刘广志3，王乐涛3，李明4，张翠翠4，朱明月1，史瑞瑞1，王超1*1. 济宁学院生命科学与工程学院，山东曲阜 2731552. 山东东阿润惠堂阿胶有限公司，山东东阿 2522003. 东阿县检验检测中心，山东东阿 2522004. 山东东阿东韵阿胶股份有限公司，山东东阿 252200摘要：文章综述了近年来阿胶多肽组成、性质和保健作用等方面取得的研究进展。
通过生物信息学研究发现，阿胶主要成分是Ⅰ型胶原蛋白（COLIα1、COLIα2）、Ⅱ型胶原蛋白（COLIIα1）和血清白蛋白（ALB）等大分子量蛋白质。
不同研究团队使用生物酶分解阿胶蛋白获得不同长度和种类的小分子量阿胶多肽序列。
动物实验表明：阿胶多肽在不同层级的免疫调节中发挥重要作用；阿胶多肽能够促进贫血小鼠外周血白细胞、红细胞和血红蛋白数量的升高；同时，不同阿胶多肽表现的抗氧化能力有显著差异；另外，阿胶多肽在降低血压、改善阿尔兹海默症、抑制肿瘤等方面发挥重要作用。
上述结果为今后研究阿胶多肽的产品研发和临床应用提供了重要理论依据。
关键词：阿胶；阿胶多肽；免疫调节；抗氧化；补血；抗肿瘤中图法分类号：Q51文献标识码： A文章编号：1000-2324（2024）02-0288-07 Research Progress on Composition and Function of Colla Corii Asini PolypeptideCHEN Ying-qi1, REN Shi-li2, LIU Guang-zhi3, WANG Le-tao3, LI Ming4, ZHANG Cui-cui4, ZHU Ming-yue1, SHI Rui-rui1, WANG Chao1*1. College of Life Science and Engineering, Jining University, Qufu 273155, China2. Shandong Dong'e Runhuitang Ejiao Co., Ltd, DongE 252200, China3. Dong'e County Inspection and Testing Center, DongE 252200, China4. Shandong Dong'e Dongyun Ejiao Co., Ltd, DongE 252200, ChinaAbstract: We reviewed the research progress of composition, properties and health function of Colla Corii Asini polypeptide recently. It is found that the main component of Colla Corii Asini is type I collagen (COLIα1, COLIα2), type II collagen (COLIIα1) and high molecular weight proteins such as serum albumin (ALB) through bioinformatics research. Different research teams use biological enzymes to digest Colla Corii Asini protein to obtain small molecular weight polypeptide sequences of different lengths and types. Animal experiments show that Colla Corii Asini polypeptides play an important role in different levels of immune regulation; polypeptide can promote the increase of leukocyte and erythrocyte and hemoglobin in peripheral blood of anemic mice. At the same time, the antioxidant capacity of different Colla Corii Asini polypeptides was significantly different; In addition, polypeptide plays an important role in lowering blood pressure, improving Alzheimer's disease, inhibiting tumor, etc. The above results provide an important theoretical basis for future research on product development and clinical application of Colla Corii Asini polypeptide.Keywords: Colla Corii Asini; Colla Corii Asini polypeptides; immune regulation; antioxidant; replenish blood; antitumor阿胶产业是医养健康产业的重要组成部分，山东阿胶产业在全国具有明显优势，产业规模占全国70%，在国内外影响力越来越大，已经成为山东省中医药和医养健康产业的名片［1］。
近年来海洋生物活性多肽的研究概况与探析（可编辑）
近年来海洋生物活性多肽的研究概况与探析维普资讯 ////0>.第卷第期. . .海洋通报年月.近年来海洋生物活性多肽的研究概况与展望于荣敏,严春艳,曲红艳,姚新生,暨南大学药学院,广东广州 ;沈阳药科大学,辽宁沈阳摘要:海洋是地球上资源最丰富的领域,海洋生物是新型肽类生物活性物质的重要来源。
科学研究证明,许多海洋多肽具有抗肿痛、抗艾滋病、抗真菌、抗病毒、防治心脑血管疾病及免疫调节等药理活性。
本文简要介绍了近来国内外对海洋生物活性肽的研究概况,并进行了概括性展望。
关键词:海洋;生物活性肽;研究概况:展望中图分类号:文献标识码: 文章编号:?海洋是地球上资源最丰富的领域,由于海洋生物物种的生态环境比陆生生物复杂得多,其赋予海洋生物的某些特异的化学结构是陆地生物体内尚未发现的,这使得海洋成为创新药物与功能性/保健食品的资源宝库。
自世纪年代以来,人们已经从海洋生物中分离出数万种新型化合物,包括肽类、蛋白质类、多糖类、生物碱类、萜类、大环聚酯类等类型。
海洋生物活性物质中肽类是数量最庞大的一类化合物,达数万种之多 ,包括海洋肽类毒素与海洋生物活性肽等。
生物活性肽是指有特殊生理活性的肽类。
现已证明,很多海洋肽类具有抗肿瘤、抗艾滋病、抗真菌、抗病毒及免疫调节等生理活性。
抗肿瘤多肽从海洋动物提取的化合物有 %具有抗癌活性,海洋植物提取物有. %具有抗癌和细胞毒活性。
其中抗癌多肽具有活性高、稳定性好等特点。
由于海洋生物生存的特定环境,海洋抗癌多肽的结构与陆生动植物肽糖肽有很大不同,多为小分子环肽.含有丰富的型氨基酸、羟基酸、新的氨基酸与氨基酸及噻酚、嗯唑环。
有的还含有烯键与炔键,这大大提高了肽的生物稳定性及生物利用度。
年,等从帕劳群岛的海洋藻青菌中分离得到了抗肿瘤活性很高的化合物 ,它最初是从海兔中获得的。
人们还从关岛和夏威夷的中分离得到了的化学类似物,结构中的 , 二甲基异亮氨酸基团为型氨基酸,并确定了它的立体化学结构。
多肽在生物医药和诊断试剂中的应用
多肽在生物医药和诊断试剂中的应用摘要：多肽是一种α-氨基酸肽键连接形成的化合物，属于蛋白质水解形成的中间产物，对皮肤与人体均可起到良好作用，可用于医学领域、化妆品等领域的物质。
医药领域主要是细胞因子模拟肽、抗菌性活性肽与诊断用多肽等，本文对多肽在生物医药和诊断试剂中的应用情况作综述，为临床实际应用提供参考。
关键词：多肽；生物医药；诊断试剂；应用多肽在医学领域的应用主要有抗氧化和调节免疫力、促皮肤愈合以及延缓衰老等，目前临床应用广泛的是多种生长因子模拟肽与抗菌性活性肽等，也有用于心血管疾病的多肽和其他药用小肽等。
诊断用多肽通常是作为抗原检测的抗体，多肽抗体常用于病毒与细胞、支原体以及螺旋体等微生物和寄生虫等抗体检测，有较强的特异性，尤其是制备简单，临床可以广泛应用，可推动医疗健康事业的进一步发展。
1、抗肿瘤多肽肿瘤组织的形成原因较多，但病理组织研究指出肿瘤与癌基因表达调控的情况有关，肿瘤不同则生成时的酶存在差异，有不同的调控因子，通常特异性小肽对肿瘤的调控因子能发挥作用，有封闭活性位点的作用，这样可以预防肿瘤组织的发生。
目前已知的肿瘤相关基因与肿瘤产生调控因子诸多，可以筛选和靶点特异结合的多肽，比如多肽可用于妇科恶性肿瘤治疗，蜂毒肽已证实对乳腺癌和卵巢癌等肿瘤有良好的治疗效果，天然环肽RA-V可以对人类的乳腺癌细胞起到杀伤效果，可能与这种多肽能阻断3-磷酸肌苷依赖性蛋白激酶1-丝氨酸/苏氨酸激酶相互作用有关，经此起到诱导细胞凋亡的效果。
多肽可获得良好的抗癌药物，主要的抗肿瘤机制是能对肿瘤细胞增殖起到抑制效果，也能阻止肿瘤血管的生成，对肿瘤细胞凋亡有诱导作用，可以激活患者的机体免疫反应，使机体的内环境稳定。
有研究指出海绵中分离提取的多肽hemiasterlins能与微管蛋白结合，起到微管解聚的阻止作用，使有丝分裂被影响，达到细胞增殖抑制作用，合成的多肽SA12对p16表达有上调作用，对细胞周期调控蛋白CDK4有下调作用。
猪脾转移因子的制备及临床应用_张祺嘉钰
米非司酮是一种新型的抗孕激素，它能与孕酮受体结合，对子宫内膜的孕酮受体具有较强的亲和力，对哺乳类动物的各期妊娠均能产生一定引产效应，常被用于临床上非手术性抗早孕治疗〔3〕。
随着近年来医疗水平的发展，也逐渐有人应用该药对异位妊娠进行治疗，但有关其治疗疗程和应用剂量始终各有不同。
虽然从其药理学角度来说，米非司酮完全可以做到药物流产，但要进行异位妊娠的治疗则需要多大剂量和多长疗程才能产生较高的治疗总有效率呢？针对这一问题，我院进行了本次实验性治疗研究。
研究表明，对照组在对血β-HCG水平没有严格限制而行保守治疗的情况下，治疗效果一般，而实验组中的A组、B组在一定程度上加大了米非司酮的剂量，一定程度上解除对对血β-HCG水平的限制但效果仍然不理想，与对照组相比并没有统计学意义（P＞0.05），而同样不加限制的实验C组由于施加了更大剂量的米非司酮却产生了较为令人满意的治疗效果。
由此可见，较大剂量的米非司酮对于临床上治疗异位妊娠具有较好的疗效。
那么问题来了，米非司酮治疗未破裂型宫外孕的安全性是否有可靠的保证，有文献资料表明人类1日2000mg米非司酮是相对安全的，故我们将实验C组的剂量提升到1日500mg。
通过实验可以看出，实验C组在前一周内的不良反应如乏力、水肿、皮疹等均处于患者可承受的范围之内，其诸如血尿常规、电解质、肾功能等常规指标也在治疗前后没有明显异变，仅个别患者肝脏的转氨酶有轻度升高，在随后的75mg/3.5d匀速减量治疗中该指标渐渐恢复，治疗后期加以得当的处理基本可控。
综上所述，较大剂量使用米非司酮治疗未破裂型异位妊娠的临床价值较高，有利于提高治愈率，缩短住院时间，改善患者临床症状，值得推广。
参考文献〔1〕陈芳芬.腹腔镜保守手术治疗未破裂型异位妊娠的疗效〔J〕.中外医学研究，2013（4）：29-30〔2〕丁贤红.不同保守方法治疗未破裂型异位妊娠的疗效及不良反应研究〔J〕.临床合理用药杂志，2013（30）：23-24.〔3〕马倩雯，郭荣.活血化瘀消癥方联合复方米非司酮治疗异位妊娠31例〔J〕.湖南中医杂志，2013（11）：61-63.猪脾转移因子的制备及临床应用张祺嘉钰，孙毅，刘正君，张钧华，郑琛（陕西中医学院咸阳712046）摘要：本文以健康猪脾为原料，采用pH值调节-超滤法制备脾转移因子。
脾多肽注射液全科讲课文档
产品概述
品 名 ： 脾多肽注射液 制备方法 ： 生物技术提取
原 料 ： 小牛脾脏
成 分 ： 多肽（分子量小于6000）、游离氨基酸、核酸、总糖 剂 型 ： 水针 规 格 ： 2ml/支
性 状 ： 淡黄色液体
批准文号 ： 国药准字H22026497 生产厂家 ： 万生联合制药有限公司
50 0
233 235
治疗前
226 151
治疗后
对照组 治疗组
对照组 治疗组
结果
1、血常规
实验组血常规治疗前后无明显变 化，而对照组治疗后血常规较治
疗前下降明显（P<0.05）
2、疗效
实验组对晚期大肠癌治疗总有 效率达46.67%，明显高于对照
组的20.00%（P<0.05%）
张金淑.脾多肽注射液联合FOLFOX方案治疗晚期大肠癌30例.中国医药指南.2010,30
结论：脾多肽可用于各种原因所致的血小板减少症，疗效显著
血小板计数明显升高。
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脾多肽注射液治疗慢性障碍性贫血
摘自《肿瘤》2009年6月第29卷第6期
对照组：环孢素A常规治疗（每天3-6mg/kg) 观察组：环孢素A+脾多肽注射液（10ml加入5%葡萄糖溶液500ml中静滴，1
发性血小板减少性紫癜、慢性口腔溃疡等 其 他：各种细胞免疫缺陷病
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牛脾肽对荷肝癌小鼠肿瘤生长抑制作用
实验结果：牛脾肽具有抑制肝癌细胞生长增殖的作用
基金项目:国家自然科学基金(30860327)
内蒙古医学院学报，2010年4月，第32卷第2期，191~195。
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胎盘多肽生物活性测定方法研究
胎盘多肽生物活性测定方法研究吴晓华【摘要】本文利用分光光度-白细胞黏附抑制实验测定胎盘多肽生物活性.结果表明,在抗原存在的情况下,实验组与对照组相比,白细胞黏附抑制率显著升高;此法准确、简便并具有良好的重复性,可以作为胎盘多肽活性的测定方法.【期刊名称】《宁夏农林科技》【年(卷),期】2017(058)002【总页数】3页(P37-39)【关键词】胎盘多肽;分光光度法;白细胞黏附抑制实验;生物活性【作者】吴晓华【作者单位】杭州师范大学生命科学研究院,浙江杭州 310036【正文语种】中文【中图分类】R927自1985年刘月新等[1]报道采用“匀浆-透析法”提取胎盘肽（又称胎盘因子、胎盘免疫调节因子）以来，广大科研工作者对胎盘因子进行了大量的理化分析和应用研究。
研究表明，胎盘肽是一种具有免疫调节功能的小分子多肽物质，其生物活性与转移因子相似，它具有调节免疫、延缓衰老、抗菌、抗病毒、降血脂等功能[2-3]，国内外许多科研机构将其应用于生物制药、保健品、化妆品、特殊食品等方面。
临床应用20多年来，胎盘肽在治疗病毒性肝炎、白细胞减少症、重症肌无力等免疫性疾病以及恶性肿瘤等方面也取得了较为理想的疗效[4-7]。
但其生物活性测定尚缺乏理想的方法，这不利于对胎盘肽的深入研究和质量控制。
笔者利用分光光度-白细胞黏附抑制实验（Leucocyte adherence inhibition，LAI）[8-11]检测胎盘多肽的生物活性，以期为胎盘多肽的进一步研究奠定基础。
1.1 实验材料1.1.1 胎盘因子批号依次为080424、080419、050104。
由中国辐射防护研究院提供，使用浓度为1 mg/mL。
1.1.2 实验动物小鼠，22～25 g/只，雌雄随机，由山西医学院提供。
1.1.3 试剂Hank's液，按文献 [12]方法配制，pH 7.2～7.4，不加酚红。
RPMI-1640，按文献[13-14]方法配制。
益脾健胃南极磷虾油多肽生物制品的制作流程
本技术公开了一种益脾健胃南极磷虾油多肽生物制品及其制备工艺，属于海洋生物技术领域。
本技术以南极磷虾油加工下脚料为原料，集成现代生物分离技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术，研制开发出具有显著益脾健胃保健功效的南极磷虾多肽生物制品，其中混菌好氧发酵菌种主要包括黑曲霉和枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌。
所得南极磷虾多肽具有较强的益脾健胃保健功效，提取液可根据应用途径做浓缩、吸附干燥、醇析或树脂纯化等处理，满足在保健、食品、医药等领域的高效利用。
该工艺技术简单高效、所得产品抗氧化能力和益脾健胃保健功效强，产品稳定性强，生产成本低，易于工业化规模生产。
权利要求书1.一种益脾健胃南极磷虾油多肽生物制品，其特征在于具体包括如下步骤：溶解：将南极磷虾油加工下脚料粉碎，加水搅拌至完全溶解；酶解：向溶解后的加入南极磷虾油加工下脚料质量比2～3%的复合蛋白酶，控温40～60℃条件下酶解4～8h；好氧发酵：向酶解后的酶解液中加入酶解液质量比2～3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条件下好氧发酵6～12h；厌氧发酵：好氧发酵结束后加入1～2%的两岐双歧杆菌粉，在28～35℃条件下厌氧发酵8～16h；过滤：进行粗过滤除去发酵菌体；灭酶：在100℃条件下灭酶10min；离心：以10000r/min速率离心分离，上清液即为南极磷虾多肽提取液。
2.根据权利要求1所述的一种益脾健胃南极磷虾油多肽生物制品，其特征在于所述步骤（1）中最佳加水比例为南极磷虾油加工下脚料：水=1:8。
3.根据权利要求1所述的一种益脾健胃南极磷虾油多肽生物制品，其特征在于所述南极磷虾油加工下脚料溶解过程中加入南极磷虾油加工下脚料量比2～3%的茯苓多糖。
4.根据权利要求1所述的一种益脾健胃南极磷虾油多肽生物制品，其特征在于所述步骤（2）中所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的组合，其质量比为2:1。
5.根据权利要求1所述的一种益脾健胃南极磷虾油多肽生物制品，其特征在于所述步骤（3）中所述复合微生物菌剂为黑曲霉和枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌的混合菌剂，其质量比组成为2:3:1。
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猪脾脏多肽的酶法制备及其生物活性研究
刘庆涛; 余蓉; 崔瑜霞; 马宇峰; 吴诚光; 杨继虞
【期刊名称】《《食品与药品》》
【年(卷),期】2010(012)003
【摘 要】目的探索酶解法制备猪脾脏多肽的最佳条件,检测所得产物的生物活性。
方法用胰酶酶解法、正交试验、甲醛滴定法考察最佳酶解条件,用乙醇沉淀法收集
多肽,并分别用Fe2+诱发卵黄脂蛋白多不饱和脂肪酸过氧化体系和纤维蛋白平板法
检测多肽的抗氧化活性和溶栓活性,CM-Sepharose离子交换层析纯化最佳酶解条
件下的脾多肽,利用SDS-PAGE电泳确定具备促凝活性的多肽分子片段相对分子质
量。结果最佳酶解条件为60℃,pH 7.0,加酶量6.0%,时间5.5 h;检测到脾多肽具备
抗氧化活性和促凝活性,经纯化后的脾多肽促凝时间比正常对照提前20 s。结论可
初步判断猪脾脏多肽在抗氧化和凝血方面有一定作用,且首次证实猪脾多肽具有凝
血功能。
【总页数】4页(P161-164)
【作 者】刘庆涛; 余蓉; 崔瑜霞; 马宇峰; 吴诚光; 杨继虞
【作者单位】四川大学 华西药学院生物制药教研室 四川 成都 610041
【正文语种】中 文
【中图分类】Q556
【相关文献】
1.蒙古绵羊脾脏多肽的酶法制备及体外抗氧化性能 [J], 德力格尔桑;韩杰;玛丽娜;
乌兰塔娜
2.猪脾脏多肽的酶法制备及其生物活性研究 [J], 刘庆涛;戴军;余蓉;徐佐旗;崔瑜霞;
赵婷;马宇峰;闫舒;吴诚光;仰榴青;杨继虞
3.新型脾脏生物多肽的制备工艺方法及免疫活性研究 [J], 林浩荣;陈绮婷;蔡肇栩;
臧林泉;
4.新型脾脏生物多肽的制备工艺方法及免疫活性研究 [J], 林浩荣;陈绮婷;蔡肇栩;
臧林泉
5.不同蛋白酶制备藜麦麸皮多肽及其活性研究 [J], 林冰洁;薛鹏;荆金金;张若愚;季
晓迎;韩彩静;张丰香
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