多肽类分析分离方法
多肽的分离纯化方法
多肽的分离纯化方法一、引言多肽是由氨基酸组成的生物大分子，其具有广泛的生物学功能和应用场景。
多肽的研究需要对其进行分离纯化，以获取高纯度的多肽样品。
本文将介绍多肽的分离纯化方法。
二、多肽的提取1. 细胞裂解法：将细胞裂解后，通过离心等方法去除细胞碎片和脂质等杂质，得到含有目标多肽的上清液。
2. 酸性水解法：将含有目标多肽的蛋白质样品加入酸性溶液中，在适当温度下进行水解反应，得到含有目标多肽的水解液。
三、分离方法1. 层析法：利用不同化学性质或大小形状等差异对混合物进行分离。
包括凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等。
2. 电泳法：利用电场作用下不同电荷或大小形状等差异对混合物进行分离。
包括SDS-PAGE、IEF等。
3. 薄层色谱法：将混合物均匀地涂在薄层色谱板上，通过不同的溶剂系统进行分离。
4. 超滤法：利用超滤膜对混合物进行筛选，根据分子量和形状等差异进行分离。
四、纯化方法1. 透析法：将混合物放入透析袋中，在适当条件下通过半透膜进行渗透扩散，去除杂质，得到目标多肽。
2. 再结晶法：通过溶液浓缩、结晶等步骤得到高纯度的多肽样品。
3. 活性剂法：利用表面活性剂或有机溶剂等对混合物进行解聚和去除杂质。
五、检测方法1. 比色法：利用多肽与某些化学试剂发生反应产生显色物质来检测多肽样品。
2. 质谱法：通过质谱仪对多肽样品进行检测，得到其分子量和组成信息。
3. 免疫学方法：利用特异性抗体对多肽样品进行检测。
六、结论多肽的分离纯化方法有很多种，选择合适的方法需要考虑到目标多肽的特性以及实验室条件等因素。
在分离纯化过程中，需要注意对样品的保护和操作的规范性，以获取高质量的多肽样品。
高效液相色谱在多肽分离分析中的应用
高效液相色谱在多肽分离分析中的应用李文龙;张慧;汤琦;高利龙;丛海林;于冰【摘要】多肽的高生物活性和低毒副作用使其成为近来国内外生命科学研究的热点,因此多肽的分离与分析也愈发的关键.高效液相色谱(HPLC)以其极高的分离效率和良好的选择性已经成为实验室和工业分离分析生物大分子最常用和有效的方法.本文主要介绍了HPLC以及一些新型色谱在多肽分析分离中的应用.%Polypeptide has become the focus of life science research at home and abroad because of its high bioactivity and low toxicity. High performance liquid chromatography(HPLC)with high separation efficiency and good selectivity has become the commonly used and the most effective method in laboratory and industrial separation and analysis of biological macromolecules. T his review mainly summarized the ap-plication of HPLC and some new chromatography techniques in the separation and analysis of polypep-tides.【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2018(000)001【总页数】5页(P63-67)【关键词】高效液相色谱;多肽;分离;分析【作者】李文龙;张慧;汤琦;高利龙;丛海林;于冰【作者单位】青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;纤维新材料与现代纺织国家重点实验室培育基地,青岛大学材料科学与工程学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;纤维新材料与现代纺织国家重点实验室培育基地,青岛大学材料科学与工程学院,青岛266071【正文语种】中文随着生物化学技术的不断发展，多肽因其独特而又高效的吸收机制和非常强的生物活性，而成为生化专家们所关注和研究的热门材料。
高效液相色谱法在合成多肽分离与纯化中的应用
HPLC在合成多肽分离与纯化中的应用杜雾晨摘要：固相肽合成（SPPS）技术是目前制备各种模式多肽和天然多肽类似物的最有效方法，但是最终产物的成分往往比较复杂，不经纯化难以用于蛋白质多肽的结构、功能和药理学研究。
近年来已出现了多种多肽及蛋白质的分离纯化技术，高效液相色谱法（HPLC）是目前分析纯化合成多肽的主要手段。
本文根据固相肽合成方法的原理及产物特点，对高效液相色谱法在分析纯化合成肽中的应用作了较为系统的评述。
关键词：固相肽合成；纯化；高效液相色谱法多肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,由一种或多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。
多肽是构成蛋白质的结构片段,也是蛋白质发挥作用的活性基团,是人体进行代谢、调控活动的重要物质。
蛋白质主要以多肽形式吸收,透过多肽既可深入研究蛋白质的性质,又为改变和合成新的蛋白质提供了基础材料。
研究多肽结构与功能的关系,有助于了解多肽中各氨基酸系列的功效,以便应用中设计尽可能短的多肽同时提高其生理活性,减少临床的不良反应。
多肽类药物在临床上显示了巨大的应用价值,受到药物化学家越来越多的重视,多肽药物的研究和开发成为国际新药技术领域竞争中的重要方面。
化学合成的肽产品是一个纯度不好的粗产品,其一是因为在合成肽过程中各种副反应、消旋化等造成的副反应肽,二是在脱保护过程中,由于保护基的残留,肽键的断裂、烷基化等造成的杂质。
杂质的分子结构与合成肽很相似,或许二者之间仅仅在某一个位置的氨基酸残基不同,或许二者之间的差异仅仅在某一氨基酸残基侧链上某一基团是否存在等等。
由于杂质与合成的肽在分子结构和化学性质上如此相似,就给肽的分离纯化带来了困难[1]。
因此,根据对目的肽的要求,需要选择适当的方法进行纯化。
高效液相色谱(HPLC)是生物技术中分离纯化的重要方法,在多肽、蛋白质的分离纯化工艺中显示出优异的性能。
而且,它已走出实验室投入到大规模的工业化生产中,成为生物技术X围内一有力高效的分离工具[2]。
多肽类分析分离方法
多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。
生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。
随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。
一些新方法、新思路的应用。
不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中。
本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展。
1 分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、电泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC 应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。
为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。
多肽提取方法范文
多肽提取方法范文
一、物理方法
1.机械破碎法：通过直接或间接机械破碎细胞的方法来提取多肽。
例如，高速均质机、高压均质机等可以破坏细胞膜来释放细胞内的多肽。
此外，也可以通过超声波处理或通过球磨仪来破坏细胞。
2.离心法：通过离心将细胞内容物与细胞壁分离，并将多肽富集在上
清液中。
离心速度和时间的选择应根据待提取的样品而定。
3.滤液法：通过使用滤膜来富集多肽。
细菌滤液、胰蛋白酶水解产物
等可以通过滤液法进行富集。
4.萃取法：使用有机溶剂或水溶液来提取多肽。
常用的有机溶剂有甲醇、醋酸乙酯、氯仿等。
二、化学方法
1.酸碱水解法：在酸或碱的条件下，将待提取样品进行水解，使多肽
从复合物或结合物中释放出来。
酸碱水解法适用于提取蛋白质或肽类物质。
2.酶解法：通过使用特定的酶来酶解待提取样品，使多肽释放出来。
例如，使用胰蛋白酶可以将蛋白质水解为多肽。
3.溶剂萃取法：使用有机溶剂或水溶液来提取多肽，然后通过蒸干或
浓缩溶剂来得到多肽。
例如，甲醇、乙腈等有机溶剂可以用于多肽的提取。
4.膜技术：通过使用膜分离技术（如逆渗透、超滤、渗析等），将多
肽与其他物质分离。
总结起来，多肽的提取方法包括物理方法和化学方法。
物理方法主要
包括机械破碎、离心、滤液和萃取等；化学方法主要包括酸碱水解、酶解、溶剂萃取以及膜技术等。
在实际操作中，根据待提取的多肽类型和样品特
点选择适合的提取方法，以获得高纯度和高产率的多肽。
多肽纯化分离方法和发展方向
多肽纯化分离方法和发展方向
多肽的浓度较低，成分复杂，尤其是杂质的理化性质和目标多肽十分相似，分离纯化比较困难。
虽然多肽纯化的方法繁多，但由于多肽大多数具有相似性，使用目前的纯化分离方法已经达不到理想的分离效果，而且都或多或少存在一定的弊端。
多肽纯化分离方法将朝着以下几个方面发展：
①根据多肽的种类和性质不同，组建多肽分离纯化方法数据库(包括:色谱、层析、电泳等方法)，收集多肽图谱，制作多肽分离纯化的预测软件，利于今后的分离纯化和对比分析;
②可选用载体先将目标多肽与载体结合转化为易分离的物质，分离出目标多肽后，再去掉载体获得多肽纯品;
③利用多种方法联用技术已显示出巨大的优越性。
特别是近年来，采用将多种技术联用分离纯化多肽取得一定进展。
德兰梅勒利用膜分离技术为生物制药、食品饮料、发酵行业、农产品深加工、植物提取、石油石化、环保水处理、空气除尘、化工等行业提供分离、纯化、浓缩的综合解决方案，满足不同客户的高度差异化需求。
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反相液相色谱对多肽的分离、纯化与制备
反相液相色谱对多肽的分离、纯化与制备作者：闫凤来源：《科学与财富》2017年第35期摘要：随着现代生物技术的发展，出现了各种多肽类药物，多肽在临床医学中有巨大的应用价值。
用反相高效液相色谱（RPLC）对两种化学合成多肽-32肽和21肽进行了分离、纯化和制备，能够提高多肽的纯度。
基于此，文章主要对多肽反相液相色谱法的分离、纯化与制备进行了简单的分析与研究。
关键词：多肽；反相液相；分离、纯化、制备引言多肽是氨基酸以肽链连接形成的化合物，其多肽在临床医学中有着较高的应用价值。
在现代化生物技术的影响下，多肽化学合成技术水平也在不断提升，但是，由于多肽化学合成的产物成分比较复杂，对其混合物进行分离提纯优化就显得格外重要。
只有对多肽化学产物进行分离提纯，才能提高多肽产物的纯度，保证多肽的药用价值。
1反相液相色谱法概述反相液相色谱法是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种，该方法具有柱效高、分离能力强、保留机理清楚等优点，对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析，反相液相色谱正受到越来越多的关注。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度，取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数，组分在固定相上的保留时间越长，固定相与流动相之间的极性差值越大。
而流动相为极性，固定相为非极性的液相色谱就是反相液相色谱。
2多肽反相液相色谱实验分析2.1实验仪器与试剂选择第一，实验仪器。
选用型号为SCL-10AVP液相色谱仪，该色谱仪包括系统控制器、LC-10ATVP色谱泵、进样阀、SPD-M10AVP二极管阵列检测器、CLASS-VP5.33色谱工作站。
色谱柱为200×4mmID的不锈钢管，用匀浆法装填德国进口Nucleosil4000-7C18反相色谱填料。
KQ-250型超声波清洗器、TLL-C台式冷冻离心机、E-Pure纯水器。
第二，试剂。
试剂选择色谱纯乙腈、三氟乙酸（TFA）、32肽、21肽粗品。
2.2实验方法将合成多肽粗品用含乙腈水溶液溶解后，离心，保留上清液，弃去沉淀。
一种动物多肽的提取方法
一种动物多肽的提取方法
有许多方法可以提取动物多肽，以下是一种常用的方法：
1.动物材料的准备：选择富含多肽的动物组织或器官，如脑、肺、肝脏等。
进行无菌处理和冷冻保存。
2.组织均质化：将动物组织切碎，加入适量的磷酸盐缓冲液，
使用高速均质机或超声波处理器将组织均质化，破碎细胞壁释放多肽。
3.离心分离：将均质化的混合物离心，去除固体残渣和细胞碎片，得到悬浮液。
4.酸性提取：向悬浮液中加入强酸（如三氟乙酸）调节pH值
为2-3，使多肽溶于水相，不溶于有机相。
5.溶剂萃取：向酸性溶液中加入有机溶剂（如乙醇、丙酮），
摇匀混合，使多肽转移到有机相中。
6.沉淀分离：将有机相离心分离，收集有机相中沉淀了的多肽，摄取上清液。
7.重复提取：重复以上几个步骤，直到多肽从水相转移到有机
相中的量已经不再明显增加。
8.制备纯化：对收集到的多肽进行纯化处理，如使用层析、电
泳等方法。
9.质量分析：对提取纯化后的多肽样品进行质谱分析等方法，确定多肽的序列和质量。
需要注意的是，动物多肽的提取方法可能因动物的不同而有所差异，具体的提取方法需要根据所研究的动物和多肽的特性来确定。
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多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。
生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。
随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。
一些新方法、新思路的应用。
不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中。
本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展。
1 分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、电泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC 应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。
为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。
同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。
肽图分析（Peptide Mapping）：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶[一般未肽链内切酶（endopeptidase）]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。
利用胰蛋白酶能特意性作用于Arg和Lys羧基端的肽链的性质，通过RP-HPLC法采用C18柱检测了重组人生长激素特征性胰肽图谱。
同时胰岛素的肽图经V8酶专一裂解也制得，并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾的不同种属来源的胰岛素。
人类肿瘤坏死因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线分析技术确定了肽图，便于鉴定分析。
此项技术已经在新药开发中得到广泛应用。
1.1.2 疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatogrphy，HIC）HIC是利用多肽中含有疏水基因，可与固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的目的，其比RP-GPLC具有较少使多肽变性的特点。
利用GIC分离生产激素（GH）产品的结构与活性比EP-GPLC分离的要稳定，活性较稳定。
Geng等利用HIC柱的低变性特点，将大肠杆菌表达出的经盐酸胍乙啶变性得到人重组干扰素-γ。
通过HIC柱纯化、折叠出高生物活性的产品。
不同人尿表皮生长因子（EGF）也利用HIC纯化到了，均具有良好的生物活性。
HIC可将未经离子交换柱的样品纯化。
而RP-HPLC则不能达到这一要求。
1.1.3 分子排阻色谱（Sizs-Exclusion chromatogrphy，SEC）SEC是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质，特别对一些较大的聚集态的分子更为方便，如人重组生长激素（hgH）的分离，不同结构、构型的GH 在SEC柱上分离行为完全不同，从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体，利用SEC研究修饰化的PEG的分离方法，此PEC具有半衰期长、作用强的特点。
一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。
1．1．4离子交换色谱（Iron-Exchange chromatography,IEXC）IEXC可在中性条件下，利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。
其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类，还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。
在多肽类物质的分离分析研究中，对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多，不同的多肽分离条件有所不同，特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。
Wu等报道利用离子交换柱层析法，探讨分离牛碳酸酐异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件，获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。
1．1．5膜蛋白色谱（Chromatography of Membrane Protein,CMP）CMP+分离强蔬水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。
羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量有关。
利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。
1．1．6高效置换色谱（High-Performance Displacement Chromatography,HPDC）HPDC是利用小分子高效置换剂来交换色谱柱上的样品，从而达到分离的目的。
它具有分离组分含量较少成分的特性。
利用HPDC鉴定分离了低于总量1%组分的活性人重组生长激素（rHG ）。
在研究非毒性交换剂时Jayarama发现硫酸化葡萄糖（Detran Sulfate，DS）是对β乳球蛋白A和B的良好置换剂，一般DS的相对分子质量为1×104和4×104最宜。
研究表明置换剂的相对分子质量越低，越易于与固定相结合，因此在分离相对分子质量小的多肽时，需要更小的置换剂才能将其置换纯化出来。
1.1.7 灌注层析（Perfusion Chromatography，PC）PC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，固定相孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。
试验证明其在生产、制备过程中具有低投入、高产出的特性。
目前市场上可供应的PC固定相种类较多，适合于不同分子量的多肽分离使用。
1.2 亲和层析（Affinity Chromatography，AC）AC是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲和性而分离物质的层析方法。
自1968年Cuatrecasas提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等等。
对多肽类物质分离目前主要应用其单抗或生物模拟配基与其亲和，这些配基由天然的，也有根据其结构人工合成的。
Patel等人利用一系列亲和柱分离纯化到了组织血浆纤维蛋白酶原激活剂蛋白多肽。
固定金属亲和层析（Immobilized Metal Affinity Chromatography.LMAC）是近年来发展起来的一种亲和方法。
其固定相基质上鳌合了一些金属离子，如Cu2+、Ni2+、Fe3+等，此柱可通过配为键鳌合侧链含有Lys、Met、Asp、Arg、Tyr、Glu 和His的多肽，特别是肽序列中含有His-X-X-X-His的结构最易结合到金属离子亲和柱上，纯化效果较好。
其中胰岛素样生长因子（Insylin Like Growth Factor，IGF）、二氢叶还原酶融合蛋白等均用此方法分离到纯度较高的产品。
Chaiken等人报道了另一种亲和层析方法，利用反义DNA表达产生，其与正链DNA 表达产生的肽或蛋白具有一定的亲和性，如Arg加压素受体复合物，已用此法分离得到。
DNA与蛋白、多肽复合物之间的作用也是生物亲和中常用的方法。
将人工合成的寡核苷酸结合在固定相基质上，将样品蛋白或多肽从柱中流过，与之结合可达到分离特定结构多肽的目的。
1.3 毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）--分离分析方法CE是在传统的电泳技术基础上于本世纪60年代末由Hjerten发明的，其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽，使电泳效率提高了几十倍。
此技术从80年代以来发展迅速，是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性多肽与蛋白类物质的有利工具。
CE根据应用原理不同可分为以下几种；毛细管区带电泳Capillary Zone electrophoresis，CZE）、毛细管等电聚焦电泳（Capillary Isoeletric Focusing，CIEF）毛细管凝胶电泳（CapillaryGelElectrophoresis，CGE）和胶束电动毛细管层析（Micellar Electokinetic Electrophoresis Chromatorgraphy,MECC）等。
1.3.1 毛细管区带电泳（Capillary Zone Electrophoresis，CZE）CZE分离多肽类物质主要是依据不同组分中的化合物所带电性决定，比传统凝胶电泳更准确。
目前存在于CZE分离分析多肽物质的主要问题是天然蛋白或肽易与毛细管硅胶柱上的硅醇发生反应，影响峰形与电泳时间，针对这些问题不少学者做了大量实验进行改进，如调节电池泳液的PH值，使与硅醇反应的极性基团减少；改进毛细管柱材料的组成，针对多肽性质的不同采取不同的CZE方法研究分离5个含9个氨基酸残基的小肽，确定了小肽分析的基本条件，即在低PH条件下，缓冲液中含有一定浓度的金属离子如Zn2+等，此时分离速度快而且准确。
1．3．2细管等电聚电泳（Capillary Isleletric Focusing,CIEF）由于不同的蛋白、多肽的等电点（PI）不同，因此在具有不同pH梯度的电泳槽中，其可在等电点pH条件下聚集沉淀下来，而与其他肽类分离开来。
CIEF在分离、分析混合多肽物质中应用不多，主要应用与不同来源的多肽异构体之间的分离，如对rHG不同异构体分离。
由于在CIEF柱表面覆盖物的不稳定性限制了此法的广泛应用。
1．3. 3毛细管凝胶电泳 (Capillary Gel Electrophoresis,CGE)CGE是基于分子筛原理，经十二烷基磺酸钠（SDS）处理的蛋白或多肽在电泳过程中主要靠分子形状、分子量不同而分离。