阿莫西林微生物限度检查步骤
药包材微生物限度检查操作规程
药包材微生物限度检查操作规程药包材微生物限度检查操作规程一、目的与范围为保障药包材的卫生质量，规范药包材微生物限度检查操作，本操作规程适用于药包材微生物限度检查。
二、术语与定义1. 药包材：指用于药品包装的材料，如玻璃瓶、铝箔、袋子等。
2. 微生物限度：指药包材中的微生物污染的数量不能超过一定的限度。
3. 检查样品：指从药包材中取样检查的样品。
三、操作流程1. 准备工作1.1 检查人员应在工作前进行手部消毒，并佩戴洁净工作服、帽子和口罩。
1.2 检查仪器设备应进行清洁和消毒，确保无污染。
1.3 首次使用检查样品前，应进行无菌处理。
2. 取样2.1 根据药包材的特点，选择合适的取样方法，如剪刀剪取、刮取等。
2.2 取样时应注意避免污染，避免手部和工具的直接接触。
2.3 取样应充分代表药包材的不同部位和不同批次。
3. 样品处理3.1 将取样的药包材放入无菌容器中，避免接触外界环境。
3.2 添加合适的培养基，保证微生物生长。
3.3 药包材中的微生物落菌数较多时，可对样品进行稀释处理。
4. 培养和观察4.1 将培养基接种完毕后，密封容器，确保无菌。
4.2 将培养基置于适宜的温度和湿度条件下培养。
4.3 观察培养基是否出现细菌、真菌等微生物的生长。
5. 计数和判断5.1 培养基培养一定时间后，根据培养基上的菌落形态、颜色等特征进行初步判断。
5.2 将培养基进行放大培养，使用显微镜观察细菌、真菌的形态和结构，进行进一步鉴定。
5.3 使用计数板对菌落进行计数，记录每种微生物的数量。
5.4 根据国家规定的微生物限度标准，判断样品是否合格。
6. 结果记录和分析6.1 将检查结果记录在相应的记录表中，包括药包材名称、样品编号、微生物种类和数量等信息。
6.2 对合格的样品进行合格认证，对不合格的样品进行处理和记录。
6.3 对不合格的样品进行原因分析，查明污染源，并采取相应的措施进行处理和纠正。
四、操作注意事项1. 所有操作应在洁净室中进行，避免外界空气和微生物的污染。
微生物限度检查——微生物总数检查(精)
菌数报告规则：需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌
总数测定宜选取平均菌落数小于 100cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。取最髙的平均
菌落数，计算lg、lml或10cm2供试品中所含的微生物数，取4位有效数字报告。如各稀 释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时， 以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
微生物总数检查
提纲
一、试验前准备 二、操作过程 三、结果判断 四、相关要求
一、试验前准备
1.取样
取样量 检验量 3-5倍的检验量 10g或10ml或100cm2；2个以上独立包装
2.无菌室的清洁与消毒
消毒剂：0.2%苯扎溴铵、75%乙醇等 消毒流程：自上而下、先里后外；开启紫外灯与空气过滤装置30分钟以上
3.供试品检查
（1）平皿法 平皿法包括倾注法和涂布法。 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌 数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。培养和计数：除另有规定外，胰酪大豆胨 琼脂培养基平板在 30 ～ 35 ℃培养箱中培养 3 ～ 5 天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在 20 ～ 25℃培养箱中培养5～7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报 告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落 数，按菌 数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平 板的菌落数不能相差1倍或以上。
菌数报告规则：以相当于lg、lml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌 落生长，以＜1 报告菌数（每张滤膜过滤lg、lml或10cm2供试品），或＜1乘以最低稀释 倍数的值报告菌数。
微生物限度检验操作规程
微生物限度检验操作规程微生物限度检验操作规程1.目的：建立微生物限度检验的基本操作，为检查人员提供正确的操作规程。
2.范围：本标准适用于化验室微生物限度检查。
3.责任：化验室检验操作人员对本规程的执行负责。
目录5.1实验条件 (2)5.2操作步骤 (2)5.2.1培养基的制备 (2)5.2.2实验前准备 (2)5.2.3供试品溶液的制备 (2)5.2.4检验方法 (3)5.2.5擦拭样的微生物限度检验 (4)5.2.6纯化水、注射用水的微生物限度检验 (4)5.3培养 (4)5.4菌落计数 (4)5.5菌数报告规则 (5)5.6控制菌检查 (5)5.6.1耐胆盐革兰阴性菌 (6)5.6.2大肠埃希菌 (6)5.6.3沙门菌 (6)5.6.4铜绿假单胞菌 (7)5.6.5金黄色葡萄球菌 (8)5.6.6梭菌 (8)5.6.7白色念珠菌 (9)5.7注意事项 (9)4.定义：4.1供试品：待测定微生物限度的样品包括原料、辅料、中间产品、包装材料等。
4.2CFU：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。
5.内容：5.1实验条件微生物限度检查应在环境洁净度C级下的局部洁净度A级的单向空气区域内进行，检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止交叉污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.2操作步骤5.2.1培养基的制备按《微生物培养基管理规程》的要求准备相应的培养基，也可用市售成品预灌装培养基。
5.2.2实验前准备操作人员按《物料进出洁净区卫生管理规程》的要求将物品、物料传入QC实验室洁净区。
5.2.3供试品溶液的制备5.2.3.1水溶性供试品无特殊规定时取10g或10mL供试品，加入适量pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨溶液或者其他合适的灭菌溶液，配制为1：10 的供试品溶液，也可以使用其他的配制比率。
如果样品具有抗菌活性，可以将灭活剂添加到稀释剂中。
如果供试品含菌量较大，则用相同的稀释剂按10倍递增稀释法准备1：10、1：102、 1：103等稀释级的供试液。
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程1 目的明确微生物限度检查-控制菌检查法的过程，保证产品质量。
2 适用范围检查非无菌制剂及其原、辅料等是否存在特定的微生物（如：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）, 从而判断是否符合相应的微生物限度标准。
3 定义无。
4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。
负责人：监督执行情况，审批最终结果。
5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。
5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.1.3 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
5.2 检验量从一批中随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合后，从中抽取10g或10mL。
5.3 实验材料与用具5.3.1 混合后的待检品（供试品）、TSB培养基（9mL/管）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；5.3.2 铜绿假单胞菌实验用材料：铜绿假单胞菌菌悬液（≤100cfu/mL）、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、1%二盐酸N,N-二甲基对苯二胺试液（即用即配）；5.3.3 金黄色葡萄球菌实验用材料：金黄色葡萄球菌菌悬液（≤100cfu/mL）、甘露醇氯化钠琼脂培养基；5.3.4 用具：培养皿、接种环、洁净滤纸片、无菌玻棒。
5.4 供试液制备5.4.1 取供试品和pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以1:10稀释成供试液。
5.4.2 必要时，用统一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释；也可用混合的供试品原液作为供试液。
5.5 增菌培养5.5.1 供试品组：取1mL供试液，接种至9mL的TSB中，混匀，共接种2管。
5.5.2 阳性对照：取1mL菌液，与供试液同法操作，接种至9mL的TSB中，混匀，接种1管。
5.5.3 阴性对照：取1mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，与供试液同法操作，接种至9mL 的TSB中，混匀，接种1管。
微生物限度检查操作规程(含表格)
微生物限度检查操作规程（ISO13485-2016/YYT0287-2017）1.0目的规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限检查符合ChP2015规定。
2.0适用范围适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。
3.0引用/参考文件ChP2015实用药品微生物检验检测技术指南《取样及留样管理规程》4.0职责质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS 调查。
5.0程序5.1仪器用具高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、三角瓶、培养皿、胶塞、移液枪、微型台秤或电子天平、微限检查虑架、酒精灯、镊子、0.22μm 滤膜等。
5.2培养基、稀释液及试剂（均已经121℃，15min灭菌处理）胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、pH7.0NaCl-蛋白胨缓冲液、无菌生理盐水、R2A琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基（TSB）、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等。
5.3检查5.3.1纯化水微生物限度检查5.3.1.1样品准备微生物QC手用75%酒精消毒后，将采样口周围进行消毒，打开采样口阀门使水自流至少5秒后用灭菌三角瓶或者无菌取样袋快速取样至少10ml。
打开阀门后在需要时仍可以使用消毒剂进行再次消毒后取样。
取样结束后，迅速用胶塞将三角瓶封口，装于取样箱内转移至微生物实验室进行检验，样品转移过程中特别注意污染防护。
样品如不能立即检测，可以在2-8℃条件下最长保存8h。
5.3.1.2实验室准备实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、传递窗紫外灯，保持30min。
5.3.1.3微限检查操作微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入实验室关闭紫外灯后准备开始试验。
微生物限度检查法
中华人民共和国药典2000版二部微生物限度检查法附录Ⅺ J 微生物限度检查法微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法,包括染菌量及控制菌的检查。
供试品应随机抽样。
一般抽样量为检验用量(2个以上最小包装单位)的3倍量。
检查的全过程,均应严格遵守无菌操作,严防再污染。
除另有规定外,本检查法中细菌培养温度为30~35℃,霉菌、酵母菌培养温度为25 ~28℃,控制菌培养温度为36℃±1℃。
检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。
培养基及其制备方法除另有规定外,培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。
1.营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法(附录Ⅺ H)2.玫瑰红钠琼脂培养基胨 5g 玫瑰红钠 0.0133g葡萄糖 10g 琼脂 15~20g磷酸二氢钾 1g 水 1000ml硫酸镁 0.5g除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装,灭菌。
3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨 10g 琼脂 15~20g酵母浸出粉 5g 水 1000ml葡萄糖 20g除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖,分装,灭菌。
4.胆盐乳糖培养基(BL)胨 20g 磷酸二氢钾 1.3g乳糖 5g 牛胆盐 1.3g氯化钠 5g (或去氧胆酸钠0.5g)磷酸氢二钾 4.0g 水 1000ml除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2, 煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,灭菌。
5.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基 100ml 曙红钠指示液 2ml20%乳糖溶液5ml 亚甲蓝指示液 1.3~1.6ml 取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液, 摇匀,倾注平皿。
6.麦康凯琼脂培养基(MacC)胨 20g 1%中性红指示液 3ml乳糖 10g 琼脂 15~20g牛胆盐 5g 水 1000ml氯化钠 5g除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程1 目的与适用范围本规程规定了微生物限度检查方法和操作要求。
本规程适用公司所需进行微生物限度的检查。
2 职责质量保证部负责本规程的实施。
3 内容3.1 引用标准：《中国药典》2010年版二部。
3.2 药品微生物限度检查法总则3.2.1 抽样3.2.1.1 供试品一般按批号随机抽样。
3.2.1.2 一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
3.2.1.3 抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应选有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。
3.2.2 供试品保存供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。
3.2.2.2 供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。
3.2.3 检验3.2.3.1 供试品检验项目按《中国药典》2010年版二部微生物限度标准确定。
3.2.3.2 检验的全过程，均应严格遵守无菌操作，严防再污染。
3.2.3.3 除另有规定外，供试品制备成供试液后，应在均匀状态取样。
3.2.3.4 制成供试液后，应该在60分钟内注皿操作完毕。
3.2.4 培养3.2.4.1 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。
3.2.5 复检3.2.5.1 菌数测定不合格者应复检，控制菌检查以一次检出为准，不再复试，但应保留检出菌株一个月备查。
3.2.5.2 复试项目以不合格项目为准，作单项复试。
3.2.5.3 复试需另取同批号样品，复试2次。
3.2.5.4 复试报告，以3次测定结果的平均值报告。
3.2.6 检验报告3.2.6.1 检验报告以1g、1ml或10cm2为单位。
3.2.6.2 测定菌数报告，依3.10.2.4菌数报告规则报告。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程1.目的建立一个微生物限度检查（包括细菌、霉菌、酵母菌）标准工作程序，规范QC微生物限度检查人员的微生物限度检查操作。
2.范围适用于本公司的细菌、霉菌、酵母菌的限度检测。
3.责任者QC微生物限度检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到微生物限度检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定微生物限度检查所需的容器具、试液、培养基等的项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行微生物限度检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
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阿莫西林微生物限度检查步骤
东南科仪
东南科仪工程师问您分享：
阿莫西林为抗细菌口服抗生素制剂，应检查霉菌每1g中不得超过100个，因其对铜绿假单胞菌无效，还应检查铜绿假单胞菌
一、使用设备：日本ALP CL-32L高压灭菌器（东南科仪提供），德国binder KBF恒温恒湿箱（东南科仪提供），离心机（kokusan提供），意大利VELP 均质器（东南科仪提供）
二、霉菌的检查
配制供试液:称取供试液10g。
置0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，用意大利VELP 均质器或其它方法进行混匀，作为供试液。
三、培养基使用前处理
采用日本ALP CL-32L高压灭菌器直接对琼脂培养基，使用器皿的高压灭菌。
四、预处理:可采用以下方法
1.稀释法:将供试液注入较大的培养集中，使该供试液稀释至不具抑菌作用的浓度。
2.离心沉淀集菌法：将规定量的供试液，离心（3000r/min）30min，留底部集菌液约2ml,再稀释成原规定量的的供试液，如有不溶性药渣，可离心（500r/min）5min,取全部上层液，再集菌处理。
3.薄膜过滤法：取定量供试液至稀释剂100mI中，摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm，孔径不大于0.15um±0.02um微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用稀释剂冲洗滤膜3次，每次50-100ml，取出滤膜备捡。
4.利用平皿菌落计数法，将供试液涂布在玫瑰红钠培养基上，在适宜的温度下进行培养，观察肉眼可见的霉菌菌落数。
五、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）的检查
检验程序：铜绿假单胞菌、分离、纯培养革兰氏染色镜检，及生化试验等步骤进行检查。
检查方祛:取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml，两份分别加入规定量的供试液，其中一份入对照菌液作为阳性对照，第3份加入与供试液等量的稀释液作为阴性对照。
培养18-24h阴性对照应无菌生长，其余2份培养液划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上培养18-24h, ;当阳性对照的平扳呈阳性菌落时，供试品的平板无菌落或无疑似菌落的生长，可判未检出铜绿假单胞菌。
铜绿假单胞菌典型菌落呈扁平，无定形，周边扩散，表而湿润，灰白色，周围时有蓝绿色扩散。
如生长菌落具有上述特征或疑似者，应挑选2-3个菌落，分别接种于营养琼脂养斜面上，培养18-24小时。
取培养物做革兰染色，并作氧化酶试验。
如革兰阴性杆菌、氧气酶试验阳性，及绿脓菌素试验阳性，可判检出铜绿假单胞菌。
绿脓菌素阴性的培养物，应继续做硝酸盐还原产气实验、42℃生长实验、明胶液化实验均为阳性时，应判检出铜绿假单胞菌。
附：日本ALP CL-32L高压灭菌器特点
1、CL-32L 高压灭菌器的显示屏、键盘及压力表在同一个斜面上，令操作和读数都同样方便。
键盘功能指
示明确，并可保留预设模式，一键start即可自动完成高压灭菌器的全部工作
2、快速锁盖杆可轻松地锁紧高压灭菌器的灭菌舱盖，自动铰链使拾起各放下舱盖都毫不费力。
3、双内锁装置确保高压灭菌器操作过程中舱盖的锁紧，并使温度保持安全范围内。
4、高压灭菌器的状态图像显示，可清晰显示当前的工作状态。
5、定时空气排出，确保高压灭菌器内纯蒸汽的灭菌环境。
6、可调自动蒸气排出，使高压灭菌器灭菌完后蒸汽慢慢地自动排出。
7、ALP生产的高压灭菌器专为处理培养基设计的保温及融化功能。
8、定时启动功能，可使高压灭菌器的灭菌工作按所需日期时间启动，使您随时可以开始工作。
9、记忆功能，高压灭菌器的使用工作程序即使在断电后也不丢失，重新接上电源，程序即可恢复。
10、多选功能，ALP CL-32L高压灭菌器满足各种工作需要：①热空气或真空干燥②样品温度探头使灭菌更为可靠③自动给水④预热功能可缩短升温时间，⑤冷却风机，缩短冷却时间⑥打印机⑦记录仪11、三种标准工作模式， CL-32L高压灭菌器组合加热、灭菌、排气、保温、融合等各步骤，适应液体、固体、废料、培养基等不同样品的处理需求。
增配干燥设置，即可提供带干燥的操作模式。