实验三 琼脂糖凝胶电泳

实验三琼脂糖凝胶电泳

一实验目的

1. 学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法

2.检测 DNA提取和PCR的结果

二实验原理

电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术。琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度，DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。

三实验材料、用具及试剂

提取的组织DNA和PCR产物

电泳仪，电泳槽，电子水平，移液器，枪头，三角瓶、点样板，微波炉等琼脂糖，TAE电泳缓冲液,EB，载样缓冲液（Loading buffer）

四、实验步骤

（一）制胶：

1.准备好凝胶成型器，插入成型梳。

2.将1g琼脂糖加至100 ml 50×TAE（98ml+2mlTAE）缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至60℃以下。

3.加入5ul溴化乙锭（终浓度0.5ug/ ml ）至熔化的琼脂糖液中混匀，但避免出现气泡。

4.将冷却的琼脂糖倒入凝胶成型器，制备凝胶。

（二）点样：

1.待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约20分钟），小心垂直向上拔出

梳子，将凝胶置入电泳槽中，加50×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm。

2.用移液器吸取2μl 的6X载样缓冲液于封口膜上，再加入5μl样品，混

匀后，小心加入点样孔。

3.接通电源，调节电压至80-100v，DNA从负极移到正极。电泳时间10-20

分钟。

4. 电泳结束，关掉电源。

（三）观察：紫外透射分析仪下观察，时间不要太久

五注意事项

1 倒胶时把握好胶的温度，不要高于60℃，否则温度太高会使制板变形

2 胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏点样孔

3 点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不要太多

4 EB有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，胶勿乱扔

5 紫外线照射不要太久

六作业

画出电泳图，分析观察到的结果