地衣芽孢杆菌原生质体的制备、再生及转化研究

地衣芽孢杆菌介绍

名称：地衣芽孢杆菌英文名：PWD一1 (Baclicus lincheniformis PWD一1）俗称：整肠生（地衣芽孢杆菌胶囊）种属：芽孢杆菌科细菌革兰氏染色性；为革兰氏阳性杆菌细胞大小：0．8μm×（1．5～3．5）μm细胞形态及特点：细胞形态和排列呈杆状、单生。

细胞内无聚-β-羟基丁酸盐（P HB）颗粒芽孢形态：产生近中生的椭圆状芽孢，孢囊稍膨大培养特性：在肉汁培养基上的菌落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，24h后菌落直径为3mm生化形状：本菌有动力地衣芽孢杆菌的作用机制是以菌治菌，活菌进入肠道后，对葡萄球菌、酵母样菌等致病菌有拮抗作用，而对双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化性链球菌有促进生长作用，从而可调整菌群失调达到治疗目的。

可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。

此外通过夺氧生物效应使肠道缺氧，有利于大量厌氧菌生长，造成肠道低氧环境，对肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化链球菌等有益健康的厌氧菌的生长繁殖有促进作用；对葡萄球菌、白色念球菌、酵母样菌等致病菌则有拮抗作用。

通过这种双重作用可以调整肠道菌群失调，维持机体肠道微生态平衡，从而对肠道疾病达到治疗和预防的目的。

【性状】地衣芽孢杆菌高纯粉≥250亿／克水分≤10％【主要用途】1、促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能；2、对肠道细菌感染具有特效，对轻型或重型急性肠炎，轻型及普通型的急性菌痢等，均有明显疗效；3、能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。

【适用对象】适用于细菌原因引起的肠道菌群失调症以及肠道需要保健的养殖动物。

【用法用量】添加在饲料中的量为：50～100克／吨（全价料），注意混合均匀。

凝结芽孢杆菌原生质体电转化方法的研究

凝结芽孢杆菌原生质体电转化方法的研究下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!Certainly! Here's a structured demonstration article based on the topic "Research on the Electroporation Method for Protoplast Transformation of Bacillus thuringiensis":研究概述本文旨在探讨凝结芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）原生质体电转化方法的研究进展及其应用。

原生质体的制备与再生毕业开题报告论文

淮阴工学院毕业设计(论文)开题报告学生姓名：严闯学号：1121602115专业：生物工程论文题目：Trichoderma asperelloides原生质体的制备与再生研究指导教师：方芳2016 年 2 月13 日毕业论文开题报告1．结合毕业设计（论文）课题情况，根据所查阅的文献资料，每人撰写2000字左右的文献综述文献综述1 引言原生质体概念：用水解酶将细胞壁水解剥离，剩下由原生质体膜包围着的原生质体部分称为原生质体（protoplast ）。

其形状随不同菌类而异。

原生质体基本保持原细胞结构、活性和功能，只是因为去掉了细胞壁，对渗透压和外界环境特别敏感。

为制备原生质体，必须有效地除去细胞外的细胞壁。

去壁的方法有机械法、非酶分离法和酶法。

实际工作中绝大多数采用酶法，时间短，效果好。

即用水解酶除去细胞壁，释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体的过程。

不同微生物种类其细胞壁结构和化学组成不同，酶解处理的有效酶也不一样，因此要根据微生物种类特性选择合适的酶。

本次实验是针对Trichoderma asperelloide的，所以选取的是蜗牛酶，溶菌酶，纤维素酶[1]。

Trichoderma asperelloides是从棘孢木霉中分出的新种，它与木霉属、曲霉属等形态学基本没有区别，但分子序列标记不同。

目前国内少见该菌种的报告，但是有关该菌种产纤维素酶的报道。

研究表明该菌种能较好地利用农业废弃物为底物生产纤维素酶，并利用紫外、微波对该菌株进行了复合诱变，选育出一株产酶活力高的突变菌株Trichoderma asperelloides ZWWB1。

但是影响纤维素酶产量和活力的因素，除菌种外，还有发酵基质、温度、pH、水分及发酵时间等；同时还有纤维素酶的生产方式。

另外Trichoderma asperelloide是一种广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤的一个常见菌种。

Trichoderma asperelloide是重要的发酵工业菌种，在工业酶制剂、有机酸发酵方面被广泛应用，此菌有很强的纤维素霉及纤维,二糖淀粉酶等,它能利于农副产品,如麦杆,木材,木屑等纤维素原料,使之转变为糖质原料[2]。

枯草芽孢杆菌Snb2原生质体制备和再生研究

烘干，重。采用干重法测定菌体生长量，制生长曲线。称绘
１２不同青霉素及甘氨酸浓度试验．．２通过干重法测定在培养液中含有不同浓度的青霉素和甘氨酸对菌体生长量的影响。在５ｒＬ的基础培养液中接入ＳｂＯａｎ２种子液５，入不等体积的青霉素母液至终浓度为０１，ｍＬ加．％
手段之～。已有多项研究采用原生质体融合的方法改造芽孢杆菌ｌ５。本研究选用对大豆胞曩线虫具有较强生
物活性的枯草芽孢杆菌Ｉ对其原生质体的制备和再生条件进行研究，活性菌株的遗传改良ｒ作奠定基础。砌，为］二
１材料与方法
ＷＡＧＹａ－ｕｎ，ＤＡｕｘ，ＣＥｉｉ，ＺＵＸａ－ｅｇＮｕｎｙａＵＮＹ＿ｉＨＮＬ－ｅＨｉｏｆｎｂｊ
ａｏｌｇｆＢｏｇａＳｉｃｎｅｈｏｏｙｂｏｌｇｆＰａｔＰｏｅｔｎｈｎａｇＡｒｕｔｒｌＵｉｒｔ，ｈｎａｇ１０６，ｈｎ）．ｌｅｏｉｌｉｌｃｅｅａｄＴｃｎｌｇ，．Ｃｌｅｏｌｎｒｔｃｉ，ＳｅｙｎｇｉｌａｎｖｓｙＳｅｙｎ１１ＣｉａＣｅｏｃｎｅｏｃｕｅｉ１
枯草芽孢杆菌Ｓｂｎ２原生质体制备和再生研究
王媛媛，玉玺，段陈立杰，晓峰朱
（阳农业大学ａ生物科学技术学院，．物保护学院。阳１０６）沈．ｂ植沈１１１

地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法

ＴＡＮＧｅｍｉｇＳＡＯｅ—ａＷＡＮＧｈｎ－ｉｎ，ＦａｇＨｕ— ｉｇ，ＺＨＵＧＥｉｎＸｕ — ｎ，ＨＷｉｌｎ，ＺｅｇｘａｇｎｉｎｙＪａ
（ｅＫｅｂｒｔｒｆＩｄｓｒｌＢｉｔｃｎｌｇ，ＭｉｉｔｙｏｕａｉｎｏｔｅｎＹａｇｚＴｈｙＬａｏａｏｙｏｎｕｔｉｏｅｈｏｏｙａｎｓｒｆＥｄｃｔｏ，ＳｕｈｒｎｔｅＵｎｉｅｓｙｖｒｉ，Ｗｕｉ１０６，Ｃｈｎ）ｔｘ４３２ｉａ
（南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡２４３）江１０６
摘要：通过体外处理诱导地衣芽抱杆菌产生感受态性能，同时调整参数，立了感受态细胞对质建
粒ｐＡＰＲ的高效电转化方法．质粒ＤＮＡ为１５ｇｍＬ、化时电压为１７０Ｖ时，得到２１个当．／转５可６
Ｎｏ．５２００２
文章编号：０９—０８２０）５—０６１０３Ｘ（０２０４０—０４
地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法
唐雪明，邵蔚蓝，王正祥，方惠英，诸葛健
ｒｍｅｅｓａｍｅｈｏｆｈｉｈｅｆｃｅｃｌｃｒｔａｆｒａｉｎｆｒｐｌｓｉａｔｒ，ｔｄｏｇｆｉｉｎｙｅｅｔｏｒｎｓｏｍｔｏｏａｍｄｐＡＰＲｓｅｔｌｈｄｗａｓａｂｉｅｓ

地衣芽孢杆菌的分离和鉴定

地衣芽孢杆菌的分离和鉴定作者：布帕提买木·麦麦提潘姣姣阿迪莱·卡哈曼伍麦尔·麦海提陈荟旭张秋林李莲瑞来源：《农业与技术》2020年第17期摘要：为了從土壤中分离得到地衣芽孢杆菌，开展后续研究，试验采集塔里木盆地的土壤进行细菌培养，采用台盼蓝平板方法，对分离培养得到的单菌落进行生物学特性研究、生理生化试验和16S rDNA鉴定。

根据《伯杰细菌鉴定手册》，初步鉴定为芽孢杆菌，提取DNA 进行PCR扩增并送测序。

结果表明，从塔里木盆地土壤中分离得到的细菌为地衣芽孢杆菌，说明该土壤中存在地衣芽孢杆菌，并为后续进一步研究及应用奠定基础。

关键词：土壤;分离和鉴定;16S rDNA;地衣芽孢杆菌中图分类号：S-3文献标识码：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20200915005收稿日期：2020-08-17基金项目：大学生创新项目（项目编号：201810757029）作者简介：布帕提买木·麦麦提（1996-），女，硕士在读。

研究方向：动物性食品卫生与安全;通信作者李莲瑞（1968-），女，博士，教授。

研究方向：动物性食品卫生与安全。

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为革兰氏阳性菌，广泛分布于微生物混合培养物中[1]。

呈杆状，芽孢为椭圆形，孢囊稍膨大，为非致病性菌，细菌最适生长温度约为50℃，酶的最适生长温度为37℃。

地衣芽胞杆菌耐热、含酶量多、产酶量高的优良特性被广泛应用于工业生产中，主要用来生产淀粉酶[2]及蛋白酶[3]。

芽孢杆菌具有耐酸、耐盐、耐高温等特点，这使得其可以在条件不利的情况下形成芽孢，自我保护，并在环境适宜的条件下复活。

地衣芽孢杆菌在代谢过程中能产生多种酶和活性物质，具有益生保健[4]，降解农药[5]和净化水体[6]的作用。

为了解塔里木盆地土壤中是否存在地衣芽孢杆菌，本试验从塔里木盆地的1份土壤中筛选出1株镜检有芽孢的单菌落，对该菌株进行分离纯化，经过生理生化实验鉴定、16S rDNA基因测序，最终鉴定为地衣芽孢杆菌，且为后续开展地衣芽孢杆菌的应用研究奠定基础。

原生质体制备与融合

Thanks!
• 渗透压稳定剂对原生质体制备的影响
细胞壁脱去后，原生质体必须在高渗环境中保存及生长，否则会因为渗透压而破裂。因此，渗透压稳定剂也是影响原生质体制备的重要因素。
0.5% 纤维素酶+1mol/L 的山梨醇处理Lecanicillium sp.
高倍显微镜下酶解前 Lecanicillium sp. 菌丝
混合酶液处理 Lecanicillium sp. 制得原生质体（×200）
原生质体的融合
原生质体的融合的不同产物
电诱导融合法：短时间强电场作用，质膜发生可逆性电击穿，促使原生质体融合
原生质体融合的方法
激光诱导融合法：让原生质体先紧密贴在一起，后用激光对接触处照射，使细胞融合
化学诱导融合法
• 酶解时间、温度、pH值对原生质体制备的影响
酶解时间的长短直接影响原生质化的效果，处理时间过短，脱壁不完全，处理时间过长，会导致原生质体脱水皱缩，再生率显著降低。而且不同的的酶都有各自的最适酶解温度。酶解时温度选择的原则是既有利于原生质化，又能防止原生质体被破坏。酶解时的pH值随酶和物种有一定的差异，需根据实际情况对pH值进行优化。
影响原生质体融合的因素
• 无机离子对原生质体融合的影响
原生质体融合过程中需要一定量的Ca2+和Mg2+促进融合，而 K+、Na+会显著降低融合率。
• 融合剂PEG对原生质体融合的影响
仅将原生质体混合在一起融合率并不高，需要添加融合剂来提高融合率。PEG较常使用。PEG的相对分子质量和浓度高低对融合都有较大的影响。PEG浓度过高会导致原生质体皱缩甚至是中毒，过低导致原生质体破裂。
融合子的筛选

嗜酸乳杆菌-地衣芽孢杆菌融合子的制备工艺优化

嗜酸乳杆菌-地衣芽孢杆菌融合子的制备工艺优化高媛惠1,2,马林峰2,霍乃蕊2（1.太原海关技术中心，山西太原030024；2.山西农业大学动物医学学院，山西太谷030801）摘要:研究旨在优化嗜酸乳杆菌和地衣芽孢杆菌的原生质体制备工艺来获得融合子，为产芽孢乳酸菌的育种和改良提供新的思路。

通过单因素试验考察菌龄、溶菌酶浓度、酶解温度和时间对原生质体形成率和再生率的影响，并在此基础上，以原生质体形成率为指标，通过正交试验优化原生质体制备工艺。

结果表明，菌龄和酶解时间对原生质体形成率影响较大，其次为酶解温度和溶菌酶浓度。

嗜酸乳杆菌原生质体制备的最优工艺为取培养12h 的对数生长中后期菌体用5.0mg/mL 溶菌酶37℃酶解30min ；地衣芽孢杆菌则取培养8h （对数生长中后期）的菌体用2.5mg/mL 溶菌酶37℃酶解3h 。

在上述条件下制备亲代细胞的原生质体，以PEG6000促融，嗜酸乳杆菌和地衣芽孢杆菌的原生质体融合率分别为4.6×10-6和3.8×10-6。

原生质体制备工艺的优化是嗜酸乳杆菌-地衣芽孢杆菌融合子制备及获得高融合率的关键，融合子的获得可为筛选既能形成芽孢又可产蛋白酶和淀粉酶的高性能乳酸菌菌株奠定基础。

关键词:嗜酸乳杆菌；地衣芽孢杆菌；原生质体融合；产芽孢乳酸菌中图分类号:Q813.2文献标识码:A文章编号:1002-2481（2021）02-0121-05Optimization of the Technique for the Preparation of the Fusant ofLactobacillus acidophilus and Bacillus licheniformisGAO Yuanhui 1，2，MA Linfeng 2，HUO Nairui 2（1.Technical Center of Taiyuan Customs of the People's Republic of China ，Taiyuan 030024，China ；2.College of Veterinary Medicine ，Shanxi Agricultural University ，Taigu 030801，China ）Abstract ：The study aimed to optimize the protoplast preparation technology of Lactobacillus acidophilus and Bacillus licheniformis to obtain the fusants,so as to provide new strategy for breeding and modification of spore-producing lactobacillus.The effects of bacterial culture time,lysozyme concentration,enzymolysis temperature and time on protoplast formation rate and regeneration rate were investigated by single factor test.On this basis,the protoplast formation rate was taken as the index,the protoplast preparation process was optimized by orthogonal test.The results showed that bacterial culture time and enzymolysis time had the greatest influenceon the formation rate of protoplast,followed by enzymolysis temperature and lysozyme concentration.The optimal protoplast preparation process of Lactobacillus acidophilus was as follows ：the medium-late period bacteria,cultured for 12h,was hydrolyzed with 5.0mg/mL lysozyme at 37℃for 30min,and Bacillus licheniformis of the same period cultured for 8h was hydrolyzed with 2.5mg/mL lysozyme at 37℃for 3h.Under the above conditions,protoplasts were prepared and fused with PEG6000.The protoplast fusion rates of Lactobacillus acidophilus and Bacillus licheniformis were 4.6×10-6and 3.8×10-6,respectively.The optimization of the technology of protoplast preparation was critical both for the fusion of Lactobacillus acidophilus and Bacillus licheniformis .The fusants obtained laid a foundation for the screening of spore-producing lactic acid bacteria with the high capacity to produce protease and amylase.Key words ：Lactobacillus acidophilus ;Bacillus licheniformis ;protoplast fusion;spore-producing lactobacillus收稿日期:2020-09-30基金项目:山西省重点研发计划项目（201803D221023-4；201803D221024-2）作者简介:高媛惠（1988-），女，山西太原人，中级工程师，主要从事食品微生物研究工作。