免疫荧光技术在肾活检病理诊断中的应用研究
肾活检120例临床与病理观察
资料 与方 法 ２０ ０ ４年 １月 一 ００年 １月 收 治 因 各 ２１
本组资 料 显示 ： 超 声 引导 的 肾活 用 检 ， 得 有 效 肾 组 织 的 成 功 率 是 获 ９ ．３ 。 出血 是 最 主 要 的 并 发 症 ， 镜 ８３％ 但 下血尿 、 肉眼血尿及。 膜下出血通常是 肾包 自限性 的， 无明显症 状。经皮 超声引导下 肾穿刺活检 术风 险小 ， 并发症 少 ， 成功 率 高是诊断 肾脏病必不可少 的手段 Ｌ 。 １ ｊ 肾活检病理检查对 明确诊断 、 指导治 疗、 判断预后 有重要 的临床意义。本文资 料 肾活检病例 １８例 ， 中原发性 肾小球 １ 其 疾病 占 ７ ． １ ， Ｉ 肾病 和 系膜增 生 ８８％ 以 ｇ Ａ 性 肾 小 球 。 炎 多 见 ， 别 占 ３．０ 、 肾 分 ２ ２％ ２ ．６ ， ９ ６ ％ 继发性 肾小 球疾病 占 １． ５ ， ６９％ 以狼疮性 肾炎最 多见 。通 过 肾活检修 正 参考文献
１。
发症。修 正原有诊 断 ３ ．４ ； 发性 肾 ４７％ 原
小 球 疾 病 以 ＩＡ 肾 病 最 为 常 见 ｇ ， （ ２ ２ ％ ） 继发 性 肾 小 球 疾 病 以 狼 疮 性 ３． ０ ， 肾 炎 为 主 （ ．７ ） 结 论 ： 皮 超 声 引 ８４％ 。 经 导下肾穿刺活检 术风 险 小， 并发 症 少， 是
竭等 ， 为肾穿刺活检的适应证 。术前常规 检查 血小板 计数 、 出凝血 时间 、 凝血 酶原 时间正常， Ｂ超显示肾脏大小基 本正常 。 方法 ： 患者腹 下垫枕 头 ｊ 用超 声再 ，
次检查确定 施术 肾 的位 置 、 外形 、 小及 大 实质 与集合 部 的厚 度 （ 因检查 施 术方 便 首选 右 肾为 穿 刺 对 象 ） 。常 规 消 毒 、 铺 巾 ，％利多卡 ， 确定穿刺针 已推进至右 。 肾下极 肾包膜处 嘱患者屏气 ， 发射 自动活
多色免疫荧光技术
多色免疫荧光技术
多色免疫荧光技术是一种基于免疫学原理的荧光显微技术，能够同时检测多种不同的蛋白质或分子，通过将不同颜色的荧光标记与不同分子或蛋白质结合，实现在同一细胞或组织中多种成分的高效鉴定和定位。
多色免疫荧光技术在细胞学、病理学以及生物医学研究中有着广泛的应用。
例如，在研究细胞信号传递、基因表达、蛋白质定位等方面，多色免疫荧光技术可以提供高分辨率、高灵敏度的成像数据；在诊断疾病时，多色免疫荧光技术可以帮助医生更准确地定位病灶。
多色免疫荧光技术的发展离不开荧光探针的不断创新和改进，目前已经出现了许多基于荧光蛋白的标记技术，如GFP、RFP、YFP等。
同时，高通量荧光显微技术的出现也为多色免疫荧光技术的应用提供了更大的空间和可能性。
总之，多色免疫荧光技术的出现和发展为细胞生物学研究和医学诊疗提供了强有力的工具和手段，也为生命科学领域的进一步发展带来了更广阔的前景。
- 1 -。
肾活检病理检查及肾脏病理基础知识
通过定期进行肾活检病理检查，可以监测肾脏疾病的进展情况，及 时发现病情变化。
预测预后
肾活检病理检查结果可以预测患者的预后情况，有助于医生制定合 适的治疗计划和患者自我管理方案。
指导治疗
根据肾活检病理检查结果，医生可以评估患者的预后情况，指导患 者采取合适的治疗措施，提高治疗效果和生活质量。
对肾脏疾病的治疗指导
制定治疗方案
01
根据肾活检病理检查结果，医生可以制定针对性的治疗方案，
提高治疗效果。
调整治疗方案
02
在治疗过程中，通过肾活检病理检查可以评估治疗效果，及时
调整治疗方案，提高治疗效率。
预测治疗效果
03
肾活检病理检查结果可以预测疾病的治疗效果和预后，有助于
医生制定合适的治疗计划。
对肾脏疾病预后的评估
06
肾活检病理检查的局限 性及展望
肾活检的局限性
01
02
03
样本误差
并发症风险
诊断准确性
肾活检只能获取肾脏的部分组织， 可能无法全面反映肾脏的整体病 变情况。
肾活检是一种有创性检查，存在 一定的并发症风险，如出血、感 染等。
由于病理医生的主观判断和经验 差异，肾活检的诊断准确性可能 受到影响。
未来发展方向与展望
血管病变
包括肾动脉硬化、肾静脉 血栓形成等，对肾脏疾病 的发展和预后有一定影响。
肾脏病理的诊断方法
光学显微镜检查
免疫荧光检查
通过观察肾脏组织的光学显微镜，可 以对肾脏疾病的病理变化进行初步诊 断。
通过观察肾脏组织的免疫荧光染色， 可以对肾脏疾病的免疫学特征进行诊 断。
电子显微镜检查
通过观察肾脏组织的超微结构，可以 对肾脏疾病的病理变化进行更深入的 诊断。
免疫组化,免疫荧光
免疫组化,免疫荧光
免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光（Immunofluorescence，简称IF）是常用于研究细胞和组织中蛋白质分布和定位的实验技术。
免疫组化：免疫组化是通过使用特异性抗体来检测和定位组织切片中特定蛋白质的技术。
它包括将组织切片与特异性抗体结合，然后使用染色试剂使抗原-抗体复合物形成染色反应，从而可视化目标蛋白质的位置。
该技术常用于研究细胞分化、组织病理学和肿瘤学等领域。
免疫荧光：免疫荧光是利用荧光染料（荧光标记的二抗或直接标记的一抗）结合目标抗原的方法来检测和定位组织或细胞中的蛋白质。
通过特异性的抗体与目标蛋白质结合，然后使用荧光标记的二抗或直接标记的一抗与抗原-抗体复合物结合，使目标蛋白质在显微镜下产生荧光信号，以观察其位置。
免疫荧光技术广泛应用于细胞生物学研究、免疫学和医学诊断领域。
这两种技术在原理上非常类似，但在应用上有一些区别。
免疫组化主要用于固定的组织切片，可用于定量和定位分析。
而免疫荧光通常用于固定的细胞，可以提供更高分辨率的蛋白质定位信息，并可以进行多色荧光共标记以研究多个蛋白质的相互作用和定位。
无论是免疫组化还是免疫荧光，都依赖于合适的抗体选择和样本处理步骤来确保结果的准确性。
技术的选择应根据研究
的目的和样本的性质进行评估和决策。
肾活检病理报告
肾活检病理报告1. 患者信息•姓名：XXX•年龄：X岁•性别：X•就诊日期：XXXX年XX月XX日2. 检查结果2.1 肾脏病理类型根据肾活检结果，患者被诊断为以下肾脏病理类型之一：•病理类型1•病理类型2•病理类型32.2 肾小球病变在肾小球的病理检查中，我们观察到以下情况：•肾小球数量：正常/异常•肾小球体积：正常/异常•肾小球结构：正常/异常2.3 肾小管和间质在肾小管和间质的病理检查中，我们观察到以下情况：•肾小管：正常/异常•肾小管间质：正常/异常•其他发现：（额外的病理变化描述）2.4 免疫荧光染色免疫荧光染色结果如下：•IgA阴性/阳性•IgG阴性/阳性•IgM阴性/阳性•C3阴性/阳性•其他免疫染色结果3. 诊断和建议3.1 诊断基于以上的肾活检病理报告结果和免疫荧光染色结果，我们对患者的肾脏疾病做出如下诊断：•主要诊断：•次要诊断：3.2 相关指标分析根据患者的病理结果和临床表现，我们分析了以下指标：•肌酐：X mg/dl•血尿素氮（BUN）：X mg/dl•尿蛋白定量：X mg/24h•其他相关指标3.3 治疗建议为了控制和改善患者的肾脏疾病，我们建议采取以下治疗措施：•药物治疗：根据病理诊断和具体病情，选择适当的药物进行治疗。
•饮食控制：建议患者控制蛋白摄入量、限制盐分摄入等。
•生活方式调整：提醒患者戒烟、戒酒，保持良好的作息和适度的运动。
•定期复查：建议患者定期进行相关检查，以监测疾病的进展和调整治疗方案。
4. 注意事项在治疗和康复过程中，我们需要患者及家属注意以下事项：•定期复诊：请患者按时前往医院复诊，与医生沟通病情和治疗效果。
•药物使用：请患者按医嘱正确使用药物，遵守用药时间和剂量的规定，如有疑问请及时咨询医生。
•饮食调理：请患者遵循医生的饮食建议，合理搭配饮食，尽量避免摄入对肾脏不利的食物。
•注意保暖：请患者避免寒冷环境，及时增加衣物，以防感染或恶化病情。
以上为肾活检病理报告及相关建议，仅供参考。
PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体会
PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体
会
李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2014(30)6
【摘要】经皮肾穿刺活检病理诊断是当今肾脏病理学的重要组成部分，是肾脏疾病诊断必不可少的检查方法。
肾穿刺活检病理检查主要包括常规HE染色、特殊染色（PAS染色、PASM染色、Masson染色和刚果红染色）、免疫组化染色或免疫荧光染色以及电镜检查。
【总页数】2页(P693-694)
【作者】李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇
【作者单位】南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025
【正文语种】中文
【中图分类】R361.2
【相关文献】
1.肾穿刺活检电镜检查组织标本肾小球定位技术的应用与体会 [J], 黄远洁;孟春梅;莫肖敏;李卫东;成晓静;郑华;王明军
2.4种特殊染色法在肝脏穿刺活检病理学检查中的应用比较 [J], 李萍;丛玲华;钟国
平;王玲娣
3.宫颈特殊染色法上皮组织特殊染色液在宫颈病变检查中的临床意义 [J], 张朝红;黄玮;薛晓玲;王兰妮;孙晓丽
4.PASM-Masson套染在肾穿刺活检中的应用 [J], 喻宏; 孙炎; 李晓星; 苟继周; 罗伟仁
5.宫颈特殊染色法在宫颈高级别鳞状上皮内病变及以上病变筛查中的应用价值 [J], 石鑫;冯力民;马秀华;宋风丽;史伟;贺笑茜;郅玲玲;于帅;马丽丽;高万里
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免疫荧光技术课件PPT课件
蛋白质相互作用研究
总结词
免疫荧光技术可用于研究蛋白质之间的 相互作用，揭示生命活动的分子机制。
VS
详细描述
利用两种不同颜色的荧光标记抗体分别与 两种蛋白质结合，通过荧光共振能量转移 等技术，可以观察到两种蛋白质在空间上 的接近程度，从而推断它们之间的相互作 用。
药物筛选与开发
总结词
免疫荧光技术可用于药物筛选和开发过程中，评估药物对细胞或组织的影响。
多模态成像融合
将免疫荧光技术与光声成像、光学相干成像等其他成像技 术融合，实现多模态、多维度的生物分子成像，将有助于 更全面地了解生物样本的结构和功能。
临床应用转化
加强免疫荧光技术的临床应用研究，将其应用于疾病的早 期诊断、疗效评估和预后判断等领域，提高临床诊疗水平。
THANKS
感谢观看
研究和发展新的抗体和荧光标记技术，提高免疫荧光技术的灵敏度 和特异性，降低假阳性结果。
多标记检测
实现多标记免疫荧光技术，能够在同一样品上同时检测多种目标分 子，提高实验的信息量。
05
免疫荧光技术的应用实例
细胞内抗原定位
总结词
通过免疫荧光技术，可以精确定位细胞内的抗原，有助于研究细胞结构和功能。
详细描述
抗体
结合方式
荧光物质通过化学键与抗体结合，形 成荧光抗体，这种荧光抗体可以特异 性地结合抗原，形成抗原-抗体-荧光 抗体的复合物。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质， 能够特异性地结合抗原，形成抗原-抗 体复合物。
荧光信号的激发与检测
激发方式
荧光信号的激发通常采用特定波 长的光，如紫外光或蓝紫光，这 些光能够激发荧光物质发出可见
光。
检测设备
检测设备通常采用荧光显微镜， 能够检测到荧光信号并对其进行
电镜检查在肾脏疾病病理诊断中的作用
能够将标记物直接定位到相应的免疫复合物(D) 或特定的结构上，对某些疾病的早期诊断具有 重要价值。如早期Amyloid，LCDD等
对IF失效病例的确诊具有应用价值。
电镜既能观察光镜无法分辨的细微结构变化， 也对IF检测的免疫复合物的沉积进行核实及 明确的定位，弥补和验证了LM及IF的检查
EM作用
决定性 辅助性 验证
Hass: 50%
21%
29%
本院:作用的病理类型
原发性肾小球疾病
肾小球微小病变：脏层上皮细胞足突广泛融合 I期膜性肾病：上皮细胞下块状D沉积 致密物沉积病：GBM致密层D缎带状均匀沉积
EM起决定性作用的病理类型
遗传性肾小球疾病
薄基底膜肾病：GBM弥漫性变薄 Alport综合征：GBM分层、撕裂状改变 Fabry氏病：肾小球上皮细胞内髓鞘样小体 指甲-髌骨综合征：GBM内可见胶原纤维分布
EM起决定性作用的病理类型
纤维样物质沉积病
早期肾淀粉样变：系膜区或/及GBM内可见直 径约10nm的细纤维分
及小血管壁见粗颗粒或絮状D 异常代谢性肾小球病 早期糖尿病肾病：GBM均质性增厚 脂蛋白肾病：毛细血管腔内细小空泡状或层状
髓鞘样结构填充
EM提供重要参考作用的病理类型
辅助诊断：急性毛内GN(驼峰)
FSGS（足细胞病变）
膜性肾病的分期；MPGN的分型
伴随病变：IgAN伴GBM变薄；
早期MN伴糖尿病肾病
继发性GN：不典型MN或多部位D，提示继发
于
HBV相关性肾炎或狼疮肾炎
病因提示：病毒样颗粒提示与病毒感染有关； 硬化性GN见D，提示免疫复合物介导
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免疫荧光技术在肾活检病理诊断中的应用研究
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合。
肾组织活检
病理诊断离不开免疫学反应。
从肾脏疾病的组织学分型可以看出，免疫荧光技术对肾脏疾病
的诊断及其分类极其重要，其在肾活检病理诊断中的地位是其他组织化学、电子显微镜检查
等无法替代的。
1 免疫荧光技术
1.1 肾穿刺活检冰冻切片免疫荧光染色肾穿刺活检组织冰冻切片免疫荧光染色特异性强，敏
感性高，染色步骤简单，节省时间，定位准确，强度易于判读，是一种最简便、快速的方法[1]。
1.1.1 直接法用己知特异性抗体与荧光素结合，制成特异荧光抗体，直接用于细胞或组织抗
原的检查。
此法特异性高，缺点是一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性差，但此法非常
实用，应用也广泛[2]。
直接法检测IgG、IgA、IgM, C3,Fib,C1q：①肾组织冷冻切片在室温下
稍风干后，在室温下用冷丙酮固定10min。
②PBS冲洗2次×3min。
③滴加兔抗人的荧光抗
体IgG、IgA、IgM, C3,Fib,C1q,设立Albumin作对照排除。
④室温下避光孵育40min。
⑤PBS
冲洗2次×3min。
⑥缓冲甘油封片。
1.1.2 间接法先用特异性抗体与细胞标本反应，随后用PBS洗去未结合的抗体，再用间接荧
光抗体与结合在抗原上的抗体结合，形成抗原—抗体—荧光抗体的复合物。
使用间接法提高
了敏感性。
间接法检测HBsAg, HBcAg步骤，①—⑤同直接法。
⑥分别滴加F1TC标记抗鼠
荧光抗体和F1TC标记抗兔荧光抗体。
⑦室温下孵育30min。
⑧下同直接法⑤—⑥。
1.2 肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色方法采用石蜡切片免疫荧光染色方法可以补救冰冻切
片免疫荧光染色无肾小球的情况，但不同的抗原修复方法染色效果不同。
方法：常规处理:玻片经特殊处理后以多聚赖氨酸浸泡后干燥备用。
连续切片2μm，裱于载
玻片上，60℃烤片5 h ,常规脱蜡水洗。
PBS水洗数次后用3%过氧化氢室温下处理10min ,去
除过氧化物酶，防止组织自溶。
1.2.1 胰酶抗原修复组将常规处理的切片用0.25%的胰酶37℃随温箱孵育15 min。
后用蒸馏
水冲洗2次，除去胰酶。
1.2.2 高压加热抗原修复组放入加有枸橼酸—枸橼酸盐缓冲液的立式染缸，加盖。
高压消毒
锅不关压力阀的情况下将枸橼酸—枸橼酸盐缓冲液加热煮沸。
后将常规处理好的切片放入缓
冲液中，密封高压消毒锅，加盖压力阀。
加热至出现喷气时计时2 min。
切断电源，打开压
力阀，让高压锅内的压力迅速降低。
后取出立式染缸，在室温中放置20 min在缓冲液冷却前
不要取出玻片，待冷却备用。
1.2.3 不修复常规处理后的切片不采取任何修复方法，待用。
将以上3种方法的石蜡切片统一进行蒸馏水冲洗2次后，再用PBS洗2次，每次3 min。
擦
干后和冰冻切片一起摆入湿盒。
分别滴加相应的抗体10u1。
37℃孵育60min ,PBS洗2次后甘油封片。
2 免疫荧光结果的判读
应用荧光显微镜观察肾活检组织时需做以下记录：①使用抗体的种类。
②荧光显示的部位。
③荧光显示的型式(pattern)。
④荧光显示的分布。
⑤荧光显示的强度。
3 免疫荧光技术在肾脏疾病诊断中的应用
3.1 对于肾小球疾病发病机制的研究
3.1.1 肾小球抗原所致的原位免疫复合物其中包括在肾小球毛细血管壁呈线条状沉积的抗肾小球基膜抗体，和呈颗粒状沉积的抗近端肾小管刷状缘抗原成分的免疫复合物，见于动物Heymann肾炎。
3.1.2 非肾小球抗原所致的原位免疫复合物将此类复合物“种植”在肾小球毛细血管壁上，形成“植入性”抗原，则机体能针对抗原产生相应抗体，在肾小球原位形成免疫沉积物而致病。
3.1.3 抗原抗体在循环中形成的循环免疫复合物随血流滞留在肾小球毛细血管壁，引起肾脏病变。
此外，用荧光素标记补体抗血清，可以检测到各种不同补体成分在肾炎发病过程中的应用。
3.2 判断人类肾脏疾病是否为免疫性疾病一般说来，肾小球及肾小管的免疫复合物沉积常提示免疫性疾病，无免疫复合物沉积常提示为非免疫性疾病。
在某些非免疫性疾病中，也偶见免疫球蛋白沉积。
这种沉积物被认为是非特异性的滞留而不是免疫性的结合。
3.3 有助于某些肾脏疾病的确诊如IgA肾病，诊断本病主要依靠肾小球系膜区有以IgA为主的免疫球蛋白沉积，同时排除狼疮性肾炎等。
同时轻链/重链病的确诊，也离不开免疫荧光染色。
总之，我们认为光镜检查是肾活检病理诊断的基础，免疫病理观察则是肾活检病理诊断的必备条件，尤其是免疫荧光病理检查使临床对肾脏疾病的诊断迈上一个新台阶。
参考文献
[1]王海燕.肾脏病学[M].北京:人民卫生出版社,1996:430
-434.
[2]邹万忠.肾活检病理学[M].北京:北京大学医学出版社,2006:249-254.
注：本课题获广西中医学院科研课题Q200314资助。