肾穿组织综合病理技术方法
移植肾穿刺活检60例的病理学研究
Ｇ ｒ Ｂ 、 Ｃ ４ ｄ的表达 。所用抗体均购 自北京中杉金桥公 司； 免疫荧光检查 ： 冰冻切片后 ， 常规进行免疫球蛋
白Ｉ ｇ Ｇ、 Ｉ ｇ Ａ、 Ｉ ｇ Ｍ 和补体 Ｃ ３、 Ｃ ｌ ｑ以及 纤 维 蛋 白
如何对各种合并症做出正确诊断并给予及时有效的 治疗 ， 延长 移植 肾 的生 存 期仍 然是 人 们 需 要 解 决 的
重要课 题 。移植 。 肾穿刺活 组织 检查 是应 用病 理学 的 方法 直接 观 察 移 植 肾 的病 理 变 化 ， 根据 Ｂ ａ ｎ ｆ移 植 肾活 检病 理 诊 断 体 系对 各 种 合 并 症 做 出诊 断 与 分 类 ， 进而 指导 临床 的治疗 。笔 者 回顾性 分析 ６ ０例
作者单位 ： 西安交通大学 医学 院第一附属医院 病 理科 、 肾移植科 ，
西安 ７ １ ０ ０ ６ １
作者简介 ： 隋燕 霞 ， 女， 硕 士， 助理 研 究 员 ， 责 任作 者 ， Ｅ ， ｍ ａ ｉ ｌ ： ｓ ｕ ｉ ｙ —
ａ ｎ ｘ ｊ ０ ２ ９＠ １ ６ ３ ｃ ｏ ｎ ｒ
２ 结果
移植肾穿刺活检患者临床资料 ， 通过对病理诊断结
果 的分析 ， 了解 移 植 肾 常 出现 的 合 并症 的种 类 及 其 原因， 为 临床 治疗 提供依 据 。
２ ０ １ ２— ０ ８—０ ６接 收
２ ． １ 临床 结果
６ ０例移植 肾穿 刺 活检 标 本 中急性
排斥 反 应 １ ７例 （ ２ ８ ． ３ ％） 、 慢性排斥反应 ２ １例
（ Ｆ Ｒ Ａ ） 的检测。所有病例均参照 Ｂ ａ ｎ ｆ２ ０ ０ ５和 Ｂ ａ ｎ —
ｆ １ ９ ９ ７移 植 肾活 检 病 理 学 诊 断 与 分 类 方 案 进行 分
肾穿
腰痛及腰部不适：多数病人有轻微的同侧腰痛或腰部 不适，一般持续1周左右。多数病人服用一般止痛药可减 轻疼痛，但合并有肾周围血肿的病人腰痛剧烈，可给予麻 醉性止痛药止痛。 腹痛、腹胀：个别病人肾活检后出现腹痛，持续1～7 日，少数病人可有压痛及反跳痛。由于生活习惯的改变加 之腹带的压迫，使病人大量饮水或可出现腹胀，一般无需 特殊处理，对腹胀、腹痛明显者可给予乳酶生及解痉药等 以缓解症状。 发热：伴有肾周围血肿的病人，由于血肿的吸收，可 有中等度发热，应按发热病人护理，并给予适当的药物处 理。
并发症的护理
血尿：约有60～80%的病人出现不同程度的 镜下血尿，部分患者可出现肉眼血尿，为了 使少量出血尽快从肾脏排出，除绝对卧床外， 应嘱病人大量饮水，应观察每次尿颜色的变 化以判断血尿是逐渐加重还是减轻。血尿明 显者，应延长卧床时间，并及时静脉输入止 血药，必要时输血。
肾周围血肿：肾活检后24小时内应绝对卧 床，若病人不能耐受，应及时向病人讲解清 楚绝对卧床的重要性及剧烈活动可能出现的 并发症。以求得病人的配合。 在无肉眼血尿且卧床24小时后，开始逐渐 活动，切不可突然增加活动量，以避免没有 完全愈合的伤口再出血。此时应限制病人的 活动，生活上给予适当的照顾。术后B超检 查发现肾周围血肿的病人应延长卧床时间。
• 感染 • 死亡
感染发生率低，多因无菌措施不严，肾周已存在感染或伴有肾盂肾炎所致， 如出现发热、剧烈腰痛、白细胞增高需用抗生素治疗。 发生率为0－0.1%，因严重大出血、感染、脏器损害或出现其他系统并发症死 亡。
术后护理
病人肾活检后，局部伤口按压数分钟后，平车推入病房。 俯卧位1小时，24小时绝对卧床，心电监测24小时。 每半小时测血压，若病人血压波动大或偏低应测至平稳，并给 予对症处理。 若病情平稳、无肉眼血尿，24小时候，可下地活动。若病人出 现肉眼血尿，应延长卧床时间至肉眼血尿消失或明显减轻。必 要时给静脉输入止血药或输血。 术后嘱病人多饮水，以尽快排出少量凝血块。同时留取尿标本 3次常规送检。 卧床期间，嘱病人安静休息，减少躯体的移动，避免引起伤口 出血，同时应仔细观察病人伤口有无渗血并加强生活护理。 应密切观察病人生命体征的变化，询问有无不适主诉，发现异 常及时处理
肾脏穿刺病理标本染色方法探讨
Ｔ ｅｄ ｈ ｉ ￣
文献标 识码 ： Ａ
Ｏ ｂｕ ｉｏ ａ ｏ ｇｃｌｓ ｉｎ ｔｏｓｏ ｉｎｙ ｂ ｐｙｓｅｉ ｎ ＨＮ Ｓｕ ｕ Ｚ Ｏ ｒ ｇ ， Ａ Ｇ ｌ ａｏ ｔｈ ｔ ｔ ｌ ｉ ｔ ｎ ｇｍｅ ｄ ｆｋｄ ｅ ｉ ｓ ｐ ｃ ｌ ｓｐ ｈ ｏ ａ ａ ｉ ｈ ｏ ｍｅ ｈ－ ｎ ， Ｈ Ｕ Ｕ－ ｎ Ｗ Ｎ ｊ ｉ
Ｌ ｔｙｕ ，ｔｉ （ ｅ ｒ ｅｔｆＮｐ ｒｏ ，ｈ ｃｎ ｏ ｉｌＪ ｉ Ｕ ｉ ｒｔ Ｓｈｏ ｏ ｅｉｎ ， ｈｎ ｃｕ ３０ １ Ｃ／ａ ｉｔ ｏ ｅｏ． Ｄｐ ｔ ｎ ｏ ｅｈｏ ￣ Ｔｅ ｅ ｄＨ ｓ ｔ ，ｄｎ ｎ ｅ ｉ ｃｏｌｆＭ ｄｃ ｅ Ｃａｇｈｎ１０４ ， ｈｎ ） ｄ－ ａｍ ｌ ｓｏ ｐａ ｖ ｓｙ ｉ
，Ｏ７ １ ：２２ ２Ｏ ，１ １ ） ４
使 含有 乙二醇的化合 物氧 化形成 醛基 ； 蒸馏水 洗去过 碘酸 ； Ｓｔｆ氏试 剂反应 １ ｉ， ｅ Ｅ ５ｍｎ 使醛基与 Ｓｈ 氏试剂结合 ， 成紫 ｅｉ ｆ 形 红 色产 物 ； ．％亚硫 酸氢钠处理 ３ ， Ｏ５ 次 每次 １ｍｎ 流水 冲洗 ｉ； ５ ０ｒｎ 用 苏木素染 液复染 细胞核 ； ％盐酸酒 精分化 ， —１ ｉ； ｎ １ 自 来水洗 ， 弱氨水返 兰， 自来 水洗 ； 系列 酒精脱水 ， 甲苯透 明， 二
１４ 。 Ｍａｓｎ染 色 ｓ ｏ
医用 电子仪器厂 制造 的 Ｂ ． Ｍ Ｖ型 自动 组织包埋 机 ， 阳纵 横 沈 高技 术公 司制 造 的 Ｚ － 石蜡 切 片用 冷 台 ， 国 Ｔ ｅ ｏ Ｈ ３型 英 ｈｒ ｍ Ｓａｄｎ公司 的半 自动 石蜡 切片机 ， 海产 Ｐ ３ ｈｎｏ 上 Ｗ－０型电热恒 温烤 箱 ， 京 产 Ｄ － Ｗ－ 北 ＲＨ １型 电 热 恒 温 水 浴 箱。 日本 产
肾穿病理报告的流程
制片流程
以上四种染色可穿插同步进行，以标本数10 例为例，染色总时间约为 200 min,超出10例 标本,切片时间递增,染色时间倍增.
制片流程
至下午五点左右制片过程全部结束，出片。 周二穿刺，周三下午五点左右出片； 周四穿刺，周五下午五点左右出片；
免疫标记流程
周二穿刺标本在周四上午进行免疫荧光染色。 周四穿刺标本在周五上午进行免疫荧光染色。 周五下午所有标本荧光拍照。
荡2h； （10）纯包埋剂渗透组织，并震荡2 h； （11）纯包埋剂包埋：纯包埋剂包埋组织并置于聚合器中聚合
37°Ｃ烘箱，24 h；
电镜检查
周五：继续聚合，调烘箱温度至45°Ｃ， 24 h；
周六：继续聚合，调烘箱温度至60°Ｃ， 48h至周日；
免疫标记流程
1、免疫荧光：
1.1直接免疫荧光：冰冻切片室温放置20min，一抗室温孵 育1h，洗片5min×3，晾干甘油封片，总计时间约2 h。
1.2间接免疫荧光：冰冻切片室温放置20min，一抗室温孵 育1h，洗片5min×3，二抗室温孵育1 h，总计时间为2.5 h
免疫标记流程
2、免疫组化：
制片流程
PAS染色步骤
1. 切片脱蜡入水 30min 2. 1%高碘酸染 12min. 流水冲洗 2min 3. shiff液染到组织转淡红. 10-15min 4. 流水冲洗直至组织转枚红(镜下观察). 5min 5. 苏木素染核 3min. 水洗1min 6. 0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可) 7. 水洗蓝化(镜下观察). 5min 8. 从低浓度到高浓度酒精脱水. 20min 9. 二甲苯透明 20min 10. 树胶封片. 标记 10min 总时间 约 120 min
5 烤片30min 6 蜡块封存 总计约200min，至中午结束切片
三种脱水程序在肾穿刺活检标本制片中的应用比较
三种脱水程序在肾穿刺活检标本制片中的应用比较韩福兰;汪家文;刘靖;刘应时;刘芳【摘要】目的：探讨肾穿刺组织最合适的脱水程序。
方法随机选取新鲜肾穿刺标本80例，每例取材3份，固定后按不同脱水程序分为3组：A组为新型超声结合水浴加温组、B组为常规大体标本脱水组、C组为小标本单独脱水组。
3组所做的切片均进行HE染色和特殊染色。
结果小标本单独脱水组，HE染色切片厚薄均匀平整，细胞染色鲜艳，无皱缩现象，对比度清晰，各项特殊染色着色鲜艳、定位准确，优于其余两组。
结论应用小标本快速脱水组制作的切片质量优良，完全满足肾组织临床病理诊断的需要，既缩短了制片时间，又提高了制片质量。
%To investigate the most suitable dehydration procedure of renal biosy tissues.Methods 80 renal biopsy specimens had been selected. Three small pickling tissues were cut from each case and were divided into three groups:Group A for fast ultrasonic processing technology, which combined with the water bath method. Group B for routine dehydration of large samples. Group C for dehydration program of small specimen. The three groups of sections were observed by HE staining and specialstaining.Results Rapid dehydration program of small specimen was better than the other two groups. In this group, all the HE and special staining slices were uniform and smooth, with bright staining, clear contrast and accurate positioning.Conclusion Rapid dehydration program of small specimens was the most suitable dehydration procedure of renal biosy tissues, which not only shortened the production time, but also improved the sample quality.【期刊名称】《佛山科学技术学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】5页(P9-13)【关键词】肾穿刺活检;HE染色;特殊染色;脱水【作者】韩福兰;汪家文;刘靖;刘应时;刘芳【作者单位】佛山市中医院病理科，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000【正文语种】中文【中图分类】R361.2肾小球肾炎是临床常见病，肾穿刺活检有利其病理分型，以及确定其病变程度，被认为是该病诊断的金标准。
重视肾穿刺活检标本处理技术
１． ０ 丁樱 ， 张红敏 ． 雷公藤多苷对 肾小球系膜 细胞细胞 因子生成
的影响 ． 中华 肾脏 病杂志 ，０ ２ １ （ ） １９ ２ ０ ，８２ ：３ ． １． １ 万毅 刚 ， 孙伟 ， 甄彦 君 ， ． 等 雷公藤 多苷对实验性 系膜增殖 性
蛋白尿及系膜 损伤 的影 响 ． 国中西 医结 合 杂志 ，０ ５ ２ 中 ２ ０ ，５
９ 周太 光 ， ． 王峥 ， 夏彦 ， 雷 公藤 多苷对 肾病 综合 征患儿糖 皮 等． 质激素受体 的影 响及 其 临床 意义 ． 临床 儿科 杂 志 ，０ ３ ２ ２０ ，１
（ ０ ：１ —６ ４ １ ）６ ２ １ ．
减少 、 肝损害 、 消化道反应 、 月经紊乱等 ， 并予相应 治疗及防范。
Ｃ ＩｗＮ， ｒｈ２ ０ ， ｏ．０ Ｎ ． Ｊ１ Ｍａｃ ０ ９
糖皮质激 素是 治疗 肾病 综合 征的主要药物 ， 它通 过与细胞 激活而发挥免疫抑制效应 ，ｒⅣ ｒ、Ｐ也 可抑 制 Ｎ Ｆ—Ｉ ， 而抑制 ｃ 进 Ｂ Ｔ细胞 的增殖 、 诱导 Ｔ细胞凋亡＿ ； ６ 雷公藤 可通过兴奋下丘脑 一 垂体 一肾上腺轴而增加 糖皮质 激素 的合 成 Ｊ而且 １ ｖ ， 、 Ｐ本身 质激素在免疫抑制方面具有协 同作用 。本 组观察结果 也显示 ，
单用泼尼松 。
志 ， ９ ４ １ （ ） １ —１ ． １９ ， １１ ：３ ５
糖皮质激素受 体 （ Ｃ 结合 、 制细 胞核 因子 一Ｋ （ Ｇ Ｒ） 抑 Ｂ ＮＦ—ｘ ３ 黎磊石 ， Ｂ） ． 张训 ， 陈惠 萍 ， ． 等 雷公 藤治疗 肾小球 肾炎 的临床研
究． 中华 内科 杂 志 ，９ １２ （ ）２ ６ １ ． １ ８ ，０ ４ ：１ —２ ８
肾穿刺活检技术
前言肾活检组织学检查（简称肾活检）的创立及其临床应用为肾脏病学成为独立学科和发展作出了重要贡献。
肾活检对各类肾脏疾病的病理诊断、指导治疗和判断预后有重要意义。
操作方法包括经皮肾活检、开放式肾活检、经腹腔镜下肾活检及经血管内肾活检等，其中经皮肾穿刺活检是目前最主要的肾活检方法。
近20年来，肾活检技术更加成熟，穿刺成功率接近100%，取材合格率大大提高，且并发症的发生率大大减少[1~4]。
一、经皮肾活检发展史1923年，Gwyn[5]进行了首例开放式肾活检。
1934年，Ball[6]采用穿刺针经皮穿刺肾组织成功诊断肾肿瘤，此后陆续有人用此方法进行肾肿瘤的诊断。
直到1952年，瑞典医师Alwall[7]，丹麦医师Iversen和Brun[8,9]借鉴肝穿刺活检技术，使用静脉肾盂造影定位，采用坐位方式，首次以经皮肾穿刺的方法获取到足够用于诊断肾脏病的肾组织。
但采用该方法仅有40%的成功率。
随后，Kark和Muchrake[10]对穿刺方法作了改进：采用Franklin-Vim-Silverman型穿刺针，患者俯卧位接受手术，并在腹部垫硬枕固定肾脏，穿刺成功率达到96%，并且无严重并发症发生，随后这一方法逐渐成为肾穿刺活检的主要方法。
早期的肾活检主要根据肾脏所对映体表解剖位置进行盲穿或静脉肾盂造影进行定位。
至1985年，B超肾脏实时定位[11]（real time scanning）问世后，肾活检定位及引导更加准确。
自动穿刺枪的问世肾活检技术更易于掌握，肾活检相关并发症明显下降，威胁生命的并发症发生率降至<0.1%，肾活检穿刺成功率达到95%以上[1, 2, 12, 13]。
国内，赵魁丹等[14]于1958年最先开展经皮肾穿刺活检并取得成功。
20世纪60至70年代，已有少数医院尝试了肾活检，直至80年代后肾活检才广泛应用于临床[15]。
在1983年召开的“肾小球疾病肾活检诊断”专题座谈会上，全国已有多家单位进行病例报告，但肾活检例数仅1011例（南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所281例）[16]。
肾穿 病理流程
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肾穿组织综合病理技术方法探讨【中图分类号】r657.4【文献标识码】b【文章编号】1008-6455（2011）08-0439-01
近年来随着肾穿技术的广泛开展，肾活检组织病理检查已成为肾脏疾病诊断和研究不可缺少的重要内容［1］，我科自1996年～2009年对2149例肾活检标本应用综合病理技术，及时全面地保证了肾活检病理诊断，现介绍如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料：收集1996年～2009年本院及外院送检肾穿刺活检标本共2149例，其中：男性1046例，女性1103例，男女之比1:1.05；年龄范围1岁～75岁，平均年龄为33.54岁，分别做光镜和电镜检查。
应用规范的专项肾穿刺病理申请单和报告单模式，保证临床信息全面可靠。
1.2 方法：应用快速制样技术完成光镜和电镜的制备［2］，全过程在1.5d内完成。
肾穿组织以faa液（10%甲醛10ml、冰醋酸5ml、95%酒精85ml）固定2h，微波快速脱水、透明、浸蜡2h后包埋，2μm连续切片，分别作he、masson（马松三色）、pas（过碘酸雪夫）、pasm（六胺银）染色，部分病例进行刚果红染色。
免疫组化s-p法染色：选用抗体iga、igg、igm、c3、coⅳ，部分病例增加乙型肝炎病毒抗原（hbsag和hbcag）检查（试剂均购自福州迈新公司）。
电镜组织切成1mm3组织块2～4粒，立即投入4%戊二
醛缓冲液固定2h，1%四氧化锇后固定30min，快速制样；lkb-v型超薄切片机半薄切片观察并定位，超薄切片70nm，醋酸铀及柠檬酸铅染色，日本jeol-1010透射电镜观察。
病例诊断参考who1995年肾脏疾病分类标准，由学习过肾穿病例诊断的主治医师、主任医师，应用逐级阅片（he切片、特染、免疫组化、半薄切片和超薄切片）方法，结合临床实验室结果，进行综合病例诊断。
2 结果
2149例肾活检中光镜标本肾小球少于5个且无电镜资料的归入未明确诊断80例（5.9%）；完整光镜和电镜样品2069例中256例（13.83%）电镜未找到肾小球，综合病例诊断1594例，占全部资料的74.17%。
3 讨论
肾穿刺活检组织新鲜，具有适合病理光镜和电镜检查的特点，为及时全面地提供高质量的各项技术切片，保证肾活检病理诊断的及时性和准确性，我们在工作中结合肾活检组织固定、he切片、特染染色、免疫组织化学染色和电镜技术的特点，将各项方法相互结合形成综合技术，为肾活检综合病理诊断创造了较好的条件。
3.1 及时选择适宜固定液：对一次性穿刺的肾组织经分离取材后，选用faa固定液固定光镜肾组织，选用4%戊二醛缓冲液做为电镜组织固定液，组织固定时间均为2h，较好地保证肾活检组织结构完好性。
3.2 同步光镜、电镜组织快速制样：光镜组织采用微波快速制样，全过程30min左右，缩短制样时间，浸蜡及包埋采用石蜡松香，以加强切片的延展性。
电镜组织采用快速制样技术，全过程1.5d
完成，与光镜he、特染、免疫切片同时提交，为医生综合诊断提供条件。
3.3 光镜组织集中制片：he、特染、免疫组化切片一次性完成，即省时，切片质量好，减少肾小球丢失率。
切片时选用精度达到1μm性能良好的切片机，切片厚度为2μm；蜡块修切平整后力争一次性制片20余张；选用防脱载玻片，分别捞到10张玻片上，每张保证2张切片；因切片菲薄，为避免皱折选用由20℃～45℃水温二次展片法捞片；以备he、特染及免疫组化染色。
3.4 同步式he、特染染色：he染色及三种特染同时展开，每一染色法使用固定专用配套的染色缸防止交叉影响。
其中pam染色采用二次染液法，即：工作液染色过程中，待切片出现淡黄色时立即更换新配制工作液继续染至出现黑色沉淀，避免过染的问题。
3.5 石蜡切片免疫组织化学染色法：肾穿组织免疫方法可采用荧光法和免疫组化法，我们体会冰冻荧光免疫法虽方法相对简单，单需增加冰冻切片等工作程序，切片不能长期保存，若肾穿标本量少则难于保证需要。
免疫组织化学法不但能将形态学改变与免疫特征结合起来，易于保存并便于观察；从技术工作角度可在石蜡切片过程中一次性完成制片，克服冰冻荧光免疫分次制片和肾标本量少
的问题；我们采用s-p即用法，各抗体在肾组织中均能较好的显示免疫特征。
3.6 专项技术专人负责是质量保证：工作中定技术岗，利用专项业务提高综合技术水平；同时参加医师读片，增加辨认肾组织结构及各项染色特征的能力，及时把握各项技术条件指标，增加工作的主动性，保证肾穿综合技术水平稳定有序发展。
参考文献
［1］王泊云，李玉松等主编. 病理学技术［m］. 人民卫生出版社，2001:948-953
［2］唐新萍，邹赛英，邱敬芝，等. 肾穿组织快速电镜制样技术探讨［j］. 西北国防医学杂志，2004:25（4）：318。