最新[基础医学]常规组织病理技术ppt课件

固定的意义
❖ 将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能 尽量保持其生活状态时的形态结构和位置。
❖ 作用：（1）保持组织的结构和形态 （2）保持细胞内特殊的成分 （3）便于区别不同组织成分 （4）有利于切片 （5）保存抗原及DNA、RNA
固定剂的不良影响
❖影响常规染色 ❖固定造成物质损失 ❖组织皱缩
固定的注意事项（一）
❖ 根据研究目的选择合适的固定剂 ❖ 固定液的量 ❖ 固定液的穿透性 ❖ 组织块的大小
固定的注意事项（二）
❖ 固定时间 ❖ 固定温度 ❖ 加热 ❖ 特殊固定
单纯固定液
❖ 甲醛（formaldehyde） ❖ 中性甲醛液 ❖ 丙酮 ❖ 酒精
混合固定液
❖ 乙醇-甲醛液（A-F液） ❖ Bouin液 ❖ Zenker液 ❖ Carnoy液 ❖ 4%多聚甲醛-磷酸缓冲液
切片的注意事项
❖ 组织的取材与固定 ❖ 组织的脱水、透明和浸蜡 ❖ 切片 ❖ 切片机和切片刀 ❖ 特殊要求切片的制作
冰冻切片法
❖ 应用广泛 ❖ 对临床手术病人的术中快速诊断具有重
要意义 ❖ 科研应用
恒冷箱切片
❖ 温度的调节 ❖ 包埋机OCT或羧甲基纤维素 ❖ 切片 ❖ 吹干或固定
载玻片的处理方法
三、活检组织取材注意事项
2. 采取标本时切忌挤压，取材刀要锋利，操 作要正确，以免组织过度受挤压，而导致 细胞结构、形态严重变形而影响诊断，甚 至造成不必要的重新取材，给病人造成不 必要的痛苦，并且延长诊断时间。
三、活检组织取材注意事项
3. 手术切除的内脏器官或较大肿瘤，最好将 标本全部送检，并保持原病变的完整性， 如要切开，应根据不同器官病变按一定的 方法切开。
浸蜡
❖组织经透明后，在溶化的石蜡内浸 渍的过程称为浸蜡。
❖用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃
第二节 组织的包埋和包埋方法
❖ 组织块经过浸蜡，用包埋剂包起 的过程称包埋。
❖ 经包埋后，可使组织达到一定的 硬度和韧度，有利于切成薄片。
包埋方法
❖ 石蜡包埋法 ➢ 常规石蜡包埋法 ➢ 快速石蜡包埋法
❖ 火棉胶包埋法 ❖ 石蜡半薄切片包埋法 ❖ 树脂包埋法 ❖ 塑料包埋法
❖ 组织块可长期保存。 ❖ 最常用，最普遍的方法。
切片前准备
❖ 高质量的蜡块和锋利的切片刀 ❖ 清洁载玻片 ❖ 恒温烤片装置 ❖ 铅笔、毛笔、镊子等
切片制作过程
❖ 固定蜡块，调整蜡块与刀至合适位置 ❖ 切片、展片，冰块的应用 ❖ 轮转式切片机由下至上切，将脆硬难切的
部分放在上面 ❖ 捞片，注意位置，编号 ❖ 恒温烤片
取材的注意事项（一）
❖ 防止人为因素的影响 ❖ 标本大小 ❖ 取材时间 ❖ 注意包埋方向 ❖ 边缘标记 ❖ 小标本的处理方法
取材的注意事项（二）
❖ 注意特殊情况 ❖ 取材数量 ❖ 清除多余成分 ❖ 重复取材 ❖ 核对 ❖ 组织存放
第二节 固定
❖固定的意义 ❖固定时的注意事项 固定液 ❖组织固定后的洗涤
细胞浆染色原理
❖伊红Y是一种化学合成的酸性染料， 在水中离解呈带负电荷的阴离子， 与蛋白质的氨基正电荷结合而使细 胞浆染色，与蓝色的细胞核形成鲜 明的对比。
二甲苯的作用
❖脱蜡，使染料易于进入细胞和组织 ❖透明，以利于光线的透过
酒精的作用
❖ 苏木染色前，酒精由高浓度向低浓度逐 渐下降，目的是洗脱二甲苯，使水分逐 渐进入切片。
细胞核染色原理
❖细胞核内染色质主要是DNA，带负 电，呈酸性，很容易与带正电荷的 苏木精碱性染料以离子键或氢键结 合而被染色。苏木精在碱性溶液中 呈蓝色，因此细胞核被染成蓝色。
细胞浆染色原理
❖细胞浆内主要成分是蛋白质，为两 性化合物，等电点4.7-5.0。pH在胞 浆等电点以下，在染液中加入醋酸 使胞浆带正点荷，就能被带负电荷 的染料染色。
四、活检组织的固定
送做病理检查的标本必须新鲜，不能自溶 腐败，离体的标本应立即预以固定。固定液 的量要充足，至少5倍于标本体积，以使固 定液全部淹埋组织为宜。放标本的容器大小 要适当，口径要大，以便于标本保持原样固 定和便于取出。容器要密封，以免固定液挥 发浓度不足而影响固定效果。
第一节 取材
❖取材时对送检组织的要求 ❖取材 ❖取材时的注意事项 ❖冰冻切片取材 ❖不同组织的取材方法
二、可供做活检的标本
3. 刮取的破碎组织，如子宫内膜、骨 组织等。
4. 粗针或细针穿刺抽吸的组织，如肝、 肾、甲状腺穿刺组织等。
三、活检组织取材注意事项
1. 选择恰当的取材部位。力求切取明显病 变的组织，如为肿瘤组织，一定要带有 其周围的正常组织。不要只选坏死组织， 而取周围没有坏死的病变组织如为溃疡 要取溃疡的周围及底部组织送检。
常规石蜡包埋法
❖ 有无特殊包埋面（如分层组织、皮肤、 内镜标本等）
❖ 包埋蜡的温度与组织块的温度接近 ❖ 包埋完毕，蜡块稍凝后，移入冷台加速
凝固
第三节 组织切片法
❖ 石蜡切片法 ❖ 冰冻切片法 ❖ 组织切片机和切片机的维护
石蜡切片法
❖ 组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片 机制成切片的过程称为石蜡切片法。
[基础医学]常规组织病理技 术2012
常规组织病理技术
南开大学医学院 李玉皓
二、可供做活检的标本
1. 手术切除的部分器官和组织，例如胃、乳 腺、淋巴结等切除标本。
2. 切取的小块病变组织，如皮下小结节，内 窥镜下钳取的肿块组织。随着内窥镜在临 床上的广泛应用，钳取的小块组织已成为 活检组织的主要标本。
第二章 组织切片技术
第一节 组织的脱水、透明和浸腊
❖脱水 ❖透明 ❖浸腊（浸透） ❖骨和含钙组织脱钙法
脱水
❖借某些溶媒置换组织内水分的过程。 ❖最常用脱水剂：酒精
透明
❖通过某种溶剂的媒介作用，使石蜡 浸入组织块。因组织块中的水分被 溶剂所取代，组织块变得透亮，称 之为透明。
❖最常用脱水剂：二甲苯
❖ 载玻片 ❖ 盖玻片
第三章 苏木素-伊红染色方法
苏木素-伊红染色（HE）简介
❖HE染色是生物学和医学的细胞和组织 学最广泛应用的染色方法，在病理学 实验室中称为常规染色方法。可用于 观察、描述正常和病变组织的形态学， 而且HE切片可较长时间保存。
HE染色的基本原理
❖细胞核染色的原理 ❖细胞浆染色的原理 ❖HE染色中二甲苯、酒精和水洗作用 ❖分化和蓝化作用