高中生物第一部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离自我小测浙科版选修精编版
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件8 浙科版选修1
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再 进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什 么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始 处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
培养基（culture media）
按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出的供其生长繁殖的营养基质。
提供微生物生长的条件： 合适的温度：25-37℃ 合适的pH：细菌 6.5-7.5 中性偏碱
真菌 5.0-6.0 中性偏酸 营养成分：含有碳源、氮源、生长因子、水
和无机盐。
LB培养基的配方
培养基成分 蛋白胨
消毒与灭菌
（1）消毒： 利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生
物的过程。
（2）灭菌：
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括 所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到 完全无菌的过程。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术。
消毒的方法
1、100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法
经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，
导致生产失败的根源在于发酵物中混入了
杂菌。
保持培养物纯净，
保证无杂菌污染很
重要！
大肠杆菌的培养与分 离
一、大肠杆菌（E. coli）
兼性厌氧的肠道内的共生菌群
合成维生素B和维生素K，供机体利用； 产生大肠杆菌素，抑制肠道致病菌和 腐生菌滋生。
革兰氏阴性菌
作为一种工程菌， 在基因工程技术中被广泛采用。 例：大规模生产治疗糖尿病的药物——胰岛素
高中生物 第一部分《实验二 微生物的培养和利用》课件7 浙科版选修1
实验2 分离以尿素为氮源的微生物
（二）实验流程——基本原理
酸碱指示剂是用来指示化学反应前后溶液的酸碱性 变化的。本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到
了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情 况下呈黄色，碱性情况下呈红色，
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实验2 分离以尿素为氮源的微生物
纤维素，常用的产生纤维素酶的微生物有绿色木霉、变 异青霉、黑曲霉和根霉等。
纤维素酶是一类酶的总称，可催化水解纤维素生成 纤维二糖和葡萄糖。纤维素酶包括酶C1酶、Cx酶和β－葡
萄糖苷酶
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实验3 观察土壤中能分解纤维素的微生物
（二）实验流程——基本原理
(2)选择培养基对微生物的选择作用
，待刮刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培 养皿，将前面已加入的土壤稀释液（细菌悬液）
均匀涂布到整个平面上。
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实验2 分离以尿素为氮源的微生物
（二）实验流程——基本操作步骤 （4）将培养皿倒置摆放在37℃恒温箱中培养
24～48h，观察菌落数 。
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实验2 分离以尿素为氮源的微生物
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实验2 分离以尿素为氮源的微生物
（二）实验流程——基本原理
本实验是用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固 化剂，其目的是：尽可能使培养基中只含尿素一种 含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被以尿素 为氮源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。
（2）酸碱指示剂
尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲 酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。
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实验3 观察土壤中能分解纤维素的微生物
高中生物《实验一大肠杆菌的培养和分离》教案1浙科版
浙科版《生物技术实践》（选修1）教学
第一部分微生物的利用
一、课标内容：
进行微生物的分离和培养
二、教学要求
本部分“实验2：分离以尿素为氮源的微生物”与“实验3：观察土壤中能水解纤维素的微生物”不作要求，只要求学生做1个实验，即“实验1：大肠杆菌的培养和分离”。
2实验建议
在大肠杆菌的培养和分离的实验中，要特别强调无菌操作，这是进行微生物实验中必备的操作要求，也是本模块多数实验的基本要求，应该让学生形成无菌操作的行为习惯。
无菌操作，既包括各种器皿必须是无菌的，也包括各种培养基也必须是无菌的，同时还要求在接种时，不能带有其它杂菌，所以在实验过程中，应时刻让学生保持这种无菌意识。
在菌落和菌种种类的辩认时，要教会学生能大致区分细菌、放线菌与酵母菌菌落，有些用肉眼不能判断的菌落也可借助显微镜进行观察推断。
大肠杆菌培养和分离
大肠杆菌培养和分离超净台实验准备工作2灭菌和消毒无菌操作目的：为了避免被杂菌污染。
1对实验操作空间：超净台：紫外线灭菌，过滤风桌面：酒精擦拭，酒精灯外焰附近操作2.操作者衣服和手进行：清洁和消毒，70%酒精3.避免已灭菌处理的材料用具和周围物品的接触消毒的方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气、高锰酸钾消毒……（1）消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。
消毒与灭菌的区别（2）灭菌：灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。
实验1大肠杆菌的培养和分离超净台上紫外灯和过滤风实验过程：准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒操作阶段：1倒平板：分装固体培养基倒平板：将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过程。
分装培养基：1倒平板：将灭菌后的固体培养基倒入培养皿培养基冷却到60度时倒入2培养基的分装（试管，三角瓶，培养皿）倒入三角瓶和试管（漏斗法）1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
朊病毒就是蛋白质病毒，是只有蛋白质而没有核酸的病毒。
1997年诺贝尔医学/生理学奖的获得者美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳(S.B.Prusiner)就是由于研究朊病毒作出卓越贡献而获此殊荣的。
细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，它使得这层壁坚韧并富有弹性。
一旦失去细胞壁，所有的细菌都将变成球形。
细菌细胞壁的主要功能是保护细胞、维持细胞形状、协助鞭毛运动等，而且还与细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的敏感性有关。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件14 浙科选修1
2.不同的微生物往往需要采用不同 的培养基配方 .
3.培养基内所含的基本物质
一般营养物质(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机 盐
其他物质 pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细 菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、 某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗 透压等的要求。
（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具 进行灭菌 ；
（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近进行；
（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品 相接触。
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
消毒
（１）消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死大部level Disinfection）、中程度 消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Lowlevel Disinfection）三种方式。
② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温的需要保持干 燥的物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
牛肉膏 尿素
②固氮微生物所利用的氮源是 氮气
3培养基配制原则：
营养要协调 目的要明确 PH要适宜
（三）无菌技术
1.无菌技术的概念
无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。
从制备培养基到接种与培养等全部实 验过程要无菌操作
（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进 行清洁和消毒 ；
分离固氮菌
2023-2024学年高中生物浙科版选修1第1部分 微生物的利用单元测试(含答案解析)
2023-2024学年浙科版高中生物单元测试班级 __________ 姓名 __________ 考号 __________一、选择题（本大题共计19小题每题3分共计57分）1.以下关于分离纤维素分解菌的实验操作错误的是（）A. 经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B. 选择培养这一步可省略但得到的纤维素分解菌会较少C. 可通过定时测定葡萄糖产量的变化来衡量纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量D. 对照组可用等量的纤维素分解菌培养液涂布到含葡萄糖的培养基上【答案】A【解析】解 A.经选择培养后再经梯度稀释才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 A错误B.富集培养可省略但培养分离的纤维素分解菌少 B正确C.纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定 C正确D.实验组和对照组遵循单一变量原则对照组可用等量的纤维素分解菌培养液涂布到不含纤维素的培养基上设置对照能证明经“浓缩”培养得到了欲分离的微生物 D正确故选 A2.下列生物学实验操作能够顺利达到实验目的的是（）A. 在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒B. 在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单个菌落C. 将切下的胡萝卜外植体直接接种在培养基上获得愈伤组织D. 将土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌【答案】B【解析】3.下列关于大肠杆菌纯化培养的叙述正确的是（）A. 牛肉膏和蛋白胨只能为大肠杆菌提供碳源和氮源B. 倒平板和接种的操作都要在酒精灯火焰附近进行C. 在伊红美蓝培养基上大肠杆菌的菌落会呈现红色D. 纯化大肠杆菌只能采用稀释涂布平板法进行接种【答案】B【解析】解 A.牛肉膏为大肠杆菌提供碳源和氮源蛋白胨为大肠杆菌生长提供氮源、碳源和维生素等 A错误B.倒平板和接种的操作都要在酒精灯火焰附近进行防止微生物落入培养基 B正确C.在伊红美蓝培养基上大肠杆菌的菌落会呈现深紫色并有金属光泽 C错误D.纯化大肠杆菌也可以采用平板划线法进行接种 D错误故选 B4.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是（）A. 菌落B. 细菌形态C. 细菌体积D. 细菌结构【答案】A【解析】A．同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征是菌种鉴定的重要依据B、C、D．单个细菌个体微小用肉眼是看不见的细菌形态、体积和结构不适合作为菌种鉴定的依据故选A5.以下关于菌落的叙述正确的是（）A. 一定是圆形的B. 一定是黄色的C. 大小一定是相同的D. 观察到的单个菌落也有可能来自2个菌体的增殖【答案】D【解析】A、菌落的性状是菌落的特征之一不同的微生物形成的菌落的形状不一定相同 A错误B、菌落的颜色是菌落的特征之一不同的微生物形成的菌落的颜色不一定都是黄色 B 错误C、菌落的大小是菌落的特征之一不同的微生物形成的菌落的大小不一定相同 C错误D、当两个或多个相同菌体或细胞连在一起时经培养后观察到的只是一个菌落 D正确6.下列关于细菌分离及培养的叙述正确的是（）A. 以尿素为唯一氮源的培养基可选择和鉴定尿素分解菌B. 生长在液体培养基表面的菌落特征可作菌种鉴定的依据C. 判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置未接种的牛肉膏蛋白胨培养基作对照D. 尿素被尿素分解菌合成的脲酶分解成氨和\ CO_2后才能被植物利用【答案】D【解析】解 A.以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌 A错误B.鉴别培养基属于固体培养基可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型 B错误C.用接种了的全营养培养基作对照即接种了的牛肉膏蛋白胨培养基可用来判断选择培养基是否起到了选择作用 C错误D.尿素被尿素分解菌合成的脲酶分解成氨和 CO_2后才能被植物利用 D正确故选 D7.下列不属于菌落特征的是（）A. 菌落的形状B. 有无荚膜C. 菌落的大小D. 隆起程度【答案】B【解析】解 A、菌落的形状是菌落的特征之一 A正确B、有无荚膜是单个细菌细胞的特征不是菌落的特征 B错误C 、菌落的大小是菌落的特征之一 C正确D、菌落的隆起程度是菌落的特征之一 D正确．故选 B．8.下列有关“分解纤维素的微生物的分离”实验的叙述正确的是（）A. 纤维素酶中\ C_1酶和葡萄糖苷酶都能将纤维素分解成纤维二糖B. 在液体选择培养基中直接加入刚果红可以鉴别纤维素分解菌C. 增加样品液中纤维素分解菌浓度时往往利用固体选择培养基D. 为确定得到的是纤维素分解菌还需进行产纤维素酶的实验【答案】D【解析】解 A.纤维素酶中 C_1酶和 C_x酶能将纤维素分解成纤维二糖 A错误B.鉴别纤维素分解菌应选用固体培养基 B错误C.增加样品液中纤维素分解菌浓度时往往利用液体选择培养基 C错误D.为确定得到的是纤维素分解菌还需进行产纤维素酶的实验 D正确故选 D9.加工橘子罐头时采用酸碱处理脱去中果皮（橘络）会产生严重污染目前使用酶解法去除橘络可减少污染下列生长在特定环境中的4类微生物不能产生所用酶的是（）A. 生长在麦麸上的黑曲霉B. 生长在酸奶中的乳酸菌C. 生长在棉籽壳上的平菇D. 生长在木屑上的木霉【答案】B【解析】解橘络的主要成分是纤维素使用酶解法去除橘络应选用纤维素酶麦麸、棉籽壳、木屑的主要成分是纤维素能在其上生长的微生物一定可以产生纤维素生长在酸奶中的乳酸菌以葡萄糖为原料经无氧呼吸产生乳酸不会产生纤维素酶故选 B10.在做分离分解尿素的细菌实验时 A同学从培养基上筛选出大约150个菌落而其他同学只选择出大约50个菌落产生A同学结果的原因可能有（）①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照A. ①②③B. ②③④C. ①③④D. ①②③④【答案】A【解析】在做分离分解尿素的细菌实验时 A同学获得的菌落远大于其他同学可能是由于其所取的土样不同含有的细菌数较多①正确也可能操作过程中没有保证无菌操作如培养基灭菌不彻底、被杂菌污染导致获得的菌落数较多②③正确没有设置对照不会导致其获得的菌落数明显增加的④错误综上所述以上说法正确的有①②③故选A11.下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述正确的是（）A. 分离土壤中的尿素分解菌实验中采集的土样经高温灭菌后可以用于制取土壤稀释液B. 测定土壤样品中的活菌数目常用显微镜直接计数法C. 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量选用的稀释度范围不同D. 接种土壤微生物稀释液时平板划线法可以采取连续划线的方法使微生物均匀分布【答案】C【解析】解 A.分离土壤中的尿素分解菌实验中采集的土样经高温灭菌后其中的微生物全部死亡不能得到尿素分解菌 A错误B.测定土壤样品中的活菌数目常用菌落计数法一般不常用显微镜直接计数法 B错误C.土壤中各类微生物的数量不同为了获得不同类型的微生物就需要按不同的稀释度进行分离可见测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量选用的稀释度范围也不同 C正确D.接种土壤微生物稀释液时可借助平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面但并不是使微生物均匀分布 D 错误故选 C12.关于对分解尿素的细菌进行分离、计数的实验叙述错误的是（）A. 统计菌落数目时当样品的稀释度足够高时培养基表面的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌B. 统计菌落数目时通过统计平板上的菌落数就能推测出样品大约含有多少活菌C. 设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰D. 以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂通过检测培养基的pH的变化还不能准确鉴定培养基中的细菌就是能够分解尿素的那种【答案】D【解析】解 A、用稀释涂布平板法进行微生物计数时当样品的稀释度足够高时培养基表面的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌 A正确B、用稀释涂布平板法进行微生物计数时当样品的稀释度足够高时通过统计平板上的菌落数就能推测出样品大约含有多少活菌 B正确C 、分离微生物时需要设置不接种的培养基与实验组一起培养做空白对照设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰 C正确D、以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂通过检测培养基的pH的变化基本能准确鉴定培养基中的细菌就是能够分解尿素的尿素分解菌 D错误．故选 D．13.在分解尿素菌的分离和鉴定中对先后用到的两种培养基叙述正确的是（）A. 加入酚红指示剂作为选择培养基再加入唯一碳源作为鉴别培养基B. 加入唯一氮源作为选择培养基再加入酚红指示剂作为鉴别培养基C. 加入唯一氮源作为鉴别培养基再加入酚红指示剂作为选择培养基D. 加入唯一碳源作为选择培养基再加入酚红指示剂作为鉴别培养基【答案】B【解析】分离尿素分解菌以加入尿素为唯一氮源作为选择培养基鉴定尿素分解菌以加入酚红指示剂作为鉴别培养基14.在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时甲组实验用氮源只含尿素的培养基乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基其他成分都相同在相同条件下操作、培养与观察则乙组实验属于（）A. 空白对照B. 自身对照C. 相互对照D. 条件对照【答案】D【解析】本实验甲组为实验组乙组为对照组给实验组某种处理给对照组另一条件的处理为条件对照故选D15.下列关于纤维素分解菌分离实验的说法不正确的是（）A. 通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌B. 当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后培养基中会出现透明圈C. 该实验用的培养基为选择培养基D. 在用刚果红染色时只能先培养微生物再加入刚果红不能在倒平板时加入【答案】D【解析】A、刚果红能鉴别纤维素可采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌 A正确B、刚果红只能与纤维素结合呈红色当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后菌落周围的纤维素被分解所以培养基中会出现透明圈 B正确C、由于碳源是纤维素所以只有能分解纤维素的菌才能生存所以该培养基属于选择培养基 C正确D、在用刚果红染色时可以先培养微生物再加入刚果红也可以在倒平板时加入 D错误16.微生物培养过程中肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（）A. 细菌的大小、形状、颜色B. 菌落的大小、形状、颜色C. 有无鞭毛D. 培养基的不同【答案】B【解析】A、肉眼观察不到细菌的大小、形状、颜色 A错误B、鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是菌落形态如菌落的大小、形态、颜色 B正确C、肉眼无法观察到细菌的鞭毛 C错误D、培养基不同不是鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据 D错误17.在用刚果红染色法分离分解纤维素的微生物实验时先进行选择培养的目的是（）A. 杀灭不需要的微生物B. 除去杂菌获得能分解纤维素的纯种菌C. 浓缩目标菌种D. 在微生物的菌落上获得纤维素分解菌种【答案】C【解析】解分解纤维素的微生物的基本过程如下土壤取样\rightarrow 选择培养\rightarrow 梯度稀释\rightarrow 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上\rightarrow 挑选产生透明圈的菌落其中选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度 C正确 ABD错误．故选 C．18.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌下列实验操作错误的是（）A. 将土壤用无菌水稀释制备10^-3sim10^-7稀释倍数的土壤稀释液B. 将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上C. 用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌D. 从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株【答案】C【解析】从土壤中分离以尿素为氮源的细菌时将土壤用无菌水稀释制备土壤稀释液将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上用加入酚红指示剂的鉴别培养基可以筛选分解尿素的细菌从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株故选C19.下列说法正确的是（）A. 绿萝的呼吸作用将有机物分解为无机物实现了物质循环B. 实验“落叶是在土壤微生物作用下腐烂的吗？”中对照组要放在60℃下恒温灭菌1h 尽可能排除土壤微生物的作用C. 预测种群数量的变化的主要依据是年龄组成D. 稻田里杀灭害虫大大地提高了能量的利用率【答案】C【解析】解 A.物质循环指的是构成生物的元素在无机环境和生物之间进行循环 A错误B.实验组要放在60℃下恒温灭菌1h 尽可能排除土壤微生物的作用 B错误C.预测种群数量的变化的主要依据是年龄组成 C正确D.稻田里杀灭害虫不能明显提高能量的利用率 D错误故选 C二、解答题（本大题共计5小题每题10分共计50分）20.（1）对大肠杆菌进行数量测定选用图\_\_\_\_\_\_\_\_________接种样品．结果分析C ．适宜温度下培养．20.（2）测定的大肠杆菌数在对应稀释倍数为10^6的培养基中得到以下几种统计结果正确可信的是________20.（3）一同学在稀释倍数为10^5的培养基中测得平板上菌落数的平均值为43.4 那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）________．20.（4）用这种方法测定密度实际活菌数量要比测得的数量________ 因为________．20.（5）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现在培养基上还有其他杂菌的菌落能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？________ 为什么？________．20.（6）自己在家中制作的果醋很容易受大肠杆菌等微生物的污染而包装瓶上写着105^\circ C 高温瞬时的果醋瓶上写着“不含任何防腐剂最长保质期为一年” 其中的奥秘是________．【答案】 \A , 稀释涂布平板法【解析】解（1）对大肠杆菌进行数量测定的实验常用的接种方法是稀释涂布平板法即图中的A．【答案】D【解析】（2）分析选项可知 D选项中四个平板的每个平板的菌落数在30\sim 300之间且非常接近因此D选项的结果最可靠．【答案】4.34times 10^7个【解析】（3）每毫升样品中的细菌数是= （平板的平均菌落数\div 涂布的体积）\times 稀释的倍数= (43.4\div 0.1)\times 10^5= 34.34\times 10^7个．【答案】少, 当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落【解析】（4）由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落因此估算的菌落数少于实际菌落数．【答案】不能, 因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程【解析】（5）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现在培养基上还有其他杂菌的菌落不能确定大肠杆菌品系被污染也可能是培养基被污染或接种过程没有严格按照无菌技术进行操作或培养过程污染．【答案】高温杀死了微生物【解析】（6）105^\circ C 高温将微生物杀死因此可以较长时间保存．21.（1）实验步骤①配制以________为碳源的固体培养基为了使培养基凝固成固体应该向培养基中加入的物质是________．②将土壤样品接种到已灭菌的培养基上在恒温培养箱中培养一段时间后培养基上出现________．③将接种针用________ 法灭菌后从②中的培养基上挑取一定量细菌接种入________（固体、半固体、液体）培养基在恒温摇床上培养24 h 使细菌大量繁殖．④配制与①相同的培养基并加入少量碘液使培养基呈蓝紫色．用________法将上一步大量繁殖后的细菌接种到已灭菌的培养基上．⑤培养一段时间后观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小．周围出现较大________ 现象的菌落即为初选菌落经进一步分离、纯化后即可达到实验目的．21.（2）上述所有倒平板和接种操作都应在超净台上酒精灯________附近进行．21.（3）上述实验步骤中从用途看①所用培养基属于________培养基⑤所用培________ 培养基．【答案】淀粉, 琼脂, 菌落, 灼烧灭菌, 液体, 稀释涂布平板, 透明圈【解析】解（1）①筛选淀粉分解菌需要配置以淀粉为唯一碳源的选择培养基配方中加入琼脂可以配置固体培养基．②将土壤样品梯度稀释后接种到已灭菌的培养基上一些土壤微生物可以利用培养基中的营养物质长出菌落．③金属的接种工具使用灼烧灭菌法灭菌．淀粉分解菌属于异养需氧型微生物需要将其接种到液体培养基进行摇床震荡培养．④淀粉分解菌的鉴定需要将其用稀释涂布平板法接种到已灭菌的培养基上．⑤淀粉遇到碘液会变蓝色在固体平板培养基上淀粉分解菌能够将淀粉分解而使得以淀粉分解菌菌落为中心的非蓝色的透明圈．出现透明圈的就是淀粉分解菌经进一步纯化培养可达到实验目的．【答案】火焰【解析】（2）微生物培养的成功的关键是无菌操作所以所有倒平板和接种操作都应在超净台上酒精灯火焰附近进行．【答案】选择, 鉴别【解析】（3）从用途分析①所用培养基属于选择培养基⑤所用培养基属于鉴别培养基．22.（1）配制培养大肠杆菌的培养基时根据“细菌喜荤霉菌喜素”的规律通常在培养基中加入蛋白胨和________作为营养物质为了________ 常需加入一定量的NaCl22.（2）实验中大肠杆菌在________培养基中进行扩大培养培养液经________后在LB 固体培养基上进行________ 并置于恒温培养箱中培养可以获得如图效果22.（3）（）是筛选高表达量菌株的最简便方法对其进行初步鉴定时下列哪项不能作为鉴定依据？（）（【答案】酵母提取物, 维持一定的滲透压【解析】配制培养大肠杆菌的培养基时根据“细菌喜荤霉菌喜素”的规律通常在培养基中加入蛋白胨和酵母提取物作为营养物质为维持一定的滲透压常需加入一定量的NaCl 【答案】LB液体（培养基）, 稀释, 涂布分离【解析】实验中大肠杆菌在 LB液体（培养基）培养基中进行扩大培养培养液经稀释后在LB固体培养基上进行涂布分离并置于恒温培养箱中培养可以获得如图效果【答案】C【解析】单菌落分离是筛选高表达量菌株的最简便方法对其进行初步鉴定时通常对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小、颜色等特征进行初步的鉴定23.（1）图中应配制________的选择培养基鉴别培养基还需添加________作指示剂分解尿素细菌在该培养基上生长一段时间后其菌落周围的指示剂将变成________色土壤中的细菌之所以能将尿素分解是因为这些细菌能合成________23.（2）制备实验所需的培养基时在各成分都溶化后和分装前要进行的是________和灭菌对培养基进行灭菌的常用方法是________ 倒平板时要待平板冷凝后将平板倒置其主要目的是________________________________________23.（3）在5个细菌培养基平板上均接种稀释倍数为10^5的土壤样品液0.1mL 培养一段时间后平板上长出的细菌菌落数分别为191、16、362、173和182 该过程采取的接种方法是________ 每克土壤样品中的细菌数量为________个/mL 此计数方法测得的数目往往比活菌的实际数目________ 理由是________________________________________【答案】（1）尿素为唯一氮源, 酚红, 红, 脲酶【解析】解（1）由题意可知该实验目的是从土壤中筛选分解尿素的细菌只有能合成脲酶的细菌可以分解尿素所以选择培养基中应以尿素为唯一氮源分解尿素细菌培养一段时间后细菌合成的脲酶将尿素分解为氨使培养基的pH升高可用酚红作指示剂此时指示剂变红【答案】（2）调整pH, 高压蒸汽灭菌, 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染防止培养基中水分挥发过快【解析】（2）制备实验所需的培养基时在各成分都溶化后和分装前要调整pH和灭菌对培养基进行灭菌常用高压蒸汽灭菌法为防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染倒平板时要待平板冷凝后将平板倒置【答案】（3）稀释涂布平板法, 1.82×10^8, 少, 两个或更多个细胞连在一起平板上观察到的只是一个菌落【解析】（3）根据题意此方法为稀释涂布平板法为保证结果的准确性统计平板上的菌落数一般选择菌落数在30~300的平板进行计数并计算这些平板上菌落数的平均值即在稀释倍数为 10^5的土壤样品溶液0.1mL中含有（191+173+182）÷3= 182个则每毫升土壤样品中的细菌数量为182÷0.1× 10^5=1.82× 10^8个稀释涂布平板法中当两个或多个细胞连在一起时平板上观察到的是一个菌落所以该法测得的数目往往比活菌的实际数目少统计数目时除了用稀释涂布平板法进行菌落计数外显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法24.（1）步骤①中用________法将1 mL菌液逐步稀释成10^﹣6的悬浊液为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见表）注“+“表示有“﹣“表示无据表判断培养基甲________（填“能“或“不能“）用于分离和鉴别纤维素分解菌原因是________ 培养基乙________（填“能“或“不能“）用于分离和鉴别纤维素分解菌原因是________ 某同学在纯化土壤中的细菌时发现培养基上的菌落连成一片最可能的原因是________24.（2）对土壤中该类微生物进行计数则步骤①采用的接种方法是________24.（3）纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的________进行定量测定的方法【答案】梯度稀释, 不能, 液体培养基不能分离单菌落且纤维素不是唯一碳源, 不能, 培养基乙中没有纤维素不会形成CR﹣纤维素红色复合物即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌, 菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够）【解析】筛选纤维素分解菌时需要将样品进行梯度稀释10^﹣6的悬浊液据表分析可知甲培养基为液体培养基不能分离单菌落且纤维素不是唯一碳源所以不能用于分离和鉴别纤维素分解菌乙培养基为固体培养基但乙中没有纤维素不会形成 CR﹣纤维素红色复合物即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌所以也不能用于分离和鉴别纤维素分解菌菌液稀释倍数不够浓度太高会导致在纯化土壤中的细菌时发现培养基上的菌落连成一片【答案】稀释涂布平板法【解析】步骤①中对微生物进行计数采用的接种分是稀释涂布平板法【答案】葡萄糖【解析】纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖量进行定量测定的方法。
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实验室守则
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生物技术概述
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第一部分 微生物的利用
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实验1 大肠杆菌的培养和分离
浙科版高二生物选修1电子课本课 件【浙科版高二生物选修1电子课本 课件【全册】目录
0002页 0103页 0184页 0186页 0256页 0269页 0319页 0383页 0501页
实验室守则 第一部分 微生物的利用 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 第二部分 酶的应用 实验5 加酶洗衣粉的使用条件和效果 实验7 用蒸气蒸馏法从芳香植物中提取精油 实验9 腐乳的制作 第四部分 浅尝现代生物技术 实验12 乳酸脱氢酶同工酶的分离
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实验一大肠杆菌的培养与分离(最新)
恒温培养箱
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床
摇床
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床 7、酒精灯和超净台
1-1什么是生物技术
• 生物技术=生物工程
应用自然科学及工程学原理，以微生 物体、动物体、植物体或其组成部分作为 生物反应器将物料进行加工，以提供产品 来为社会服务的技术。
1-2 传统生物技术
• 传统生物技术指主要通过微生物 的发酵来生产商品.如:酱、醋、 酒、面包、奶酪、酸奶等
1-3 现代生物技术
②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进人细胞； ④使细胞具有致病性及对 噬菌体的敏感性。
伤 寒 杆 菌 细 胞 壁 中 含 毒 素
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
特点：结构简单，形体微小，通常要用光学显微镜或 电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。 用途：90%以上的微生物是对人类有利的。如抗生素 多数来源放线菌和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳 由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物也能消除环境污染， 在新能源领域将发挥巨大作用。
1）放线菌
1、结构： 单细胞原核 分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
分离后,一个菌体 便会形成一个菌 落,这是消除污染 杂菌的通用方法, 也是用于筛选高 表达量菌株的最 简便方法之一
高中生物浙科版选修一知识点归纳
高中生物浙科版选修一知识点归纳选修一生物技术实践知识点总结第一部分微生物的利用一、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌：P20-21，灭菌前，试管加棉花塞或塑料盖、三角瓶用封口膜或6层纱布封口……最后各种用品均需用牛皮纸或报纸包好，用高压蒸汽灭菌法（121C，1kg/cm2压力）灭菌15min。
值得注意的是，实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。
灭菌后，通常将实验用具放入60～80℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。
在进行实验操作前，将需要使用的用具从烘箱中取出，放到超净台上。
在超净台工作之前，应先打开超净台的紫外灯和过滤风，工作时关闭紫外灯。
塞子制作的好坏是控制污染发生的关键。
2、培养基的配制：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
①培养基种类尺度培养基类型固体培养基液体培养基合成培养基天然培养基鉴别培养基配制特点加入琼脂不加入琼脂由已知成分配制而成由天然身分派制而成添加某种唆使剂或化学药剂主要应用菌种分离,鉴定,计数、保存菌种的扩大培养菌种的鉴别菌种的分离按物理性质分按化学组身分按用途分②微生物培养的培养基：LB培养基。
配制培养基时需考虑营养物质的配比外，还需要考虑微生物生长对pH、氧气、渗透压等的要求。
“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常细菌培养基要用卵白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
此外．细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌要求在中性偏酸的环境中生长。
选择培养基添加（或短少）某种化学身分3、培养基的灭菌：通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。
但假如培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm压力（90C以上）灭菌30min。
有些不能加热灭菌的化合物，如尿素（加热会分解）等，只能用G6玻璃砂漏斗过滤，但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用纸包好灭菌。
高中生物 第1章 第1节 微生物的分离和纯培养检测(含解析)中图版高中选修1生物试题
第一节微生物的分离和纯培养一、培养基1．含义由于微生物代谢方式的不同，因而对营养物质的需求也是有差异的。
根据微生物生长繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。
2．平板培养基将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。
二、无菌技术1．目的和要求在微生物的分离和纯培养中，一定不能有外来的污染性杂菌，所以必须采用无菌技术进行操作。
因此，在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所要进行消毒。
2．灭菌和消毒(1)灭菌：用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物，常用的方法是高温灭菌法。
(2)消毒：用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞，常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。
三、接种技术1．含义把相应的研究对象移入培养基中的过程。
2．分类在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。
预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物的概念及特点 1．概念微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。
2．特点微生物⎩⎨⎧小个体微小⎩⎪⎨⎪⎧ μm 微米级：光学显微镜下可见细胞nm 纳米级：电子显微镜下可见细胞器、病毒微生物⎩⎪⎪⎨⎪⎪⎧ 简构造简单⎩⎪⎨⎪⎧单细胞简单多细胞非细胞即“分子生物”低进化地位低⎩⎪⎨⎪⎧原核类：细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、蓝细菌真核类：真菌酵母菌、霉菌、原生生物非细胞类：病毒、类病毒、朊病毒二、微生物的营养及功能微生物的化学组成成分与其他生物大体相同，也是由C 、H 、O 、N 、P 、S 等元素组成，其中C 、H 、O 、N 占细胞干重的90%以上，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物。
这些化合物可归纳成碳源、氮源、生长因子、无机盐和水这五大类营养要素。
营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO 2、NaHCO 3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物①微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。
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第一部分 微生物的利用 实验1 大肠杆菌的培养和分离
1获得纯净培养物的关键是( )
A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
B．接种纯种细菌
C．适宜环境条件下培养
D．防止外来杂菌的入侵
2本实验分离大肠杆菌所采用的方法是( )
A．涂布分离法 B．稀释分离法
C．竞争分离法 D．划线分离法
3大肠杆菌与下列哪一组微生物的细胞结构相似( )
A．病毒、酵母菌 B．硝化细菌、噬菌体
C．放线菌、细菌 D．乳酸菌、霉菌
4大肠杆菌的培养和分离所用的培养基从物理性质上分别属于( )
A．液体培养基、固体培养基
B．固体培养基、液体培养基
C．液体培养基、液体培养基
D．固体培养基、固体培养基
5LB培养基的物质组成是( )
A．葡萄糖、蛋白质、NaCl、水
B．蛋白质、NaCl、水
C．蛋白胨、NaCl、水、酵母提取物
D．葡萄糖、NaCl、水、酵母提取物
6下列划线分离的图解中，正确的是( )
7平板冷凝后要将平板倒置，其意义是( )
A．利于大肠杆菌的接种
B．防止杂菌污染
C．利于培养基的冷却
D．防止皿盖上的冷却水倒流入培养基
8经划线分离的大肠杆菌，经37 ℃恒温箱中培养12～24 h后，观察到怎样的结果，则
表明菌已被分离了( )
A．在划线的每一区域均出现了菌落
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2
B．在每一区域的中部有菌群生长
C．在划线的末端出现不连续的单个菌落
D．在划线的起点出现连续的多个菌落
9一个细菌经一段时间的培养，若出现了64个细菌，则初略推算该菌培养的时间为
( )
A．20 min B．1280 min
C．100 min D．5 min
10下列操作错误的是( )
A．用酒精擦拭双手
B．用氯气消毒水源
C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行
D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭
11将大肠杆菌接种到彻底灭菌的固体培养基上，经过一定时间的培养，就能够得到
( )
A．菌丝 B．无一定形态的群体
C．单个细菌 D．菌落
12对无菌操作转接培养物的叙述，正确的是… ( )
①接种环在火焰上灼烧灭菌 ②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞 ③打开棉塞的试管
口通过火焰 ④将已冷却的接种环伸入菌液，蘸取一环菌液转移到一装有无菌培养基的试管
中 ⑤将试管口塞上棉塞 ⑥接种环进行消毒
A．①②④⑤⑥ B．①②③④⑤
C．①②③④⑤⑥ D．①②③④
13大肠杆菌属于下列哪一种类型的菌( )
A．严格厌氧型 B．严格需氧型 C．自养型 D．兼性厌氧型
14某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用
菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来
各种食用菌菌种。请完成以下问题：
(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，其中制备固体牛肉膏蛋白胨
培养基所需的原料中：提供能源的主要物质是________；琼脂的作用是________，它不提供
营养。
(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故制备培养基时各成分要有合适的
________。
(3)将配制好的培养基分装到试管中，培养基体积约占试管长度的________。加棉塞后
把若干个试管捆为一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧，放入________中灭菌。
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3
(4)从一支试管向另一支试管接种时应注意，接种环要在酒精灯________(“内”或
“外”)焰灭菌，并且待接种环________后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近。
15某兴趣小组进行研究性学习，探究“影响细菌生长繁殖的因素”。在培养细菌的过
程中，发现了某种细菌(记作R)的周围其他细菌的生长繁殖受到抑制。他们把R细菌接种到
专门的培养基上进行培养，一段时间后，他们除去R细菌，用该培养基再培养其他细菌， 结
果其他细菌仍然不能在这个培养基上生长和繁殖。
(1)从生态学的角度分析，R细菌与周围细菌之间的关系是________。
(2)于是，某同学假设了“造成R细菌的周围其他细菌不能生长和繁殖”的可能原因，
你认为最可能的原因是________。
A．R细菌占据了其他细菌的生存空间
B．R细菌吞噬了其他细菌
C．R细菌产生了不利于其他细菌生存的物质
D．R细菌更容易吸收培养基中的物质
(3)参照上述题目中给出的有关材料，请你设计一个实验对第(2)题所作的选择进行验
证，简述你的实验步骤及结论：
①方法步骤：
第一步：_____________________________________________________________。
第二步：_____________________________________________________________。
第三步：_____________________________________________________________。
第四步：_____________________________________________________________。
②结果：_____________________________________________________________。
③结论：_____________________________________________________________。
参考答案
1答案：D 解析：纯净培养物是单一、纯种菌的菌落。因此，确保无其他杂菌的入侵
是关键，故选D。
2答案：D 解析：分离细菌的方法多种多样。本实验中分离大肠杆菌用了划线分离法。
3答案：C 解析：病毒(如：噬菌体)无细胞结构，酵母菌、霉菌属真核生物，放线菌、
细菌(如：硝化细菌、大肠杆菌)是由原核细胞构成的。
4答案：A 解析：培养基从物理性质上可分为固体、半固体和液体培养基。每种培养
基用途各不相同。大肠杆菌的分离和培养分别用固体和液体培养基。
5答案：C 解析：LB培养基必须满足五大营养成分，即碳源、氮源、水、无机盐以及
生长因子。C选项中全齐。而A中缺生长因子，B中缺生长因子，D中缺氮源。
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6答案：C 解析：划线分离的划线有许多要求。A的划线方法不对，而B错在划线2
的起点，D项错在4与1交叉了。
7答案：D 解析：倒置平板是为了防止皿盖上的水冷却后倒流入培养基中，带来杂菌
污染的可能。
8答案：C 解析：在划线的末端由于菌数减少，细菌分离，其末端出现不连续的单个
菌落，至此，表明菌已被成功分离了。
9答案：C 解析：细菌以二分裂方式繁殖，约20 min分裂1次，若1个细菌分裂得到
64个细菌，则说明其已分裂了5次，则共培养了约20×5＝100 min。
10答案：D 解析：消毒与灭菌在概念上是不同的。但人们在日常生活中常会混淆。D
的操作错在器皿应该灭菌，而不是用酒精擦拭消毒。
11答案：D 解析：细菌经繁殖和生长可得到菌落。
12答案：C 解析：这是对无菌操作过程中其中一个环节的考查。这一转接培养物的正
确顺序是C。
13答案：D 解析：大肠杆菌不能自己将无机物合成有机物，其异化方式却既可需氧又
可厌氧，即兼性厌氧型。
14解析：(1)配制固体牛肉膏蛋白胨培养基，其中的牛肉膏成分复杂，为生命活动提供
能源，也能提供氮源和生长因子；(2)考查配制培养基的基本要求——营养要协调，一方面
各种营养成分的种类要适合微生物的生长需求，另一方面各种营养成分的比例要适合微生物
的生长需求。(3)考查培养基分装和灭菌的方法。(4)考查接种的方法，接种环要在酒精灯外
焰灭菌，因为外焰的温度高于内焰。灭菌后的接种环必须冷却后再接种，温度过高会杀死菌
种。
答案：(1)牛肉膏 凝固剂
(2)比例
(3)1/3 高压蒸汽灭菌锅
(4)外 冷却
15解析：(1)根据题目所给信息可得到两者的关系是竞争。(2)因为某种细菌的周围其
他细菌受到抑制，那就不可能是D，否则自己也难存活。也不可能为A和B，因为除去R细
菌，其他细菌也不能生长和繁殖。(3)由(2)中可知变量为有无R细菌。设计实验中要特别注
意菌种的选择，对照原则，唯一变量原则以及微生物的接种技术。
答案：(1)竞争 (2)C
(3)①第一步： 取两个培养皿，按相同营养成分配制甲、乙两个培养基
第二步： 甲培养基上接种R细菌，培养一段时间后除去R细菌，乙培养基上不接种R
细菌，作对照
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第三步：两个培养基分别接种相同的其他细菌
第四步：在相同的条件下，让甲、乙两个培养基上的细菌生长、繁殖
②甲培养基上细菌的生长受到抑制，不能繁殖。乙培养基上细菌能正常生长繁殖
③R细菌产生了不利于其他细菌生长和繁殖的物质