中药化学实验指导—实验九 防己中粉防己碱的提取分离与检识
汉防己(华西药学药化实验)
药材：汉防己科千金藤属植物（Stephania tetrandra S.Moore）块根粉 末 试剂：0.5%硫酸、新鲜石灰乳、碘化汞钾试剂、碘化碘钾试剂、碘化铋 钾试剂、硅钨酸试剂、净砂、乙醚、1%盐酸、95%乙醇、氯化钠、 硅胶GF254、0.5%CMC-Na aq、展开剂（环己烷-乙酸乙酯-二乙胺比 例为6：3:1）、显色剂（改良碘化铋钾试剂）。
思考 1.为什么要使用稀H2SO4提取？ 2.为什么用石灰乳调pH? 3.抽滤后拌砂的目的是什么？
操作： 1. 将40g汉防己粗粉与0.5%硫酸31.5ml拌匀，发胀35min，均与装入渗漉筒中，用950ml0.5% 硫酸渗漉提取，渗漉速度为2ml/min，渗漉液为棕色液体。取渗漉液四份，每份1ml，分别加 入2滴碘化汞钾、碘化铋钾、碘化碘钾、硅钨酸试剂，反应结果如下：
沉淀试剂 现象
碘化汞钾 立即产生大量 类白色沉淀 +
思考与讨论
注意事项： 1.装置的安装要小心，不能打碎仪器 2.点样时轻点三次，每次点完用电吹风立即烘干，要求点样点扩散后不超过 2mm 3.抽滤转移残留样品时用母液而非洗涤液转移可避免因溶剂的增多而造成的损失。 洗涤样品时尽量做到洗涤溶剂少量多次，即用最少的溶剂达到最大洗涤效果。 4.重结晶后应逐步冷却静置，骤冷会使晶型不好 5.乙醚的爆炸限很宽1.85%-36.5%，闪点-45摄氏度。乙醚等易燃易爆液体应避 开明火，实验选择热源时要充分考虑这方面因素。且乙醚沸点低、挥发性强、 有麻醉性，实验过程中要尽量减少其在空气中暴露，装置气密性要求严格。 6.渗漉过程中要保持提取剂液面高于药材，使药材始终完全浸润在提取剂中，以 防药材干涸裂开，使之后加入的溶剂直接从裂缝中流走而达不到提取目的。
结果
橘红色无沉淀
天然药化实验指导书
《天然药物化学实验》课程课程编号：实验指导书主撰人解军波审核人天津商业大学生物技术与食品科学学院二零零九年十月前言1．实验总体目标天然药物是人类防病治病药物的一个重要来源。
提取、分离天然药物中具有生理活性的化学成分，是天然药物化学研究的一个重要课题。
天然药物化学实验主要是学习天然药物有效成分的提取、分离、纯化、鉴定的方法。
通过实验，加深学生对理论知识的深入理解，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，为将来从事相关研究打下坚实的实践基础。
⒉适用专业年级制药工程专业三年级（第五学期）⒊先修课程分析化学、有机化学⒋实验课时分配⒌实验环境实验室的标准温度为20℃,实验室内的相对湿度一般应保持在50－70％。
实验室的噪音、防震、防尘、防腐蚀等方面的环境条件应符合在室内开展的检定项目之检定规程。
⒍实验总体要求提取、分离、纯化、鉴定是贯穿于天然药物化学实验的全过程的基本操作单元。
正确掌握和灵活处理各个环节的操作技能是训练学生严格认真的科学态度与良好工作习惯，促进理论与实践结合的一个重要环节。
通过本实验让学生掌握、熟悉天然药物化学提取、分离、鉴识技术的基本原理与基本方法，能够进行日常的天然药物研究工作。
⒎本实验的重点、难点及教学方法建议为了保证实验的正常进行和培养学生良好的实验作风及保证实验质量，学生必须遵守下列要求：1、实验前必须充分预习实验讲义，明确实验目的、要求，防止实验盲目性，讲求实验质量。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。
要善于思考，学会运用所学理论知识解释实验现象，研究实验中的问题。
3、重视安全操作，遵守实验室安全守则，使用易燃、易爆、有毒物品时要小心谨慎，避免事故发生。
4、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。
目录实验一、芦丁的提取、分离与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 实验二、汉防己生物碱的提取、分离、鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3 实验三、甘草酸的制备与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6实验一芦丁的提取、分离与鉴定一、实验目的1了解黄酮类化合物的一般性质。
实验三 粉防己生物碱的提取分离与鉴定
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
注二：净砂必须事前洗净烘干，拌和量最好不要超过120g，以免索氏提取器一次装不下或装得过多。
实验一 黄藤中掌叶防己碱的提取,氢化和鉴定
渗漉液（400ml）
10%固体NaCl，搅拌溶解 40% NaOH调pH10，静置，抽滤
巴马汀粗品
氯化巴马汀的制备
巴马汀粗品
40ml80%EtOH,加热溶解15min 趁热抽滤
滤渣
20ml 80%EtOH 加热溶解 趁热抽滤，可重复至溶液变浅
滤液
滤液合并
6M HCl调pH2，放置析晶，抽滤
仪器：抽滤设备，水浴锅 试剂：50%甲醇溶液，四氢硼钠，6M盐酸，95%乙
醇
注意：1.四氢硼钠是强还原剂，避免长时间接触空 气和手 2.加四氢硼钠要摇匀，反应充分
3.25
四、鉴定
仪器：显微熔点测定仪 溶剂：碘化铋钾，乙醇 注意：熔点测定时，样品量要少
4.1
总报告
实验目的
1.掌握渗漉提取方法 2.得到巴马汀粗品 3.生物碱的定性鉴别 4.重结晶的方法 5.氯化巴马汀精品 6.巴马汀的氢化反应，制备延胡索乙素 7.学习生物碱的TLC检视方法 8.巴马汀，四氢巴马汀的定性鉴别
6.TLC判断：2~3种不同系统的展开剂圆整的斑点。
7.溶液在析晶时调pH会有什么后果？ 巴马汀与巴马汀盐酸盐同时存在，产品纯度会降低
8.加入四氢硼钠颜色由黄变无色，溶液浑浊的原因是什么？ 巴马汀还原为四氢巴马汀，其难溶于水，溶液变浑浊
9.延胡索乙素重结晶时为何加入水？ 四氢巴马汀的极性小，加水极性变大，易于析出
盐析，静置，抽滤
巴马汀粗品
3.渗漉用的酸水，除醋酸外，还可用什么酸水？ 答：0.1%~1%的硫酸盐酸，酒石酸也可作为提取剂。
4.氯化巴马汀的制备实验中，为什么用HCl调PH？ 答：使其生成小檗碱的难溶的盐酸盐，使溶解度降低，易于
汉防己提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解汉防己生物碱的提取、分离与鉴定方法。
2. 掌握回流提取、低压柱层析等实验操作技术。
3. 学习天然产物中活性成分的提取与分离过程。
二、实验原理汉防己（Stephania tetrandra S. Moore）为防己科千金藤属植物，其根含有多种生物碱，如汉防己甲素、乙素等。
本实验采用回流提取和低压柱层析方法，从汉防己根中提取生物碱，并进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己根粉、95%乙醇、丙酮、硅胶、氧化铝、硝酸银、氨水、氯化钡等。
2. 实验仪器：圆底烧瓶、回流装置、布氏漏斗、抽滤瓶、低压柱层析柱、超声波清洗器、电子天平、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1. 汉防己生物碱的提取（1）称取100 g汉防己根粉，置于1000 ml圆底烧瓶中。
（2）加入500 ml 95%乙醇，回流1 h。
（3）过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液。
（4）浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析（1）装柱：取25 cm长、内径1.8 cm的层析柱，用减压干法装硅胶约25 g（高约20 cm）。
（2）拌样加样：取汉防己碱约150 mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度），用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱：开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入溶剂，收集不同洗脱组分。
3. 汉防己生物碱的鉴定（1）紫外分光光度法：将提取的生物碱溶液在紫外分光光度计上测定其最大吸收波长。
（2）薄层色谱法：将提取的生物碱溶液点于薄层板上，与已知标准品进行对照，观察其Rf值。
五、实验结果与分析1. 提取结果：经回流提取和低压柱层析，从汉防己根中成功提取出生物碱。
2. 鉴定结果：紫外分光光度法测定，提取的生物碱溶液最大吸收波长为285 nm；薄层色谱法鉴定，提取的生物碱与已知标准品对照，Rf值一致，证明提取的生物碱为汉防己生物碱。
汉防己生物碱的提取
汉防己生物碱的提取、分离与鉴定汉防己为防己科千金藤属物Stephania tetrandra S. Mcore的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。
主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
临床上除用作治疗高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。
一、目的要求通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。
1．生物碱的一般提取方法。
2．纯化单体的方法及薄层层析鉴定二、已知生物碱的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。
1．汉防已甲素（Tetrandrine，汉防已碱，粉防已碱）无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。
NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3 R=H 汉防己甲素汉防己乙素O2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。
籍此可以相互分离，用不同溶剂重结昌时，其晶形和溶点不同：乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃丙酮 六面粒状晶 mp134℃吡啶-甲醇 mp 121~2℃环已烷-EtocAc mp 156℃3．轮环藤酚碱（Cylanoline ）为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。
实验一 黄藤中掌叶防己碱的提取,氢化和鉴定
渗漉液（400ml）
10%固体NaCl，搅拌溶解 40% NaOH调pH10，静置，抽滤
巴马汀粗品
氯化巴马汀的制备
巴马汀粗品
40ml80%EtOH,加热溶解15min 趁热抽滤
滤渣
20ml 80%EtOH 加热溶解 趁热抽滤，可重复至溶液变浅
滤液
滤液合并
6M HCl调pH2，放置析晶，抽滤
思考题
1.巴马汀的提取实验中，先加HAc将药粉润湿15min的目的是什么 答：避免干燥药材吸水后在渗漉桶内膨胀而使渗漉液难以流出。
2.还可用什么方法，提取黄藤中的生物碱，请设计流程。
醇类溶液提取法
黄虅粉
酸或酸性醇
醇液
挥醇，加酸水
药渣
沉淀
H+/OHH,2O/-H 2O CHCl3
OH -/H 2O
CHCl3
6.TLC判断：2~3种不同系统的展开剂圆整的斑点。
7.溶液在析晶时调pH会有什么后果？ 巴马汀与巴马汀盐酸盐同时存在，产品纯度会降低
8.加入四氢硼钠颜色由黄变无色，溶液浑浊的原因是什么？ 巴马汀还原为四氢巴马汀，其难溶于水，溶液变浑浊
9.延胡索乙素重结晶时为何加入水？ 四氢巴马汀的极性小，加水极性变大，易于析出
延胡索乙素
鉴定
TLC: 巴马汀 对照品 4.6
样 品 4.5 延胡索 对照品 0.9
样 品 1.0 熔距:
巴马汀 216——220 延胡索159——160
实验数据的记录与计算
1.巴马汀的提取：称重，计算粗制率 W=1.5/60×100%=2.5% 渗漉液+ 碘碘铋钾——红褐色沉淀
碘化铋钾——橘红色沉淀 鞣酸——橘黄色沉淀 硅钨酸——黄色沉淀 苦味酸——亮黄色沉淀
9 学习项目一 生物碱的提取分离和检识
气相色谱法等。
生物碱在酸性水或稀醇中与某些 试剂生成难溶于水的复盐或络合物的 反应称为生物碱沉淀反应。这些试剂 称为生物碱沉淀试剂。
①用于检查生物碱的有无，在生物碱的定性 鉴别时，这些试剂可用于试管定性反应和作 为平面色谱的显色剂。 ②另外在生物碱的提取分离中还可指示提取、 分离终点。 ③ 个别沉淀试剂可用于分离纯化生物碱， 如雷氏铵盐可用于沉淀分离季铵碱。
① 反应一定要在酸性条件下，生物碱 成盐溶于水方可反应。 ② 对生物碱的有无定性时，应用三种 以上试剂分别进行反应，均阳性或阴 性方有可信性。
1%钒酸铵的浓硫酸溶液 阿托品呈红色、 奎宁呈橙色、士的宁呈蓝紫色到红色。 1%钼酸钠浓硫酸溶液 乌头碱呈黄棕色、 吗啡呈紫色转棕色、可待因呈暗绿色至淡 黄色。 甲醛-浓硫酸溶液 吗啡呈橙色至紫色、可 待因呈洋红色至黄棕色
生物碱盐易溶于水，难溶于亲 脂性有机溶剂的性质，将生物体内多 种形式的生物碱转变为在水中溶解度 较大的盐而被提出。
（2）离子交换树脂提取法：
酸水提取液通过阳离子交换树脂柱， 使生物碱盐阳离子交换在树脂上，而非 碱性化合物随溶液流出柱。树脂用氨水 碱化，使生物碱从树脂上游离出来，再 将树脂用有机溶剂洗脱。洗脱液浓缩后 即可得到游离的总生物碱。
3. 利用生物碱特殊功能基进行分 离 具有酚羟基的生物碱，除有碱性外 还具有弱酸性，可与NaOH溶液生成 酚盐而溶于水，而非酚性生物碱不 溶于碱水，可利用此性质将两者分 离。如吗啡和可待因的分离。
具有内酯或内酰胺结构的生物 碱，可与NaOH溶液在加热条件下皂 化开环生成溶于水的羧酸盐，酸化 后环合，与不具有这类结构的化合 物分离。
（2）有机溶剂萃取法：
酸水提取液用碱液碱化，使生物碱 盐转变为生物碱，再用亲脂性有机溶剂 萃取，合并萃取液，回收有机溶剂即可 得到总生物碱。 （3）沉淀法： 酸水提取液加碱液碱化，使生物碱 在水中游离而沉淀析出。
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实验九 防己中粉防己碱的提取分离与检识
（一）目的要求
学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：
1．掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。
2．熟悉生物碱的一般理化性质。
3．熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。
4．掌握连续回流法（索氏提取器）、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。
（二）主要化学成分的结构及性质
防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore 的干燥根。
总生物碱含量约为1.5％～2.3％，主要为粉防己碱和防己诺林碱。
1．粉防己碱(tetrandrine) 又称粉防己甲素，分子式C 38H 42N 2O 6，在防己中的含量约为1％，为无色针状结晶（乙醚），mp.217～218℃。
易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。
N H 3C O N
O C H 3
O R
H 3C O
O C H 3O
C H 3
粉防己碱 R=CH 3
防己诺林碱 R=H
2．防己诺林碱(fangchinoline) 又称粉防己乙素，分子式C 37H 40N 2O 6，在防己中的含量约为0.5％，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237～238℃。
溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。
（三）实验原理
本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。
再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。
（四）实验内容
1．防己总生物碱的提取略
2．防己总生物碱的精制略
3．粉防己碱和防己诺林碱的分离略
4．防己生物碱的检识
（1）生物碱沉淀反应取粉防己碱的盐酸水溶液8 ml分置于4支试管中，分别滴加下列试剂2～3滴，观察并记录有无沉淀产生及颜色变化。
①碘化铋钾试剂②碘化汞钾试剂③碘－碘化钾试剂④硅钨酸试剂
（2）薄层色谱检识
薄层板：硅胶G-CMC-Na板
试样：自制粉防己碱乙醇溶液
自制防己诺林碱乙醇溶液
对照品：粉防己碱标准品乙醇溶液
防己诺林碱标准品乙醇溶液
展开剂：氯仿-丙酮-甲醇（6∶1∶1）氨气饱和
显色剂：喷雾改良碘化铋钾试剂
（五）实验说明及注意事项
1．提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，不宜过干，否则当加入1％盐酸水溶液后，易结成胶状团块，影响提取效果。
2．两相溶剂萃取时，应注意不可用力振摇，应将分液漏斗轻轻旋转摇动，以免产生乳化现象，影响分层，但萃取振摇的时间需适当延长。
且不可因怕产生乳化现象而不敢振摇或为预防乳化现象产生而减少振摇的程度和时间，从而造成萃取分离不完全。
要力求萃取完全，提尽生物碱，防止生物碱丢失过多而影响收得率。
倘若发生严重乳化现象难以分层时，可用以下方法解决：将难以分层的乳化液置于三角烧瓶中，取定性滤纸少许揉成蓬松的团块，放入乳化液中，用玻璃棒搅拌片刻后，乳化液中的粘稠物质被吸附在滤纸团的周围，从而削弱和破坏了乳化液的稳定性，克服了乳化现象，因而得到澄清溶液。
然后滤过，必要时可再加入适量溶剂洗涤滤纸团，滤过，合并滤液即可。
3．检查生物碱是否萃取完全的方法，通常采用薄层色谱、纸上斑点试验或生物碱沉淀反应。
取最后一次氯仿萃取液数滴，水浴上蒸去溶剂，残留物加5％
盐酸溶液0.5ml溶解后，傾入试管中，加碘化铋钾试剂1～2滴，如无沉淀或无明显混浊，则表示生物碱已提取完全或基本被提取完全，否则应继续萃取。
也可取最后一次氯仿萃取液1滴，滴于一薄层板或滤纸片上，干燥后，喷洒改良碘化铋钾试剂，观察有无红棕色斑点出现，若无红棕色斑点，表示已萃取完全。
（六）思考题
1．粉防己碱、防己诺林碱在结构与性质上有何异同点？实验过程中，应怎样利用它们的共性及个性进行提取及分离？请设计方案。
2．分离水溶性与脂溶性生物碱的常用方法有哪些？
3．萃取过程中怎样防止和消除乳化？。