胃蛋白酶

一：苏玉永,徐楚鸿,吕永宁.多酶微片胶囊中胃蛋白酶的活力测定[J].2004.24(4):214-125

2.1.1对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液(取1 moL·L-1盐酸溶液65 mL,加水至1000 mL,摇匀,即得)制成每1 mL中含0.5 mg的溶液,摇匀,备用。

2.1.2供试品溶液的制备取本品5粒,将内容物中的5片粉红色的胃蛋白酶糖衣片置研钵中,研细。加上述盐酸溶液少许,研磨均匀,移至100 mL量瓶中。加上述盐酸溶液至刻度,摇匀。精密量取适量,用上述盐酸溶液制成每1 mL中

约含0.2～0.4单位的溶液。

2.1.3测定法取试管6支,其中3支各精密加入对照品溶液1 mL,另3支各精密加入供试品溶液 1 mL,置(37±0.5)℃水浴中,保温 5 min。精密加入预热至(37±0.5)℃的血红蛋白试液5 mL,摇匀,并准确计时,在(37±0.5)℃水浴中反应10 min。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5 mL,摇匀,滤过。取续滤液备用。另取试管2支,各精密加入血红蛋白试液5 mL。置(37±0.5)℃水浴中保温10 min,再精密

加入5%三氯醋酸溶液5 mL。其中1支加供试品溶液1 mL,另1支加盐酸溶液1 mL,摇匀,滤过。取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照分光光度法,在275 nm波长处测定吸收度,见图1,图2。算出平均值A s和A,按下式计算:

式中,As为对照品的平均吸收度;A为供试品的平均吸收度;Ws为对照品溶液每1 mL中含酪氨酸对照品的量μg;n为供试品稀释倍数。在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmoL酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力单位。

2.2干扰试验按照处方配制无胃蛋白酶的空白样品,取适量,按2.1项下方法操作,结果在275 nm波长处几乎无吸收,说明处方中其他组分对胃蛋白酶活力的测定无干扰。

2.3线性试验精密称取经105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品85 mg,加上述盐酸溶液溶解并稀释至100 mL。再精密量取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL各3份分别置试管中,依次加上述盐酸溶液至1.0 mL,按2.1项下方法操作,测得吸收度A值分别

为:0.1383,0.2536,0.3757,0.4905,0.6111,

线性回归方程为:Y=0.5912X+0.01909(r=0.9999),线性范围为:0.17

～0.85 g·L-1,说明本方法具有良好的线性关系。

2.4回收试验按处方制备高、中、低各3份共9份模拟样品,按2.1项下方法

分别测定回收率,平均回收率为101.6%,结果见表1

2.5稳定性试验取供试液1份,室温放置,按2.1项下方法分别于0,1,3,5,8 h测定,结果测得吸收度分别为0.3926,0.3701,0.3749,0.3745,0.3704,平均吸收度为0.3765,RSD为2.46%,表明供试液在8 h内稳定性良好。

2.6重复性试验取本品45粒,将内容物中的粉红色胃蛋白酶糖衣片共45片,精密称定,置研钵中,研磨均匀。精密称取适量,制备7份供试液,分别按2.1项下方法测定胃蛋白酶活力,测定结果见表2。结果表明本方法的重复性良好。

表2重复性试验结果

二：张耀庭,李娟,吉海滨等.应用分光光度法测定胃蛋白酶活力[J].1998,11(4):196.

2.1 对照品(酪氨酸)、样品(胃蛋白酶)、底物(牛血红蛋白)溶液均按CP90方法配制。对照液浓度为500陀/以，样品稀释倍数为40000，底物浓度为1%。分别取对照液，样品溶液各1耐，置37士0.5℃水浴中，保温5而n，精密加人预热至37士0.5℃的血红蛋白试液srril，摇匀，立即计时，在37士0.5‘C水浴中反应10nlin，立即精密加人5%三氯醋酸5司，摇匀，滤清，在275nm处测定吸收度(同时分别做空白对照)。活力按CP90方法的公式计算即得。

2.2 对6批样品进行测定，该法重现性好，测定值的变异系数均在5.0%以下。取一批胃蛋白酶，在上述分光法测定条件下，在终止酶促反应后，间隔不同时间观察吸收度的变化值，测得结果表明，4h内测定活力基本稳定，略有上升，但对结果影响不大。对n批胃蛋白酶分别用不发光法和蛋清法同时进行测定，以分光法活力X对蛋清法活力Y进行线性回归，得回归方程为:Y=2080+2.77X，r=0.9904，P<0.01。

三：井春梅，史丽敏，王晓华.凝乳法测胃蛋白酶合剂活力的评

价[J]. 1993，10（2）：28-29.

蛋白酶的活力测定

精密称取胃蛋白酶约2g，置100ml容量瓶内，加稀HCI至刻度，再将其稀释100倍作为样品液，按中国药典1990版胃蛋白酶活力测定法测得结果:每1g胃蛋白酶的蛋白消化力为1730活力单位。

2.3胃受白醉合荆的活力侧定

将自配的胃蛋白酶合剂用稀盐酸(pH1.50)稀释100倍作为样品液，按1990版中国药典中的方法测定酶活力，同时再按《中国医院制剂规范》中的凝乳法测其凝乳时间，成人胃酶的测定结果见表1，表2，小儿胃酶见表3，表4。以上实验是在室温29士1℃下进行的，为了进一步了解温度对其效期的影响，我们又单用牛血红蛋白分光光度法在室温21士1℃下做了一组实验，结果见表5。

通过牛血红蛋白法和凝乳法对胃酶合剂活力测定的比较，我们发现两者测定结果不一致。随着放置时间的延长，牛血红蛋白法的酶活力单位数下降很快，而相应的凝乳法随时间下降的幅度小。而且当牛血红蛋白法的胃酶活力单位数降至低限以下(<1200u)时，凝乳法的时间仍然符合规定(<305)。相比之下，我们认为凝乳法不能很好地反应出胃酶活力的变化。牛血红蛋白分光光度法在严格控制酶促反应的条件下，即pH在1.50，温度37士。。5℃，反应时间为10min，测定结果重现性好，而且该方法快速，灵敏，供试液稳定，能真实地反应出酶活力的变化情况。

四: 刘瑜明.简介胃蛋白酶活力测定各种方法[J].:47-50.

1.凝固卵蛋白测定法其原理是用磨碎的卵蛋白为底物用消化凝固卵蛋白的倍数