液相色谱仪检定规程JJG705—2014解读
液相色谱仪检定方法及注意事项
液相色谱仪检定方法及注意事项 摘要：本文对液相色谱仪检定方法及检定中出现的问题，结合自己的工作经验进行了探讨。
关键词：液相色谱仪 检定1、概述液相色谱仪因分离效率高；应用范围广；分析速度快；样品用量少；灵敏度高等特点，在送药、食品、环境、材料等领域有了广泛的应用，成为各类研究室、实验室极为重要的仪器设备。
本文依据JJG705-2002《液相色谱仪》检定规程，以紫外—可见光检测器为例，结合实际工作对主要检定项目泵流量、柱箱温度、基线噪声、基线漂移、最小检测浓度、定性定量重复性的检定及检定中的注意事项说几点看法。
2、检定方法按规程要求设定流量、启动仪器，待压力稳定后在规定时间内收集流动相，同时用秒表计时，出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，在天平上称重，重复测量3次，则流量设定值误差SS 和流量稳定性误差SR ，公式如下： %100/)(⨯-=-S S S F F m F S%100/)(min ⨯-=--m S F F x Fma S 式中：F m -F m =（W 2-W 1）/（e t ·t ），流量实测值，ml/min ； W 2-容量瓶+流动相的质量，g ；W 1-容量瓶的质量，g ；e 1-实验温度下流动相的密度,g/cm 3；t-收集流动相的时间，min ；min /，ml F m 值同一组测量的算术平均--； Fs 流量设定值，ml/min ；Fmax-同一组测量中流量最大值，ml/min ；Fmin-同一组测量中流量最小值，ml/min ；2.2注意事项2.2.1收集流相和计时由一个人完成，减少计时误差；因甲醇容易挥发，收集时用封口胶密封容量瓶瓶口，收集完一瓶后立刻称量，收集的流动相在换算成体积后保留小数点后三位，最后结果保留小数点后一位。
2.2.2如果实际流速低于设定值，清洗或更换单向阀，过滤头；如果流速过高，检查流速补偿和压缩补偿调节是否失灵，如果流量不稳，检查泵头内是否聚集气泡，打开放空阀，让泵在高流速下运行，排除报泡；检查泵头是否松动，拧紧泵头固定螺丝，检查输液管路漏液或部分堵塞，需逐段管路进行排除。
液相色谱仪的检定和校准
3
1.计量基础知识
c) 量值传递和溯源，包括检定、校准、 测试、检验和测量；
d）物理常量、材料和物质特性的测定； e）测量不确定度、数据处理与测量理论
及其方法； f）计量管理，包括计量保证与计量监督
等。
4
1.计量基础知识
Fm平 ——同一组测量的算术平均值(mL/min)；
Fs ——流量设定值(mL/min)； Fmax——同一组测量中流量最大值(mL/min)； Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min)。
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3. 液相色谱仪检定方法
3.2.3 梯度误差的检定
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯 水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个阶梯从0变到100%。 将输液泵和检测器连接好（不接色谱柱），开机后以A溶剂冲洗 系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线，如下 页图。求出A、B溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读 数），重复测量2-3次，计算平均值。从B溶剂的含量及对应的输
+ + + + + + + + + + + + +
后续检定
– + + + + + + + + + + – – +
使用中检验
– + +
– – – + + + – – – – +
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2. 液相色谱仪检定规程
5）计量器具控制
c) 检定方法 d) 检定结果的处理
高效液相色谱仪检定操作规程
目的：本规程规定了高效液相色谱仪检定操作规程责任：由工程部制订、审核，质量保证部批准并颁发，工程部计量室执行。
范围：本规程适用于带有紫外检测器的高效液相色谱仪。
定义：无相关定义。
内容：1.检定项目及技术要求2. 检定条件2.1环境条件：仪器应放置在平稳的工作台上，室内温度15-30℃，相对湿度20%~85%RH范围内。
2.2 检定设备：秒表：分度值小于0.1秒分析天平：最大称量不小于100g,最小分度不大于1mg.数显测温仪:测量范围0~100℃，最小分度不大于0.1℃。
标准物质：萘/甲醇溶液、紫外溶液标准物质3. 检定方法3.1泵流量设定值误差、流量稳定性误差的检定将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联好，以甲醇为流动相，设定流量，待流速稳定后，在流动相排口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确收集相应时间，计算泵流量设宴定值误差S S和流量稳定性误差，结果按下式式中：F m—F m= (W2-W1)/(ρt·t),为流量测定值（ml/min）—流量设定值误差（%）SSF S —流量设定值（ml/min）W1 —容量瓶重量（g）W2 —容量瓶＋流动相的重量（g）ρ—实验温度下流动相的密度（g/cm3）tt —收集流动相的时间（min）S R —流量稳定性误差（%）F max—同一组测量中流量最大值（ml/min）F min—同一组测量中流量最小值（ml/min）F—同一组测量值的算术平均值（ml/min）m3.2柱温箱温度控制系统的检定柱温箱温度的设定值误差ΔT与控温稳定性误差T C选择日常使用的单一温度进行检定，待指示温度稳定后，每隔10分钟记录一次，共计7次，求出算术平均值，设定值与平均值之差为ΔT，7次测量中最大与最小值之差为控温稳定性误差T C。
3.3检测器性能的检定检测波长为254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，待基线稳定后，记录基线30-40分钟，计算基线漂移和噪声波长为254nm，在相同波长下注入10~20uL 1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰-峰高，按下式计算最小检测浓度C L(按20uL进样量计算)。
液相色谱仪期间核查实验方法-new
液相色谱仪期间核查实验方法A. 基线漂移的测定1. 紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器：选用C18色谱柱，以100％甲醇为流动相，流量为1.0mL/min ，检测器波长选在254nm ，检测灵敏度调到最高档。
开机预热，待仪器稳定后记录基线30min 。
基线漂移用1h 内基线偏离原点的值（AU/h ）表示。
2. 荧光检测器：选用C18色谱柱，以85％甲醇/水溶液为流动相，流量为1.0mL/min ，激发波长选在345nm ，发射波长选在455nm ，检测灵敏度调到最高档。
仪器预热稳定后，记录基线30min 。
用检测器自身的物理量（FU ）做单位表示。
3. 差示折光率检测器：选用C18色谱柱，以去离子水水溶液为流动相，流量为1.0mL/min ，参比池充满流动相，检测灵敏度调到最高档。
仪器预热稳定后，记录基线30min 。
用检测器自身的物理量（RIU ）做单位表示。
B. 最小检测浓度的测定根据检测器不同选择相应浓度的标准溶液:紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器：1×10-4g/mL ，1×10-7g/mL 的萘/甲醇溶液荧光检测器： 1×10-6g/mL ，1×10-9g/mL 的硫酸奎宁/高氯酸水溶液 差示折光率检测器：1×10-3g/mL ，1×10-5g/mL 的丙三醇/水溶液选用C18色谱柱，不同检测器按上述流动相设置，流量为1.0mL/min ，开机预热稳定后，用微量注射器从进样口注入一定量的标准溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰-峰高，按下式计算得最小检测浓度C L （按20uL 进样量计算）。
H 20cV N 2C d L式中：C L ——最小检测浓度，g/mL ；Nd ——基线噪声峰-峰高，mm ；C ——标准溶液浓度，g/mL ；H ——标准溶液得色谱峰高，mm ；V ——进样体积，uL 。
C. 定性（定量）重复性的测定将仪器各部分联接好，选用C18色谱柱，根据仪器配置的检测器，选择流动相和测量参数：紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器以100％甲醇为流动相，流量为1.0mL/min ，检测器波长选在254nm ，基线稳定后由进样器注入5-10μL 的1×10-4g/mL 的萘/甲醇溶液；荧光检测器以85％甲醇/水溶液为流动相，流量为1.0mL/min ，激发波长选在345nm ，发射波长选在455nm ，基线稳定后由进样器注入5-10μL 的1×10-6g/mL 的硫酸奎宁/高氯酸水溶液；差示折光率检测器以100%的水溶液为流动相，流量为1.0mL/min ，注入5-10μL 的1×10-3g/mL 的丙三醇/水溶液。
液相色谱仪(UV)检定操作规程
制备60ug/ml基准重铬酸钾的0.005mol/l硫酸溶液，按紫外分光光度法，用1cm石英比色皿分别在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四个波段处，以0.005mol/L硫酸为空白，测定各波长处60ug/ml基准重铬酸钾的0.005mol/l硫酸溶液的吸收度，各波长重复测量三次。
3.5.2.色谱条件：
色谱柱：C18
流动相：甲醇
流速：1ml/min
波长：254nm
进样量：20ul（定量环）
3.5.3.操作步骤：将仪器各部份联接好，以甲醇为流动相，开机，待基线稳定后，将上述配制好的对照品溶液进样，记录色谱图。
3.5.4.按下式计算最小检测浓度：
Cl=2·Nd·C/H
式中：Cl：最小检测浓度（g/ml）；
10min
1ml/min
50%
50%
13min
1ml/min
50%
50%
15min
1ml/min
25%
75%
18min
1ml/min
25%
75%
20min
1ml/min
0
100%
23min
1ml/min
0
100%
25min
1ml/min
100%
0
3.6.4.结果计算：
式中：
--第i段梯度误差（%）；
12个月
定性、定量测量重复性误差
12个月
Nd：基线噪声峰-峰高，mm；
C：对照品溶液浓度（g/ml）；
H：标准溶液的色谱峰高，mm。
3.5.5.结果判断：对照品溶液的峰高应大于或等于两倍基线噪声峰高，即最低检测浓度应低于4×10-8g/ml（萘的甲醇溶液）。
液相色谱仪检定员考试题及答案
1.JJG705-2014检定规程规定，检定可调波长荧光检测器的波长示值误差和波长重复性时，激发波长为 345nm ，发射波长为455nm 。
2.液相色谱仪是利用试样中各组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附特性的差异，将试样中各组份进行分离的。
3.示差折光率检测器受温度和流量波动影响较大，一般不能进行梯度洗脱。
4.JJG705-2014检定规程规定，用萘/甲醇溶液检定紫外-可见光检测器的最小检测浓度，用丙甲醇/水溶液检定示差折光率检测器的最小检测浓度。
5.JJG705-2014检定规程规定，紫外-可见光检测器波长示值误差不超过±2nm，波长重复性误差优于2nm 。
6.液相色谱仪是依据被测样品中各组份的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析的。
7.JJG705-2014检定规程适用于配有紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器和示差折光率检测器的液相色谱仪。
8.用作液相色谱仪流动相的溶剂，在进入色谱系统前，必须经过过滤和脱气。
二、选择题：1.JJG705-2002检定规程规定，紫外可见光检测器的基线噪声应不超过 A 。
A.5×10-4 AUB.5×10-3 AUC.5×10-5AU2.荧光检测器属于 B 。
A.通用型检测器B.选择性检测器C. 两者都不是3．对多组份混合物的分离，色谱柱越长分离 B 。
A.越差B. 越好C. 越快4.检定紫外-可见光检测器的最小检测浓度时，流动相为 B 。
A.90%乙腈B.100%甲醇C.HPLC水5.JJG705-2014检定规程规定，流量为1.00mi/min时，泵流量设定值误差S S应小于： B 。
A.2%B.3%C.5%6.JJG705-2014检定规程规定，荧光检测器的波长示值误差应不超过 C 。
A.±2nmB. ±3nmC. ±5nm7.JJG705-2014检定规程中,检定紫外-可见光检测器波长示值误差和重复性的标准波长为 A C 。
高效液相色谱仪再验证方案和报告
高效液相色谱仪再验证方案1.概述本品由岛津公司生产，是根据质量控制的目的和要求购置的精密仪器。
主要用于样品的含量测定、鉴别、有关物质的检查等，该仪器由溶剂输送泵、中继单元、柱温箱、在线脱气机、自动进样器、紫外可见双波长检测器及色谱工作站、电脑、打印机等组成。
2.目的依据液相色谱仪检定规程（JJG705-2014）对LC-16型高效液相色谱仪进行再验证，确保仪器各项性能持续符合要求，保证检测结果准确可靠。
3.适用范围本方案适用于LC-16型高效液相色谱仪的再验证。
4.职责验证小组：负责验证工作的具体实施与跟踪。
项目负责人：负责验证文件的起草。
QC负责人：负责验证方案的审核，并安排实施验证工作。
质量部经理：负责验证方案的审核，并监督验证工作的实施。
质量受权人：负责验证方案的批准。
5.仪器信息：仪器型号：XXX 管理编号：XXX6.再验证内容6.1仪器工作环境及电路系统确认按照再验证记录对仪器工作环境及电路系统进行确认并记录确认结果，各项指标均应符合可接受标准。
6.2试验条件的确认按照再验证记录对试验条件进行确认并记录确认结果，各项指标均应符合可接受标准。
6.3性能确认6.3.1 泵流量稳定性 S R将仪器各部分连接好，以超纯水为流动相，分别设定0.5、1.0和2.0ml/min三个流速，在流动相排出口用事先清洗、干燥并已称重的容量瓶收集流动相，0.5ml/min时用计时器计时收集10分钟，1.0和2.0ml/min时用计时器计时收集5分钟，在分析天平上称重，每个流速测定3次，查相应温度的水密度，按式（2）计算流量实测值、按式（1）计算SR，。
技术要求：0.5ml/min时，SR 不得过3%；1.0ml/min和2.0ml/min时SR不得过2%。
×100%（1）式中：Fmax——同一组测量中流量最大值，ml/min；Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min；Fm平均——同一组测量中平均流量值，ml/min；（2）式中：F m——流量实测值，ml/min；W2——容量瓶＋流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；ρt——实验温度下流动相的密度，g/cm；t ——收集流动相的时间，min；6.3.2 紫外-可见光检测器的检定6.3.2.1 基线噪声和基线漂移的确认选用 C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长选在254nm，检测灵敏度调到最灵敏挡。
高效液相色谱仪期间核查操作规程
高效液相色谱仪期间核查操作规程1目的为使高效液相色谱仪检测功能在检定期间内处于正常的工作状态，确保检验结果的准确性和有效性。
在仪器设备两次检定期间，对该设备进行期间核查，以验证设备是否保持校准时的状态,确保检验结果的准确性和有效性。
2范围适用于中心U3000高效液相色谱仪的期间核查。
3 核查项目泵流量设定值误差S S、泵流量稳定性S R、基线噪声、基线漂移，采用有证的标准物质萘甲醇溶液（已知浓度u并给出不确定度Ur的单标准物质）1.0×10-7g/ml、1.0×10-4g/ml，检出限（L）、定性重复性、定量重复性。
4 核查依据JJG694-2009《原子吸收分光光度计检定规程》5 核查方法计量器具控制包括：两次检定之间或大修（修理更换泵、光路等）后的运行检查。
5.1 核查条件（1）环境条件核查室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，通风良好。
室温（15—30）℃，检定过程中温度变化不超过3℃，室内相对湿度20%—85%。
仪器应平稳的放在工作台上，周围无强烈机械振动和电磁干扰源，仪器接地良好。
（2）其他要求核查用试剂：色谱级甲醇，纯水，萘-甲醇溶液1.00×10-4g/ml和1.00×10-7g/ml。
拓展不确定度小于4%，k=2。
5.2通用技术要求：目视、手动检查。
5.3输液系统泵流量稳定性S R设定流量1ml/min，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先称重过的洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集5min时间流出的流动相，在分析天平称重，按公式计算S s和S R，重复测量3次。
式中：——流量3次测量值算术平均值，ml/min；——流量设定值，ml/min式中：F max——同一设定流量3次测量值的最大值，mL/min;F min——同一设定流量3次测量值的最小值，mL/min。
F min=(W2-W1)/（ρt·t）(2) 式中：F m——流量实测值，ml/min；W2——容量瓶＋流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；ρt——实验温度下流动相的密度,g/cm3（不同温度下流动相的密度参见JJG694-2009《原子吸收分光光度计检定规程》附录C）t——收集流动相的时间，min。
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Ｈｅ Ｈ ａ ｉ ｈ ｏ ｎ ｇ ， Ｈｅ Ｖ ａ ｊ ｕ ａ ｎ
（ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ Ｍｅ ｔ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ＆Ａｎ ａ ｌ ｙ ｔ ｄ ｅ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｄ ｉ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ， Ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｉ ｎ ｓ ｉ ｔ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｍｅ ｔ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ２ ９ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
比并说 明更改的缘 由， 对新规程进行详 细解读 ， 重点介绍新规程变化 内容 ， 最后介 绍增加 蒸发 光散射检 测器的缘 由及
指 标 。 新 规程 使 检 定 方 法更 合 理 ， 提 高 了检 定效 率 ， 满 足 了市 场 发展 的 需要 。
关键 词 液相 色谱 仪 ； 检 定规 程 ； 指标 ； 检 测 器
液 相 色 谱 仪检 定 规 程 Ｊ Ｊ Ｇ ７ ０ ５ — ２ ０ １ ４解 读 冉
何海红 ， 何 雅 娟
（ 中 国计 量 科 学研 究 院 化 学与 分 析研 究 所 ， 北京 １ ０ ０ ０ ２ ９ ＇ Ｊ
摘要
将 液相 色谱仪检 定规 程 Ｊ Ｊ Ｇ ７ ０ ５ － ２ ０ １ ４与 Ｊ Ｊ Ｇ ７ ０ ５ — ２ ０ ０ ２在检定方 法、 检定条件、 技术指标 三个方面进 行对
中 图分 类 号 ： ０６ ５ ２
文献标识码 ： Ａ
文章 编 号 ： １ ０ ０ ８ － － ６ １ ４ ５ （ ２ ０ ￣ ４ ） ０ ６ － ０ ０ ８ ８ － ０ ３
Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｐ ｒ ｅ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｖｅ ｒ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｒｅ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｌｉ ｑ ｕ ｉ ｄ Ｃｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ Ｊ Ｊ Ｇ ７ ０ ５ － ２ ０ １ ４
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高效液相色谱仪是实验室内常见的分析仪器 ， 在 质 量检 验 、 商检 、 疾控 中心 、 食 品药 品监督 管 理 部 门有很 大 的保有 量 ， 检 定 液相 色谱 仪 要 按 照液 相 色 谱 仪 检定 规 程进 行 ， 新 版本 的液相 色谱 仪检 定 规 程 Ｊ Ｊ Ｇ ７ ０ ５ － ２ ０ １ ４于 ２ ０ １ ４年 ８ 月１ ４日开始实施 ， 取代 旧的 Ｊ Ｊ Ｇ ７ ０ ５ — ２ ０ ０ ２ ， 规 程 的变 动主 要 涉及 到荧 光 检 测器 、 示 差 折 光率 检 测 器 以及新 增 加 的蒸 发 光 散射
８ ８
第２ ３卷 ， 第６ 期
２ ０ １ ４年 １ １ 月
化 学分 析计量
ＣＨＥＭ Ｉ ＣＡＬ ＡＮｒ ＡＬ ＹＳ Ｉ Ｓ ＡＮ ／ １ ３ ＭＥＴ ＥＲＡＧ Ｅ Ｉ
Ｖ ｏ １ ２ ３， ＮＯ ． ６ ＮＯ Ｖ ． ２ Ｏｌ ４
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ， ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８ － ６ １ ４ ５ ． ２ ０ １ ４ ， ． Ｏ ６ ． ， ０ ２ ５
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