沙门菌检查法
《中国药典》微生物限度检查法及其方法学验证
微生 物 限 度 检 查 法 是 检 查 非 规 定 灭 菌 制 剂 及 其 原 、 料 受 微 生 物 污染 程 度 的 方 法 ， 查 项 目包 括 细 菌 辅 检 数 、 菌 数 、 母 菌数 及 控 制菌 检查 。与 《 国药 典 》 霉 酵 中
２０ ０ ０年 版 （ 下 简 称 ２ ０ 以 ０ ０版 ） 比 ，０ ５版 微 生 物 限 度 相 ２０ 检 查 法 在 以 下 几 方 面 进 行 了增 修 订 。 １ 标准的制订原则 ：
２ 标 准的分类 ：
微 生物 试 验 的 结 果 易 受 试 验 条 件 的 影 响 ， 别 是 特
药 品 中 含 有 对 微 生 物 生 长 有 抑 制 作 用 组 分 时 表 现 较 为 突 出。 因 此 ， 进 行 微 生 物 限 度 检 查 时 ， 保 证 在 检 验 在 应 条 件 下 的样 品 浓 度 不 足 以抑 制 污 染 微 生 物 的 生 长 ， 以 保 证结 果 的 准 确 性 。所 以 任何 产 品 的 微 生 物 限 度 检 查 法 均需 验 证 ， 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 样 品 的 微 生 物 确 限 度 检 查 ， 可 使 用 。为 此 ，０５年 版 ＜ 国药 典》 录 方 ２０ 中 附
维普资讯
２ ０ 年 ６月 ０８
《 国 药 典 》 生 物 限 度 检 查 法 及 其 方 法 学 验 证 中 做
６ ５
《 国药 典》 生 物 限度 检 查 法及 其 方 法 学 验 证 中 微
肖庆 青
（ 西 省 医药 学 校 江西 南 昌 ３００ ） 江 ３２０
中 的微 生 物 限 度 Fra bibliotek 查 法 增 加 了方 法 验 证 试 验 的要 求 。
沙门菌的检查方法及鉴定
沙门菌的检查方法及鉴定沙门菌是一类致病性细菌，可以引起沙门氏菌病。
你所提到的沙门菌的检查方法及鉴定可以从以下几个方面进行说明：1.标本采集和处理：对于沙门菌的检查，首先需要采集相关的临床样本，常见的有粪便、血液、尿液、食物、水等。
采集样本时要采用无菌技术，并且要避免污染和混杂。
2.沙门菌的常规培养：将样本置于适当的富营养培养基上进行培养，常用的富营养培养基有MacConkey琼脂培养基、XLD琼脂培养基等，这些培养基对于沙门菌的生长提供了必要的条件。
常规培养通常在37摄氏度下进行，培养时间一般为24小时。
3.大肠杆菌群的初步筛选：沙门菌属于大肠杆菌群，因此在初步筛选时可以通过革兰染色法进行鉴定。
革兰染色后，沙门菌呈现革兰阴性杆菌的形态。
4.生化试验：生化试验是沙门菌鉴定的重要手段，通过不同菌株对不同营养源的利用及产物生成情况的检测，可以进一步缩小筛选范围。
常见的生化试验包括：a.培养基试验：通过在不同培养基上生长情况的观察和分析，来判断菌株是否为沙门菌。
b.酸碱试验：通过观察剧烈酸化或碱化现象，来检测杨氏氏培养碱解试验。
c.碳源利用试验：通过检测菌株对不同碳源的利用情况，如糖耐试验、麦芽糖利用试验等。
d.氨基酸利用试验：通过检测菌株对不同氨基酸的利用情况，如亮氨酸加芥黄悬液试验等。
e.钠乙酸淀粉试验：沙门菌在生长过程中分泌出来的α-淀粉酶能将淀粉分解成葡萄糖，通过观察菌株对淀粉的降解能力，来鉴定菌株是否为沙门菌。
5.血清学试验：血清学试验是沙门菌鉴定的关键步骤，通过检测菌株在特定的抗血清中的凝集反应来进行。
根据不同的菌株反应特性，可以进一步鉴定沙门菌的种属和亚属。
6.分子生物学方法：随着分子生物学技术的发展，PCR、基因测序和基因芯片等分子生物学方法在沙门菌的鉴定中得到广泛应用。
这些方法主要通过检测和分析沙门菌的特异基因序列，可以快速准确地进行鉴定。
总之，沙门菌的检查方法及鉴定可以通过标本采集和处理、常规培养、革兰染色、生化试验、血清学试验和分子生物学方法等多个方面进行。
药品的微生物限度检查
24～48h
紫红胆盐葡 萄糖平板
10-1
无菌落
18～24h
有菌落
报告未检出
10g/10ml/ 100cm2供试品
3.耐胆盐革兰阴性菌定量检查操作示意图
以TSB为稀释液制供试液
一定量 肠道增菌肉汤
20～25℃, 2h预增菌
1ml
24～48h
紫红胆盐 葡萄糖平板
报告结果
10-1
18～24h
（六）梭菌的检查
梭菌 增菌 培养 基
供试液的制备
书写检 验记录
哥伦比亚琼脂培养基分离
1.梭菌检查程序
无菌落生长
过氧化氢 酶试验
配培养基和稀释液
最终结果判断
有 菌 落
确证 试验
10g/10ml/ 100cm2供试品
2.供试品梭菌检查操作示意图
各10ml
分别接种
一份80℃保温10min后迅速冷却
10-2
10-31ml10-110-210-3
各管加1ml
查可能菌数表
9ml 稀 释 液
有/无菌落
（二）大肠埃希菌检查
大肠埃希菌作为检验供试品是否受粪便污染的指示菌。
2015年版《中国药典》规定经口及呼吸道服给药的制剂，每1g、1ml或10cm2不得检出大肠埃希菌。
TSB 增菌 培养
30℃～35℃
3～5d
1.平皿法
（1）基本程序：
数据 处理
结果观察与计数
书写检 验记录
平板 接种
需氧菌 的培养
供试液 的制备
配培养基和稀释液
倒置 培养 3～5d
30～35℃
TSA
不少于 0.1ml
沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌属(Salmonella)是肠杆菌科的⼀个⼤属，有2000多个⾎清型，我国发现的约有100个。
沙门⽒菌⼴泛存在于猪、⽜、⽺、家禽、鸟类、⿏类等多种动物的肠道和内脏中。
1880年Eberth⾸先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较⼤，遂定名为沙门⽒菌属Salmonella 。
本属细菌绝⼤多数成员对⼈和动物有致病性，能引起⼈和动物的败⾎症与胃肠炎，甚⾄流产，并能引起⼈类⾷物中毒，是⼈类细菌性⾷物中毒的最主要病原菌之⼀。
根据沙门⽒菌的致病范围，可将其分为三⼤类群。
第⼀类群：专门对⼈致病。
如伤寒沙门⽒菌、副伤寒沙门⽒菌(甲型、⼄型、丙型)。
第⼆类群：能引起⼈类⾷物中毒——⾷物中毒沙门⽒菌群，如⿏伤寒沙门⽒菌、猪霍乱沙门⽒菌、肠炎沙门⽒菌、纽波特沙门⽒菌等。
第三类群：专门对动物致病，很少感染⼈，如马流产沙门⽒菌、鸡⽩痢沙门⽒菌。
致病性最强的是猪霍乱沙门⽒菌(Salmonella cholerae)，其次是⿏伤寒沙门⽒菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门⽒菌(Salmonella enteritidis)。
⼀、沙门⽒菌属的⽣物学特征：1.形态染⾊特性：G-⽆芽孢杆菌。
⼤⼩通常为0.7～1.5µm ×2.0～5.0µm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，⽆荚膜，除鸡⽩痢沙门⽒菌和鸡伤寒沙门⽒菌外均有周⾝鞭⽑，能运动，绝⼤多数菌株有菌⽑。
需氧或兼性厌氧菌，⽣长温度范围为10～42℃，最适⽣长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不⾼，在普通培养基中⽣长旺盛，胆盐可促进其⽣长。
2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；⽣长温度范围为10～42℃，最适⽣长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不⾼，在普通培养基中⽣长旺盛；胆盐可促进其⽣长。
版药典药品微生物限度检查法
黑曲霉 1 61 57 68 65 0
2 49 47 51 54 0
3 95 94 105 96 0
回收率 84％ 94％ 88％ 83％ 86％ 95％ 80% 82% 89%
92% 91% 93%
89% 91% 94%
培养基稀释法
当供试品五种菌中有一种菌的回收率未达到 70％时，首先考虑用培养基稀释法。
供试液的制备
液体供试品 固体、半固体或粘稠性供试品
取供试品10 g（10ml) ，加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml,混匀，为1：10供试液，
需用特殊供试液制备方法的供试品
非水溶性供试品
膜剂供试品
肠溶及结肠溶制剂供试品
气雾剂、喷雾剂供试品
非水溶性供试品
取本品10g，置输液瓶中加无菌十四烷酸异丙 脂20ml，充分振摇，使供试品溶解。
举例
一.六味地黄丸微生物限度检查法
检验方法 取本品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲
液100ml，使分散均匀，作为1：10供试液； 取供试液按常规法测定细菌数、霉菌及酵母 菌数，并进行控制菌和大肠菌群检查。
方法说明
六味地黄丸处方为熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、 泽泻，均没有明显抑菌作用。验证实验中，采用常规法测定 5株验证菌株（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希 菌、白色念珠菌和黑曲霉）的回收率，均符合要求，故进行 细菌、霉菌及酵母菌计数时可采用常规法测定。对于控制菌 和大肠菌群检查，采用大肠埃希菌为对照，与不加供试液的 阳性对照比较，生长正常，故控制菌和大肠菌群检查亦可按 常规法检验。
（2阴性菌对照组 设立阴性菌对照组是为了 验证该控制菌检查方法的专属性。方法同试 验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌 检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌； 验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌，梭菌 检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。阴 性对照菌不得检出。
二部、四部通则微生物检测法
二部、四部通则微生物检测法
二部、四部通则微生物检测法是《中华人民共和国药典》中的重要组成部分，用于检查药品中微生物的污染程度。
二部通则微生物检测法主要用于检测药品中的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数，以及控制菌检查。
其中，需氧菌总数检查需要取适量药品，用薄膜过滤器过滤，然后将滤膜放入培养基平板上培养计数。
四部通则微生物检测法主要用于检查中药材及中药饮片的微生物污染程度，检查项目包括需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、耐热菌总数、耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌和沙门菌。
其中，耐热菌总数检查需要将供试液置水浴中处理30分钟，然后按照需氧菌总数测定方法进行检测。
在进行二部、四部通则微生物检测时，试验环境应符合微生物限度检查的要求，检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
2020版药典微生物限度计数—沙门菌
2020版药典微生物限度计数—沙门菌2020版本药典(1) 菌种及菌液制备1) 菌液制备将铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌分别接种在胰酪大豆胨琼脂培养基上，35℃条件下培养24小时，将新鲜培养物用pH7.0的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。
(2) 控制菌检查方法适用性试验控制菌检査用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查，各培养基的检查项目及所用的菌株见表1。
表1 控制菌检査用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特性沙门菌菌检查方法适用性试验1、RV沙门菌增菌液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
2、RV沙门菌增菌液体培养基抑制能力检查：分别接种不大于l00cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养24小时。
3、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基促生长能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
4、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基指示特性检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
5、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基抑制能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养24小时。
6、三糖铁琼脂培养基指示特性检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
7、三糖铁琼脂培养基抑制能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
(3) 沙门菌检査1) 供试液制备和增菌培养取10g供试品直接接种至90ml的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，35℃培养24小时。
微生物限度检查知识指导
精心整理微生物限度检查知识培训1、微生物方法验证，要求菌株回收率≧70%，是否有上限要求？（如不得高于100%或者110%）。
答：没有上限。
但一般不会高于100%，因为加进去的菌量是一样的，如果超过100%可看成是操作上的误差。
按微生物的特性，如果不超过太多，是可以接受的，但没有具体上限。
（本所控制在110%以内）。
2、在微生物方法验证时，霉菌、酵母菌计数验证只用黑曲霉及白色念珠菌做方法学验证，在操作似？答：3答：计数，超过204阴性对照是检查整个检验系统是否被微生物污染，实际上也包括了培养基的无菌性检查。
5、微生物限度检查法中所用的培养基如：营养琼脂、EMB 、Macl 等培养基其分装容器需要预先灭菌吗？答：不用。
只要是洁净的就行，因为分装后还要灭菌。
6、具有抑菌性的供试品，细菌、霉菌、都是用薄膜过滤法来检查的，那么沙门菌可以用常规法来检查吗？就是可以不经过过滤直接接种到营养肉汤中吗？答：这要看你验证的结果。
如果通过验证，你的品种是对沙门菌有抑制作用，且用培养基稀释法不能消除其抑菌性，则就必需考虑用薄膜过滤法。
7、微生物限度检查中，稀释剂对照组，是在稀释液中加入50~100cfu的菌，还是把稀释液制成含量50~100cfu的浓度呢？答：是把稀释液制成含50~100cfu/ml菌的浓度。
（在这里，我对上次讲课时关于稀释剂对照组操作的PPT进行纠正，对于离心薄膜过滤法的稀释剂对照组的操作应该是：含50~100cfu/ml菌的稀释89、10答：11、答：报告书不需要显示第一、第二天的结果，只需报告最终结果。
理由请见第9题答复。
或者是在营养琼脂中加入TTC试剂（每100ml加入0.1%）12、由于微生物检验的特殊性，对于样品的微生物限度检查计数数据是否可登记在表格内（此表格仅含样品名称、批号及检查结果）。
之后再将检测结果移至详细记录中？答：原始记录应该只有1份。
如果你说的详细记录是属于一般记录，是没有必要的，如果是指报告书，就应该没问题。
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沙门菌检查法1 简述沙门菌属是肠杆菌科的重要致病菌，按Bergey系统细菌学手册第一卷（1984），沙门菌分5个亚属。
2003年出版的第八版的临床微生物手册将沙门菌属分成两个菌种即肠炎沙门菌和乍得沙门菌，其中肠炎沙门菌分6个亚种，包括常见的伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒、，鼠伤寒，猪霍乱等沙门菌杂内，迄今已发现2501个血清型。
O抗原抗血清A-E群包含了沙门菌分离株的95%，所以常用沙门菌A-F O多价血清进行沙门菌初筛试验。
药品中的沙门菌，是以鉴定沙门菌属为准，即对没10g（或10ml）药品中是否检出沙门菌作出检验报告。
由于沙门菌血清型繁多，各血清型的生化及血清学特性虽密切相关，却不尽相同，采用一种增菌培养基和两种分离培养基，不可能涵盖所有沙门菌的最适增菌及分离条件。
此外，由于药品在生产过程中，常受到加热、干燥等加工步骤的影响，药品中污染的沙门菌可受到损伤或呈休眠状态，故须在增菌培养前先进行预增菌。
然后再进行增菌及分离、三糖铁琼脂初步鉴别、生化试验、血清学试验等步骤。
2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。
3 试液指示液（参见大肠埃希菌3）3.1 无菌脲试液[附录2.5]。
3.2 酚磺酞指示液[附录4.4]。
3.3 亮绿试液[附录2.9]。
3.4 氰化钾试液[附录2.14]。
3.5溴甲酚紫指示液[附录4.5]。
3.6 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。
3.7 沙门菌属A-F“O”多价血清（即O多价1）生物制品研究所供应。
4 培养基4.1 营养琼脂培养基[附录5.2]。
4.2 营养肉汤培养基[附录5.1]。
4.3 半固体营养琼脂培养基[附录5.3]。
4.4 曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）[附录5.8]。
4.5 麦康凯琼脂培养基（MacC）[附录5.9]。
4.6 四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）[附录5.11]。
4.7 三糖铁琼脂培养基（TSI）[附录5.10]。
4.8 胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）[附录5.13]。
4.9 沙门菌属志贺菌属琼脂培养基（SS）[附录5.12]。
4.10 蛋白胨水培养基[附录5.18]。
4.11 脲（尿素）琼脂培养基[附录5.23]。
4.12 氰化钾培养基[附录5.24]。
4.13 赖氨酸脱羧酶培养基[附录5.25]。
5 对照用菌液取乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]是营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，36℃±1℃培养18～24h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1:106（浓度相当于50～100cfu/0.1ml），作阳性对照用菌液。
其菌液浓度可用平板菌落计数法测得。
即取0.1ml 加入平皿内，倾注营养琼脂，混匀，或以0.1ml均匀涂布于事先准备好的营养琼脂平板上，经培养后点计求得。
6 操作方法6.1 准备工作：（见细菌、霉菌和酵母菌计数6）。
6.2 供试液的制备：（见细菌、霉菌和酵母菌计数7）。
含抑菌成分供试品供试液的制备：（见大肠埃希菌6.2）。
6.3 阳性对照实验、阴性对照实验（见大肠埃希菌7.1）。
6.4 增菌培养6.4.1 预增菌取营养肉汤培养基2份，每份200ml，1份加入10g 或者10ml供试品使匀，另1份加入稀释剂10ml作阴性对照，36℃±1℃培养18～24h，观察。
摇动阴性对照瓶后应清亮透明，无菌生长。
6.4.2 增菌培养轻微摇动供试品增菌培养瓶，吸取1ml接种于1管含10ml四硫磺酸钠亮绿培养基的试管中，培养18～24h。
6.5 分离培养轻微摇动供试品增菌培养，以接种环沾取1～2环培养液划线于胆盐硫乳琼脂（DHL）或沙门菌志贺菌琼脂（SS）平板及曙红亚甲蓝（EMB）琼脂或麦康凯琼脂平板各1个，倒置培养24～48h。
检查平板上有无疑似沙门菌菌落。
沙门菌在上述平板上的菌落形态特征见表1。
表1 沙门菌的菌落特征平板菌落形态胆盐硫乳琼脂（DHL）无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色沙门菌属志贺菌属琼脂（SS）无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色曙红亚甲蓝琼脂（EMB）无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落麦康凯琼脂（MacC）无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色由于沙门菌不发酵乳糖和蔗糖，不产酸，菌落不着色，一般为无色半透明，多数沙门菌因产生H2S，菌落中心呈现黑色甚至全黑色，在DHL 琼脂平板上较为明显。
在SS琼脂平板上，H2S特征有时不明显，沙门菌属亚属Ⅲ因多数菌株发酵乳糖，故在上述平板上的乳糖发酵菌落呈现粉红或紫色，但由于产生H2S，在有H2S指示系统的平板上仍出现黑色中心。
在上述培养基上，有些非沙门菌属细菌，也可呈现类似沙门菌菌落形态，须进一步鉴别。
由于药物的影响或非典型菌株的存在，沙门菌菌落可呈现非典型形态，如色泽变深，菌落粗糙等，应注意辨别。
6.6 初步鉴别试验从每个供试品的分离平板上挑取2～3个疑似菌落（菌落形态特征与表1所列的形态特征相符或疑似）分别接种于三糖铁琼脂斜面，接种时应以接种针轻轻接触单个菌落中心部位，沾取培养物划线于三糖铁琼脂斜面并穿刺到底层或先穿刺底层再划线斜面，培养18～24h，观察结果。
疑似沙门菌在三糖铁琼脂斜面上的反应为：①斜面红色（产碱），底层黑色（产H2S）并显示黄色（产酸）；②斜面红色，底层黄色；③斜面黄色，底层黑色，并显示黄色。
多数沙门菌在三糖铁琼脂上产生气体，使底层琼脂出现气泡或使琼脂断裂，但也有不产生气体的菌种。
对在三糖铁琼脂斜面黄色并同时底层无黑色，或斜面及底层均为红色者可以排除沙门菌。
将疑似沙门菌的三糖铁琼脂或营养琼脂斜面培养物作生化试验，血清凝集试验及革兰染色，镜检。
沙门菌应为革兰性杆菌。
6.7 生化试验6.7.1 靛基质试验用接种环沾取少许培养物，接种到蛋白胨水培养基中，照大肠埃希菌靛基质试验项下操作、判断结果。
沙门菌应为阴性反应。
6.7.2 脲酶试验用接种环沾取少许培养物，划线接种于脲琼脂斜面，培养24h，观察结果。
斜面变为红色为阳性反应，沙门菌属为阴性反应。
6.7.3 氰化钾试验竟培养物先接种至营养肉汤培养基中培养20～24h，用接种环沾取培养液1环，接种至氰化钾培养基内，另取一环培养液接种于不含氰化钾的同样培养基内作对照管，接种后即以橡胶塞塞紧，培养24～48h，观察结果。
对照管内有菌生长（浑浊），而试验管也有菌生长为阳性反应；对照管有菌生长（浑浊）而试验管无菌生长（清亮）为阴性反应。
沙门菌应为阴性反应。
本试验应十分注意密封管口，夏天分装培养基宜在冰浴中进行，防止氯化钾分解，产生氢氰酸逸出，致使培养基内氰化钾浓度降低，不能抑制细菌生长，造成假阳性。
氰化钾为剧毒品、操作时须谨慎，切勿用口吸液。
用后的培养基，每管加数粒硫酸亚铁和20%氢氧化钾0.5ml，去毒，然后再灭菌，洗涤。
6.7.4 赖氨酸脱羧酶试验用接种环沾取少许培养物，接种在赖氨酸脱羧酶培养基中，同时接种一支不含赖氨酸的同样培养基作为对照管，培养24～48h观察结果。
对照管黄色（产酸），试验管呈紫色为阳性反应（赖氨酸脱羧酶产碱）；试验管黄色为阴性反应。
沙门菌应为阳性反应。
6.7.5 动力试验用接种针沾取培养物，穿刺接种于半固体营养琼脂管中，培养24h，观察结果。
有动力的细菌能在穿刺线以外的培养基内扩散生长使培养基呈浑浊现象；无动力的细菌仅能沿穿刺线生长，不向外扩散，培养基仍呈清晰透明状；无动力表现的培养物，应在室温保留2～3天后，再行观察。
沙门菌除鸡雏沙门菌及无动力的变种外，均具有周身鞭毛，能运动，动力试验阳性。
沙门菌生化反应的初步鉴别见表2表2 沙门菌与有关细菌在三糖铁琼脂及初步生化试验的鉴别序三糖铁琼脂靛基脲酶氰化赖氨酸脱判定菌属斜面产层产气硫化号氢质钾羧酶1.1 －＋＋/－＋/－－－－＋沙门菌属1.2 ＋/－＋＋＋－－－＋沙门菌属Ⅲ2 －＋＋/－＋＋－－＋缓慢爱德华菌属3 ＋/－＋＋/－＋/－－/＋－/＋＋/－－弗劳地柠檬酸杆菌4.1 －＋＋S ＋－＋＋－奇异变形杆菌4.2 －＋＋/－S＋＋＋＋－普通变形杆菌5 ＋/－＋＋/－－＋/－－－＋/－大肠埃希杆菌6 －＋－－－/＋－－－志贺菌属7.1 ＋＋＋－－＋/＋－阴沟肠杆菌－7.2 ＋＋＋－－＋/－＋＋肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌8 －＋＋S/－－＋＋/－＋－普罗菲登斯菌属、摩根菌属9 －＋＋/－－－－/＋＋＋蜂房哈夫尼亚菌、粘质沙雷菌注：＋产酸（黄色），阳性，阳性率>90%；－产碱（红色），阴性，阴性率>90%；＋／－多数阳性、少数阴性；＋S产生少量气体（本表依据何晓青卫生防疫细菌检验参考第八版美国临床微生物手册）；反应序号１.１不产H2S可结合血清学凝集试验，或加做部分生化试验，判定为沙门菌；反应序号１除典型反应外，脲酶、氰化钾试验、赖氨酸脱羧酶试验三项中有一项异常；反应序号２仅靛基质阳性。
其他情况可排除沙门菌。
6.8 血清学凝集试验6.8.1 准备1片洁净的灭菌载玻片，在近中央的一端，以直径3mm接种环沾取沙门菌属Ｏ多价1血清2～3环制成与玻片横径相垂直的条形涂抹，长约1.5cm，宽约0.5cm。
另一端用生理盐水代替血清同法操作，作为阴性对照。
6.8.2 用接种环分别挑取三糖铁琼脂斜面或营养琼脂斜面的新鲜培养物少许，在血清和盐水中混匀。
菌量要适当，勿过浓。
6.8.3 将玻片前后倾斜数次，以暗色背景衬底，在良好的照明条件下进行观察，阴性对照不出现凝集现象都是阳性反应。
阳性反应通常在3min内发生。
有时因血清效价低、反应迟缓时，应将玻片置培养皿内，并放一个湿棉球在旁边，盖上皿盖，经约20min，再观察结果。
如果仍然没有出现凝聚，应取斜面培养物，置含少量生理盐水的试管中，制成浓菌悬液，在100℃水浴中保温30min，以除去可能存在的Vi抗原，待冷，再做凝集试验，如出现凝集，仍判为阳性反应；如不出现凝集现象，则为阴性反应。
6.8.4 如对照试验出现凝集现象为非特异反应，须对该菌株培养物进行处理后再作凝集试验。
7 结果判定7.1 供试品培养物为革兰阴性杆菌，三糖铁琼脂反应及生化反应符合沙门菌属反应。
多价1血清凝集试验阳性反应（含待检培养物经100℃30min处理后凝集试验为阳性反应），报告10g或10ml供试品检出沙门菌。
7.2 供试品培养物三糖铁琼脂反应或生化反应不符合沙门菌属反应。
多价1血清凝集试验为阴性反应（含待检培养物经100℃30min处理后凝集试验为阴性反应），报告10g或10ml供试品未检出沙门菌。
7.3 供试品培养物出现下列情况，应继续鉴定或保留菌种，送交有关单位进一不鉴定后，再作报告。
7.3.1 供试品培养物的生化反应符合沙门菌属反应多价1血清凝集试验阴性反应。
7.3.2 供试品培养物的生化反应不符合沙门菌属反应多价1血清凝集反应呈阳性反应。