沙门氏菌检测血清学分型(选做)
salmonella 血清学鉴定
H抗原 第1相 a b g, m g, s, t i z 第2相 1,2 1,w [1,2] 1,2 1,7
[ ]内的O抗原可能存在或不存在。 [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
沙门氏菌菌型的表示方法
血清型以数字和字母表示.
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。 它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）
位相变异试验的方法
U形管法 小玻管法 小套管法 软琼脂斜面法
59种沙门氏菌的血清列表
O1 O2 O4 O5 O7 O8 O9 O10 O11 O14 Hb Hp Hc Hr
O15 O19 O20 O27 O34 O46 O3,19 Ha Hd Hs Hf Ht Hg Hu Hh Hv Hi Hk Hm Hn Hy H6
考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表
菌名
基桑加尼沙门氏菌 维也纳沙门氏菌 埃森沙门氏菌 金斯敦沙门氏菌 鼠伤寒沙门氏菌 印地安纳沙门氏菌
原名
S. kisangani S. wien S. essen S. kingston S. typhimurium S. indiana
O抗原
1,4,[5],12 1,4.12,27 4,12 1,4,[5],12,27 1,4,[5],12 1,4,12
位相变异的解释
将一个双相沙门氏菌的菌株在琼脂平板上划线分离，所得的 菌落中，有的有第1相H抗原，有的则有第2相H抗原。若任 意挑取一个菌落在培养基上多次传代，其后代又可出现部分 是第1相而另一部分是第2相的菌落。这种两个相的H抗原可 以交相产生的现象称为位相变异。 双相菌初次分离时，单个菌落的纯培养往往只有一个相H抗 原，鉴别时常只能检出一个相，而测不出另一相。此时，可 用已知相血清诱导的位相变异试验来获得未知的另一个相H 抗原。
沙门氏菌检验详细流程图
1 mL+SC10 mL 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
BS
XLD（或HE、科玛嘉显色培养基）
36 ℃±1 ℃，40 h～48 h
36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)， KCN
商 品 化 生 化 H2S+靛基质- 尿素- H2S+靛基质+ 尿 H2S-靛基质-尿素 反应结果与左
为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用 两种以上选择性分离培养基。
进口-SS 进口-SS 国产-SS 进口-HE 国产-HE 进口-XLD 国产-XLD 进口-BS 国产-BS CHRO显色 国产-DHL 国产-WS TSA（对照）
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
初筛微生 物
沙门氏菌
柠檬酸杆 菌属
变形杆菌
菌落颜色
紫色(直径约 1mm)
蓝色(直径约 1mm)
无色或被抑 制
特异性 灵敏度
89％ 100%
---
---
(铜绿假单胞菌也呈紫红色， 可以通过前增菌排除。所以推 荐在检测中的前增菌用TTB。 粉红色、深红色、干燥菌落、 边缘锯齿状等 均非沙门氏菌菌 落。）
被分成2500多个血清型。
Vi抗原 O抗原 H抗原
沙门氏菌命名与书写方式
目前的命名方法规定：
肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用 标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且 亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠 伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工作中，可简写为S. Typhimurium。
沙门氏菌检验
K
A
＋/－ ＋
A
A
＋/－ ＋
K
A
＋
－
K
A
－
－
A
A
＋/－ －
可能的菌属
沙门氏菌属、变形杆菌属、枸橼 酸杆菌属、爱德华氏菌属
沙门氏菌属亚属Ⅲ、枸橼酸杆菌 属、变形杆菌属
沙门氏菌属、埃希氏菌属、哈夫 尼亚菌属、摩根氏菌属、普罗菲 登斯菌属
伤寒沙门氏菌 鸡沙门氏菌 志贺 氏菌属 埃希氏菌属 哈夫尼亚菌 属 摩根氏菌属 普罗菲登斯菌属
§ 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL四 硫酸钠煌绿增菌液（TTB），42℃±1℃, 18h~24h
• 含有胆盐，抑制除沙门氏菌以外的肠道菌（主要抑制革兰氏阳性球菌 和部分大肠埃希氏菌的生长），而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长
• 选择性效果相对较好，杂菌最少 • 配置时最好用无菌温水，先煮沸基础液，分装至无菌瓶，临用时再加
平板分离——HE琼脂
v 菌落为蓝绿色或蓝色，多数菌落产硫化 氢，菌落中心为黑色或几乎全部黑色
v 亚利桑那沙门氏菌，因发酵乳糖，菌落 为黄色，根据产硫化氢情况而带或不带 黑色中心
平板分离——XLD琼脂
v 菌落为粉红色，据产硫化 氢情况有或没有黑色中心
v 产硫化氢的多数菌株产生 大的有光泽的黑色中心或 几乎全黑色
前增菌
v Day1：
§ 25g(mL)样品+225mL缓冲蛋白胨水（BPW）
• BPW是基础增菌培养基，不含任何抑制成分，有利于受损伤的沙门氏 菌复苏。使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态
§ 36℃±1℃, 8h~18h § 样品呈酸性、碱性时，需调PH值至6.8±0.2
选择性增菌
沙门菌的检验技术
亚硫酸铋（BS ）琼脂
糖发酵管
HE 琼脂
邻硝基酚 β-D 半乳糖苷 （ONPG）培养基
木糖赖氨酸脱氧胆盐 （XLD ）琼脂
半固体琼脂
沙门氏菌属显色培养基 三糖铁（TSI）琼脂
丙二酸钠培养基 沙门氏菌O 和H 诊断血清。
生化鉴定试剂盒
操作步 骤 1、前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养
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沙门氏菌的增菌液
l 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)：含有胆盐， 抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌的 生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长。
l 亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：可对伤寒及 其他沙门氏菌作选择性增菌，亚硒酸与蛋白 胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸和硫的 复合物，影响细菌硫代谢，从而抑制大肠埃 希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增殖。
——修改了标准的中英文名称； ——修改了标准的范围； ——修改了培养基和试剂； ——修改了设备和材料； ——修改了附录A。 本标准的附录A、附录B 为规范性附录。 本标准所代替的历次版本发布情况为： ——GB 4789.4-84、GB 4789.4-1994、 GB/T 4789.4-2003、GB/T 4789.4-2008
（一）前增菌 •前增菌：使食品加工过程中受伤的沙门菌细胞 恢复活力 •未经加工过的食品，检验前不需要前增菌
前增菌：25克（加工食品）+225毫升缓冲蛋白胨 水 37度培养4小时（干蛋品18—24小时）。
沙门氏菌前增菌培养基
缓冲蛋白胨水(BPW) 肉汤： 是基础增菌培养基，不含任何抑制成
分，有利于受损伤的沙门氏菌复苏。使受 损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状 态。2003版本标准仅用于加工食品或冷冻 食品的前增菌。
PCR鉴定沙门氏菌血清分型方法的建立与应用
PCR鉴定沙门氏菌血清分型方法的建立与应用赵建梅;李月华;宋传周;赵格;曲志娜【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2018(035)001【摘要】为建立快速有效、经济适用的沙门氏菌血清型鉴定方法,利用PrimerPlex 软件设计畜禽中常见沙门氏菌的菌体(O)抗原和鞭毛抗原(H)的引物,优化引物比例和退火温度等反应条件,建立沙门氏菌血清型鉴定的PCR法,并对46株沙门氏菌分离株进行血清型鉴定,同时与传统玻片凝集法和美国CDC的液相芯片(Luminex-xMAP)法进行比较.优化后获得了O抗原中B、C1、D和E1群的多重PCR引物,以及鞭毛抗原H1相抗原基因(fliC)和H2相抗原基因(fljB)的2对引物;建立了一套基于沙门氏菌O和H抗原的多重PCR血清型鉴定法;PCR法和Luminex-xMAP 法鉴定出7种沙门氏菌血清型,传统玻片凝集法鉴定出6种血清型;PCR法与传统玻片凝集法和Luminex-xMAP鉴定结果的符合率均为95.65%.本研究建立的PCR 沙门氏菌血清型鉴定法简便、快速,预期可在沙门氏菌的血清分型研究中发挥作用.【总页数】5页(P73-77)【作者】赵建梅;李月华;宋传周;赵格;曲志娜【作者单位】中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032;平原县畜牧兽医局王庙镇动检分所,山东德州253100;中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032【正文语种】中文【中图分类】S852.61【相关文献】1.复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌方法的建立及初步应用 [J], 贺英;赵萍;储岳峰;高鹏程;张建军;逯忠新2.复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌方法的建立及初步应用 [J], 贺英;赵萍;储岳峰;高鹏程;逯忠新;赵海燕3.福氏志贺菌4av和Yv血清型PCR鉴定方法的建立及应用 [J], 罗霞;王建平;孙强正4.复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌方法的建立及初步应用 [J], 李树清;易建平;陈志飞;王巧全;周筱华;罗满林;方怡;陈敏;夏谦5.流行性出血病病毒血清分型RT-PCR方法的建立及应用 [J], 杨振兴;李占鸿;宋子昂;李卓然;朱建波;廖德芳;杨恒因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
沙门氏菌国标检测方法
沙门氏菌国标检测方法一、样本采集在采集样本时，应确保采集的样本具有代表性，且无菌操作。
通常采集食品、动物粪便、环境样本等。
对于食品，应采集不同种类，如肉类、禽类、奶制品等。
对于动物粪便，应采集新鲜样本，避免受到污染。
环境样本应采集可能存在沙门氏菌的表面或水样。
二、增菌培养增菌培养是沙门氏菌检测的重要步骤，目的是增加细菌的数量，使其更容易分离和检测。
常用的增菌培养基有肉汤培养基和缓冲葡萄糖胨水培养基等。
将采集的样本接种到培养基中，在37℃下培养18-24小时。
三、分离培养将增菌培养后的培养物划线接种于选择性培养基（如SS 琼脂、麦康凯琼脂等）上，在37℃下培养18-24小时。
选择性培养基可以抑制其他细菌的生长，有利于沙门氏菌的分离。
四、初步鉴定对分离培养得到的单个菌落进行初步鉴定，包括菌落形态、染色特性、镜下形态等观察。
同时进行革兰氏染色和氧化酶试验，以初步判断是否为沙门氏菌。
五、生化试验生化试验是确定分离菌株是否为沙门氏菌的关键步骤。
常用的生化试验包括赖氨酸脱羧酶试验、尿素试验、靛基质试验等。
根据试验结果，对分离菌株进行初步分类。
六、血清学分型为了确定分离菌株的具体血清型，需要进行血清学分型。
通过与已知抗血清进行反应，确定细菌的特异性抗原，从而确定其血清型。
血清学分型对于追踪沙门氏菌的来源和传播途径具有重要意义。
七、报告结果根据以上各步骤的检查结果，综合分析并得出最终结果。
对于疑似沙门氏菌的样本，应进行复核和确认。
最终结果应以书面形式报告给相关单位或个人，报告应包括样本来源、检测方法、检测结果等内容。
同时，应对检测结果进行解释和说明，提供相应的建议和措施。
沙门氏菌检测血清学分型(选做)
《畜产品检测技术》电子教材沙门氏菌检测血清学分型（选做）一、血清学分型操作步骤（一）O 抗原的鉴定用A～F多价O 血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。
在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株，不能分型。
1.被A～F多价O 血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。
根据试验结果，判定O 群。
被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E4各亚群，每一个O 抗原成分的最后确定均应根据O 单因子血清的检查结果，没有O单因子血清的要用两个O 复合因子血清进行核对。
2.不被A～F多价O 血清凝集者，先用9种多价O 血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O 群血清逐一检查，以确定O 群。
每种多价O 血清所包括的O 因子如下:O 多价1 A，B，C，D，E，F群(并包括6，14群)O 多价2 13，16，17，18，21群O 多价3 28，30，35，38，39群O 多价4 40，41，42，43群O 多价5 44，45，47，48群O 多价6 50，51，52，53群O 多价7 55，56，57，58群O 多价8 59，60，61，62群O 多价9 63，65，66，67群（二）H 抗原的鉴定1.属于A～F各O 群的常见菌型，依次用表1所述H 因子血清检查第1相和第2相的H 抗原。
表1A-F群常见菌型 H抗原表2.不常见的菌型，先用8种多价H 血清检查，如有其中一种或两种血清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种H 因子血清逐一检查，以第1相和第2项的H 抗原。
8种多价H 血清所包括的H 因子如下:H 多价1 a，b，c，d，iH 多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51H 多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40H 多价4 1，2；1，5；1，6；1，7；z6H 多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H 多价6 z39，z41，z42，z44H 多价7 z52，z53，z54，z55H 多价8 z56，z57，z60，z61，z62每一个H 抗原成分的最后确定均应根据H 单因子血清的检查结果，没有H 单因子血清的要用两个H 复合因子血清进行核对。
食品中沙门氏菌检验
食品中沙门氏菌检验
食品微生物检验技术
1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行时分离出猪霍乱沙门菌，故定名为沙门菌属。 沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。目前已发现的沙氏菌有2500多个血清型和变种。虽然沙门菌血清型很多，但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约40~50 个血清型。而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。分类： •伤寒沙门菌(伤寒、副伤寒)-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。 • 非伤寒沙门菌-食品安全标准的检测的主要对象。
一、沙门氏菌概况
培养与生化特性
前增菌
选择性增菌
生物化学筛选
非如上述的各种反应
检样
BS
XLD(或HE ，显色培养基)
挑取可疑菌落
选择性平板筛选
非沙门氏菌
H2S+靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+
H2S+靛基质+尿素-KCN-赖氨酸+
H2S-靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+/-
甘露醇+ 、山梨醇+
ONPG -
蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色
菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑心中心
按照显色培养基的说明进行判定
葡萄糖+H2S
乳糖+ H2S
乳糖+ H2S
葡萄糖+H2S
SC
TTB
结果报告：综合以上生化试验结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。前增菌：缓冲蛋白胨水（BPW） 肉汤是基础增菌培养基，不含任何抑制成分，有利于受损伤的沙门菌复苏。鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。增菌：① 四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）含有胆盐，抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与付伤寒沙门菌仍能生长。②亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）可对伤寒及其他沙门菌作选择性增菌，亚硒酸与蛋白胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸和硫的复合物，影响细菌硫代谢，从而抑制大肠埃希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增殖。
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《畜产品检测技术》电子教材
沙门氏菌检测血清学分型（选做）
一、血清学分型操作步骤
（一）O 抗原的鉴定
用A～F多价O 血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。
在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株，不能分型。
1.被A～F多价O 血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。
根据试验结果，判定O 群。
被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E4各亚群，每一个O 抗原成分的最后确定均应根据O 单因子血清的检查结果，没有O单因子血清的要用两个O 复合因子血清进行核对。
2.不被A～F多价O 血清凝集者，先用9种多价O 血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O 群血清逐一检查，以确定O 群。
每种多价O 血清所包括的O 因子如下:
O 多价1 A，B，C，D，E，F群(并包括6，14群)
O 多价2 13，16，17，18，21群
O 多价3 28，30，35，38，39群
O 多价4 40，41，42，43群
O 多价5 44，45，47，48群
O 多价6 50，51，52，53群
O 多价7 55，56，57，58群
O 多价8 59，60，61，62群
O 多价9 63，65，66，67群
（二）H 抗原的鉴定
1.属于A～F各O 群的常见菌型，依次用表1所述H 因子血清检查第1相和第2相的H 抗原。
表1A-F群常见菌型 H抗原表
2.不常见的菌型，先用8种多价H 血清检查，如有其中一种或两种血清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种H 因子血清逐一检查，以第1相和第2项的H 抗原。
8种多价H 血清所包括的H 因子如下:
H 多价1 a，b，c，d，i
H 多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51
H 多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40
H 多价4 1，2；1，5；1，6；1，7；z6
H 多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38
H 多价6 z39，z41，z42，z44
H 多价7 z52，z53，z54，z55
H 多价8 z56，z57，z60，z61，z62
每一个H 抗原成分的最后确定均应根据H 单因子血清的检查结果，没有H 单因子血清的要用两个H 复合因子血清进行核对。
检出第1相H 抗原而未检出第2相H 抗原的或检出第2相H 抗原而未检出第1相H 抗原的，可在琼脂斜面上移种1代～2代后再检查。
如仍只检出一个相的H 抗原，要用位相变异的方法检查其另一个相。
单相菌不必做位相变异检查。
3.位相变异试验方法如下:
(1)简易平板法：将0.35%～0.4%半固体琼脂平板烘干表面水分，挑取因子
血清1环，滴在半固体平板表面，放置片刻，待血清吸收到琼脂内，在血清部位的中央点种待检菌株，培养后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。
(2)小玻管法：将半固体管(每管约1mL～2mL)在酒精灯上溶化并冷至50℃，取已知相的H 因子血清0.05mL～0.1mL，加入于溶化的半固体内，混匀后，用毛细吸管吸取分装于供位相变异试验的小玻管内，待凝固后，用接种针挑取待检菌，接种于一端。
将小玻管平放在平皿内，并在其旁放一团湿棉花，以防琼脂中水分蒸发而干缩，每天检查结果，待另一相细菌解离后，可以从另一端挑取细菌进行检查。
培养基内血清的浓度应有适当的比例，过高时细菌不能生长，过低时同一相细菌的动力不能抑制。
一般按原血清1∶200～1∶800的量加入。
(3)小倒管法：将两端开口的小玻管(下端开口要留一个缺口，不要平齐)放在半固体管内，小玻管的上端应高出于培养基的表面，灭菌后备用。
临用时在酒精灯上加热溶化，冷至50℃，挑取因子血清1环，加入小套管中的半固体内，略加搅动，使其混匀，待凝固后，将待检菌株接种于小套管中的半固体表层内，每天检查结果，待另一相细菌解离后，可从套管外的半固体表面取菌检查，或转种1%软琼脂斜面，于36℃培养后再做凝集试验。
（三）Vi抗原的鉴定
用Vi因子血清检查。
已知具有Vi抗原的菌型有:伤寒沙门氏菌，丙型副伤寒沙门氏菌，都柏林沙门氏菌。
（四）菌型的判定
根据血清学分型鉴定的结果，按照表2或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型。
表2常见沙门氏菌抗原表
E4 群
注：关于表内符号的说明：
{}={}内O因子具有排他性。
在血清型中{}内的因子不能与其他{}内的因子同时存在，例如在O:3,10群中当菌株产生O:15或O:15,34因子时它替代了O:1 0因子。
[]= O（无下划线）或H因子的存在或不存在与噬菌体转化无关，例如O:4群中的[5]因子。
H因子在[]内时表示在野生菌株中罕见，例如极大多数S.Para typhi A具有一个位相（a），罕有第2相（1，5）菌株。
因此，用1,2,12:a: [1,5]表示。
_=下划线时表示该O因子是由噬菌体溶原化产生的。