沙门氏菌生化鉴定
沙门氏菌生化试验判定步骤
三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生
成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是
在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄
色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，
生成黑色的硫化亚铁沉淀。
底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。
斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌
氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄
糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜
面又转为碱性。
2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳
糖，不产生H2S。
4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，
不产生H2S。
3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，
多数产气。
赖氨酸脱羧酶试验
1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。
2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。
氨基酸脱羧酶试验?(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。?(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。(3)结果：若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。
(4)应用：主要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。
精氨酸双水解酶试验?(1)原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。??(2)方法：将待检菌接种于试验培养上，置35℃孵箱孵育1~4d，观察结果。(3)结果：溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。(4)应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。
非发酵菌：是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。
表2
反应1：典型沙门氏菌，如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常，按表3进行。如有2项异常为非沙门氏菌。
反应2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。
反应3：补做ONPG。ONPG为阴性，同时赖氨酸脱羧酶为阳性；赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。
必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别
沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。 根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。第二类群：能引起人类食物中毒――食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌。大小通常为0.7～1.5μm × 2.0～5.0μm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。需氧或兼性厌氧菌，生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不高，在普通
沙门氏菌检验
实验六食品中沙门氏菌的检验 一、概述： 1.沙门氏菌的形态特征：革兰氏阴性，两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，周身鞭毛，运动力强，具菌毛。 2.沙门氏菌需氧或兼性，10-42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH 为6.8-7.8。 3.沙门氏菌食物中毒的食品主要为动物性食品，特别是畜肉类及其制品，污染肉类食物的几率很高。冷冻对沙门氏菌无杀灭作用，即使在-25℃低温仍可存活10个月左右。 意义：沙门氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国各类细菌性的食物中毒中，沙门氏菌常居前列。因此，沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。 二、操作步骤： 1．前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 2．选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。 3．选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。 4．生化鉴定——排除大多数非沙门氏菌，提供了沙门氏菌培养物菌属的生理生化鉴定结果。 5．血清学技术——对沙门氏菌属培养物进行血清学分型鉴定，确定菌型。 主要沙门氏菌有2000多个血清型，可先用多价血清鉴定，再用单因子血清鉴定，先有常见菌型的血清鉴定，再用不常见菌型的血清鉴定。 三、实验过程： 1.前增菌将样品鸡蛋壳用灭菌棉签查拭蛋壳后，将棉签上部剪掉，下部放入前增菌培养基BPW中，5个棉签放入150mL前增液中，将制备好的预增菌液于37℃培养8-18h。（样品液变浑浊即可）
食品微生物检验技术W4305沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-干制生化鉴定试剂盒-4-微教材
《农产品/食品微生物检验》课程-微教材 知识讲解 沙门氏菌操作程序及要点——干制生化鉴定试剂盒 检测工作中，由于沙门氏菌类型繁多，生化反应复杂多样，可根据三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。 干制生化鉴定试剂盒一般包括赖氨酸脱羧酶及其对照、氰化钾及其对照、靛基质、尿素、甘露醇、山梨醇、ONPG、三糖铁共8项生化试验试剂，通过接种可疑菌落悬浊液培养一定时间后，观察生化现象，结合标准从而判定鉴定结果。由于此生化鉴定试剂盒中适配三糖铁实验现象不明显，一般将这个实验单独操作。 按照产品说明书，主要操作步骤如下： 接种： 第一步：从铝箔袋中取出试剂盒，打开盒盖； 第二步：用接种针从平板上挑取新鲜培养的适量单菌落接至适量无菌水中，与试剂盒中的
标准比浊管进行比对，制成0.5麦氏菌悬液，注意菌悬液浓度不宜过大，否则可能产生假阳性结果； 第三步：接种菌悬液分别至试剂盒的9个圆孔中，每孔接种量0.2mL； 第四步：在氨基酸对照、赖氨酸脱羧酶、氰化钾对照、氰化钾实验孔中滴加2滴矿物油覆盖培养基表面，盖上盒盖； 第五步：与三糖铁生化管一同置于36 ℃±1 ℃的恒温恒湿培养箱中培养24 h，其中ONPG 实验培养1～3h观察结果，如为阴性继续培养至24h观察结果；氰化钾实验若24h仍为阴性，可延长培养至48h观察结果； 第六步：培养结束后，在靛基质实验孔中滴加2滴靛基质试剂，即刻观察结果。 结果观察： 按照说明书进行结果观察，根据颜色反应，判读是阴性还是阳性。如： 赖氨酸脱羧酶（对照管黄色，试验管紫色）为阳性； 氰化钾（对照管生长，试验管不生长）为阴性； 靛基质实验（黄色）为阴性；尿素（黄色）为阴性； 甘露醇（黄色）为阳性；山梨醇（黄色）为阳性；ONPG（不变色)为阴性 判定：根据标准描述进行结果判定。 拓展阅读 《GB4789.4-2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》 食品微生物检验论坛：https://www.360docs.net/doc/6d19016279.html,/forum-1-1.html
0040沙门氏菌生化试验检验操作规程
目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。 依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。 范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。 责任人QC负责人、化验员。 内容 1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。 1.1仪器： 托盘天平 1.2玻璃器皿： 150ml锥开瓶、试管、载玻片 1.3试液： 1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。 1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。 1.4染色剂： 1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。 1.4.2碘液：取碘化钾 2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。 1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。 1.5培养基：
1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。 1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。 1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。 1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。 1.5.5沙门、志贺菌属琼脂：取沙门、志贺菌属琼脂试药60g，加蒸馏水1000ml，放置20分钟，用石棉网微火煮沸使完全溶解，冷至50℃左右倾入无菌平皿中凝固后，备用。麦康凯琼脂培养基：取麦康凯琼脂试药55g，加蒸馏水1000ml加热使溶解，116℃灭菌30分钟，备用。 1.5.6三糖铁琼脂培养基斜面：取三糖铁琼脂试药6.4g，加蒸馏水100ml，分装小试管，121℃灭菌20分钟，倾斜摆放，凝固后备用。 脲琼脂培养基：取脲琼脂试药2.9g加蒸馏水100ml，加热使溶解，121℃灭菌20分钟，备用。 1.5.7氰化钾培养基：取氰化钾培养基试药两份，每份1.4g，分别加蒸馏水100ml，加热使溶解，121℃灭菌20分钟，冷却后，一份加氰化钾试液1.5ml，另一份不加氰化钾试液，分别分装于12mm×100mm灭菌试管内，每管4ml，立即用灭菌橡胶塞塞紧，置冰箱4℃备用。 1.5.8赖氨酸脱羧酶培养基：取赖氨酸脱羧酶培养基试药两份，每份0.9g，分别加蒸馏水100ml加热溶解后；一份加L—赖氨酸0.1g，另一份不加作为对照，分别按每管 2.5ml 分装小试管，并滴加一层液体石蜡，121℃灭菌20分钟备用。 2操作步骤： 2.1增菌、分离培养： 2.1.1取供试品10g，加灭菌生理盐水100ml作供试品溶液，取营养肉汤增菌液3份，每份100ml，2份分别加入10ml供试品溶液，其中1份加入对照菌溶液作阳性对照，第3份加入10ml灭菌生理盐水作阴性对照。置36±1℃培养18—24小时，阴性对照应无菌落生长。取其余2份培养物各1ml，分别接种于四硫磺酸盐增菌培养基10ml 中，再置36±1℃培养18—24小时。分别划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基的平板上，置36±1℃培养18—24小时或延至40—48小时。当阳性对照的平板呈现阳性菌落时，供试品的平
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法 沙门氏菌是一种主要引起食物中毒的致病菌，其检验方法主要包括培养分离、生化检测和分子生物学方法等。下面是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。 1. 培养分离 沙门氏菌可以通过在选择性培养基上进行培养分离来检测。常用的选择性培养基包括XLD培养基、SS培养基和BS培养基等。将待检样品接种于选择性培养基上，并采用适当的温度和培养时间进行培养。沙门氏菌在培养基上形成红色或无色的菌落，可以通过形态特征进行初步判断。 2. 生化检测 生化检测是通过检测沙门氏菌代谢产物或酶活性来进行的。常用的生化检测方法包括气体产生试验、亚甲蓝试验和尿嘧啶酸试验等。气体产生试验通过观察沙门氏菌在培养基中是否产生氢气或硫化氢气体来判断其存在。亚甲蓝试验则是通过观察沙门氏菌对亚甲蓝的还原作用来进行检测。尿嘧啶酸试验则是通过检测沙门氏菌产生的尿嘧啶酸来进行。 3. 血清学检测 血清学检测是通过检测人体血清中对沙门氏菌特异性抗体的存在来进行的。常用的血清学检测方法包括凝集试验、间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验等。在这些方法中，沙门氏菌抗原与患者血清中的抗体结合，形成可见的凝集物或荧光产物，从而判断是否感染沙门氏菌。
4. 分子生物学方法 分子生物学方法是通过检测沙门氏菌特异性基因序列来进行的。常用的分子生物学方法包括聚合酶链式反应（PCR）、核酸杂交和基因测序等。PCR方法可以通过特异性引物扩增沙门氏 菌基因的特定片段，从而进行检测。核酸杂交可以通过与沙门氏菌特异性探针结合，形成杂交信号来进行检测。基因测序则可以直接检测沙门氏菌菌株中的特定基因序列，确定其身份。 总结： 沙门氏菌的检验方法主要包括培养分离、生化检测、血清学检测和分子生物学方法等。这些方法通过不同的途径检测沙门氏菌的存在，可以提供准确鉴定和检测结果。在实际应用中，结合多种方法的综合应用可以提高检测结果的准确性和可靠性。
沙门氏菌生化鉴定完整版
沙门氏菌生化鉴定 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
沙门氏菌生化试验判定步骤 三糖铁琼脂赖氨酸脱羧 酶初步判断 斜面底层产气硫化氢 产碱红产酸黄＋（－）＋（－） 黑 ＋紫可疑沙门氏菌 产碱红产酸黄＋（－）＋（－） 黑 －黄可疑沙门氏菌 产酸黄产酸黄＋（－）＋（－） 黑 ＋紫可疑沙门氏菌 三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。 斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分 解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。 2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵 乳糖，不产生H2S。 4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳 糖，不产生H2S。 3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生 H2S，多数产气。 赖氨酸脱羧酶试验 1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。 2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。 氨基酸脱羧酶试验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。
沙门菌生化部分检查
沙门氏菌检验 5.3 生化试验 5.3.1 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内，肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。 表2 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果 说明：在三糖铁琼脂内只有斜面产酸并同时硫化氢（H2S）阴性的菌株可以排除，其他的反应结果均有沙门氏菌的可能，同时也均有不是沙门氏菌的可能。 5.3.2 在接种三糖铁琼脂的同时，再接种蛋白陈水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各1管，于36±1℃培养18~24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1，其他5种反应结果均可以排除。 表3 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表
5.3.3 反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常，则按A3判定为弗劳地氏柠檬酸杆菌。 表4 5.3.4 反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，按表5判定结果。 表5 5.3.5 反应序号B1：补做ONPG。ONPG十为大肠埃希氏菌，ONPG-为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸+，但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸-。
5.3.6 必要时按表6进行沙门氏菌生化群的鉴别。 表6沙门氏菌属各生化群的鉴别 5.4 血清学分型鉴定 具体内容见GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中6.4。 5.5 菌型的判定和结果报告 综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果，按照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中表8或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型，并报告结果。 注：本文参照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》
沙门氏菌的检验步骤
沙门氏菌的检验步骤 沙门氏菌是一种常见的食物中毒细菌，它可以引起沙门氏菌属感染。 所谓的沙门氏菌属包括两个物种：Salmonella enterica和Salmonella bongori。这两个物种又包含了超过2,500种不同的血清型。 为了检测食物或其他样本中是否存在沙门氏菌，通常需要进行以下步骤： 1.样本收集：收集来自可疑食物或其他可能被污染的样品，如肉、蛋、奶制品、水果、蔬菜或动物粪便。确保采集样品的方法是无菌的，以避免 污染。 2.前处理：对样本进行适当的前处理，以提高沙门氏菌的检测效果。 这可能包括样品的预处理、样品的培养基中添加抑菌剂等。 3. 培养：将样品接种于适宜的培养基上，如XLD（Xylose Lysine Deo某ycholate Agar）或SS（Salmonella Shigella Agar）等。这些培 养基可以选择性地识别并培养Salmonella属的细菌。 4.孵育：将培养皿放入恒温培养箱，通常是在37℃左右，孵育时间 一般为24至48小时。 5.形态特征观察：观察培养基上菌落的形态特征，如形状、颜色、大 小等。沙门氏菌通常形成呈灰白色、圆形、凹陷的菌落。 6.血清型鉴定：对沙门氏菌进行血清学鉴定以确定其血清型。这通常 涉及到使用抗体和相应的血清反应，以确定菌株的亚型。 7.生化测试：对阳性菌落进行生化测试，如甲烷糖发酵试验和硫化氢 产生试验，以进一步确认其鉴定。
8.PCR检测：PCR是目前常用的沙门氏菌检测方法之一、它利用聚合酶链反应（PCR）技术，检测样品中的沙门氏菌DNA。 9.分子的子类型分析：通过分子生物学技术，如基因测序、脉冲场凝胶电泳（PFGE）或肽核酸类似程序分析（AFLP），确定沙门氏菌的亚型。 总之，沙门氏菌的检验步骤包括：样本收集、前处理、培养、孵育、形态特征观察、血清型鉴定、生化测试、PCR检测和分子的子类型分析。这些步骤的目的是确认样品中是否存在沙门氏菌，并确定其类型和亚型，以便采取相应的预防和控制措施。
沙门氏菌的生物学特性及鉴定要点
沙门氏菌的生物学特性及鉴定要点 沙门氏菌（Salmonella）是一类革兰氏阴性杆菌，属于肠杆菌科。它 是一种引起人和动物肠道感染的重要病原体。沙门氏菌有两个主要的亚种：Salmonella enterica和Salmonella bongori，其中Salmonella enterica是最常见的感染人类的菌株。 首先，沙门氏菌是革兰氏阴性菌，具有杆状形态，通常为直杆状。它 是兼性厌氧菌，可以在有氧和无氧条件下生长。沙门氏菌属于革兰氏阴性 杆菌科，因此具有外膜、细胞壁和细胞膜等典型的细胞结构。 其次，沙门氏菌具有很强的适应性，可以在不同的生境中存活和繁殖。它可以在动物消化系统中生长，因此通过食物、水源或其他途径传播给人类。沙门氏菌还可以在动物皮肤、血液等环境中存活一段时间。 沙门氏菌还能产生多种毒性产物，包括细胞毛、猪流感毒素、产碱酯酶、核磷酸腺苷酸二磷酸酶等。这些毒性产物能够破坏宿主细胞的完整性，导致宿主感染。 另外，沙门氏菌还具有抗药性。由于长期暴露于抗生素的压力下，沙 门氏菌的耐药性逐渐增加。它能够产生多种抗生素抗性基因，如β内酰 胺酶、氯霉素乙酰转移酶、四环素酰移酶等。 鉴定沙门氏菌的主要要点包括形态学、生理生化特性和分子生物学检测。 形态学鉴定主要通过显微镜观察菌落形态和菌体形态。沙门氏菌的菌 落形态多呈灰白色或深红色。菌体形态为短杆状或长杆状。
生理生化特性包括对营养源的利用和代谢产物的生成。沙门氏菌可以 利用葡萄糖、果糖等碳源进行发酵，并产生气体。它能够降解胆红素，产 生硫代硫酸盐和亚硝酸盐，以及耐久表型的产生。 分子生物学检测是目前最常用的方法之一、它利用PCR技术针对沙门 氏菌特异性基因进行检测。这些特异性基因包括invA基因、hilA基因等。通过分子生物学检测可以快速、准确地鉴定沙门氏菌。 总体而言，沙门氏菌是一种革兰氏阴性杆菌，具有强大的适应性和致 病能力。通过形态学、生理生化特性和分子生物学检测等方法可以准确鉴 定沙门氏菌。对沙门氏菌的鉴定有助于预防和控制相关感染疾病的传播。
沙门氏菌检验 (2)
沙门氏菌检验 1.范围 本法适用于食品中沙门氏菌的检验。 2.设备和材料 处微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2℃～5℃。 2.2 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平：感量0.1g。 2.6 无菌锥形瓶：容量500mL，250mL。 2.7 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 2.8无菌培养皿：直径90mm。 2.9 无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。 3.培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）。 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂。 3.5 HE琼脂。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。 3.7沙门氏菌属显色培养基。 3.8 三糖铁（TSI）琼脂。 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂。 3.10 尿素琼脂（pH7.2）。 3.11 氰化钾（KCN）培养基。 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基。 3.13 糖发酵管。 3.14 邻硝基苯β-D-半乳糖苷（ONPG）培养基。 3.15 半固体琼脂。 3.16 丙二酸钠培养基。 3.17 沙门氏菌O和H诊断血清。 3.18 生化鉴定试剂盒。 4.检验程序 沙门氏菌检验程序见图1。 42℃±118h～24h 36℃±1℃，18h～24h 5.操作步骤
5.1 前增菌 称取25g（mL）样品放入盛有225mL BPW 的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2.无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。 如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻。 5.2 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mL TTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL转种于10mL SC内，于36℃±1℃培养18h～24h。 5.3 分离 分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。与36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD平板、HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表1。 表1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 5.4 生化试验 5.4.1 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可以菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌，直接接种懒氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和懒氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。 表2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和懒氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果 5.4.2 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保留24h，以备比必要时复查。
沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点
．检验沙门氏菌的原因和意义： 据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门 氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～ (106 个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染， 进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。 因此对沙门氏菌的检验事关重大。 二、检测及鉴定： 沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。 沙门氏菌典型菌落形态：
生化鉴定显示： API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。 限值要求： 参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区 的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定， 《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采 样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定， 具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。 三、沙门氏菌传统检测方法
的关键控制点 1、样品处理 尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。 2、培养基及培养方面 （1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。 （2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。 （3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS 培养基认为是最适合的。 （4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式 沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病，可能会导致严重的胃肠道感染。为了保障食品安全，确保公众的健康，我们需要进行沙门氏菌的国标检验。下面是一份生动、全面且有指导意义的文章，详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。 第一步：样品准备 在进行沙门氏菌检验之前，我们首先需要准备样品。常见的样品包括食品、水、动物排泄物等，可能携带沙门氏菌。样品应该收集自具有代表性的地点，并采取无菌采样容器进行收集。收集样品时要注意避免污染，并确保样品的数量足够进行检验。 第二步：样品处理 样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来，并进行后续的检测。可以采用不同的方法进行样品处理，常见的方法包括富集培养和选择性培养。富集培养是将样品放入富集培养基中，利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长，从而使沙门氏菌生长出来。 第三步：菌落鉴定 在样品处理后，我们需要对培养基上的菌落进行鉴定，确认是否为沙门氏菌。常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特
征来判断细菌的种类。生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的 代谢情况来确定细菌的种类。分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列 来识别沙门氏菌的基因，通常使用PCR技术进行检测。 第四步：抗菌药敏试验 沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。通过抗菌药敏试验，我们可以选择合适的药物来治疗感染。可以使用 各种常见的抗生素盘进行试验，然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。根据抗生素的抑菌效果，可确定沙门氏菌的耐药性情况。 第五步：结果分析与报告 最后一步是对检验结果进行分析，并撰写检验报告。检验结果要 结合国家标准进行评估，确定样品是否合格。如果样品中检测到沙门 氏菌，还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。在撰写报 告时，需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果，以及 相应的建议和措施。 通过以上步骤，我们可以对样品中的沙门氏菌进行国标检验。这 些检验步骤和接种方式的正确实施，可以确保检验的准确性和可靠性，预防沙门氏菌相关疾病的传播，保障公众的健康。希望本文能对相关 从业人员、食品生产和检验单位提供指导和帮助。
实验四 沙门氏菌属(Salmonella)的检验
实验四沙门氏菌属（Salmonella）的检验 1 目的 1.1 理解沙门氏菌属生化反应及其原理 1.2 掌握沙门氏菌属血清因子使用方法 1.3 掌握沙门氏菌属的系统检验方法 2 原理 沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。种类繁多，少数只对人致病。其他对动物致病，偶尔可传染给人。主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。 食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1 前增菌；2 选择性增菌；3 选择性平板分离沙门氏菌；4 生化试验，鉴定到属；5 血清学分型鉴定。目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。本实验以蛋品为检测样品，以已知的沙门氏菌和大肠埃希氏菌为对照。 3 材料 3.1 菌种 沙门氏菌（Salmonella sp.） 大肠埃希氏菌（E.col.） 3.2 检样 冻肉、蛋品、乳品等。 3.3 培养基 缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁孔雀绿（MM）增菌液、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、SS琼脂、EMB琼脂、亚硫酸铋琼脂（B S）、三糖铁琼脂（TSI）、蛋白胨水、尿素培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、鸟氨酸脱羧酶试验培养基、丙二酸钠培养基、氰化钾（KCN）培养基、ONPG培养基、缓冲葡萄糖蛋白胨水、DHL琼脂、HE琼脂。 3.4 试剂 吲哚试剂、V-P试剂、甲基红试剂、氧化酶试剂，沙门菌A—F多价诊断血清，革兰氏染色液等。 3.5 器具 天平（称取检样用）、均质器或乳钵、显微镜、广口瓶、三角烧瓶、吸管、平皿、