硫代乙酰胺法检查重金属原理
药物分析药物的杂质检查
杂质限量的计算：
杂质限量（L）=杂—质—的—最—大—允—许—量 × 100% 供试品量
标准溶液的体积（V） ×标准溶液的浓度（C）
杂质限量=
×100%
供试品的量（S）
L = ——C—V—— × 100%
S
医学ppt
C：杂质标准浓度(对照品)
V：杂质标用示例一 对乙酰氨基酚中氯化物检查
硫化钠要新配制的（因对玻璃有腐蚀，久置产生絮状物）。
医学ppt
25
3、注意点：
A、加HNO3目的：
水解
盐+ H2 O
酸+碱
中和
B、溶液越稀越容易水解，所以临时配制使用
C、排除干扰物质 含芳环或杂环有机物，按药典方法先炽灼破坏使与有机
物分子结合的重金属游离，再依法检查。
医学ppt
26
第四法 微孔滤膜法。 适用于重金属限量低的药物。 （含2～5μg重金属）的检查。 。
2 ×103 × 25 100
×100% = 0.01%
医学ppt
8
例2：葡萄糖中重金属检查：取葡萄糖4.0g ，加水23ml 溶解后加醋酸缓冲溶液（pH=3.5）2ml，依药典检查， 含重金属不得超过百万分之五，问取标准铅溶液多少 ml？（每1ml相当10μgPb）？
解： (1μg=10-6g) (百万分之五=5X10-6）
LS 5X10-6 X4.0g
V=------- =---------------------- = 2.0ml
C
10 X10-6 g
医学ppt
9
例3:磷酸可待因中的吗啡检查:取本品0.10g,加盐酸溶液 (91000)使溶解成5ml,加亚硝酸钠试液2ml,放置15min, 加氨溶液3ml,所显颜色与吗啡溶液5ml [取无水吗啡 2.0mg加盐酸溶液(9->1000)使溶解成100ml ]用同一 方法比较,问限量为多少?
重金属检查法
（2）中国药典（2000年版）共收载 四法。
（2）用硝酸铅配制标准铅贮备液 （加硝酸防止Pb2+水解），临用前稀 释而成，标准硝酸铅溶液10g Pb2+/ml，最适检出浓度：27ml溶液
中含10g~
2+ 20g的Pb
。
（3）酸度：金属离子与H2S呈色酸度 影响较大。pH3-3.5硫化铅沉淀较完 全，酸度增大呈色变浅，太大其至 不呈色。
（4）消除颜色干扰： A.外消色法：样品溶液有色时：向 标准管中滴加稀焦糖溶液（蔗糖用火 加热，掌握好加热程度），使与样品 管颜色一致，或向标准管中加pH指示 剂使其颜色一致。 B.内消色法 C.改用微孔滤膜过滤法。
（5）干扰物的排除：
①微量Fe的干扰:
Fe3++S2-
S
H
排除方法加入维生素C或盐酸羟胺 Fe3++Vc Fe2++去氢抗坏血酸
③共价键结合的砷化物：先要有
机破坏，破坏方法有碱破坏法或
酸破坏法，ChP常采用前者。 ④锑的干扰：
Sb Sb H 3 锑斑
HgBr 2
（灰色），需改用白田道夫法。
（二）Ag-DDC法 基甲酸银
二乙基二硫代氨
对照法检查、含量测定 （ChP90,95,2000 采用，85未用）， （SilyerdithyldithioCarbamate Ag-DDC）,USP（24）
五、重金属检查法_(1)重金属概念_工业上_比重5以上的金属_药典
CH CSNH H O CH CON H S 3 2 2 2 2
pH3.5 3
2 pH3.5
药物： Pb H S PbS 黄色～ 2
对照： PbNO c 、 V H S PbS 3 2
p H3.5
黄色～
2.方法 （1）在弱酸性下（pH3.5醋酸盐缓 冲液），以硫代乙酰胺为显色剂。 （2）在碱性下（若药物在酸性下 不溶解），以Na2S为显色剂（第三 法）。 3.讨论 （1）硫代乙酰胺试剂：在弱酸性 下转换为H2S，所以与H2S显色剂具有 相同作用和效果，无恶臭、浓度易控 制。
方法：首先依第一法检查，结果经微
孔滤膜过滤后比较色斑。
总之，各国检查重金属方法不一。
USP（24）检查重金属时，使用硫代乙酰 胺显色。检查时，除用供试管、对照管， 还规定用监控管，三管同法检查。BP
（2000）用供试管、对照管和空白管检查。
97： 78．重金属检查中，加入硫代乙
酰胺时溶液控制最佳的pH值是（B）
五、重金属检查法 (1)重金属概念 工业上，比重5以上的金属 药典上重金属指在实验条件下 能够与硫代乙酰胺或Na2S反应生成 沉淀的金属杂质。如Ag、Pb、Hg、 Cu、Cd、Bi、Zn、Co、Ni等，其中 铅Pb最常遇到，且易积蓄中毒，因 此，检查时以Pb为代表。
（2）中国药典（2000年版）共收载 四法。
（2）用硝酸铅配制标准铅贮备液 （加硝酸防止Pb2+水解），临用前稀 释而成，标准硝酸铅溶液10g Pb2+/ml，最适检出浓度：27ml溶液
中含10g~
2+ 20g的Pb
。
（3）酸度：金属离子与H2S呈色酸度 影响较大。pH3-3.5硫化铅沉淀较完 全，酸度增大呈色变浅，太大其至 不呈色。
重金属的测定(固体)
重金属的测定比色法（适用于固体）原理：金属离子与硫代乙酰胺或硫化钠作用其颜色深浅与重金属离子浓度成正比。
仪器：纳氏比色管(50ml)、坩埚、马弗炉、电炉试剂：盐酸（分析纯）、硝酸（分析纯）、醋酸盐缓冲液（PH=3.5）、标准铅溶液、硫代乙酰胺试液（混合液与硫代乙酰胺5：1混合）、蒸馏水检验步骤：1、取样品（固体）1g置于坩埚中，先碳化，然后置于600度（正负50度）的马弗炉上灰分至多次称重保持衡重为止（6小时以上）。
2、取出处理好的样品加盐酸2ml，加硝酸0.5ml，置于电炉上小火蒸干，冷凉，加水5ml再蒸干，冷却加醋酸盐缓冲液5ml，加水20ml，温热5min，加水适量使成50ml。
3、分取20ml，加水5ml。
取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲溶液2ml后，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入按该品种项下规定的方法制成的供试品溶液25ml，若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与甲管一致。
4、再在甲乙管中分别加入硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，比色（乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深）。
含重金属不得过百万分之五十。
试剂配制：醋酸盐缓冲溶液（pH=3.5）：取醋酸铵25g加水25ml溶解后，加7mol/l盐酸溶液38ml，用2mol/l盐酸溶液或5mol/l氨溶液准确调节pH值至3.5（电质法指示）用水稀释至100mol/l既得。
7mol/l盐酸：浓盐酸（必须缓缓倒入冷水中）加水583ml 1000ml定容加水2mol/l盐酸： 166.6ml 1000ml定容5mol/l NH3•H2O：取340ml浓氨水缓缓倒入冷水中，稀释至1000ml。
标准铅溶液：铅贮存液（0.1mg/mol）（一年有效期）取硝酸铅0.160g+5ml HNO3（分析纯） + 50ml H2O,溶解后加水再稀释至1000ml摇匀。
中药制剂检测技术第四章中药制剂的杂质检查技术
重金属检查注意事项
标准铅溶液（每1ml相当于10μg 的Pb）应临用前配制，用量为2ml。配制与贮 存标准铅溶液用的玻璃容器，均不得含有铅。
显色条件：最佳酸度为pH=3.5。最佳显色时间为2分钟。 若供试品溶液有颜色，可在对照液管中加稀焦糖液或其他无干扰的有色溶液，
残渣加稀盐酸
无灰滤纸过滤
滤渣干燥称重
计算酸不溶性灰 分含量
酸不溶性灰分含量% =
m m
1 2
×100%
结果判断
m1：为酸不溶性残渣的重量（g）；
m2：为炽灼前供试品的重量（g）。
中药制剂检测技术第四章中药制剂的 杂质检查技术
三、应用实例
九味羌活丸总灰分和酸不溶性灰分测定
《中国药典》2010年版规定，九味羌活丸应进行“总灰分”和“酸不溶性灰 分”检查。要求总灰分不得过7.0%，酸不溶性灰分不得过2.0%。
中药制剂检测技术第四章中药制剂的 杂质检查技术
五、杂质检查的方法
对照法（限量检查法）：供试液与待检杂质对照液在相同 条件下处理，比较反应结果，判断供试品中所含杂 质是否 超出限量。不需测定杂质的准确含量。
准确测量法（含量测定法）：可测定杂质的准确含量 。
灵敏度法：是以检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量 的方法 。
使之与供试液颜色一致 。 供试品中如含高铁盐，影响检查，可在供试液管和对照液管中分别加入维生素
C 0.5～1.0g，将高铁离子还原成为亚铁离子消除干扰。 炽灼温度必须控制在500～600℃，温度过低灰化不完全，重金属不能全部游离
，温度在700℃以上，多数重金属盐都有不同程度的挥发损失 。 为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属的影响，在配制供试品溶液时，如使
药物分析问答
问1．用薄层色谱法检查药物中的杂质，可采用高低浓度对比法检查，何为高低浓度对比法？2．药物重金属检查法中，重金属以什么代表？有那几种显色剂？检查的方法共有哪几种？3．简述中国药典对药物中氯化物检查法的原理，方法及限量计算公式？4．试述药物的杂质检查的内容（包括杂质的来源，杂质的限量检查，什么是一般杂质和特殊杂质。
）5．肾上腺素中的特殊杂质是什么？药典采用什么方法对其进行检查？6．简述硫代乙酰胺法检查重金属的原理和方法？7．请举例说明信号杂质及此杂质的存在对药物有什么影响答1．当杂质的结构不能确定，或无杂质的对照品时，可采用此法。
方法：将供试品溶液限量要求稀释至一定浓度做对照液，与供试品的溶液分别点加了同一薄层板上、展开、定位、观察。
杂质斑点不得超过2－3个，其颜色不得比主斑点深。
2．（1）在药品生产中遇到铅的机会较多，铅在体内易积蓄中毒，检查时以铅为代表。
（2）有H2S、硫代乙酰胺、硫化钠（3）中国药典（2005版）重金属检查法一共载有四法。
第一法硫代乙酰胺法第二法将样品炽灼破坏后检查的方法。
第三法难溶于酸而能溶于碱性水溶液的药物，用Na2S作为显色剂第四法微孔滤膜法3．（1）原理：Cl-+AgNO33AgCl（白色浑浊）（2）方法：利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液在相同的条件下的与氯化银浑浊液比较，判断供试品中氯化物是否超过限量。
（3）计算公式：CV×SL=×1%4．（1）杂质的来源：一是生产过程中引入。
二是在储存过程中产生。
（2）杂质的限量检查：药物中所含杂质的最大允许量叫做杂质限量。
通常用百分之几或百万分之几表示。
（3）一般杂质及特殊杂质一般杂质：多数药物在生产和储存 过程中易引入的杂质如：氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、有色金属等。
特殊杂质：是指在该药物的生产和储存过程中可能引入的特殊杂质。
如阿斯匹林中的游离水杨酸、肾上腺素中的酮体等。
3-2药物杂质检查技术
对照： Fe3 C、V 6SCN HCl FeSCN 6 红色
3
（二）检查方法
标准铁溶液的制备→供试品溶液和对照溶液
的制备→加入显色剂30%硫氰酸铵溶液→比色→记
录和结果判断等
三、铁盐检查
（二）检查方法
供试品 加水溶解 25ml 稀HCl 4ml
过硫酸铵 50mg
药物： Pb2 H2S pH3.5 PbS黄色～棕黑色
对照：PbNO3 c、V H2S pH3.5 PbS黄色～棕黑色
（二）检查方法
1.标准铅溶液的制备
2.检查溶液的制备
对照溶液的制备（甲管）
供试品溶液的制备（乙管） 监控管溶液的制备（丙管）
3.比色
1、原理： 三价As 五价As
Zn+HCl
AsH3
HgBr2试纸
砷斑 黄棕色
五价砷的反应较慢，需先还原为三价砷
（二）检查方法
1.标准砷溶液的制备
2.标准砷斑的制备
3.供试品砷斑的制备
4.比色 5.结果判断
（三）注意事项
1.在反应液中加入碘化钾和酸性氯化亚锡的目
的
2.在检砷装置的导气管中装入醋酸铅棉花的目
第三章 药物杂质检查技术
（三）杂质限量计算
允许杂质存在的最大量 杂质限量＝ 100% 供试品量
L C V 100 % S
L：杂质限量 V：标准溶液体积 S：供试品的量 C：标准溶液浓度
对乙酰氨基酚中硫酸盐的检查 取本品2.0g，加水100ml，加热溶解后，冷却、滤过， 取 滤 液 25ml ， 依 法 检 查 ， 与 标 准 硫 酸 钾 溶 液 1.0ml （100µ g/ ml SO4）制成的对照液比较，不得更浓。计 算硫酸盐的限量。
重金属的检查
武汉大学药学实验教学中心
4
砷盐检查原理
3
古蔡氏法
As 3As O3 H 2 AsH3 溴化汞试纸 砷斑 黄棕 AsO3 4
Zn+HCl 药物产生的砷斑 标准砷溶液产生的砷斑
12
比较颜色深浅
三、实验方法与指导
武汉大学药学实验教学中心
---葡萄糖中 4 种无机杂质的检查
17
武汉大学药学实验教学中心
砷盐的检查
导气管 C : 装入醋酸铅棉花60 mg ，高约60 ～80 mm
旋塞D:
平面上放一片溴化汞试纸
பைடு நூலகம்
注意：
导气管和溴化汞试纸应保持干燥
武汉大学药学实验教学中心
砷盐的检查
只做标准砷斑：
精密量取标准砷溶液（1μg/ml）2 ml，置试砷瓶中，加浓
盐酸5 ml与蒸馏水21 ml（改为：加稀盐酸（1：1）10 ml和蒸
25 m L pH 3.5 2 mL
H 2O
醋酸盐缓冲液
再在甲、乙、丙 3 管中分别加新鲜 配制的硫代乙酰胺试液各 2 ml，摇 匀，放置 2 min，同置白色背景上， 自上向下透视
16
武汉大学药学实验教学中心
重金属的检查 结果判断：
当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显 出的颜色与甲管比较，不得更深。 如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按中国 药典第二法重新检查。
标准溶液需用移液管量取；为了平行操作，其它试剂也最 好用移液管量取。 5.移液管的操作问题； 100oC水浴，防止烫伤！
20
五、思考题
武汉大学药学实验教学中心
1．对照法检查杂质限量应遵循的原则是什么?
2．分别计算葡萄糖中氯化物、铁盐、重金属的限量。 3. ChP（2010）重金属检查方法中为什么增加丙管？ 4．古蔡氏试砷法中所加盐酸、锌粒、碘化钾、酸性氯化亚 锡的作用分别是什么? 5. 检查无机杂质的意义是什么？
中药制剂杂质检查技术—重金属检查法
重金属检查注意事项
标准铅溶液（每1ml相当于10μg 的Pb）应临用前配制，用量为2ml。配制与贮 存标准铅溶液用的玻璃容器，均不得含有铅。
显色条件：最佳酸度为pH=3.5。最佳显色时间为2分钟。 若供试品溶液有颜色，可在对照液管中加稀焦糖液或其他无干扰的有色溶液，
使之与供试液颜色一致 。 供试品中如含高铁盐，影响检查，可在供试液管和对照液管中分别加入维生素
三、硫化钠法
适用于能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的 药物的重金属限量检查。
检查原理：在碱性条件下，药物中的重金属离子，与硫化钠试液作用，生成
有色的金属硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处所呈现 的颜色进行比较，判断供试品中重金属是否超过规定限量。
Pb2+ + Na2S NaOH PbS↓ + 2Na+
第三节
重金属测定法
重金属：在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠试液作用而显色
的金属杂质。如银、铅、汞、铜、镉等。中药制剂生产过程中接触铅的机会
较多，且铅在人体内易蓄积中毒，故重金属检查一般以铅为代表。
《中国药典》有三种重金属检查法：
一、硫代乙酰胺法 检查原理：硫代乙酰胺在酸性（pH3.5的醋酸盐缓冲液）条件下水解产
操作方法：除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解
后，置纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，摇匀，与一定量的标准 铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。
三、应用实例
冰片中重金属检查
《中国药典》2010年版收载的冰片为人工合成品，又称合成龙脑。 《中国药典》2010年版采用第一法对冰片进行重金属检查，并规定冰片含 重金属不得过百万分之五。
标准铅溶液 2ml
药典重金属检查方法及原理
药典重金属检查方法及原理药典中的重金属检查主要是针对药物及其制剂中可能存在的有害重金属杂质，这些重金属包括但不限于铅、汞、镉、砷、铜、铬等，它们的存在可能对人体健康造成严重危害。
以下是中国药典中记载的部分重金属检查方法及其基本原理：1.硫代乙酰胺法：-原理：在弱酸性条件下（通常是pH3.5左右的醋酸盐缓冲液），硫代乙酰胺水解产生硫化氢（H2S），硫化氢与样品中能够形成硫化物的重金属离子（如Pb2+、Cd2+、Hg2+等）结合生成不溶性的硫化物沉淀，表现为黄色至棕黑色的混悬液。
通过与已知浓度的标准铅溶液产生的颜色对比，可以定量或定性判断样品中的重金属含量是否超出限量要求。
-应用：适用于溶于水、稀酸和乙醇，并在酸性体系中稳定的药物。
2.炽灼残渣法：-原理：对于含有芳环、杂环或其他不易被酸溶解的有机药物，首先通过炽热破坏样品，将其中的重金属释放出来。
然后残渣经过硝酸破坏，蒸干后加入盐酸转化为可溶于水的氯化物形式，最后再按照硫代乙酰胺法进行重金属检查。
-应用：适用于含芳环、杂环以及其他难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物。
3.硫化钠法：-原理：某些药物在碱性条件下更易于与重金属离子反应，此时使用硫化钠作为显色剂，与重金属离子（如Pb2+）反应生成硫化铅（PbS）沉淀。
通过比较与标准溶液的颜色变化，判断重金属的含量。
-应用：适用于溶于碱溶液而不溶于酸溶液的药物，例如磺胺类、巴比妥类药物等。
4.微孔滤膜法：-原理：当需要检测低水平的重金属或者样品本身带有颜色时，可以通过微孔滤膜过滤含有重金属离子的溶液，然后在滤膜上显色，通过光度法或比色法测定重金属含量。
-应用：适用于含重金属杂质较少（2-5μg）且可能存在干扰色泽的供试液。
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硫代乙酰胺法检查重金属原理
硫代乙酰胺法检查重金属的原理是基于硫代乙酰胺（Thioacetamide）在酸性条件下与重金属形成稳定的络合物。
该法适用于检测水、废水、土壤等样品中的重金属含量。
在酸性条件下，重金属离子（如铅离子）与硫代乙酰胺发生络合反应，生成相应的络合物。
络合反应的过程中，溶液的颜色会发生明显的变化，可以根据颜色的变化来判断重金属的存在与含量。
具体的原理可以用如下化学方程式表示：
CH3CSNH2 + Pb2+ → Pb(SCN)2 + CH3COOH
该络合物的颜色为橙色，而硫代乙酰胺本身的颜色为无色。
因此，通过测定溶液的吸光度或比色度，可以间接计算出重金属的含量。
通常会使用分光光度计等仪器来进行光谱分析，通过测定溶液的吸光度来确定重金属的浓度。
需要注意的是，硫代乙酰胺法只适用于一些特定重金属离子的检测，对于其他重金属离子可能不敏感或反应较弱。
此外，硫代乙酰胺法检测重金属的灵敏度较低，一般适用于测定中等和高等浓度范围内的重金属含量。