沙门氏菌的检测PPT课件
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2021
制法
• 将前三种成分加入300 mL 蒸馏水（制作基础液）， • 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中，柠檬
酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL 蒸馏水中， • 琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷
至80 ℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液 中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混 匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50 ℃～55 ℃。 加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。
2021
ＴＴＢ培养基使用方法和注意事项
•
• 1.使用方法：称取本品93.55g，溶解于1050ml蒸馏水中， 加热溶解，临用前加入20％碘液20ml,0.5g煌绿2ml。
• 2.注意事项：ＴＴＢ培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。 加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙 沉淀为正常现象。
一、实验目的
• 1.掌握沙门氏菌属的检测方法 • 2.了解沙门氏菌的基本生化反应及原理
2021
二、实验器材
• 1.菌种：沙门氏菌、大肠杆菌 • 2.检样：鲜鸡蛋 • 3.培养基：四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液；氯化镁孔雀
绿增菌液（MM)；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸 铋（BS）琼脂；HE 琼脂；SS琼脂；三塘铁琼脂（TSI） • 4.设备：冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、 无菌Байду номын сангаас形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、无菌试管、无菌毛 细管
• 使溶解，再加无菌蒸馏水至100mL 即成，如为DL-胱氨酸 ，用量应加倍）。摇匀，调202节1 pH。
SC增菌液各成分的作用 蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求， 乳糖是可发酵的糖类； 亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数 革兰氏阴性菌的生长， 磷酸盐是缓冲剂， L-胱氨酸为还原剂。
2021
基础液
• 蛋白胨 10.0 g
蒸馏水 1 000 mL
• pH 7.0±0.2
牛肉膏 5.0 g
• 氯化钠 3.0 g
• 碳酸钙 45.0 g（碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程 中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长 另外还有筛选 产酸菌的作用）
• 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入 碳酸钙，调节pH，高压灭菌121 ℃，20 min
2021
硫代硫酸钠溶液 • 硫代硫酸钠（含5 个结晶水） 50.0 g • 蒸馏水 加至100 mL • 高压灭菌121 ℃，20 min。（硫代硫酸钠作为中和剂
，可以灭菌121,15min，没有影响的，检验含有次氯酸 钠的消毒水微生物，需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液；培 养基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸，能抑制大部分 大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长， 因为沙门氏菌具有四硫磺酶，能分解四硫磺酶。）
2021
5.HE 琼脂
• 基础成分： • 蛋白胨 12.0g 牛肉膏 3.0g 乳糖 12.0g 蔗糖 12.0g • 水杨素 2 .0g 胆盐 20.0g 氯化钠 5.0g • 琼脂 18.0g～20.0g • 蒸馏水 1000mL 0.4％溴麝香草酚蓝溶液16.0mL • Andrade 指示剂 20.0 mL • 甲液 20.0mL 乙液 20.0mL pH 7.5±0.2
• 2.乙液：氯化镁40g；蒸馏水100ml • 3.丙液：0.4%孔雀绿水溶液 • 4.制法 :上述成分配好后，121度高压灭菌15min，临用时
取甲液90ml；乙液9ml 丙液0.9ml
2021
MM增菌液各成分的作用
• 胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求； • 氯化钠可维持均衡的渗透压； • 磷酸二氢钾是缓冲剂； • 氯化镁可以增加培养基的渗透压； • 孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长， • 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择
4.亚硫酸铋（BS）琼脂
• 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 5.0g 葡萄糖 5.0g • 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4.0g • 煌 绿 0.025g 或5.0g／L 水溶液5.0mL • 柠檬酸铋铵 2.0g 亚硫酸钠 6.0g • 琼 脂 18.0g～20g 蒸馏水 1000mL pH7.5±0.2
2021
• ②甲液的配制 • 硫代硫酸钠34.0g 柠檬酸铁铵4.0g 蒸馏水100mL
2021
BS培养基的原理
• 1.蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源和氮源； • 2.葡萄糖提供能源 • 3.亚硫酸铋抑制剂，抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群，但不
影响沙门氏菌的生长； • 4.磷酸氢二钠 缓冲剂 • 5.硫酸亚铁用于产生硫化氢，并与铁反应生成黑色沉淀，
使阳性培养物在平板上具有金属光泽的棕色或黑色菌落 • 6.琼脂是凝固剂
2021
1.四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液
• 基础液 900 mL • 硫代硫酸钠溶液 100 mL • 碘溶液 20.0 mL • 煌绿水溶液 2.0 mL • 牛胆盐溶液 50.0 mL • 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每
加入一种成分，均应摇匀后再加入另 • 一种成分。
2021
性。
2021
3.亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 • 成分
• 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g • 亚硒酸氢钠 4.0 g L-胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL • pH 7.0±0.2
• 制法
• 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮 沸溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和 1g/L L-胱氨酸溶液10 mL（称取0.1 g L-胱氨酸，加1mol/L 氢 氧化钠溶液15mL，
2021
• 3.原理：四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来， 它对大肠菌群有抑制作用，对沙门氏菌无影响。因沙门氏 菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸钠，而大肠菌群没有 这种酶，故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂，可使沙门氏菌 不致因酸碱度改变而死亡。
2021
2.氯化镁孔雀绿增菌液（MM)
• 甲液：胰蛋白胨5g； 磷酸二氢钾1.6g ；氯化钠8g蒸馏水 1000ml；
制法
• 将前三种成分加入300 mL 蒸馏水（制作基础液）， • 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中，柠檬
酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL 蒸馏水中， • 琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷
至80 ℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液 中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混 匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50 ℃～55 ℃。 加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。
2021
ＴＴＢ培养基使用方法和注意事项
•
• 1.使用方法：称取本品93.55g，溶解于1050ml蒸馏水中， 加热溶解，临用前加入20％碘液20ml,0.5g煌绿2ml。
• 2.注意事项：ＴＴＢ培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。 加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙 沉淀为正常现象。
一、实验目的
• 1.掌握沙门氏菌属的检测方法 • 2.了解沙门氏菌的基本生化反应及原理
2021
二、实验器材
• 1.菌种：沙门氏菌、大肠杆菌 • 2.检样：鲜鸡蛋 • 3.培养基：四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液；氯化镁孔雀
绿增菌液（MM)；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸 铋（BS）琼脂；HE 琼脂；SS琼脂；三塘铁琼脂（TSI） • 4.设备：冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、 无菌Байду номын сангаас形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、无菌试管、无菌毛 细管
• 使溶解，再加无菌蒸馏水至100mL 即成，如为DL-胱氨酸 ，用量应加倍）。摇匀，调202节1 pH。
SC增菌液各成分的作用 蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求， 乳糖是可发酵的糖类； 亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数 革兰氏阴性菌的生长， 磷酸盐是缓冲剂， L-胱氨酸为还原剂。
2021
基础液
• 蛋白胨 10.0 g
蒸馏水 1 000 mL
• pH 7.0±0.2
牛肉膏 5.0 g
• 氯化钠 3.0 g
• 碳酸钙 45.0 g（碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程 中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长 另外还有筛选 产酸菌的作用）
• 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入 碳酸钙，调节pH，高压灭菌121 ℃，20 min
2021
硫代硫酸钠溶液 • 硫代硫酸钠（含5 个结晶水） 50.0 g • 蒸馏水 加至100 mL • 高压灭菌121 ℃，20 min。（硫代硫酸钠作为中和剂
，可以灭菌121,15min，没有影响的，检验含有次氯酸 钠的消毒水微生物，需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液；培 养基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸，能抑制大部分 大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长， 因为沙门氏菌具有四硫磺酶，能分解四硫磺酶。）
2021
5.HE 琼脂
• 基础成分： • 蛋白胨 12.0g 牛肉膏 3.0g 乳糖 12.0g 蔗糖 12.0g • 水杨素 2 .0g 胆盐 20.0g 氯化钠 5.0g • 琼脂 18.0g～20.0g • 蒸馏水 1000mL 0.4％溴麝香草酚蓝溶液16.0mL • Andrade 指示剂 20.0 mL • 甲液 20.0mL 乙液 20.0mL pH 7.5±0.2
• 2.乙液：氯化镁40g；蒸馏水100ml • 3.丙液：0.4%孔雀绿水溶液 • 4.制法 :上述成分配好后，121度高压灭菌15min，临用时
取甲液90ml；乙液9ml 丙液0.9ml
2021
MM增菌液各成分的作用
• 胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求； • 氯化钠可维持均衡的渗透压； • 磷酸二氢钾是缓冲剂； • 氯化镁可以增加培养基的渗透压； • 孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长， • 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择
4.亚硫酸铋（BS）琼脂
• 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 5.0g 葡萄糖 5.0g • 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4.0g • 煌 绿 0.025g 或5.0g／L 水溶液5.0mL • 柠檬酸铋铵 2.0g 亚硫酸钠 6.0g • 琼 脂 18.0g～20g 蒸馏水 1000mL pH7.5±0.2
2021
• ②甲液的配制 • 硫代硫酸钠34.0g 柠檬酸铁铵4.0g 蒸馏水100mL
2021
BS培养基的原理
• 1.蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源和氮源； • 2.葡萄糖提供能源 • 3.亚硫酸铋抑制剂，抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群，但不
影响沙门氏菌的生长； • 4.磷酸氢二钠 缓冲剂 • 5.硫酸亚铁用于产生硫化氢，并与铁反应生成黑色沉淀，
使阳性培养物在平板上具有金属光泽的棕色或黑色菌落 • 6.琼脂是凝固剂
2021
1.四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液
• 基础液 900 mL • 硫代硫酸钠溶液 100 mL • 碘溶液 20.0 mL • 煌绿水溶液 2.0 mL • 牛胆盐溶液 50.0 mL • 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每
加入一种成分，均应摇匀后再加入另 • 一种成分。
2021
性。
2021
3.亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 • 成分
• 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g • 亚硒酸氢钠 4.0 g L-胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL • pH 7.0±0.2
• 制法
• 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮 沸溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和 1g/L L-胱氨酸溶液10 mL（称取0.1 g L-胱氨酸，加1mol/L 氢 氧化钠溶液15mL，
2021
• 3.原理：四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来， 它对大肠菌群有抑制作用，对沙门氏菌无影响。因沙门氏 菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸钠，而大肠菌群没有 这种酶，故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂，可使沙门氏菌 不致因酸碱度改变而死亡。
2021
2.氯化镁孔雀绿增菌液（MM)
• 甲液：胰蛋白胨5g； 磷酸二氢钾1.6g ；氯化钠8g蒸馏水 1000ml；