非蛋白氮的概述和检测方法
血液标本采集探讨
血液采集
（一）血液标本采集法
1．血清标本测定血液中某些物质的含量（如非蛋白氮，尿素氮等）。
2．血清标本测定血清酶、脂类、电解质和肝功能等。
3．血培养标本查找血液中的病原体（如伤寒杆菌培养等）。
一般常规检验用毛细血管采血法，这种采血法由检验人员执行，血清生化及细菌培养等检验因需要较多量的血液，一般由护理人员协助采血。
目前不少生化项目检验已采用微量测定法，故也可采用毛细血管采血法采标本。
（二）静脉采血法
1．用物同静脉注射法，备干燥注射器（5-10ml），7号针头，标本容器（按需要备干燥试管、抗凝管或血培养瓶），酒精灯，火柴等。
2．操作方法
（1）备齐用物，贴好标签，核对无误后按静脉穿刺法采取所需血量，立即卸下针头，将血液沿管壁缓慢注入试管内，切勿将泡沫注入，避免震荡，以防红细胞破裂而造成溶血。
因血液中细胞的内外成分有很大差异，如细胞内钾离子浓度是细胞外的20倍，细胞内的某些酶含量也较细胞外高，如发生溶血，则直接影响检验结果的准确性。
（2）如需全血、血浆，可将血液如上法注入盛有抗凝剂的试管内，立即轻轻摇动，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。
如需作二氧化碳结合力测定时，抽取血液后，应立即注入有石蜡油的抗凝试管中，注入时针头应插入石蜡油面以下，以隔绝空气，立即送验。
否则血液中二氧化碳逸出，使检验结果降低，影响准确性。
第二章 蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱
3、图形分析 直接法：电泳染色后，直接观察图形的变
化，大概判断各区带的增减。如需定量， 可进一步脱色、比色。
光密度扫描法：可直接观察各区带的扫描图
形，且可以以数值表示各组分的含量。
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怎样判断蛋白电泳图谱
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一、前白蛋白（Prealbumin, PA)
1、合成部位：肝细胞 2、理化性质 MW 54000 half-life(t1/2<12h） 3、生理功能
组织修补
运载
甲状腺素
维生素A
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4、临床意义
营养不良的指标
正常 200-400 mg/L 轻度缺乏 100-150 mg/L 中度缺乏 50-100 mg/L 严重缺乏 <50 mg/L 作为肝功能不全的指标：合成减少 急性炎症、恶性肿瘤、创伤等时降低：消耗增加 肾炎：丢失增加 PA是负性急性时相反应蛋白
amino acids source for pre tissues
维持血浆胶体渗透压
75% plasma osmotic pressure
具有缓冲缓冲酸碱的能力
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5、临床意义 （1） 低清蛋白血症(Hypoalbuminemia)
合成减少： 营养不良or 吸收不良 急、慢性肝病 异常丢失： 肾病综合征、慢性肾小球肾炎 肠道炎症性疾病 渗出性皮炎、烧伤 分解代谢增加：组织损伤(外科手术或创伤) 感染性疾病 遗传性缺陷：无清蛋白血症 分布异常：门脉高压引起的腹水
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一、血浆蛋白质的功能和分类
（一）血浆蛋白质的功能 营养作用，修补组织蛋白 维持血浆胶体渗透压 作为pH缓冲系统的一部分 运载 免疫与防御功能 参与凝血与纤维蛋白溶解 酶的催化功能 代谢调控等 抑制组织蛋白酶
非蛋白氮(NPN)在反刍家畜中的合理利用
动物科学现代农业科技2012年第5期非蛋白氮(NPN )是指非蛋白质结构的含氮化合物。
主要包括酰胺、氨基酸、铵盐、生物碱及配糖体等含氮化合物(氨化物)。
非蛋白氮在反刍家畜饲养中的利用已有几十年的历史。
利用较广泛的是尿素,其他如双缩脲、三缩脲等虽可溶性和分解比率比尿素低,毒性也比尿素弱,但价格比尿素高,故生产中应用不多。
据有关资料报道,目前国外如美国、前苏联、英国等国,每年有10万~100万t 的尿素应用到畜牧业生产上。
尿素的含氮量一般在42%~46%,1kg 尿素可相当于2.8kg 蛋白质的营养价值,或相当于6~7kg 豆饼中所含蛋白质的营养价值。
故国外报道,在蛋白质不足的日粮中加入1kg 尿素,可多产奶6~12kg ,或多增重1~3kg ,或多产净毛50~150g 。
在国内已取得了1kg 尿素换取3.6~4.6kg 奶的成效[1-2]。
使用尿素作为反刍家畜饲养中的蛋白质补充饲料,既节省蛋白质饲料,大大降低饲料成本,又提高了生产性能。
因此,在牛羊饲养中已广为利用[3-4]。
1反刍家畜利用非蛋白氮的机制非蛋白氮只有反刍家畜(牛羊)才能充分利用,靠瘤胃及大肠中的细菌对非蛋白氮进行降解。
而非反刍家畜不具备利用尿素的功能。
但笔者了解到,在当地一些农村地区,有些帮配猪饲料的人让养猪户在猪饲料中加入尿素,这是一种误导,蒙骗不懂专业知识的人。
试验证明,尿素在猪、鸡日粮中的利用没有实际效果。
反刍家畜利用尿素的机制见图1。
2非蛋白氮饲料的合理利用尿素作为反刍家畜饲养中的蛋白质补充饲料,既可节省蛋白质饲料,大大降低饲料成本,又能提高生产性能。
但是,利用不当即会出现问题。
笔者在一些地区了解到,有的养殖户畏惧在牛羊饲养中利用尿素,主要是因为其尚未掌握喂量和饲喂方法;稍有不慎可造成牛羊氨中毒死亡。
因此,在饲养反刍家畜过程中要合理利用尿素。
2.1严格控制尿素的喂量瘤胃分泌脲酶活性很强,如尿素喂量过多,则迅速分解为氨,而细菌对氨的利用有限,多余的氨通过瘤胃壁进入血液。
乳品真蛋白检测技术
乳品中真蛋白检测方法总结1．乳及乳制品中真蛋白的概述通过测定总氮含量而计算得到的蛋白质含量称为粗蛋白( crude p rotein, CP) ,目前国家标准方法中测定的即为粗蛋白含量。
乳中的氮含量包括蛋白态氮(protein nitrogen, PN)和非蛋白态氮( non2p roteinnitrogen, NPN) ,其中前者占95% ,后者约占5%。
蛋白质是乳中的主要含氮物质,含量约218% ～318%。
乳蛋白包括酪蛋白、乳清蛋白及少量脂肪球膜蛋白。
乳清蛋白中有对热不稳定的乳白蛋白和乳球蛋白,上述蛋白构成了乳中的“真蛋白”[1]。
蛋白质是牛奶的主要成分，且牛奶中的蛋白质是完全的蛋白质，由于含有人体必需的氨基酸，所以营养价值很高，牛奶中的蛋白质消化率可以达到90%～100%[2]。
乳中其他含氮物主要来源于乳中的氨、尿素、肌酸、肌酸酐、尿酸、乳清酸、多肽、马尿酸、氨基酸和其他成分,这些成分构成了非蛋白质氮。
真蛋白( true p rotein, TP)即真正的蛋白质,在测定方面可定义为除了非蛋白质氮以外的蛋白态氮所计算得到的蛋白,正常情况下,天然乳中真蛋白的含量少于粗蛋白。
酪蛋白是乳品真蛋白中最重要的蛋白质,主要以胶束状态存在于乳中,它是以含磷蛋白质为主体的几种蛋白质的复合体,主要分为αs12酪蛋白、αs22酪蛋白、β2酪蛋白和κ2酪蛋白4种。
一般情况下,乳品真蛋白中约有80%为酪蛋白,但其含量因个体差异、牧场管理、乳牛品种的不同而变化[1]。
2.乳及乳制品中真蛋白测定的研究背景牛奶及乳制品中含有丰富的蛋白质，但在牛奶收购、生产环节中，质量掺假事件时有发生，尤以“劣质假奶粉”事件和“三聚氰胺奶粉”事件为甚。
目前，乳制品的消费量很大，根据FAO统计，世界人均年消费乳制品46kg，是日常饮食结构的重要组成部分，它的安全性直接影响到人们的身体健康，所以一旦出现质量或安全问题，它暴露的受害人群和风险就会高一些。
《蛋白质的营养作用及非蛋白氮的利用导学案》
《蛋白质的营养作用及非蛋白氮的利用》导学案导学目标：1. 了解蛋白质在人体中的重要作用；2. 掌握非蛋白氮在蛋白质代谢中的作用；3. 理解蛋白质的摄入量和质量对健康的影响。
导学内容：一、蛋白质的营养作用1. 作为身体组织的主要构成成分，蛋白质在维持身体结构和功能中起着重要作用；2. 蛋白质是人体生命活动的基本物质，参与各种生理过程，如合成酶、激素、抗体等；3. 蛋白质还是能量的重要来源，可以提供4千卡/克的能量。
二、非蛋白氮的利用1. 人体内非蛋白氮主要存在于尿素、尿酸等形式，是蛋白质代谢的产物；2. 非蛋白氮可以通过尿液排出体外，维持体内氮平衡；3. 非蛋白氮的积累可能导致尿毒症等疾病，因此需要适量摄入蛋白质，保持氮平衡。
三、蛋白质的摄入量和质量1. 成年人每日蛋白质的摄入量应占总热量的10-15%；2. 不同人群的蛋白质需求量不同，妊妇、孩子、运动员等需要增加摄入量；3. 蛋白质的质量也很重要，应选择富含必需氨基酸的高质量蛋白质来源，如肉类、蛋类、奶类等。
导学活动：1. 观看相关视频或图片，了解蛋白质在人体中的作用和重要性；2. 分组讨论非蛋白氮的观点及其在蛋白质代谢中的作用；3. 设计蛋白质摄入量的饮食计划，比较不同食物的蛋白质含量和质量。
导学作业：1. 撰写一篇关于蛋白质的作用及非蛋白氮的利用的小议论文，包括相关知识点和个人观点；2. 给出自己每日的蛋白质摄入量计划，并记录实际摄入情况，进行比较和分析。
拓展阅读：1. 《蛋白质的生理功能及其临床应用》2. 《蛋白质与健康的干系钻研进展》教师评判：本导学案通过生动的案例和实践活动，帮助学生深入理解蛋白质的营养作用及非蛋白氮的利用，培养学生对健康饮食的认识和实践能力。
希望学生能够认真完成导学活动和作业，加深对蛋白质营养学的理解和应用。
凯氏定氮法测定食品中蛋白质
成不溶性盐，并从水溶液中沉淀出来的性质，经
过过滤将乳制品溶液分为不溶性（沉淀）和可溶
性（滤液）两部分，再利用"凯氏定氮法"测定滤
液中氮含量，就可以知道非蛋白氮的含量
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凯氏定氮法测定蛋白质（粗蛋白）
凯氏定氮法是通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋 白质系数而求出蛋白质的含量。
。
1.原理
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自动凯氏定氮仪法
在凯氏定氮法的基础上发展起来的பைடு நூலகம்动凯氏定 氮仪法，具有安全、高效、准确的优点。
仪器：
消化炉
自动蒸馏装置
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1、原理及适用范围 2、特点：
（1）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶， 红外线加热的消化炉。
（2）快速：一次可同时消化8个样品，30分钟可 消化完毕。
滴定前
滴定终点
同时做一试剂空白实验，记录空白滴定消耗盐酸的体积。
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实验注意事项—消化
（1）不时转动凯氏烧瓶、缓和沸腾消化 （2）消化至呈透明后，继续消化30分钟，一般消化
时间约4小时 （3）可加如少量辛醇、硅油做消泡剂 （4）样品不易澄清时可冷却后加入30%过氧化氢2-
3ml
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蛋白质测定原理、步骤
蛋白质测定过程
能力训练方式方法
讲解、问答、互动
教学环节时间安排 课外作业
复习：5min 讲解、互动：75min
小结：5min 看书巩固知识点：5min
精选版课件ppt
预习氨基酸态氮测定
课堂考勤
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凯氏定氮法测定 食品中蛋白质
《畜禽营养与饲料》课件：蛋白质的营养作用及非蛋白氮的利用
5、短肽能提高畜禽的生产性能。一些短肽能直接被畜禽吸收， 参与机体生理活动和代谢调节，从而提高其生产性能。
畜禽营养与饲料
第一章 畜禽营养基础
第三节 蛋白质的营养作用及非蛋白氮的利用
蛋白质是一类复杂的有机化合物，其组成的化学元素有：碳、 氢、氧、氮，有的还含有硫，少量含有磷、铁、铜等元素。各类蛋白 质的含氮量不同，但总的来说，饲料中的真蛋白质平均含氮量为 16%，所以常用饲料中的总含氮量来估算饲料中的蛋白质质量。
2、非必需氨基酸
概念：是指在畜禽营养上需要，但体内能够合成或由其他氨基 酸转化而成，不必从饲料中专门供给的氨基酸，如丙氨酸、谷氨酸， 非必需氨基酸绝大部分由日粮提供，不足部分才由体内合成。当日粮 中非必需氨基酸不能满足需要，机体将利用必需氨基酸转化为非必需 氨基酸，结果引起必需氨基酸的缺乏。因此，在日粮组成成分中尽量 做到氨基酸种类全面而且比例适当。
在畜禽生产中，由于谷类籽实占非反刍畜禽日粮的大部分，因 此，要求我们在配合该类日粮时，必须补充谷类籽实中缺乏的必需氨 基酸，如赖氨酸和蛋氨酸等，使日粮中氨基酸的配比“理想化”。
各种畜禽在各个生长阶段和不同的生产水平下，对氨基酸的需 求量不同。
2、提高非反刍畜禽对蛋白质利用率的措施
蛋白质的来源不同，品质差异很大，在生产中采取综合措施， 可合理地利用蛋白质资源，提高蛋白质的利用率。
谢产生尿素，由肾脏以尿的形式配出，从而加重了肝、肾负担。
2、饲料中蛋白质供给缺乏的后果 （1）消化功能紊乱 影响动物消化管组织的正常代谢和消化液的 正常分泌。 （2）幼龄动物生长发育受阻 幼龄动物正处于生长发育旺盛期，体 内的各个组织器官都在迅速生长发育，需要的蛋白质也很多。 （3）动物发生贫血及其他疾病 如出现贫血，抵抗力下降。 （4）畜禽繁殖力降低，生产性能下降。
酱油中氨基酸态氮含量的测定
酱油中氨基酸态氮含量的测定1. 引言酱油是中国传统的调味品之一，具有香味浓郁、色泽红亮等特点。
酱油中的氨基酸态氮含量是评价其质量的重要指标之一，因为氨基酸态氮是提供食品中蛋白质含量的主要指标之一。
本文将介绍如何测定酱油中的氨基酸态氮含量。
2. 实验原理酱油中的氨基酸态氮含量可以通过测定总氮含量和非蛋白质态氮含量来间接计算得到。
具体步骤如下：1.样品预处理：将待测样品与适量的硫代硫酸钠混合，加热破乳，并用水稀释至适宜体积。
2.总氮测定：采用Kjeldahl法对样品进行总氮测定。
首先，在蒸馏装置中加入硫化钠和碳酸钠作为催化剂，然后将样品加入消解管中与硫酸混合，进行消解。
接着，将消解液进行蒸馏，收集蒸馏液，并用硫酸钠溶液进行中和。
最后，用硫酸铵标准溶液滴定反应过程中形成的硫酸铵。
3.非蛋白质态氮测定：采用巴比特法对样品进行非蛋白质态氮测定。
首先，将样品与巴比特试剂（含有碱性氧化剂和碱性还原剂）混合，在加热条件下进行消解。
然后，用硫酸钠溶液对反应产物进行中和，并用硝酸钠标准溶液滴定反应过程中生成的亚硝酸盐。
4.氨基酸态氮计算：通过总氮含量和非蛋白质态氮含量的测定结果，可以计算出酱油中的氨基酸态氮含量。
3. 实验步骤1.样品制备：取适量待测样品，加入适量的硫代硫酸钠，并在加热条件下破乳。
然后用水稀释至适宜体积。
2.总氮测定：按照Kjeldahl法的步骤进行总氮测定。
3.非蛋白质态氮测定：按照巴比特法的步骤进行非蛋白质态氮测定。
4.计算结果：根据总氮含量和非蛋白质态氮含量的测定结果，计算出酱油中的氨基酸态氮含量。
4. 结果与讨论通过实验测定，得到了酱油中的总氮含量和非蛋白质态氮含量。
根据这些数据，可以计算出酱油中的氨基酸态氮含量。
通过对多个样品进行测试，并比较其结果，可以评估不同品牌或批次的酱油在氨基酸态氮含量上的差异。
5. 结论本实验介绍了一种测定酱油中氨基酸态氮含量的方法。
通过对样品进行总氮和非蛋白质态氮的测定，并计算出其差值，可以得到酱油中的氨基酸态氮含量。
尿素氮(BUN)检测
迪信泰检测平台
尿素氮（BUN）检测
尿素氮（Blood urea nitrogen, BUN）是人体蛋白质代谢的主要终末产物，尿素氮构成了血液中绝大部分的非蛋白质氮，血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。
采用靛酚蓝比色法进行检测，脲酶水解尿素产生的NH3-N，与次氯酸盐和苯酚反应生成蓝色靛酚，产物在630nm处有特征吸收峰，尿素氮的含量在一定范围内与吸光值呈正比，通过吸光值变化即可定量检测尿素氮的含量。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测尿素氮含量变化。
此外，我们还提供其他氮代谢类检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定尿素氮样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 尿素氮含量信息。
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临床生物化学检验(DOC)
第二章蛋白质与非蛋白含氮化合物检验名词解释：氨基酸血症：氨基酸、或其中间代谢物、或其旁路代谢物在血液中增高称之。
氨基酸尿症：血浆增多的氨基酸及其代谢物均从肾小球滤过超出肾小管重吸收能力从尿排出。
高尿酸血症：血清尿酸浓度超过参考值上限称为高尿酸血症，即男性和绝经后女性大于420μmol/L，绝经前女性大于350μmol/L。
痛风：血液尿酸浓度增高到一定程度时，可出现尿酸盐结晶形成和沉积，并引起特征性急性关节炎、痛风石、慢性关节炎、关节畸形、慢性间质性肾炎和尿酸性尿路结石，即为痛风。
第一节概述一、血浆蛋白质功能1.直接在血液中发挥作用在血浆中运载弱水溶性物质、维持血浆胶体渗透压、组成血液pH缓冲系统、参与凝血与纤维蛋白溶解、血浆固有酶在血浆发挥作用2.需要时进入组织发挥作用对组织蛋白起修补作用、组成体液免疫防御系统、抑制组织蛋白酶、参与代谢调控作用的激素二、醋纤膜电泳或琼脂糖电泳分五个区带：白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白（依次为从阴极到阳极，须按顺序记住）分辨率高时：可有β1和β2；α2中也可有两条采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，在适当条件下可以分出30多个区带【生理功能】血浆蛋白质有多种功能，PA即TTR能转运甲状腺激素，并结合携带视黄醇的RBP；ALB是最重要的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白；AAT是最重要的蛋白酶抑制物；AAG是主要的APP；Hp结合Hb并防止Hb从肾脏丢失；α2MG也是主要的蛋白酶抑制剂；血浆铜95％存在于Cp中；TRF携带铁在血液中运输；CRP能结合异物并激活补体。
二、体液氨基酸（AA）作用：合成蛋白质，转变为其他含氮生物活性物质（一）遗传性氨基酸代谢紊乱：氨基酸血症，氨基酸尿症（二）继发性氨基酸代谢紊乱：见于肝脏和肾脏疾患、蛋白质营养不良、烧伤等。
肝功能衰竭时，主要在肝脏降解的芳香族氨基酸浓度升高，主要在肌肉、肾及脑中降解的支链氨基酸分解未减少，因此出现支链氨基酸/芳香族氨基酸比值（BCAA/AAA比值）下降三、嘌呤核苷酸（一）嘌呤核苷酸代谢包括腺苷酸（AMP）和鸟苷酸（GMP）嘌呤核苷酸的合成：从头合成途径、补救途径嘌呤核苷酸的分解：终产物是尿酸，人类不能再分解（二）、高尿酸血症1.嘌呤代谢紊乱在原发性高尿酸血症的病因中约占10％，主要原因是嘌呤代谢酶缺陷2.尿酸排泄障碍终尿排出尿酸盐只占滤过量的6％～10％总量约为2.4mmol～3.0mmol/d3.代谢综合征与高尿酸血症4.高嘌呤饮食啤酒引发痛风的可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒基本上不存在这种危险5.各种肾脏疾病6.细胞破坏增多第二节常用体液蛋白质与非蛋白含氮化合物检测项目一、体液总蛋白测定蛋白质时利用蛋白质特有的结构或性质：①重复的肽链结构；②分子中均含有氮原子；③与色素结合的能力；④沉淀后借浊度或光折射测定；⑤酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收（一）双缩脲法（临床常用方法须掌握原理）【测定原理】蛋白质中两个相邻肽键(-CO-NH-)在碱性溶液与二价铜离子作用产生稳定的紫红色络和物。
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非蛋白氮的概述和检测方法 发布时间：2002-11-08 1 非蛋白氮的概述
非蛋白氮大致可以分为以下几类，①尿素及其衍生物类，如缩二脲、羟甲基尿素等；②氨态氮类，如液氨、氨水等；③铵类，如硫酸铵、氯化铵等；④肽类及其衍生物，包括氨基酸、酰胺、胺等；⑤动物粪便及其它废弃物类。以下是几种常见的非蛋白氮的介绍：
1．l 双缩脲 又称缩二脲，是一种尿素缩合产品，其含氮量在35％上，蛋白质当量为219％。缩二脲难溶于水，一般的定量检验方法为紫红色配位化合物比色法（原理：鱼粉中的双缩脲经抽提后，在酒石酸钠的碱性溶液中与硫酸铜生成紫红色配位化合物，在550nm波长下比色从而测出其含量）。
1．2 尿素 是氮和二氧化碳在高温高压下化合而成。纯尿素的含氮量为47％，折合蛋白当量为293．75％。易潮解，易溶于水，一般的定量检验方法有二种：一种为二甲基氨基苯甲醛显色法；另一种为二嗪衍生物显色法。但以上两种方法只能测定游离性尿素而不能测定其衍生物。
1．3 尿素甲醛聚合物 是由尿素和甲醛聚合而成，其含氮量为38.89％，折合蛋白当量为243．06％。该聚合物难溶于水。 1．4 硫酸铵 俗称肥田粉，其含氮量为20％左右，折合蛋白当量为125％。硫酸铵的工业品一般为白色或微带黄色的结晶，易溶于水，其分子式为（NH4）2SO4。
1．5 异亚丁基二脲 又名二脲异丁烷，简称IBDU，为尿素和异丁醛在催化剂的作用下综合反应生成。IBDU为一种子的白色粉末或颗粒，总含氮量为32．18％，折合蛋白当量为201.13％，吸湿度远低于尿素。
以上是比较常见的非蛋白氮物质。随着科技的发展，还会有越来越多的非蛋白氮物质被合成出来，从而使反刍动物所用的非蛋白氮使用广泛，而掺假者很容易将此物质掺入饲料原料中以提高原料的粗蛋白质。
2 非蛋白氮的检验 2．l 非蛋白氮的定性检验 在对原料样品的检测中，一般有定性检测和定量检测。在定性检测中，使用的比较多的为显微镜检，包括直接镜检、分层镜检（用四氯化碳或三氯甲烷分层）、反应剂镜检（用化学物质和样品中的某些物质反应而在显微下区分）、染色镜检等。在使用的过程中，往往使用一项或多项镜检方法对样品中的物质进行判定。
对于非蛋白氮的检验，显微镜检是一种比较有效的方法。在对样品的检测中，一般使用的是生物显微镜，其放大的倍数在36～400倍之间，为了获得更好的显微效果，可以根据实际情况作出具体的调整。以下是镜检使用过程中的一些技巧：
2.1.l 直接镜检 直接镜检一般所用的倍数比较小，通过对样品不同的物理特征，如颜色、透明度、表面组织、形状等物理性状进行判定。特别的要与典型的样品进行比较，以便能够更好区分样品与杂质的不同。在直接镜检中，用不同的滤光片有时可以起到比较明显的效果。虽然直接镜检比较方便和直观，但有时对于样品中的物质很难区分时，可以用其它的检验方法。
2.1.2 分层镜检 将样品用四氯化碳进行脱脂和比重分离之后，样品与其它物质的区分会更加容易。对样品中的有机物和无机物分层之后，需在常温下干燥后再进行镜检。非蛋白氮一类的物质与原料的很多外观性质很不一样，通过两者的特异性之间的观察，可以对样品中是否掺有非蛋白氮一类的物质作出一个大概的判断。
2．1．3 反应剂镜检 用反应剂和样品进行反应，非蛋白氮一类的物质的化学性质和样品不一样，通过此种方法可以对样品中的非蛋白氮进行鉴别。经过四氯化碳分层之后，再与反应剂反应是比较好的一种方法。而镜检时在样品中加一滴或数滴浓硫酸，观察样品与浓硫酸反应的情况是一种比较直观的鉴别方法。因为无论动物蛋白还是植物蛋白，其与浓硫酸的反应速度和产生的现象比较明显。
2.1.4 染色镜检 用染色剂对样品进行染色，使样品中的植物或动物细胞染成不同的颜色，而非蛋白氮一类的物质则和样品的染色后的表现不同，通过此种方法使两者区分开来从而加以鉴别。以下是比较常用的染色方法：
对植物细胞的染色方法：番红——固绿染色法。取适量脱胎（视样品脂肪多少而定，可以用四氯化碳，也可以用丙酮，对于脂肪少的也可以不用脱脂）样品于烧杯中，用1％的番红水溶液浸泡l～3h水洗（去多余的染料）。将样品涂在玻片上，稍晾干。滴加 0．l％的固绿（溶剂用 95％乙醇）。过 15s后滴加 95％的乙醇，冲去多余固绿染料。待乙醇稍挥发后，加甘油液（甘油:水＝1:1）浸润，加盖玻片。用生物显微镜检查。染色结果：细胞核，木质化细胞壁呈鲜红色，纤维素细胞壁、细胞质呈绿色。因为非蛋白氮没有细胞核、细胞质等结构，所以只要能够较好的掌握染色技巧，其对比效果比较明显。当然，不能从染色效果判断其一定为非蛋白氮。
对动物细胞的染色方法：苏木精——曙红对染法。取适量的脱脂样品于烧杯中，加入埃利希苏木精染色液浸泡3～5min，水洗数次（用5min左右）。将样品涂在玻片上，滴加氨水。3～4s后立即满加水，洗l min，稍晾一下，加 0.2％曙红水溶液浸润 3min，滴加 95％的乙醇，洗去多余曙红染料。再稍晾一下，加甘油浸润，加盖玻片，用生物显微镜观察。其染色的结果为：细胞核呈蓝色，细胞质呈淡红色。通过此种方法染色，一般能够很容易的区分样品和非蛋白氮一类的物质。
为了能够更清晰的在显微镜下区分样品与杂质，也可采用以下方法（对于检验鱼粉一类的物质比较有效）：先用四氯化碳或三氯甲烷对样品分层，除去无机物，必要时再用丙酮进行脱脂，再取一定量的样品置入蒸馏水中，搅拌，除去溶于水的物质，再用60目或80目的样品筛过滤，将样品放入50～60℃的烘箱中进行烘干（时间不能过长，以保持样品原来的状态），然后在显微镜下进行检验或再对其进行处理后镜检。
在显微镜检中，只能对非蛋白氮作初步判断。若要进一步的分析判断，还需进行定量分析检验。
2.2 非蛋白氮的定量检验 在非蛋白氮定量的检测方法中，比较常用的方法是硫酸铜沉淀法和氨基酸测定法。除此之外，本文根据非蛋白氮的组成结构的不同，采用水解蒸馏法对样品中的非蛋白氮进行检验。 2.2.l 硫酸铜沉淀法 根据非蛋白氮的化学性质来看，大部分溶于水，一部分在常温下不溶水，但在沸水中溶解。根据此种性质，可以先将样品煮沸，用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来，由于非蛋白氮已经溶于水，故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。在过滤时，水的温度一定不能太低，否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真蛋白质。但实际上，此种方法 有很大的局限性。如果非蛋白氮不溶于沸水，或者将一般的非蛋白氮微囊化，此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。
2.2.2 氨基酸测定法 为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮，需测定样品中的氨基酸含量。无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析（柱后衍生），还是采用比较快捷的HPLC分析（往前衍生），将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值，然后将此数值乘以6.25为M，和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较，M至少为N的85％（M可能略大于N）。如果低于此数值，则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。
2.2.3 水解蒸馏法 原理非蛋白氮主要包括以下五类：尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断（可采用硫酸铜沉淀法加镜检），一般很少将肽类及其衍生物掺入其中，剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质，在强碱的条件下可以蒸馏出氨气，原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐，氨基酸盐在强碱条件下稳定，从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。仪器和设备：酒精喷灯，试管和其它常用的仪器。试剂与溶液：6mol／1的盐酸溶液和其它常用的试剂。测定方法：本文只列出用酸水解的方法。 采集有代表性样品约100g，混匀后用四分法缩分出209左右，将其粉碎，使其全部通过60目样品筛。精确称取0.300 0g的样品，置于容积为 60ml的试管底部（注意样品勿沾在管壁上），加入30ml 6mol／l的盐酸溶液，将试管在距试管口 l～2cm处用喷灯加热并封口。将封好的试管置于干燥箱内，于110℃下水解24h。冷却后打开试管，将水解液过滤至100ml容量瓶中，用蒸馏水反复多次冲洗试管和滤纸，然后定容至刻度。用10ml移液管移取10ml样液移入半微量式定氮仪的反应室中，加入2Oml 1:1的氢氧化钠溶液蒸馏10 min，余下的步骤按照测定粗蛋白的方法进行操作，得出样品所消耗的盐酸的体积为V1（ml）。同时作空白滴定可得消耗的盐酸的体积为V0，设所称样品的质量为M（g）。
非蛋白氮的粗蛋白质计算公式: CP(%)＝（V1-VO）×C×O．14×6．25/ M 3 讨论及注意事项 3．1 关于尿素衍生物是否水解和水解是否完全的问题。从理论上讲，在强酸或强碱和一定的温度（110℃）的条件下，尿素及其尿素聚合物一定会水解，但不一定能够在24h内水解完全。经过笔者做了大量的试验，证明了缩二脲在24h内的水解程度可达到50％ 以上，尿素在同样的条件下的水解比率可达到90％以上。即使水解不完全，如果样品中含有尿素衍生物，其的数值V1也会远远的大于V0，通过此数值，也可判定样品中是否掺有非蛋白氮。
3.2 关于水解后的产物问题，经过笔者反复试验，确定该水解的最终物质为氨盐或一水合氨。
3．3 关于用半微量蒸馏时所用碱量和所用的时间：通过笔者大量的实践，如果水