DHA+与+EPA+合成超长链多不饱和脂肪酸的效率比较
dha和epa 分子自由程
dha和epa 分子自由程DHA和EPA是两种重要的海洋来源的ω-3多不饱和脂肪酸，它们在人体中发挥着许多重要的生理功能。
关于DHA和EPA分子自由程，研究表明它们通过不同的途径在体内进行转运和代谢，并参与到多个生物过程中。
下面将详细探讨DHA和EPA分子在人体内的自由程。
首先我们来介绍一下DHA和EPA的结构。
DHA又称为二十二碳五烯酸，是一种22碳的长链不饱和脂肪酸，它包括六个双键，最后一个双键位于碳22位置。
EPA又称为二十碳五烯酸，是一种20碳的不饱和脂肪酸，含有五个双键，最后一个双键位于碳20位置。
由于DHA和EPA 都具有多个双键的存在，使得它们的空间构型呈现出一定的扭曲，这种扭曲结构有助于它们在生物体内发挥作用。
DHA和EPA主要通过人体的膳食摄入进入体内。
海洋中的鱼类和其他海洋生物是DHA和EPA的主要来源，它们通过食物链传递给人类。
摄入的DHA和EPA首先进入胃和小肠，在胃酸和胆盐的作用下，脂肪酸被释放出来。
然后，它们与胆固醇结合，通过混合胆汁和酶的作用进入肠道。
在肠道中，脂肪酸进一步被分解为更小的分子，例如甘油和游离脂肪酸。
最后，它们被肠道上皮细胞吸收。
经过吸收后，DHA和EPA会进入肝脏，被包裹在载脂蛋白中被转运到全身各个组织。
在肝脏中，它们可以被转化为其他ω-3脂肪酸，例如亚麻酸和α-亚麻酸。
然后，它们与载脂蛋白结合，形成胆固醇酯的混合物。
这些复合物通过循环系统运输到全身各个组织，供给能量和构建细胞膜。
DHA和EPA在体内有非常广泛的分布。
它们在大脑、眼睛、心脏、肝脏、骨骼肌和其他组织中含量较高。
特别是在大脑和眼睛中，DHA含量相对较高，这是因为它们在神经系统和视觉系统中发挥着重要的作用。
DHA是大脑神经细胞膜的重要组成部分，它能够调节细胞膜的流动性和稳定性，对神经信号的传递起到关键作用。
而EPA则主要参与了炎症反应的调节和免疫功能的调控。
一旦DHA和EPA被释放到细胞内，它们可以发挥各种生理功能。
dha有机化学
DHA（二十二碳六烯酸）是一种重要的有机化合物，属于ω-3系列不饱和脂肪酸。
它在人体中具有多种生理功能和营养价值。
本文将从DHA的结构、来源、合成方法、生理功能以及应用等方面进行介绍，以便更好地了解和认识这一有机化合物。
一、DHA的结构DHA的分子式为C22H32O2，其结构式如下：CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOHDHA分子包含22个碳原子和6个不饱和键，其中两个双键位于第三个和第七个碳原子上。
这种结构使得DHA具有独特的物理和化学性质。
二、DHA的来源DHA主要存在于海洋生物中，尤其是富含脂肪的鱼类和海藻。
鱼类体内含有较高浓度的DHA，而海藻则是鱼类DHA的主要来源。
此外，一些海洋微生物和浮游植物也能合成DHA。
三、DHA的合成方法目前，DHA的合成方法主要有两种：一种是从天然油脂提取DHA，另一种是通过人工合成。
前者通常采用脂肪酸提取法，将富含DHA 的鱼油或海藻油进行萃取和分离，得到纯净的DHA。
后者则通过化学反应在实验室中人工合成DHA，这种方法相对复杂但可控性较高。
四、DHA的生理功能DHA在人体中具有多种生理功能，其主要作用包括：1. 细胞膜结构：DHA是细胞膜的重要组成部分，能够增强细胞膜的稳定性和流动性，维持细胞的正常功能。
2. 脑发育：DHA是脑组织的重要成分，对婴幼儿的脑发育具有关键作用。
充足的DHA摄入可以促进大脑神经元的生长和连接形成，有助于智力发育。
3. 炎症调节：DHA能够通过抑制炎症反应、调节免疫功能等方式，对炎症和自身免疫性疾病具有一定的保护作用。
4. 心脏保健：DHA具有降低血液中三酰甘油和胆固醇水平的作用，有助于预防心血管疾病的发生。
5. 视力保护：DHA是视网膜组织的重要成分，对视力保护和预防眼部疾病具有积极影响。
五、DHA的应用由于DHA的多种生理功能，它在医学、保健品、食品工业等领域具有广泛的应用价值。
以下是几个常见的应用领域：1. 婴幼儿配方奶粉：针对婴幼儿的脑发育需求，许多配方奶粉添加了DHA，以满足其对脑营养的需求。
从鱼油中提取DHA
从鱼油中提取 DHA、EPA 技术的争辩现状鱼油中富含具有重要生理功能的DHA〔二十二碳六烯酸〕、EPA〔二十碳五烯酸〕，故从鱼油中分别制备高度不饱和脂肪酸(PUFA)，引起国内外广泛重视。
鱼油的开发利用关键，是对鱼油中DHA，EPA 等PUFA 进展分别制备，以去除色素、胆固醇、饱和脂肪酸等非必需成分。
目前，从鱼油中提取EPA、DHA 的方法很多，各有优缺点。
下面将主要介绍一下国内外提取EPA、DHA 的方法。
1、尿素包合法尿素包合法是一种较常用的多价不饱和脂肪酸分别方法，其原理是尿素分子在结晶过程中与饱和脂肪酸或单不饱和脂肪酸形成较稳定的晶体包合物析出，而多价不饱和脂肪酸由于双键较多，碳链弯曲，具有肯定的空间构型，不易被尿素包合，紫苏油中ALA，鱼油中EPA 与DHA 都以甘油三酯的形式等几率分布，空间位阻较大，难以直接包合，我们的做法是将其转化为脂肪酸酯或脂肪酸的形式后再进展包合。
再承受过滤方法除去尿素包合物，就可得到较高纯度的多价不饱和脂肪酸。
尿素包合法是承受乙醇作有机溶剂。
乙酯化鱼油、尿素、乙醇按1：2：6 的投料比例进展。
首先将200kg 尿素参加到600kg 乙醇溶剂当中。
待完全溶解后，缓慢参加100kg 乙酯化鱼油，把握温度不超过75℃在搅拌状态下包合30min：反响完毕后，静止冷却至室温使尿素充分结晶，形成包合物。
此时利用离心分别技术回收尿素，再将滤液进展乙醇回收、酸洗和水洗等过程除去溶液中的乙醇和残存的尿素，即可得到包合后的高不饱和脂肪酸乙酯浓缩液。
(注：使用尿素试纸检测浓缩液中尿素是否完全除净)对高不饱和脂肪酸乙酯浓缩液分别进展定性定量检测。
经气相色谱分析，其中EPA 和DHA 含量可在60％以上；称量浓缩液约在4kg 左右，即收率可到达40％以上。
2、低温冷冻法依据脂肪酸混合物在过冷有机溶剂中溶解度的不同到达分别的目的。
饱和脂肪酸在有机溶剂(常用丙酮)中的溶解度与碳链的长度成反比；而同一不饱和度的脂肪酿，碳链越长，溶解度越低；对同样碳链数目的不饱和脂肪酸，随双键数的增加，溶解度增加。
长链多不饱和脂肪酸对心脏健康的影响
长链多不饱和脂肪酸对心脏健康的影响近年来，随着人们对健康的关注度不断提高，一些营养学专家开始重视长链多不饱和脂肪酸（LC-PUFA）对心脏健康的影响。
LC-PUFA是一种从食物中获取的多不饱和脂肪酸，包括EPA（二十碳五烯酸）和DHA（二十二碳六烯酸）等。
对LC-PUFA的研究已经表明，这些脂肪酸对人体健康有着广泛和重要的影响。
首先，LC-PUFA有助于降低血液中的三酰甘油水平。
三酰甘油是一种血液中的脂肪，如果过量摄入，能够导致动脉粥样硬化和心脏病等疾病。
多项研究表明，通过摄入含有EPA和DHA的食物，可以有效地降低血液中的三酰甘油含量。
此外，这些脂肪酸还能增加高密度脂蛋白（HDL）的水平，HDL被称为“好胆固醇”，能够清除血管内的低密度脂蛋白（LDL）等有害物质。
其次，LC-PUFA还能降低心脏病的风险。
心脏病是发达国家中导致死亡的主要原因之一，而LC-PUFA的摄入可以显著地减少心脏病的发病率。
这些脂肪酸能够降低血液中的炎症水平，预防血栓的形成，降低血压等，从而降低心血管疾病的风险。
不过需要注意的是，LC-PUFA对心脏健康的影响还需要根据个人的健康状况和生活方式进行评估。
此外，LC-PUFA还对大脑和神经系统的健康有益。
这些脂肪酸在人类脑中的含量很高，参与神经细胞膜的组成，并且和个人的智力水平、学习记忆能力和抑郁等方面密切相关。
一些研究证明，经常摄入富含DHA的食物能够减缓认知衰退的速度，提升记忆力和学习能力，进而降低阿尔茨海默病等神经系统疾病的风险。
总的来说，LC-PUFA对人体健康有着重要的影响，在心脏健康、大脑和神经系统等方面都有着显著的作用。
此外，人类体内不能自行合成这些脂肪酸，必须通过食物摄入。
因此，适当地增加富含EPA和DHA的食物，如鱼类、坚果、葵花籽油等，可以帮助人们保持身体健康。
当然，在摄入这些食物时，还需注意适量、均衡饮食的原则，以保证身体的健康水平。
鱼油DHA和EPA提纯方法
鱼油DHA和EPA提纯方法鱼油中的DHA和EPA是人体所需的重要营养物质，它们对人体的健康有着非常重要的作用。
提纯鱼油中的DHA和EPA成为了当前研究的热点之一。
下面我们将讨论一些关于鱼油DHA和EPA提纯方法的相关知识。
一、鱼油DHA和EPA简介鱼油是从鱼体中提取的一种有益有机营养物质，它含有丰富的DHA和EPA。
DHA和EPA是一种具有重大生理学和营养学意义的不饱和脂肪酸，它们是人体中不可缺少的重要物质。
DHA和EPA被广泛认为对心血管、大脑、视力等有益。
提纯鱼油中的DHA和EPA 成为了重要的研究课题。
1. 化学合成法化学合成法是通过化学手段将鱼油中的DHA和EPA分离提纯出来的方法。
该方法的优点是操作简单、成本低廉，但缺点是合成出的DHA和EPA含有杂质高，对人体健康有一定风险。
2. 物理提纯法3. 生物酶法鱼油DHA和EPA提纯方法主要用于生物制药、食品添加剂等领域。
DHA和EPA可以被用于生产鱼油软胶囊、鱼油口服液等产品，作为膳食补充剂供人体摄取。
目前，随着人们健康意识的提高，市场对鱼油DHA和EPA的需求量也在不断增加，因此鱼油DHA和EPA提纯方法的研究和应用前景十分广阔。
为了提高鱼油中DHA和EPA的纯度和提纯效率，研究人员们不断对提纯工艺进行改进。
目前，一些新型的鱼油DHA和EPA提纯工艺已经在实际生产中得到了应用，取得了良好的效果。
1. 超临界流体提取技术超临界流体提取技术是一种先进的鱼油DHA和EPA提纯工艺，它利用超临界流体对鱼油进行提取和分离。
该技术操作简单，提纯效率高，产出的DHA和EPA纯度高，不含杂质，已经成为了目前鱼油DHA和EPA提纯的主要方法之一。
2. 膜分离技术膜分离技术是一种新兴的提纯工艺，它利用特殊的膜层对鱼油中的DHA和EPA进行分离提取。
该技术操作简单、成本低廉，且不需添加化学品，对环境友好。
已经被广泛应用于鱼油DHA和EPA的提纯工艺中。
五、总结鱼油中的DHA和EPA是人体所需的重要营养物质，对人体的健康非常重要。
DHA和EPA的研究
DHA和EPA的研究DHA和EPA是机体中两种重要的多不饱和脂肪酸，有研究表明:DHA和EPA的联合使用对于心血管的健康非常重要。
最近的推荐规范认为，普通人群通过各种途径每日至少摄入250mg DHA+EPA 将有助于心血管健康(EFSA, 2010b)。
近来，美国膳食指导咨询委员会（2010）的循证医学的结论表明从海洋食物中每日平均摄入250mg长链ω-3脂肪酸与因冠心病或猝死导致的心脏病死亡率的降低相关。
除了降低总体心脏病的死亡率外，n-3长链不饱和脂肪酸对于维持血浆中甘油三脂(EFSA, 2009b; Ryan et al., 2009)和血压(EFSA, 2009b)及糖尿病前期诊断代谢综合症的两项关键指标的平稳有重要作用。
最新证据表明通过食物和膳食补充剂配合食用，摄入2-4g DHA+EPA或单独摄入2g DHA(EFSA, 2009b; 2010c)对甘油三脂水平高于500mg/dl的人来讲有降低作用(Kris-Etherton, 2002) 。
而对于降血压功效，有研究表明每日摄入3g DHA+EPA, 可以平均降低高血压患者血压3-5mmHg.DHA和EPA抗血栓的机理心血管系统疾病如冠心病和动脉硬化等的主要原因是有血栓形成。
由于种种原因，血管内皮细胞从血管壁脱落后，在血管内侧血小板粘着其上并且凝集生成血栓，使血管管径狭小，阻碍血液流动。
正常机体中存在一套调节血小板-血管壁相互作用的系统，即PGI2和TXA2，它们保持动态平衡，控制着血小板和血管内皮细胞的功能，与机体的凝血及纤溶系统一起保证了血管壁的正常通透性，维持血流的正常运行。
在病理条件下，如高脂血症和冠心病等，血脂过高、血液粘滞度增大、血流速度改变、稳定的内环境遭到破坏，出现血小板与血管壁间的相互作用失调、血管壁破损、血小板大量聚集、粘着于病变部位，同时大量合成释放TXA2，于是PGI2／TXA2平衡遭破坏，结果容易引起心肌梗阻和脑血桂诱发脑溢血而猝死。
什么是AA、EPA、DHA、DPA
什么是AA、EPA、DHA、DPA?
AA即二十碳四烯酸（花生四烯酸），英文名Arachidonic acid。
它是人体大脑和视神经发育的重要物质，对提高智力和增强视敏度具有重要作用。
AA具有酯化胆固醇、增加血管弹性、降低血液黏度，调节血细胞功能等一系列生理活性。
AA对预防心血管疾病、糖尿病和肿瘤等具有重要功效。
EPA是二十碳五烯酸，英文名Eicosa-pentaenoic acid。
EPA是从鱼油中发现的一种长链ω－３多不饱和脂肪酸。
它除了保护心血管系统之外，对很多自身免疫功能问题、感染而引起的疾病，包括关节炎、气喘、结肠炎、系统狼疮红斑和牛皮癣均有治疗功效。
研究表明，EPA能迅速在脑中转化成DHA并蓄积。
DHA是二十二碳六烯酸，英文名称Doco-sahexaenoic acid。
属于ω－３多不饱和脂肪酸，DHA是构成脑磷脂的重要成分，在脑组织中大量存在,与脑细胞功能有关；DHA不足，会导致婴幼儿脑发育障碍，青少年智力低下，中老年脑神经过早退化。
多吃富含DHA的鱼类，对维护神经正常功能有益。
动物实验证实，若神经系统和视网膜中DHA积累不足，可以导致视网膜电流图波形改变及视觉灵敏度下降。
DPA即二十二碳五烯酸，英文名称Docosa-pentaenoic acid。
属于ω－３系列不饱和脂肪酸，主要存在于海洋哺乳动物的油脂中。
DPA在人乳和海狗油中含量较高，具有促进和提高人体的免疫能力，与DHA起协同作用，对Ⅱ型糖尿病、类风湿性关节炎、牛皮癣、哮喘病、溃疡性大小肠炎等有较好治疗作用。
EPA
EPA即二十碳五烯酸，是一种多不饱和脂肪酸。
同DHA一样，EPA组成磷脂、胆固醇酯等，是大脑、神经系统的重要组成部分。
在人体内，亚麻酸可以转化成EPA，所以EPA并不是人体必需脂肪酸。
EPA对降低低密度脂蛋白胆固醇有很好的作用。
EPA存在于鱼类、母乳等食物中。
ω-3脂肪酸被公认为是一种对细胞、心脏以及新陈代谢健康非常重要的食用脂之一。
ω-3不饱和脂肪酸的降脂作用显著，其通过前列腺素的降脂途径是其它任何降脂药所不能比拟的。
它具有全项降脂作用，抗血栓形成作用，调节血脂作用，抗心律失常和心室纤颤作用和抗炎症反应作用。
ω-3不饱和脂肪酸的代谢产物可以扩张血管，增强血管弹性，从而起到降压作用。
ω-6多不饱和脂肪酸是人体不能缺乏亚油酸。
它对维持细胞膜和亚细胞膜的结构和功能具有重要作用。
儿童缺乏亚油酸会出现发育迟缓和湿疹皮炎等，成人缺乏亚油酸会出现磷状皮屑、脱发和伤口难以愈合、心血管疾病、行为障碍以及关节炎等症状。
食用单元不饱和脂肪酸（ω-9）能提高好的胆固醇（HDL），降低不好的胆固醇（LDL），对预防心脏疾病有很大的功效，并可以防止多元不饱和脂肪酸降低好的胆固醇（HDL）而引起的细胞出现易老化的现象。
功效及作用：．降低血脂、胆固醇和调节血压，有效防治心血管疾病。
．防止血栓形成和中风，预防老年痴呆症。
．增强视网膜的反射能力，预防中老年人视力退化。
．提高记忆力。
．治疗抑郁症。
．抑制癌细胞的生长。
．有助于增强体力并改善皮肤质量。
．构成大脑和神经细胞重要成分，增强智力．调节内分泌，前列腺素合成前体，对抗关节炎等多种炎症．促进婴幼儿大脑及眼睛的发育适宜人群：．欲防治心血管疾病者。
．欲提高记忆力者。
．欲防治关节炎者。
．视力退化者。
．精神抑郁者。
．欲使皮肤光滑有弹性者。
DHA百科名片DHA的食物来源DHA常见补充剂形态DHA及其衍生物或可用于癌症治疗相关新闻资讯编辑本段概述自上世纪90年代以来，DHA即不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸一直是儿童营养品的一大焦点。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
【通讯作者】吴峥峥ＤＨＡ与ＥＰＡ合成超长链多不饱和脂肪酸的效率比较余 曼，陈 波，张瑞帆，吴峥峥（四川省医学科学院・四川省人民医院眼科，四川成都６１００７２）
【摘要】 目的 比较在ＥＬＯＶＬ４蛋白酶催化作用下，ＤＨＡ和ＥＰＡ合成超长链多不饱和脂肪酸ＶＬＣ－ＰＵＦＡ的效率。方法 构建携带ＥＬＯＶＬ４基因和绿色荧光蛋白的重组腺病毒，转入培养的ＰＣ１２细胞，通过ｑＲＴ－ＰＣＲ定量分析ＥＬＯＶＬ４基因的表达量，ＷＢ检测ＥＬＯＶＬ４蛋白的表达；１∶１加入ＤＨＡ和ＥＰＡ，孵育４８ｈ之后进行脂肪酸提取，通过气相质谱ＧＣ－ＭＳ分析超长链脂肪酸的成分。结果 ＧＣ－ＭＳ检测到分别用ＤＨＡ及ＥＰＡ处理后的ＰＣ１２＋Ａｄ－ＥＬＯＶＬ４的细胞中有ｎ３ＶＬＣ－ＰＵＦＡ的表达，３４：５ｎ３和３６：５ｎ３分别为０畅８５％和１畅１１％；３４：６ｎ３和３６：６ｎ３分别为０畅１６％和０畅２９％；ＥＰＡ所产生的五烯酸总和是ＤＨＡ所产生的六烯酸总和的４倍。结论 ＥＰＡ合成ＶＬＣ－ＰＵＦＡ的效率远远高于ＤＨＡ，为患者提供更高比例的ＥＰＡ，而非ＤＨＡ，可能是治疗ＳＴＧＤ３疾病的方式之一。【关键词】 二十二碳六烯酸；二十碳五烯酸；ＥＬＯＶＬ４基因；Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病；超长链多不和脂肪酸【中图分类号】Ｒ７７ 【文献标志码】Ａ 【文章编号】１６７２－６１７０（２０１４）０５－００２４－０４
ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｂｅｔｗｅｅｎＤＨＡａｎｄＥＰＡｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓ ＹＵＭａｎ，ＣＨＥＮＢｏ，ＺＨＡＮＧＲｕｉ－ｆａｎ，ＷＵＺｈｅｎｇ－ｚｈｅｎｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｐｈ－
ｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，ＳｉｃｈｕａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＰｅｏｐｌｅ摧ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７２，Ｃｈｉｎａ）
【Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ】 ＷＵＺｈｅｎｇ－ｚｈｅｎｇ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｂｅｔｗｅｅｎＤＨＡａｎｄＥＰＡｆｏｒｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎｐｏｌｙｕｎｓａｔ－ｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄ（ＶＬＣ－ＰＵＦＡｓ）ｕｎｄｅｒｃａｔａｌｙｔｉｃａｃｔｉｏｎｏｆＥＬＯＶＬ４ｐｒｏｔｅａｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＰＣ１２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｄｕｃｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ５ｃａｒｒｙｉｎｇｍｏｕｓｅＥｌｏｖｌ４ａｎｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＰ）．ＧＦＰ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａｎｄｎｏｎ－ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｃｏｎｔｒｏｌｓ．ＥＬＯＶＬ４ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｑｕａｎｔｉｆｉｅｄｂｙｑＲＴ－ＰＣＲｓ．ＥＬＯＶＬ４ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ（ＷＢ）．ＴｈｅｔｒａｎｓｄｕｃｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＤＨＡｏｒＥＰＡ（１：１）．Ａｆｔｅｒ４８ｈｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ，ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ，ａｎｄｆａｔｔｙａｃｉｄｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｆｏｌｌｏｗｉｎｇｔｏｔａｌｌｉｐｉｄｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｆａｔｔｙａｃｉｄｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｕｓｉｎｇａｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＧＣ－ＭＳ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＧＣ－ＭＳａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＤＨＡａｎｄＥＰＡｔｒｅａｔｅｄＰＣ１２＋Ａｄ－ＥＬＯＶＬ４ｈａｄｎ３ＶＬＣ－ＰＵＦＡｓｉｎｗｈｉｃｈ３４：５ｎ３ａｎｄ３６：５ｎ３ｗｅｒｅ０畅８５％ａｎｄ１畅１１％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；３４：６ｎ３ａｎｄ３６：６ｎ３ｗｅｒｅ０畅１６％ａｎｄ０畅２９％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｏｔａｌａｍｏｕｎｔｏｆｐｅｎｔａｅｎｏｉｃｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｆｒｏｍＥＰＡｗａｓａｌｍｏｓｔｆｏｕｒｔｉｍｅｓｔｈａｎｔｈａｔｏｆｈｅｘａｅｎｏｉｃｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｆｒｏｍＤＨＡ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＥｌｏｎｇａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＶＬＣ－ＰＵＦＡｓｆｒｏｍＥＰＡｉｓｍｕｃｈｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｆｒｏｍＤＨＡ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｄｉｅｔａｒｙｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｅＥＰＡｒａｔｈｅｒｔｈａｎＤＨＡｍａｙｐｒｏｖｉｄｅｓｏｍｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｂｅｎｅｆｉｔｓｆｏｒｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＳｔａｒｇａｒｄｔｓ摧ｄｉｓｅａｓｅ（ＳＴＧＤ３）．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃａｃｉｄ（ＤＨＡ），Ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃａｃｉｄ（ＥＰＡ），ＥＬＯＶＬ４ｇｅｎｅ，Ｓｔａｒｇａｒｄｔｓ摧ｄｉｓｅａｓｅ，Ｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄ（ＶＬＣ－ＰＵＦＡ）
以ＤＨＡ和ＥＰＡ为代表的ｎ３ＰＵＦＡｓ（ｐｏｌｙｕｎｓａｔ－ｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ＰＵＦＡｓ）是指含有两个或两个以上双键的一类脂肪酸，通常按照第一个双键的位置把多不饱和脂肪酸分类，其中ｎ３ＰＵＦＡｓ，即从甲基端数第１个双键的位置在第３碳位的多不饱和脂肪酸，如二十二碳六烯酸（２２：６ｎ３，ＤＨＡ）和二十碳五烯酸（２０：５ｎ３，ＥＰＡ）。在哺乳动物神经系统中，ｎ３ＰＵＦＡｓ不但是重要的结构组分，而且是重要的营养因子［１］。ＤＨＡ被认为是功能最强的ｎ３ＰＵＦＡｓ，ＤＨＡ与人类多种神经性疾病，例如阿尔默茨症［２］。Ｓｔａｒｇａｒｄｔ病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ－ｌｉｋｅｍａｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ，ＳＴＧＤ）是一种发生于青少年期的遗传性黄斑营养不良，目前尚无有效的治疗方法。近年来的研究又发现，ＥＬＯＶＬ４基因第ＶＩ外显子上突变导致了人类的常染色体显性遗传ＳＴＧＤ３的发病［３］。ＥＬＯＶＬ４属于超长链脂肪酸延伸酶（ｅｌｏｎｇａｓｅｏｆＥＬＯｎｇａｔｉｏｎｏｆｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ＥＬＯＶＬ）家族，已被证实参
与多不饱和脂肪酸（ｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎＰＵＦＡ，ＶＬＣ－ＰＵ－ＦＡ）的Ｃ２８－Ｃ３８碳链延长的生化过程［４］。ＭｃＭａｈｏｎ
等发现，ＥＬＯＶＬ４基因突变的ＳＴＧＤ３小鼠模型的视网膜中的Ｃ３２－Ｃ３６酰基磷脂酰胆碱的水平下降［５］，
ＶＬＣ－ＰＵＦＡ水平减少还会导师ＥＲＧ波幅的下降，因
此，治疗ＳＴＧＤ３的策略之一可能是通过食物供给方式将ＶＬＣ－ＰＵＦＡ送到视网膜组织。然而，由于ＶＬＣ－ＰＵＦＡ结构的不稳定性，使得其很能被大量生产，那
么另外一种方式就是通过提供ＶＬＣ－ＰＵＦＡ的前体物质，体内合成ＶＬＣ－ＰＵＦＡ。图１显示ｎ３ＰＵＦＡｓ的合成通路，我们看到ＤＨＡ和ＥＰＡ均为ＶＬＣ－ＰＵＦＡ的前体脂肪酸，尤其是ＤＨＡ占有在感光体外部节段磷脂中大约５０％的脂肪酸［６］，它在神经系统以及视网
膜中的作用曾受到广泛的关注。本研究将转基因ＥＬＯＶＬ４蛋白在ＰＣ１２细胞中过量表达，等浓度加入
４２ 实用医院临床杂志２０１４年９月第１１卷第５期 ＤＨＡ和ＥＰＡ，通过气相质谱（ｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＧＣ－ＭＳ）定量分析ＤＨＡ和ＥＰＡ的转化效率。图１ ＥＬＯＶＬ４蛋白酶催化Ｃ２８－Ｃ３８ＰＵＦＡ的合成。１ 材料与方法１畅１ 重组腺病毒载体的构建、细胞培养和病毒转导携带鼠ＥＬＯＶＬ４基因和绿色荧光蛋白（ＧＦＰ作为对照）的重组腺病毒构建系统采用ＡｄｅｎｏＸ腺病毒表达系统２和Ｃｒｅａｔｏｒ技术［４］。将重组病毒质粒转染ＨＥＫ２９３细胞，在转染３６小时后开始收集、纯化培养液中的病毒。流式细胞仪测定滴度。ＰＣ１２细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株由我院人类分子生物学与遗传研究中心实验动物中心引入，培养于含体积分数为１０％马血清、体积分数５％胎牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养基中，体积分数５％ＣＯ２条件下培养。次日，进行病毒转导，即将Ａｄ－ＧＦＰ和Ａｄ－ＥＬＯＶＬ４病毒质粒按１×１０４至２×１０４ｐｆｕ／ｍｌ浓度滴度加入含有２％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ的细胞培养液中。转导２４时后，观察并纪录ＧＦＰ表达情况和细胞形态变化，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测ＥＬＯＶＬ４和ＧＦＰ的蛋白表达量。１畅２ ＲＴ－ＰＣＲ 采用ＰｕｒｅＬｉｎｋＭｉｃｒｏｔｏＭｉｄｉ总ＲＮＡ提取试剂盒（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ），提取ＰＣ１２、ＰＣ１２＋Ａｄ－ＧＦＰ和ＰＣ１２＋Ａｄ－ＥＬＯＶＬ４三组细胞的ＲＮＡ。构建２５μｌ反应体系，上样扩增。琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察并照相，扫描各条带灰度值，定量分析，ＲＰＬ１９为管家基因。１畅３ 供给ＤＨＡ和ＥＰＡ于ＰＣ１２细胞 制备牛血清白蛋白ＢＳＡ共轭ＥＰＡ和ＤＨＡ：纯度高于９９％的ＥＰＡ的钠盐购自Ｎｕ－ＣｈｅｋＰｒｅｐ，Ｉｎｃ．（Ｅｌｙｓｉａｎ，ＭＮ）；纯度高于９５％的ＤＨＡ的钠盐购自ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）。每种钠盐溶于ＢＳＡ，制备成ＢＳＡ共轭ＤＨＡ和ＥＰＡ制备，储存于－８０℃备用。当外源基因ＥＬＯＶＬ４在ＰＣ１２细胞中转染成功，细胞培养２４小时后，培养被替换为含有ＤＨＡ和ＥＰＡ（１∶１）的培养液，两种ＰＵＦＡ的浓度控制在１５～２０μｇ／ｍｌ，以防浓度过高导致的细胞死亡。在孵育４８之后，用含有５０μｍＢＳＡ的ＰＢＳ溶液的清洗细胞一次，然后用不含ＢＳＡ的ＰＢＳ溶液清洗细胞两次，收集细胞，储存于－８０℃备用。１畅４ 脂肪酸提取和薄层色谱（ｔｈｉｎｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａ－
ｔｏｇｒａｐｈｙ，ＴＬＣ） 从至少２ｍｇ的细胞蛋白中提取
总脂质，参照Ｂｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法提取总脂质［４］，将含有脂
质的氯仿溶液储存在－２０℃中备用。加入５０ｎｍ的１５：０，１７：０，２３：０（短链脂肪酸的参照物）和４ｎｍ的３０：３ｎ６（作为长链脂肪酸的参照物）。之后，在加入１６畅６％的ＨＣｌ的甲醇溶液，在氮气下封好装有氯仿的试管口后，１００℃加热过夜，第二天将试管在冰上冷却。将上述获得的溶液用毛细管在硅胶层析板上，分离脂质［７］。分离的脂质是无色的，用二氯荧
光黄使其显色，之后将脂质从层析板上刮除，分类收集到试管中，从而得到脂肪酸甲酯（ｆａｔｔｙａｃｉｄｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ，ＦＡＭＥ），置入色谱质谱仪上分析。
１畅５ ＧＣ－ＭＳ 分析脂肪酸ＦＡＭＥ定量分析：采用ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ６８９０Ｎ气相色谱和火焰离子检