移液器的使用注意事项

移液器的使用注意事项

（一）常见错误

以前在网上写“移液器的选择”时，也写过“移液器的操作”，并且还有幸被引用过几次。当然，在网上也有不止一个人写过类似的东东。但使用者是否都很重视这个问题呢？很遗憾答案是否定的。相当多的人认为移液器是很简单的仪器，其操作也很简单，没必要费口舌，更无需上什么培训课。事实上呢？良好的移液器使用习惯对于延长移液器的使用寿命、提高移液的精度和维护使用者的健康都大有裨益。下面不妨堆砌一些在实验室常见的使用习惯，同时也是错得比较严重的使用习惯。希望您在其中不要发现自己的影子。

第一，装吸头。在移液器使用频繁的实验室里，常常可以听到敲击吸头的声音此起彼伏，颇有为枯燥的实验室生活增添点音乐的味道。走进细看，原来是使用者怕吸头不能装紧，在吸头装到移液器上之后，在吸头盒里再敲击几次，希望通过这种冲击力来保证移液的密封性。那这种操作错在哪里呢？其一，在撞击的作用下，吸头可能会变形而影响移液精度；其二，移液器套柄接触吸头的部分经过多次强力的摩擦，会逐渐变得粗糙而难以保证密封性，而为了达到良好的密封性就需要更大的撞击力，恶性循环就此开始；其三，小量程的移液器的套柄都比较细，在不断撞击的摧残下，很有可能变成钓鱼钩；其四，有时这种冲击力比移液器掉在地上承受的力还要大，移液器里的部分精密部件随时有不堪重负而罢工的可能。

第二，吸液角度。很多使用者为了在吸液过程中便于观察样品在吸头中的状况，会让移液器在吸液过程中保持45?倾角甚至更接近水平的角度。但这又错了。其一，在移取接近或达到吸头的最大容积的样品时，移液器大角度倾斜很容易让液体溜到移液器的套柄里面，从而污染甚至腐蚀移液器的活塞，同时也容易造成样品的交叉污染；其二，移液器的大角度倾斜同时也会让吸头外壁与液体的接触面增大，这样吸头离开液面时外壁残留的液体也更多，很容易在排液时随吸头内的液体一起离开吸头，从而降低移液的精度，而这些残留的液体对于微小量程（如2ul和10ul）的移液器而言，其对精度的破坏很可能是致命的！

第三，吸液速度。在实验室里经常可以看到，使用者为了“提高效率”，在吸液时拇指迅速松开，这就使液体迅速冲到吸头里面。殊不知，这样就迫使液体在进入吸头后形成湍流的状态，从而对中小量程的移液器而言会产生肉眼不可见的汽雾进入移液器的内部，对大量程的移液器而言则会看到液体直接冲到移液器的内部。最终的结果就是污染甚至腐蚀移液器的活塞，容易造成样品的交叉污染，对精度也有影响。

第四，存放。相当多的用户在移液器使用完毕后会直接把移液器平放在实验台上，爱好整洁的则可能把移液器放在抽屉里。这样其实也不好！在移液操作过程中，难免会有液体进入移液器的内部，在平放的状态下，这些液体就会一直滞留在活塞等部件上，日积月累之后污染活塞甚至腐蚀活塞。

在以上罗列的问题中，经常会提到腐蚀活塞的情况。有人可能会说：我用的移液器的活塞是耐腐蚀的！但我还是不得不提醒两点：其一，除了少数低端的移液器会用全塑料配件外，大多数移液器的活塞组件中都有金属部件；其二，只要是污染了活塞，无论活塞是何种材质，都可能有移液器内部气密性降低以及样品交叉污染的问题。

总之，各实验室有必要建立和完善移液器使用的SOP（标准操作规程），严格移液器操作的管理。

（二）重点注意事项

在网上所能看到的移液器使用方面的文章，基本都是按照操作的顺序粗略讲述一些操作规范。这当然无可厚非，但不同的操作细节对移液精度的影响不同，如果全部照做，必然会影响操作的效率。所以，我这里把相关的一些使用规则按照其重要性进行分类：“重点注意事项”是一定要遵守的，但如果对精度要求不高，就不必遵守“其它注意事项”而按照效率优先的原则来操作。这两类注意事项则分别按照操作的顺序排列。下面是重点注意事项：

1．装吸头

在移液器的套柄最下端进入吸头后，如果在吸头盒内操作，在轻轻向下压的同时左右晃动移液器或稍稍转动移液器（仅单道移液器可旋转）1－2秒即可；如果是用散装吸头，在用手把吸头往移液器方向轻轻施压的同时稍稍转动吸头1－2秒即可。如果这种操作不能达到理想的密封性，就需要检查吸头和移液器了（以后会详述）。

2．量程选择

一般说来，移液器的可用量程范围是移液器最大量程的10-100％。对特定的一支移液器，其移液的精度随移液量的降低而降低。以市场上用的较普遍的EPPENDORF的RESEARCH移液器为例，其量程范围为20-200ul的移液器，在移取200ul纯水时准确度为±0.6％，在移取100ul纯水时准确度为±1.0％，在移取20ul纯水时准确度为±2.5％（这些数据引用自EPPENDORF的产品宣传手册）。因此，笔者推荐最佳的量程范围是移液器最大量程的35-100％。

3．吸液的深度和角度

（1）吸头浸入的深度：有下面一个表格供参考（当然，不同容器需要的深度也略有不同，所以无需死记这个表格，只需把握两个原则：其一，吸液的深度需保证达到所需的移液量；其二，让吸头外壁尽量少的接触液体）。

（2）移液的角度：在移液的过程中须一直保持移液器在竖直状态，最大倾角不超过20°。

4．吸液的速度

在吸液过程中，须慢慢降低拇指的下压力，使液体在吸头内均匀且缓慢的上升。

5．停留时间

对于大量程移液（ml级）和粘度明显高于水样品的移液，在吸液时松开拇指后，须使吸头在液体内停留3－5秒后才能移出（因为液体进入吸头的运动相对比较费时，必须保证液体达致动态平衡）。

6．存放

在移液器使用完毕后，须将移液器调至最大量程，然后挂起（可以挂在专用支架上，也可以挂在实验台柜的金属横杆上）。

（三）其它注意事项

如果您只是粗略的移液，本文的内容您完全可以跳过；如果您追求高精度的移液，我建议您还是花点时间看看下面的内容。

1．量程调节

在调节量程的过程中，遵守“从大到小”的原则。具体来说，当把大量程调为小量程（如从200ul调到100ul）时，直接调节到位即可；当把小量程调为大量程时，需先超过所需量程1/3到1/2圈，然后再回调到所需的量程。这样做是为了消除移液器本身的机械误差。

2．润洗

所谓润洗，是在正式移液前，先用吸头吸取待转移的液体，然后再把它作为废液排掉。润洗吸头的目的是减少吸头内壁吸附力对精度的影响，润洗次数以2次为宜。

3．停留时间

对于物理性质非常接近水的液体（我们在这里及以后的文章中都简称水溶液），在吸液过程中松开拇指后，须使吸头在水溶液中提留1秒放开移出。

4．排液

排液的方式主要有三种：（1）吸头贴容器的内壁排液，这是最常用和最经典的排液方式；（2）直接在液体上方排液，这种方法简单而不容易受客观因素限制；（3）将吸头插入液面下排液，这主要用于小量程移液器或特殊液体的排液，只

是注意一定要在吸头从液体中移出后放开松开拇指。这三种排液方式均可，只是在考察重复性时要始终用同一种排液方式。

5．手温

虽然移液器的握持部分的外壳一般都是由低导热材料制成的，但连续握持时间长了，手的温度还是会被传导到移液器内，里面的部件有可能会因温度变化而发生形变，从而影响移液精度。因此，在操作过程中需注意：其一，在操作过程中，只要不需要拇指用力，就尽量靠指钩把移液器挂在手上而松开手掌；其二，一般连续移液不要超过半小时，如果工作量繁重，可换手操作。这样，在尽量减少手温影响的同时也让您宝贵的手得到一定的休息。

（四）特殊样品的移液技巧

多数情况下，移液器的工作对象都是水溶液，但也难免会碰到一些特殊的样品，

力有限，那还是看看本文，会对您尽量的提高精度有帮助（也只能说是有帮助，毕竟比专门的外置活塞式移液器差点）。

1．挥发性样品

应当注意两点：其一，在移液前务必润洗两次；其二，在吸液完成后尽快排液。

2．高粘度样品

采用反向移液的模式：在吸液时把吸/排液按钮按到第二档（第二停止点），而在排液时把按钮按到第一档（第一停止点）。另外，在吸液和排液时均需要3-5秒的停留时间。

3．高密度/低密度样品

移液器的精度数值都是基于转移纯水，如果样品的密度与水的密度相差很大，则精度也会相应的很差。因此，在移液前需要先搞清楚样品的密度，然后把量程调节成待转移体积与密度的乘积。举例而言，如果一个样品的密度是1.2g/cm3，您需要转移300ul，那您应该把量程设置为360ul。这只是粗略的调整方法，严格起来还需要量器或天平作为辅助工具而进行准确的计算。总之，这基本上是一个需要经验的活。

4．高温/低温样品

注意三点：其一，在移液前绝不可润洗吸头；其二，每次移液都换一个吸头；其三，吸液和排液都应尽快完成。