Sourthern blot和Northern blot原理
Northern blotting
⑧转膜结束后，揭去凝胶上方的纸巾和3MM滤纸。将膜 在6×SSC中浸泡5 min，以去除膜上残留的凝胶。
（三）核酸分子固定
烘烤：将膜夹在两张滤纸之间，80℃真空烘 烤2小时。烤干后的膜用塑料袋密封，4℃保 存备用。 紫外光固定：将膜携带RNA的一面暴露置于UV 交联仪中，UV照射自动交联
（四）核酸分子杂交
2.杂交： 将变性的探针（95-100℃变性5min，冰浴5min）加 入到预杂交液中，42℃杂交16hr。
3.洗膜： ① 倾去杂交液。 ② 2×SSC/0.1%SDS室温洗15min。 ③ 0.2×SSC/0.1%SDS，55℃洗15min×2次。
（五）杂交信号的检测
放射自显影
将膜用dd H2O漂洗片刻，用滤纸吸去膜上水份。用 薄型塑料纸将膜包好，置于暗盒中，在暗室中压上 X光片。暗盒置-70℃放射自显影3～7天左右。
Northern blotting：
优点：传统、经典的方法，更为直接可信；能够反映mRNA丰度 ，还可以检测不同的剪切体；在杂交实验中，DNA-RNA，RNARNA这两种杂交双链的稳定性高于DNA-DNA双链，因此检测 RNA靶要比检测DNA靶在严谨性上要高很多 缺点：操作较为复杂，可能需要用到同位素；实验需要的RNA量 较大，对一些少量和痕量样品较难实现。
利用DNase I在DNA双链上造成单链切口
利用大肠杆菌DNA聚合酶I的53核酸外切酶活 性在切口处将旧链从5末端逐步切除 在DNA聚合酶I的53聚合酶催化下，以互补的 DNA单链为模板依次将dNTP连接到切口的3末 端-OH上，合成新的DNA链，同时将标记的核苷 酸掺入到新的DNA链中
定义：来源不同的两条单链核酸分子通过碱基互补 形成异源双螺旋分子。可分为DNA/DNA、RNA/RNA、 DNA/RNA之间的杂交。 探针类型：
northern blot
目录
简介 流程
材料电泳胶 探针
应用 优缺点
展开
编辑本段简介
Northern blot 是一种通过检测 RNA 的表达水平来检测基因表达的方法，通过
northern blot 的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特
定基因表达情况。
Northern blot 首先通过电泳的方法将不同的 RNA 分子依据
编辑本段优缺点
分析基因的表达可以有很多种不同的方法，除 northern blot 外还有 RT-PC
R、基因芯片、RNA 酶保护实验等。基因芯片常和 northern blot 一起使用，但通
常情况下，northernblot 的灵敏度要好于基因芯片实验，而基因芯片优势在于它可
在一次实验中同时反映出几千个基因表达量的变化。与定量 PCR 的高灵敏度相
比，northern blot 显然要逊色不少，但 northern blot 较高的特异性可以有效的减
少实验结果的假阳性。Northern blot 实验中一个主要的问题是存在 RNA 的降解，
所以 northern blot 中所有的实验用品都需要经过除去 RNA 酶的过程，如高温烘
烤、DEPC 处理等。同时，norther blot 中很多实验用品如甲醛、EB、DEPC、紫
其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段。
“Northern blot”这一术语实际指的是 RNA 分子从胶上转移到膜上的过程，当然它现 在通指整个实验的过程。Northern blot 在1977年由斯坦福大学 James Alwine，David Kemp 和 George Stark 发明。Northern blotting 实际上依照比它更早发明的一项杂交 技术 Southern blot（依据生物学家 EdwinSouthern 名字来命名）来命名，Southern blot 主要用来对 DNA 进行分析。
(完整版)Sourthernblot和Northernblot原理
Sourthern blot 和 Northern blot 原理（一） Southern Blot原理：将待检测的DNA 分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上， 固 定 后再与同位素或其它标记物标记的 DNA 或 RNA 探针进行反应。
如果待检物中 含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后 用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大 小。
用途：检测样品中的DNA 及其含量，了解基因的状态，如是否有点突变、扩增重 排等。
DNA=>琼脂糖电泳=> 印迹转移=> 预杂交=> 杂交（变性探针）=> 洗膜=> 放射自显影或显色（二） Northern Blot原理：在变性条件下将待检的 RN A 羊品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同 Southern Blot 相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。
用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRN ）及其含量。
mRNA 提取=> 甲醛变性电泳=> 印迹转移=> 预杂交=> 杂交（变性探针） 洗膜=> 放射自显影或化学发光=>PRO&E Mcmbrirp(三)二者异同Southern blot 是分析DNA的杂交技术，Northern blot是分析RNA勺，而Western blot是分析蛋白质的Southern和Northerin原理基本相同，都是利用DNA或RNA的复性过程，但过程上也有区别，主要是Southern是先电泳后变性，而Northern是先变性后电泳；Southern是碱变性，而Northern采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性，因为采用碱变性会导致RNA水解(四)探针标记技术1标记物：放射性和非放射性两种放射性：非放射性：生物素、地高辛素、荧光素2、标记方法(1)切口平移法(2)随机引物法(3)末端标记法(4)单链DNA探针标记(5)寡核苷酸探针标记法。
sourthern印迹法
sourthern印迹法摘要：1.Sourthern 印迹法的概述2.Sourthern 印迹法的原理3.Sourthern 印迹法的操作步骤4.Sourthern 印迹法的应用领域5.Sourthern 印迹法的优缺点正文：【概述】Sourthern 印迹法是一种分子生物学技术，主要用于分析特定基因的表达水平。
这种方法通过检测基因转录的产物，即RNA，从而揭示基因在特定条件下的表达情况。
Southern 印迹法与其他印迹法（如Northern 印迹法和Western 印迹法）一起，为研究者提供了一种全面分析基因表达的方法。
【原理】Southern 印迹法的原理是通过核酸内切酶消化DNA，将DNA 片段转移至固定化介质上，然后通过碱变性将RNA 释放，接着进行反转录为cDNA，最后通过PCR 扩增特定基因片段，从而检测基因的表达水平。
【操作步骤】Southern 印迹法的操作步骤主要包括以下几个方面：1.选取特定基因的DNA 片段，用核酸内切酶进行消化。
2.将消化后的DNA 片段转移至固定化介质上。
3.通过碱变性将RNA 释放，并反转录为cDNA。
4.进行PCR 扩增特定基因片段。
5.通过电泳检测和定量分析扩增产物。
【应用领域】Southern 印迹法广泛应用于分子生物学、基因组学、生物信息学等领域，主要用途是研究基因表达水平、基因突变、基因拷贝数变异等。
【优缺点】Southern 印迹法的优点包括：1.可检测特定基因的表达水平，有助于研究基因功能。
2.高灵敏度和特异性，能够检测到低丰度的基因表达。
3.可应用于多种生物体和组织样本。
缺点包括：1.操作步骤相对复杂，技术要求较高。
2.需要使用较多试剂和仪器设备，成本较高。
sourthern杂交的原理
sourthern杂交的原理你知道 Southern 杂交不？这可是个在分子生物学领域里相当厉害的技术呢！咱先来说说啥是 Southern 杂交。
简单来讲，它就像是一个“侦探”，专门用来寻找特定的 DNA 片段。
想象一下，我们的细胞里有好多好多的 DNA，就像一个超级大的图书馆，里面的书多到数不清。
而我们想要找到某一本特定的“书”，也就是特定的 DNA 片段，这时候 Southern 杂交就派上用场啦！那它到底是咋工作的呢？其实啊，原理也不难理解。
第一步呢，我们得把细胞里的 DNA 提取出来。
这就好比是把图书馆里的书都搬出来放在一起。
但是这些 DNA 都是长长的链条，我们得把它们“剪碎”，这就是用限制性内切酶来切割 DNA 啦。
切成一段一段的，就像把长长的书剪成了好多小篇章。
接下来，我们要让这些 DNA 片段“跑个步”，这就是电泳啦！把它们放在电场里，根据大小不同，它们会跑得快慢不一样，这样就分开啦。
就像是一群人跑步，个子小的跑得快，个子大的跑得慢，最后就分开站成一排了。
然后呢，我们要把这些分开的 DNA 片段从凝胶里转移到一个膜上。
这膜就像是一个新的“书架”，让 DNA 片段都能稳稳地待在上面。
这个过程就像是把书从一个地方搬到另一个地方放好。
当探针和它要找的 DNA 片段结合上之后，我们就能通过检测这些标记，来发现我们想要的那个 DNA 片段啦！是不是很神奇？就好像是钥匙找到了对应的锁，然后我们就知道哪把锁是我们要的啦！你看，Southern 杂交就像是一场精心设计的“寻宝游戏”。
我们通过一系列的操作，最终找到了我们想要的那个珍贵的“宝藏”——特定的 DNA 片段。
这个技术在好多研究里都特别有用呢！比如说，我们想看看某个基因在不同的组织或者细胞里有没有，或者想研究一些遗传病是不是和特定的 DNA 变化有关，Southern 杂交都能帮上大忙！怎么样，是不是觉得 Southern 杂交挺有趣的？虽然过程听起来有点复杂，但是只要一步步来，就像解谜一样，最终总能找到答案！下次再碰到和它相关的问题，相信你也能明白个大概啦！。
northern印迹法原理和流程
northern印迹法原理和流程英文回答：The Northern Blot technique is a widely used method for detecting the presence of a specific RNA molecule in a sample. The principle behind this technique is to separate RNA molecules based on their size using gel electrophoresis and then transfer them onto a membrane for hybridization with a labeled probe. The labeled probe will bind to the specific RNA molecule of interest, allowing for its detection and quantification.The Northern Blot technique involves several key steps. First, RNA is extracted from the sample of interest, typically using a method such as phenol-chloroform extraction. The extracted RNA is then separated by size using gel electrophoresis, which involves applying an electric field to the gel matrix to separate the RNA molecules based on their size. The separated RNA molecules are then transferred from the gel onto a membrane,typically a nylon membrane, through a process called capillary or vacuum transfer.After the transfer, the membrane is cross-linked to immobilize the RNA, making it available for hybridization with a labeled probe. The labeled probe is a single-stranded DNA or RNA molecule that is complementary to the target RNA of interest. This probe is typically labeled with a radioactive or fluorescent tag for detection. The membrane is then incubated with the labeled probe, allowing it to hybridize specifically to the target RNA molecule.Following hybridization, the membrane is washed to remove any unbound probe, and then it is exposed to X-ray film or scanned using a fluorescent scanner to visualize the labeled RNA molecule. The intensity of the signal on the film or scanner corresponds to the abundance of the target RNA molecule in the original sample.Overall, the Northern Blot technique provides a valuable tool for studying gene expression and RNA abundance in biological samples.中文回答：北方印迹法是一种用于检测样本中特定RNA分子存在的常用方法。
sourthern blot的意思
sourthern blot的意思
Southern blot是一种分子生物学实验技术，用于检测和分离DNA 序列。
它是由爱德华·南方（Edwin Southern）于1975年发明的，因此得名。
Southern blot的主要步骤包括DNA提取、DNA酶切、电泳分离、转移和杂交。
首先，从待检测的样品（如细胞或组织）中提取DNA。
然后，将DNA进行限制酶切，以产生特定的DNA片段。
接下来，将DNA片段进行电泳分离，根据其大小将DNA分离成不同的带状条纹。
分离完毕后，将DNA条带转移到固体（通常是膜）上，这个过程称为转移。
最后，在膜上进行DNA杂交，用标记的探针与目标DNA序列结合，从而可视化或检测目标DNA。
Southern blot的应用非常广泛。
它可以用于检测基因的存在和拷贝数，查找特定的DNA序列，识别DNA突变或多态性，以及研究基因组结构和功能。
例如，科学家可以使用Southern blot来确定基因是否存在于特定物种中，或者在哪些组织中表达。
此外，Southern blot还可以用于亲子鉴定、疾病诊断和研究DNA修复等领域。
尽管Southern blot是一种有力的技术，但它也存在一些局限性。
首先，该技术需要大量的DNA样品，并且需要耗费较长的时间来完成。
此外，Southern blot对目标DNA序列的选择性较低，特异
性较差。
因此，随着新的分子生物学技术的发展，如聚合酶链反应（PCR）和DNA测序，Southern blot在某些应用中逐渐被取代。
Northern Blot 实验 Protocol
Northern Blot（Northern印迹杂交）是一种用于检测RNA表达水平的方法，它通过将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上，然后与特定基因互补配对的探针进行杂交，从而检测目的片段。
实验原理：Northern Blot利用了RNA的分子量大小不同，通过电泳方法将其按照大小分离，然后转移至硝酸纤维素膜上。
探针与特定的基因互补配对，当探针与目标RNA片段杂交时，可以检测到特定基因的表达情况。
所需试剂和耗材：1.RNA样品或mRNA样品。
2.探针模板DNA。
3.尼龙膜。
4.NorthernMax Kit（Cat. # 1940,Ambion, Inc.）等试剂。
实验仪器：1.恒温水浴箱。
2.电泳仪。
3.凝胶成像系统。
4.真空转移仪和真空泵。
5.UV交联仪。
6.杂交炉。
7.恒温摇床。
8.脱色摇床。
9.漩涡振荡器。
10.分光光度计。
11.微量移液器。
12.电炉或微波炉。
13.离心管。
14.烧杯。
15.量筒。
16.三角瓶等。
准备工作：1.准备好所需的试剂和耗材，确保它们在有效期内，并按照要求储存和使用。
2.确保实验区域干净整洁，并无菌操作。
3.了解和掌握实验步骤，以及如何解决可能出现的问题。
4.使用DEPC水处理相关玻璃器皿，保证无RNA酶的污染。
实验方法：1.将RNA样品进行电泳分离，根据分子量大小将RNA分子分离至琼脂糖凝胶中。
2.将凝胶中的RNA分子转印到硝酸纤维素膜上。
3.将硝酸纤维素膜上的RNA与特定基因的探针进行杂交。
4.通过底片暗盒制作X光底片，以检测RNA的表达情况。
5.对硝酸纤维素膜进行脱色处理，以便进一步检测和分析。
6.通过分光光度计测定X光底片的吸光度，以定量分析RNA的表达水平。
7.根据定量分析结果进行数据分析，绘制图表等。
注意事项：1.在实验过程中，要注意防止污染，尤其是避免交叉污染，因为这会对实验结果产生极大的影响。
2.所有溶液都应该是新鲜的，并且在使用之前应该进行充分的过滤和离心处理。
医学分子生物学第九章印迹杂交技术
cDNA。 将标记后的cDNA与点好的芯片进行杂交。 激光扫描芯片杂交结果，计算机处理。 分析杂交数据。
基因芯片
芯片杂交操作流程：
基因芯片
经大规模PCR扩增获得独立cDNA插入片段
人工制作芯片
商业化芯片
分别用cy3(绿色)和cy5红色两种荧光燃料标记两 种cDNA
23 ICK
4 IL-3
22 MIP-3 alpha
25 MMP-8
原始值
model
normal
30386
12625 14732 14606 11547.5 9262.5 20601 16912 16590.5 22787 28232.5
12482.5
7836.5 8059.5 8564.5 6742.5
辣根过氧化物酶源自底物产物， 并发出光辣根过氧化物酶：HRPO 底片曝光
③ Blotting过程
1）牛血清白蛋白封闭硝酸纤维素膜 2）先用一抗（待测蛋白的单克隆抗体）与
膜上的蛋白结合。 3）洗去未结合的一抗。 4）用二抗与一抗结合（二抗上带有HRPO）。 5）清洗掉未结合的二抗。 6）显影，检测
④结果 单抗blotting 结果
在蛋白质凝胶电泳以后，用转膜和免疫的方法检测 胶上的蛋白质泳带。
（1）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS-PAGE）：
是蛋白质的变性剂，使煮沸变性的蛋白质维持线 性状态，并与蛋白质结合，使蛋白质带上负电荷。
② 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） （Polyacrylamide gel electrophoresis）
（一）核酸的变性与复性
复性
RNA
DNA
Northern-Blot印迹杂交
杂交信号弱或无信号的问题及解决方案
• 转录水平低：考虑使用其他组织 或细胞类型进行实验，以确定目 标基因是否在所选样本中表达。
杂交信号弱或无信号的问题及解决方案
解决方案
2. 使用更高效的RNA提取方 法，确保获得高质量的RNA 样品。
样本电泳
01
02
03
选择合适的胶浓度
根据RNA的大小选择适合 的琼脂糖凝胶浓度，确保 RNA片段能够充分分离。
点样与电泳
将处理好的RNA样品点在 凝胶上，并进行电泳分离。
检测RNA条带
通过染色或放射自显影等 技术观察电泳结果，确保 RNA片段已成功分离。
样本转移
制备滤纸
选择适合的硝酸纤维素膜 或印迹膜，并将其固定在 滤纸上。
northern-blot印迹杂交
contents
目录
• northern-blot技术概述 • northern-blot实验原理 • northern-blot实验材料与设备 • northern-blot实验步骤 • northern-blot实验结果分析 • northern-blot实验问题与解决方案
01 northern-blot技术概述
定义与特点
定义
Northern-blot印迹杂交是一种用于 检测RNA在样本中的表达水平的分 子生物学技术。
特点
具有高灵敏度、高特异性和高分辨率 ，能够检测出微量的RNA分子，并可 对RNA分子进行定性、定量和定位分 析。
northern-blot技术的应用范围
1. 重新设计探针并进行验证， 确保与目标基因完全匹配。
3. 优化实验条件，如延长杂 交时间和提高探针浓度。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Sourthern blot和Northern blot原理
（一）Southern Blot
原理：
将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。
如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大
小。
用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。
DNA => 琼脂糖电泳 => 印迹转移 => 预杂交 => 杂交（变性探针） => 洗膜 => 放射自显影或显色
（二）Northern Blot
原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。
用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。
mRNA提取 => 甲醛变性电泳 => 印迹转移 => 预杂交 => 杂交（变性探针） =>
洗膜 => 放射自显影或化学发光
（三）二者异同
Southern blot 是分析DNA的杂交技术，Northern blot是分析RNA的，而Western blot是分析蛋白质的
Southern 和Northerin原理基本相同，都是利用DNA或RNA的复性过程，但过程上也有区别，主要是
Southern是先电泳后变性，而Northern是先变性后电泳；
Southern是碱变性，而Northern采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性，因为采用碱变性会导致RNA水解
（四）探针标记技术
1 标记物：放射性和非放射性两种
放射性：
非放射性：生物素、地高辛素、荧光素
2、标记方法
（1）切口平移法
（2）随机引物法
（3）末端标记法
（4）单链DNA探针标记
（5）寡核苷酸探针标记法。