食品微生物检验方法
食品微生物检验技术
引言：食品微生物检验技术是食品安全保障的重要环节之一。
微生物在食品中的存在可以引起食源性疾病和质量问题。
因此，在食品生产和加工过程中进行微生物检验是非常重要的，可以确保食品的安全和质量。
本文将为您介绍食品微生物检验技术的相关概念、应用和方法。
概述：食品微生物检验技术包括食品样品的微生物分离、鉴定和计数。
主要目的是检测食品中存在的微生物类型和数量，评估食品的健康风险和质量问题。
食品微生物检验技术广泛应用于食品加工厂、餐饮业、农产品贸易和监管部门等领域。
正文内容：一、微生物检验技术的分类1.定性检验技术：用于确定食品样品中是否存在特定微生物，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
2.定量检验技术：用于测定食品样品中微生物的数量，通常使用平板计数法、膜过滤法等常见方法。
3.毒性检验技术：用于检测食品中的毒素产生菌和毒素，例如肉毒杆菌等。
二、微生物检验技术的应用领域1.食品生产过程监测：检验食品生产过程中的原材料、中间产品和最终产品，确保食品符合卫生标准。
2.食品安全监测：对市售食品进行抽检，检测其中的微生物污染情况，保障食品安全。
3.食品质量评估：通过微生物检验，评估食品的口感、卫生状况和营养价值等质量指标。
4.食品卫生监管：监督和检验餐饮企业、食品加工厂、超市等食品销售场所的卫生状况，保障公众健康。
5.食品出口检验：对出口食品进行微生物检验，确保符合国际标准，避免贸易纠纷。
三、微生物检验技术的方法1.平板计数法：将食品样品均匀布于富养液琼脂培养基上，通过培养和计数菌落形成单位数量，从而得到食品中微生物的数量。
2.膜过滤法：将食品样品过滤到成膜过滤器上，然后将膜培养于琼脂平板上进行培养和计数。
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)：通过特定抗体与细菌或其产生的毒素结合，形成特定反应，用于检测食品中的目标微生物或毒素。
4.PCR法：利用聚合酶链反应技术，直接在食品样品中扩增目标微生物的特定基因序列，从而进行检测和鉴定。
食品中的微生物检验技术
食品中的微生物检验技术食品安全是人们日常生活中非常重要的一环，而微生物检验技术在保障食品安全方面起着关键作用。
微生物污染可能导致食品中的疾病和食物中毒事件发生。
因此，对于食品中微生物的检验至关重要，以确保食品的质量和安全。
本文将探讨食品中常用的微生物检验技术，以及其在食品行业中的应用。
一、菌落计数法菌落计数法是一种常用的微生物检验技术，用于测量食品中微生物的数量和增长情况。
通常，该方法要求将食品样品制成适当的稀释液，并将其平均均匀地涂布在富营养培养基上，然后在适当的温度下培养一段时间。
随后，通过观察和计数不同菌落的数量来评估食品样品中微生物的数量和种类。
菌落计数法的优点在于操作简单、成本低廉且能获得准确的结果。
然而，它只能提供关于微生物总数的信息，而无法检测特定的病原微生物。
因此，在食品行业中该方法通常用于检测食品中的常见的微生物。
二、PCR技术PCR（聚合酶链式反应）技术在食品微生物检验中得到了广泛应用。
PCR可通过扩增和检测食品中微生物的DNA，从而确认食物是否受到微生物的污染。
此外，PCR还能帮助鉴定特定微生物的存在，包括常见的食源性病原体。
PCR技术的优点在于其高灵敏度、高特异性和快速检测结果。
然而，该方法也存在一些局限性，如对设备要求较高，同时需要针对目标微生物设计和合成特异性引物。
此外，PCR技术还需要进行核酸提取和预处理等繁琐的操作步骤。
三、快速检测方法为了满足食品生产厂商和监管机构对食品微生物检验结果的快速反馈需求，快速检测方法在食品行业中得到了广泛应用。
这些方法通常基于免疫学技术，如ELISA（酶联免疫吸附试验）和免疫层析技术。
快速检测方法的优点在于操作简单、结果快速，并且能够在实验室以外的场所进行。
此外，它们还具有较高的灵敏度和特异性。
然而，这些方法可能对微生物种类有一定的限制，且可能不如传统的培养方法准确。
四、基因测序技术基因测序技术在食品微生物检验中的应用越来越广泛。
通过对食品样品中微生物基因组的测序分析，可以更准确地鉴定微生物的种类和数量，以及评估其对人体健康的潜在威胁。
食品微生物检验方法(ISOFDA)
所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2 ，报告EAPC/ml （g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度 。
所有平板的菌落数都超过100/cm2 ，计算平板的面积（直径为90mm 的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应 平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞ 65*100* 1/d。
大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预 示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指 示菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测 作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、 葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落 可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平 板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重 量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。
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菌落总数测定几点要求
检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可 作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4 ℃ 放置，以便在计数检样时用作对照。
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大肠菌群的定义
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼 性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学 方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为 食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些 细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步 的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗 称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和 阴沟肠杆菌等。
食品微生物检验和检测技术
食品微生物检验和检测技术食品微生物检验和检测技术是指对食品样品进行微生物检验和检测的技术方法。
微生物的污染对食品的质量与安全具有重要影响，因此必须对食品中的微生物进行检验和检测，确保食品的卫生安全。
1. 菌落计数法：菌落计数法是一种常用的食品微生物检验方法，通过将食品样品接种在适当的培养基上，培养一定时间后，根据菌落的形状、颜色、大小等特征进行计数。
菌落计数法可以测定食品中的总菌落数、霉菌数、大肠菌群数等指标，对于评估食品的卫生质量具有重要意义。
2. PCR法：PCR法是一种利用聚合酶链反应技术对食品中微生物进行检测的方法。
该方法通过寻找并扩增微生物DNA片段，利用特定的引物和聚合酶，在经过多次扩增反应后，可以检测到微生物DNA的存在与数量。
PCR法具有高灵敏度、高特异性和高效性的优点，能够快速准确地检测食品样品中的微生物。
3. ELISA法：ELISA法是一种常用的免疫学分析方法，可以通过检测食品样品中微生物所产生的抗原或抗体来确定微生物的存在与数量。
ELISA法具有灵敏度高、选择性好、简便快速等优点，广泛应用于食品微生物检测中。
4. 快速检测技术：快速检测技术是指通过分子生物学、免疫学等方法，结合微生物的快速培养和检测手段，能够在较短时间内对食品样品中的微生物进行快速检测的技术。
这些技术包括Butterfield法、PETRIfilm法、ATP生物发光法等，具有操作简便、敏感性高、准确性强等特点，可以大大缩短食品微生物检测的时间。
1. 食品卫生监督：食品微生物检验和检测技术能够对食品加工过程中的微生物污染进行监督与控制，保证食品的卫生质量，确保食品安全。
3. 疾病防控：食品微生物检验和检测技术可以对食品中的病原微生物进行及时检测，发现病原微生物污染的食品，采取相应的措施进行隔离与处理，防止疾病的传播与流行。
食品微生物检验和检测技术是保证食品安全、质量稳定以及疾病防控的重要手段和方法，对于保障广大人民群众的身体健康具有重要意义。
食品微生物检验操作流程
食品微生物检验操作流程一、样品采集。
咱要做微生物检验，第一步当然是把样品弄到手啦。
这采集样品可是有讲究的。
比如说采集食品的时候，得注意代表性。
不能光挑看起来好的或者坏的，要随机从不同部位采集。
像一整箱苹果，那就得从上面、下面、中间，各个角落都挑几个。
如果是液体的食品，像牛奶之类的，得充分混匀了再取样。
而且采集的工具也要干净无菌的哦，不然就会影响检验结果啦。
要是用个脏兮兮的工具，那结果肯定不准，就像穿了双沾满泥巴的鞋子去参加舞会，格格不入还把场地搞脏啦。
二、样品运输和保存。
采好样品之后，怎么把它送到实验室也是个问题呢。
要尽快送过去，就像送个紧急的包裹一样。
如果不能马上检验，那就要好好保存。
有些微生物在不同的温度和环境下会死掉或者疯狂生长，这可不行。
比如一些需要低温保存的样品，就得赶紧放在冰盒里。
要是没保存好，就好比你精心照顾的小宠物，因为你没给它合适的居住环境，它就生病了，那咱这个检验也就白费功夫了。
三、实验室准备。
到了实验室，那得先把环境准备好。
实验室得干净整洁，各种仪器设备都要先检查检查，看看有没有问题。
比如说显微镜，得保证镜头是干净清晰的，不然就像你戴着一副脏眼镜看东西，模模糊糊啥也看不清。
还有培养箱，温度要调整好，要是温度不对，那些微生物在里面就像住在了一个不舒服的房子里，要么不生长，要么就长得乱七八糟的。
四、样品处理。
样品送到实验室了，可不能直接就检验，得先处理一下。
固体的食品可能要切碎、研磨之类的，把它变成均匀的状态。
这就像把一大块肉切成小块，这样才能让微生物均匀地分布在里面，方便我们检测。
要是处理不好，可能有些微生物就躲在角落里，我们就发现不了它们了。
五、微生物培养。
处理好样品之后，就到了培养微生物的环节啦。
根据不同的微生物种类，我们要选择合适的培养基。
这就像不同的小动物要吃不同的食物一样。
把样品接种到培养基上，然后放在合适的环境下培养。
有的微生物喜欢有氧的环境，那就放在有空气的地方培养；有的微生物喜欢无氧的环境，那就得创造无氧的条件。
食品中的微生物检测方法
食品中的微生物检测方法食品安全一直备受人们关注，食品中的微生物检测方法是确保食品质量和安全的关键。
微生物检测是指通过检测食品中的微生物存在和数量来评估食品是否安全。
本文将介绍几种常见的食品中的微生物检测方法。
一、传统培养方法传统培养方法是最为常见的微生物检测方法之一，它可以直接检测食品中的细菌和真菌等微生物。
这种方法的原理是将食品样品接种于适当的培养基上，通过培养后的菌落形态和数量来判断微生物的存在和数量。
传统培养方法简单易行，但耗时较长，需要数天甚至数周才能得到结果。
二、荧光定量PCR法荧光定量PCR法是一种基于聚合酶链式反应（PCR）原理的微生物检测方法。
它可以快速准确地检测食品中的微生物，例如大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌。
该方法通过扩增微生物特定基因的DNA，然后使用荧光染料标记，最后通过荧光信号的强度来定量微生物的存在和数量。
荧光定量PCR法具有高效、高灵敏度和高特异性的优点，适用于快速检测大批量样品。
三、基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量的微生物检测方法，它可以同时检测多种微生物种类和数量。
该技术利用芯片上的探针与目标微生物的核酸序列发生特异性反应，然后通过荧光标记来检测微生物的存在和数量。
基因芯片技术具有快速、高通量和高灵敏度的特点，可以在较短时间内检测多个微生物。
四、质谱法质谱法是一种高效的微生物检测方法，它可以通过检测微生物代谢产物或特定标记物来判断微生物的存在和数量。
该方法广泛应用于食品中的致病菌检测，如耐药菌的检测和鉴定。
质谱法具有高灵敏度、高选择性和准确性的优势，可以在非常短的时间内完成微生物检测。
五、免疫层析法免疫层析法是一种简便快速的微生物检测方法，它通过检测微生物的抗原或抗体来判断其存在和数量。
该方法常用于食品中常见的细菌检测，如金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等。
免疫层析法操作简单、迅速，不需要复杂的设备，适用于野外和实验室环境。
综上所述，食品中的微生物检测方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。
食品微生物快速检验和无菌操作技术
食品微生物快速检验和无菌操作技术食品微生物快速检验和无菌操作技术是食品安全的重要保障，它们可以帮助食品生产企业及时发现和控制食品中的微生物污染，确保食品的质量和安全。
本文将介绍食品微生物快速检验和无菌操作技术的原理、方法以及在食品生产中的应用。
一、食品微生物快速检验技术食品微生物快速检验技术是指利用先进的仪器设备和方法，快速、准确地检测食品中的微生物，包括细菌、霉菌、酵母菌等。
常见的食品微生物快速检验技术包括PCR法、毒素检测法、酶活性检测法等。
1. PCR法PCR法是一种分子生物学技术，可以在较短的时间内快速检测食品中的微生物，如大肠杆菌、沙门氏菌等。
其原理是利用DNA扩增技术，将微生物DNA扩增成可检测的数量，然后通过荧光探针或染料检测扩增产物，确定食品中是否存在特定微生物。
2. 毒素检测法毒素检测法是指通过检测食品中的毒素水平来判断其是否受到微生物污染。
常用的方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、质谱分析法等。
通过这些方法可以快速测定食品中的毒素水平，判断食品是否安全。
3. 酶活性检测法酶活性检测法是通过检测食品中的微生物产生的酶活性来判断其是否受到微生物污染。
霉菌会产生一些特定的酶，可以通过检测这些酶的活性来判断食品是否受到霉菌污染。
二、无菌操作技术无菌操作技术是指在食品生产过程中采取一系列措施，确保生产环境和设备的无菌，避免微生物污染。
无菌操作技术包括清洁消毒、空气过滤、人员培训等方面。
1. 清洁消毒清洁消毒是无菌操作的基本步骤，包括对生产设备、生产环境、工作台面等进行定期清洁和消毒。
选择合适的清洁消毒剂，并按照规定的浓度和时间进行清洁消毒操作，可以有效杀灭细菌、霉菌、酵母菌等微生物。
2. 空气过滤空气过滤是指通过高效过滤器对生产场所的空气进行过滤，去除空气中的微生物和颗粒物。
特别是在一些对空气质量要求较高的生产环节，如酿酒、发酵等领域，空气过滤技术尤为重要。
3. 人员培训人员是食品生产过程中最容易造成微生物污染的因素之一，因此对生产人员进行严格的无菌操作培训是必不可少的。
食品微生物检验方法
食品微生物检验方法
食品微生物检验方法是通过对食品样品进行培养和鉴定，检测其中的微生物种类和数量。
常用的食品微生物检验方法包括以下几种：
1.总菌落计数：将食品样品分散在培养基上，经过一定时间的培养，计算每个菌落的数量，以评估食品中的总菌落数。
2.大肠菌群检测：通过将食品样品进行预处理和培养，然后用特定培养基进行筛选，检测食品中的大肠菌群数量，以评估食品的卫生质量。
3.致病菌检测：针对食品中可能存在的致病菌进行检测，常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）、免疫学方法、逆向传播法等。
4.真菌检测：通过培养方法，筛选食品样品中的真菌数量和种类，以评估食品的真菌污染程度。
5.酵母菌检测：通过培养方法，筛选食品样品中的酵母菌数量和种类，以评估食品的酵母菌污染程度。
6.蛋白质降解菌检测：通过培养方法，筛选食品样品中的蛋白质降解菌数量和种类，以评估食品的质量。
这些方法都需要严格的实验操作和操作规范，以确保检验结果
的准确可靠。
同时，在进行食品微生物检验时，还需要遵守相关的卫生和安全规定，保证实验环境和操作的无菌状态。
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食品微生物检验方法内容提要：●菌落总数检测●大肠菌群及大肠杆菌检测●金黄色葡萄球菌检测●沙门氏菌检测●单核细胞增生李斯特氏菌检测菌落总数测定——菌落总数的概念●菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或者表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。
菌落总数测定——卫生学意义●判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。
●及时反映食品加工过程是否符合卫生要求，为被检食品卫生学评价提供根据。
●通常认为，食品中细菌数量越多，则可考虑致病菌污染的可能性越大，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
FDA BAM 菌落总数测定流程检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）适当十倍稀释样品选择2~3个连续适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌平皿内（每个稀释度做两个平行）每皿内加入适量平板计数琼脂（PCA）35 ℃48 ±2h菌落计数FDA BAM 菌落计数方法●选择25~250CFU之间的菌落进行计数，计算公式如下：N=∑C/（1*n1+0.1*n2）*d●所有平板的菌落数都不足25CFU，报告EAPC/ml（g）为＜25*1/d。
EAPC：estimated aerobic plate count●所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2，报告EAPC/ml（g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度。
●所有平板的菌落数都超过100/cm2，计算平板的面积（直径为90mm的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml （g）为＞65*100* 1/d。
●无法计数的平板报告LA（Laboratory Accident）。
●最终结果保留前两位有效数字。
按照4舍6入，5是奇进偶不进。
ISO4833-2003 菌落总数测定流程检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）适当十倍稀释样品选择2~3个连续适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌平皿内（每个稀释度做两个平行）每皿内加入适量（12~15mL）平板计数琼脂（PCA），30±1 ℃，72 ±3 h菌落计数ISO4833-2003菌落计数方法●选择连续2个稀释度不超过300CFU的平板，且一个平板至少含15CFU进行计数，计算公式如下：N=∑C/（n1+0.1*n2）*d●所有平板的菌落数都不足15CFU，计算2平板菌落的算术平均值m，液体样品：N E=m 固体样品：N E=m×d-1●无菌生长：液体样品：less than 1; 固体样品：less than 1 ×d-1●最终结果保留前两位有效数字。
菌落总数测定几点说明●由于检样中使用30/35℃有氧条件下培养，因而并不是样品中实际的总活菌数，一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、与非嗜中温细菌，均难以反映出来。
●鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或者成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落能够来源于细胞块，也能够来源于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容积或者表面积内的菌落数或者菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。
菌落总数测定几点要求●每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过15min，要紧为防止细菌增殖与产生片状菌落。
样液与琼脂应充分混合，避免将混合物溅到平皿壁与皿盖上。
皿内琼脂凝固后，不要长时间放置，然后倒置培养，可避免菌落蔓延生长。
●检样过程中应用稀释剂做空白参照，用以判定稀释液、培养基、平皿或者吸管可能存在的污染。
同时，检样过程中应在工作台上打开一块空白平板计数琼脂，其暴露时间应与检样时间相当，以熟悉检样在检验操作过程中有无受到来自空气的污染。
●检样稀释液有的时候带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4 ℃放置，以便在计数检样时用作参照。
大肠菌群的定义●大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧与兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
●大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌与阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌的定义●大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。
●大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为++--或者-+--的细菌。
●与人类有关的大肠杆菌统称之致泻性大肠杆菌，包含五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。
卫生学意义●大肠菌群与大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。
●食品中检出大肠菌群，说明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。
大肠菌群数的高低，说明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
●大肠杆菌在外界存活时间与一些要紧肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。
近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标与HACCP实施效果的评估指标。
大肠杆菌的生物学特性基本形态：此菌为两端钝圆的短小杆菌，通常约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或者成双，但不呈长链排列。
约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，通常不超过10根，故菌体动力弱。
多数菌株有菌毛，有的有荚膜或者微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特性：●大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
大肠菌群及大肠杆菌测定——MPN法检验流程（FDA BAM）检样50g+450ml稀释液适当十倍稀释样品选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管LST肉汤（每管9mlLST肉汤并加有导管），每管接种1mL±2h没有产气管报告阴性接种44.5±0.5 ℃（水浴培养）24 ±2h ~48 ±2h查MPN表报告结果产气管接种EMB平板（35℃、18~24h）（大肠菌群）从EMB平板上挑取5个可疑菌转接到PCA斜面，进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气查MPN表报告结果（大肠杆菌）大肠菌群测定——MPN法检验几点说明●MPN检索表：MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不一致的稀释度，则表内数字应相应降低或者增加10倍。
●初发酵与证实试验：1）两步法进行了两次乳糖发酵试验。
初发酵与证实实验所用培养基不一致，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。
2）初发酵阳性管，不能确信就是大肠菌群细菌，通过证实试验后，有的时候可能成为阴性。
有数据说明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实试验相差较大。
因此，在实际检测工作中，证实试验是必需的。
●产气量与倒管：在乳糖发酵试验工作中，经常能够看到在发酵倒管内极微少的气泡（有的时候比小米粒还小），有的时候能够遇到在初发酵时产酸或者沿管壁有缓缓上浮的小气泡。
实验说明，大肠菌群的产气量，多者能够使发酵倒管全部充满气体，少者能够产生比小米粒还小的气泡。
假如对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，能够用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能有气体产生，而应作进一步试验。
大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别EMB平板典型大肠杆菌菌落特征：中心黑色或者紫红色，有或者无绿色金属光泽大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别●EMB是一种弱选择性培养基，一些球菌也可在该培养基上生长；●高压灭菌可使得美蓝还原从而使培养基的颜色呈不均一橘黄色，轻轻摇动培养基能够恢复原有的正常紫色，倾注平板前应先摇匀；●大肠杆菌在该培养基上并不一定总是呈现绿色的金属光泽；●该培养基受可见光易使其中的成分氧化，储存及培养细菌时都应在避光条件。
大肠杆菌测定——革兰氏染色基本步骤：●将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗；●滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；●滴加95%乙醇脱色约15～30s,直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗；●滴加番红复染液，复染1min，水洗、待干、镜检。
●结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
大肠杆菌测定——生化鉴定（表略）金黄色葡萄球菌——概述●根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》，按葡萄球菌的生理化学构成，将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(S. epidermidis)与腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)，其中金葡多为致病性菌，表葡偶尔致病。
●金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染中最常见的病原菌。
可引起局部化脓性感染，如疖、痈、皮下脓肿、外科切口及烧伤创面的感染；也可引起肺炎、伪膜性肠炎、肾盂肾炎、心包炎等多系统的化脓性感染；还可引起败血症、脓毒症等全身性感染。
葡萄球菌的致病力强弱要紧取决于其产生的毒素与侵袭性酶。
金黄色葡萄球菌——生物学特性金黄色葡萄球菌呈球形，直径0.8μm左右，排列成葡萄串状，无芽孢，无荚膜。
金黄色葡萄球菌——生长特性●金黄色葡萄球菌在肉汤中呈浑浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有的时候液体澄清，菌量多时呈浑浊生长。
金黄色葡萄球菌检验——方法适用性●MPN法：适用于检测带有大量竞争菌的食品及其原料与未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品。
●直接平板计数法：适用于检查金黄色葡萄球菌数不小于10/g（ml）的食品。
●增菌培养法：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。
金黄色葡萄球菌检验——直接平板计数法（FDA BAM &ISO）检样（50g+450mL稀释液）适当十倍稀释样品选择2~3个连续适宜稀释度吸取1ml菌液按照0.3mL、0.3mL、0.4mL分别涂布于3块90mmBaird-Parker平板上（做平行试验）35℃，45~48 h确证试验报告FDA BAM 金黄色葡萄球菌检验——MPN法检样（50g+450mL稀释液）适当十倍稀释样品选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管10% NaCl TSB肉汤，每管接种1mL35℃，48 ±2 h从生长的管中接种1环划线于Baird-Parker平板上35℃，48 h确证试验报告FDA BAM 金黄色葡萄球菌确证试验1.凝固酶试验●方法：从平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落，移种到TSB/BHI肉汤中，置35℃培养18-24h。