高效液相色谱六通阀原理
高效液相色谱简介及操作
HPLC和经典液相色谱法的比较
3.高效液相色谱法的分类
• 通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色 谱法和凝胶色谱法四大类。
4.如何阅读色谱图？？
tR：保留时间；tM：死时间； ：调整保留时间； W：峰宽
• 定性分析：在同一色谱系统中相同物质具 有相同的保留值 • 定量分析：组分含量与其响应值（峰高或 面积）成正比
2 色谱柱使用的注意事项
• 色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。 • 当分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存（一般 为甲醇）。 • 每天工作结束后用适当的溶剂来清洗柱。
3 其他注意事项
• 未经提取净化的蛋白样品、血样、生物样品绝对禁 止直接进样分析。 • 要注意流动相的脱气。 • 避免使用高粘度的溶剂作为流动相。 • 使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或缓冲液建 议不超过两天，最好每天更换。
（5）色谱柱平衡后，打开检测器（开灯） （6）测定样品 （7）清洗仪器
色谱柱及流路清洗 进样阀清洗 进样针清洗
四、主要注意事项
1 泵使用的注意事项
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防止任何固体微粒进入泵体（用0.22 um或0.45 um 的微孔滤膜过滤） 流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲盐的流 动相不应保留在泵内更不允许留在柱内。 泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运 转一是会使大量空气进入柱内柱床崩塌、也会磨损柱塞、 密封圈，最终产生漏液。 输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力。 流动相应先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量 的稳定性和分析结果。
c. 荧光检测器 (FLD) 只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基 酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定。
液相色谱六通阀工作原理
液相色谱六通阀工作原理
液相色谱六通阀工作原理：液相色谱六通阀是液相色谱仪器中的关键部件，其主要作用是在样品、洗涤、进样、溶剂等多路流体通道之间进行切换和连接，以实现不同流体的分离、混合等操作。
它通常由电磁阀、旋转阀芯、进出口管道等部分组成。
下面介绍一下液相色谱六通阀的工作原理：
样品输入：当六通阀的阀芯旋转到某个特定位置时，样品输入通道与样品输出通道直接相连，样品从样品输入口进入并从样品输出口流出。
洗涤：当将阀芯旋转到另一个位置时，进入洗涤试剂的通道与离开洗涤试剂的通道相连，使洗涤试剂从进口通道进入系统，并从出口通道流出。
进样：通过切换通道，让各个通道之间相互隔离，这样就可以将待分析物进入色谱柱中。
当进样信号到达时，在经过旋转阀芯的特定位置后，样品进入进样装置，然后被推进色谱柱中。
溶剂混合：将溶剂和梯度组分通过六通阀进行混合，从而实现以确定的速率将梯度组分输入到色谱柱中。
根据以上步骤，液相色谱六通阀的工作原理可以简单概括为：通过旋转阀芯改变不同通道之间的连接，实现样品、洗涤试剂、进样、溶剂等流体的切换和连接，从而完成不同的液相色谱分离、混合等操作。
液相色谱仪工作原理
液相色谱仪工作原理一、液相色谱仪－高压输液系统输液系统由贮液罐、过滤器、梯度洗脱装置、高压输液泵、脱气装置等组成。
高压泵是高效液相色谱仪最重要的部件之一。
由于高效液相色谱仪所用色谱柱直径细，固定相粒度小，流动相阻力大，因此，必须借助于高压泵使流动相以较快的速度流过色谱这。
高压泵需要满足以下条件：能提供150－450kg/cm2的压强；流速稳定，流量可以调节；耐腐蚀。
目前所用的高压泵有机械泵和气动放大泵两种。
梯度淋洗装置可以将两种或两种以上的不同极性溶剂，按一定程序连续改变组成，以达到提高分离效果，缩短分离时间的目的。
梯度淋洗的作用与气相色谱中的程序升温装置类似。
（一）贮液罐贮液罐为不锈钢、玻璃或氟塑料制成的容器，容量为1到2L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。
贮液罐可以是一个普通的溶剂瓶，也可以是一个专门设计的储液器。
储液器往往和泵通过管路构成循环系统以便除去溶剂中的气体。
现多数使用溶剂瓶，一般采用耐腐蚀的玻璃瓶或聚四氟乙烯瓶。
贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。
（二）高压输液泵气相色谱由高压钢瓶直接提供动力，高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，是流动相的动力源。
高压输液泵功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。
液相色谱为了获得高柱效，所用色谱柱径较细，所填固定相粒度很小，因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过色谱柱，就需要高压输液泵。
1.对高压输液泵的要求（1）能在高压下连续工作，一般要求耐压40～50MPa·cm2，能在8～24 h连续工作。
（2）输出流量范围宽：分析型填充柱在0.1～-10mL/min内连续调节，制备型填充柱要求在100mL以上。
（3）输出流量稳定，要求无脉冲，流量精度和重复性为0.5%左右。
（4）耐腐蚀，能适合各种有机溶剂、水和缓冲溶液。
手动与自动进样比较
液相色谱自动进样器和手动进样器工作原理之比较对于液相色谱而言，无论是手动进样器或是自动进样器都是用六通阀进样的，只是自动进样的较手动进样器的死体积较大，多了计量泵和一部分联接管线。
一、六通阀原理1.在Load状态，样品从进样针进来到定量环，多余的样品再到废液；来自泵的流动相直接流到色谱柱。
2.在Inject状态，进样位置直接连接至废液，也就是说此时如果有样品进来的话是直接流到废液的；来自泵的流动相经定量环再到色谱柱。
二、手动进样器1、实际流路连接图2、手动进样器工作原理1）Load状态（充样位置）在充样位置，泵直接和柱子联接（孔2和孔3联接），并且针口和样品定量环联接。
至少2到3倍定量环体积（更多，对于更好的精确度要求的）的样品通过针口注入，以便达到好的精度。
样品填入环内，过量的样品通过和孔6联接的排放管排出。
2）Inject状态（进样位置）在进样位置，泵和样品定量环联接（孔1和孔2联接），将全部样品从环冲洗到柱。
针口和排泄管（孔5）联接。
3）整个进样过程中，联接管线并没有任何变动，只是联接的三个弧形槽转动60度。
3、手动进样器使用注意事项1）如下图所示，排泄毛细管出口和针口必需在同一水平面，以防止倒流泄露或产生虹吸。
2)在inject位置的时候，才可以取出手动进样器的进样针，以防止倒吸或产生气泡。
这时候也可以清洗一下进样口。
3）手动进样器的进样量至少要大于2到3倍的定量环的体积，要么进样量要小于定量环体积的一半。
4）应选用液相专用的平头针三、自动进样器1.当针抽完样品，扎进针座的瞬间，进样阀同时切换位置，将样品引入系统，完成进样动作。
2.自动进样器可以设置其洗针，液相自动进样器的洗针，只是把针在洗针瓶里面沾一下，也就是说洗的是针的外部，进样针是死体积的一部分。
气相色谱的进样针洗针是外部和内部一起洗，进样针不是气相色谱死体积的一部分。
3.液相色谱自动进样器可以进行多次吸液。
气相色谱的进样针没有此功能。
高效液相色谱原理
高效液相色谱法（HPLC）一、方法原理1、液相色谱法概述高效液相色谱分析法其工作流程为：高压输液泵将贮液器中的流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导人，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中各组分被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据处理系统记录、处理和保存。
HPLC仪器的基本结构2、高效液相色谱法的特点（HPLC）与经典柱色谱原理相同，是由液体流动相将被分离混合物带入色谱柱中，根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异来进行分离。
由于高压输液泵、高灵敏度检测器和高效固定相的使用，提高了柱效率，降低了检出限，缩短了分析时间。
特点是选择性高、分离效能高、分析速度快的特点。
高沸点有机物的分析、离子型化合物、高分子化合物、热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质，弥补了气相色谱法的不足。
高效液相色谱法与气相色谱法相比，各有所长，互相补充。
如果能用气相色谱法分析的样品，一般不用液相色谱法，因为气相色谱法分析速度更快、更方便、成本更低。
3、高效液相色谱法的固定相和流动相（1）固定相表面多孔型和全多孔型两大类。
（2）流动相（淋洗液）流动相的选择对改善分离效果产生重要的辅助效应。
从实用，选用的流动相具有廉价、易购的特点外，还应满足下列要求：①与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。
②高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。
③与所用的检测器相匹配。
④应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。
⑤具有低的黏度（可减少溶质的传质阻力，提高柱效）和适当低的沸点。
⑥应避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全。
液相色谱法中常用的流动相有正己烷、正庚烷、甲醇、乙腈等。
4、高效液相色谱法的主要类型（1）液—固吸附色谱法①分离原理：基于各组分吸附能力的差异来进行混合物分离的。
②固定相：极性和非极性两种。
极性固定相：硅胶、氧化镁。
高效液相色谱法教学【全】精选全文
例: 流动相极性变化对组分k’的影响
②更换色谱柱（改变N）
措施： a.选择长柱子(N=L/H) b.填料颗粒尽量小 c.低流速(溶质传质阻力小，峰扩展小) d.低的溶剂粘度(提高柱效)
高效液相色谱法
High Performance Liquid
Chromatography （HPLC）
前言:
HPLC是70年代以后发展最 快的一个分析化学分支，现 已成为生化、医学、药物、 化学化工、食品卫生、环保 检测等领域最常用的分离分 析手段。
我国：
开始仅为少数研究实验室拥有， 现很多的生产、研究、质检部门都拥有。 广泛应用于： 质量控制、分析化验、制备分离。 讲课目的：入门 教材：《实用色谱法》（詹益兴 编著） 学习要求：记好笔记，
ⅰ大分子，扩散系数小 ⅱ小分子，扩散系数大
5. 影响分离的因素与提高柱效的途径
• 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，在高效液
相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略 不计，即 H = A + C u
• 降低传质阻力是提高 柱效主要途径。 •气相和液相Ｈ－ｕ区别
§１－４ 分离度 (Rs)
于世林编著)
第一章 高效液相色谱法基本原理 §1－1 概述 一、色谱法
混合物最有效的分离、分析方法。 是一种分离技术。 混合物分离过程：试样中各组分在 固液两相间不断进行着的分配。 一相固定不动，称为固定相。 另一相是携带试样混合物流过固定 相的液体，称为流动相。
液相色谱仪
高效液相色谱仪流程图
(1) 存在着浓度差，产生纵向扩散;
(2) 扩散导致色谱峰变宽，H↑(Ｎ↓)，分离变差; (3) B/u与流速有关：流速↓→ 滞留时间↑→ 扩散↑
waters液相进样六通阀原理
waters液相进样六通阀原理
Waters液相进样六通阀是一种用于液相色谱进样的自动进样器。
它由六个不同功能的通道组成，分别是样品进样口、清洗溶解液进口、样品进口、试剂进口、洗液进口和废液出口。
工作原理如下：
1. 样品进样口：用于加载待分析的样品。
当进样活塞向前运动时，样品被吸入并灌注到进样回路中。
2. 清洗溶解液进口：用于加载清洗溶解液。
当清洗回路活塞向前运动时，清洗溶液被吸入并灌注到样品进样回路中，对样品进行清洗。
3. 样品进口：当样品进口活塞向前运动时，样品被吸入并灌注到色谱柱中。
4. 试剂进口：用于加载试剂。
当试剂进口活塞向前运动时，试剂被吸入并灌注到样品中，进行反应。
5. 洗液进口：用于加载洗液。
当洗液进口活塞向前运动时，洗液被吸入并灌注到样品中，清洗样品。
6. 废液出口：用于排出废液，包括清洗溶解液、洗液等。
通过控制活塞的运动和阀门的开关，可以实现不同液体的加载、灌注和排出操作，以完成液相色谱进样过程。
六通阀基本结构及进样原理
六通阀基本结构及进样原理
六通阀分为两个状态，一个是载样状态，一个是进样状态。
六通阀的基本结构包括定子部分和转子部分。
定子上有六个孔与六通阀的六个气路接口一一对应，即一个孔对应一个气路；转子上则刻了三个槽，将转子放在定子上，定子上相邻的两个孔则通过一个槽连接相通。
六通阀作为进样阀使用时，需要在六通阀上安装定量环，用以对需要分析的样品进行体积取样。
常见的定量环有250μL、500μL和1mL等。
安装定量环之后，按照气路图说明，即可使用六通阀进行气体进样。
以液相色谱仪六通阀进样器为例，其工作原理可分为两步，分别是进样和分析。
进样时，使用泵将流动相溶液从①号压入，使之在液相色谱仪系统中形成稳定的流路；然后，将用进样针取适量样品溶波，经微量进样针从⑤号孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从④号孔放空孔排出，进样即完成。
样品进入定量环后，六通阀进入分析步骤的操作。
将手柄转动，使阀与样品流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相色谱仪色谱柱中进行分离检测分析。
在此操作过程中，要注意手柄的使用。
因为当手柄处于流路和注射之间时，暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。
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高效液相色谱六通阀原理
高效液相色谱六通阀是一种重要的色谱仪器配件，它通过六通阀的旋转来控制溶液的进出和流向，实现样品的进样、洗脱和分离。
六通阀的原理是利用电动或手动控制阀门的位置和方向，使溶液在不同的通道中流动，从而实现不同样品的分析和检测。
在高效液相色谱分析中，六通阀的六个通道分别对应进样口、洗涤液口、两个流动相口和两个收集器口，通过旋转控制不同通道的打开和关闭，可以实现自动进样、流动相切换和收集物分离的操作，大大提高了分析效率和准确性。
同时，六通阀具有结构简单、操作方便、可靠性高等优点，被广泛应用于医学、生物、化工等领域的样品分离和分析。
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