基因突变的检测方法
基因突变检测技术的使用方法
基因突变检测技术的使用方法基因突变检测技术是一种用于检测生物体基因组中发生的突变的技术。
这些突变可能导致一些疾病或者其他遗传性状的变化。
基因突变检测技术在医学、生物学和遗传学等领域都有着广泛的应用，可以帮助研究人员了解基因突变对生物体的影响，也可以帮助医生诊断疾病，选择治疗方案。
1.样本采集：首先需要采集来自样本患者的DNA。
样本可以是血液、唾液、组织等，根据具体实验的需要选择合适的样本。
2.DNA提取：将采集到的样本中的DNA提取出来。
DNA提取是基因检测的第一步，是整个检测流程中最关键的一步。
提取出的DNA需要保持完整性和纯度，以确保后续的检测结果准确可靠。
3.PCR扩增：为了提高检测的灵敏度和特异性，通常需要对目标基因进行PCR扩增。
PCR是一种快速、灵敏的核酸扩增技术，可以将少量的DNA扩增至足够数量进行检测。
4. 基因检测：通过各种基因检测技术，如Sanger测序、PCR-RFLP、聚合酶链式反应（PCR）、序列特异放大（SSCP）等，对样本DNA中的基因序列进行检测。
通过比对样本DNA序列与正常基因序列之间的差异，可以发现是否存在基因突变。
5.数据分析：将检测到的基因序列数据进行比对和分析，确定是否存在突变以及其类型和位置。
数据分析是整个检测流程中最复杂的步骤，需要借助专业的软件和基因数据库进行分析和解读。
6.结果报告：根据数据分析的结果，生成基因突变检测报告，包括样本信息、检测方法、检测结果、结论等内容。
根据检测结果，可以为患者提供个性化的诊断和治疗方案。
总的来说，基因突变检测技术是一项复杂而精密的技术，需要严谨的操作流程和专业的数据分析能力。
在使用基因突变检测技术时，需要结合具体的实验目的和样本类型，选择合适的检测方法和分析工具，以确保检测结果的准确性和可靠性。
随着基因检测技术的不断发展，相信在未来基因突变检测技术将会在医学和生物学领域发挥更加重要的作用。
基因突变的检测和诊断
基因突变的检测和诊断现代医学技术日新月异，基因检测成为近年来备受关注的领域。
基因是生命活动的基础单位，基因发生突变会导致人体功能障碍和疾病的发生。
基因突变的检测和诊断能够发现潜在疾病风险，帮助人们更好地预防和治疗疾病。
1. 基因突变检测的意义基因突变是指基因序列出现改变的现象。
正常情况下，它会编码RNA并转化为蛋白质，而基因突变会导致蛋白质的结构和功能发生改变，从而引起细胞功能的异常和疾病的发生。
基因突变可以影响人的身体健康，研究表明许多常见的遗传疾病和罕见疾病都由于基因突变引起。
基因突变的检测和诊断能够发现潜在风险，有助于预测疾病的发生，并采取措施加以预防和治疗。
2. 基因突变检测的方式目前基因突变检测的方式主要有四种：基因测序、基因芯片、PCR技术和DNA片段检测。
其中基因测序是最常见的一种技术，可以分为全基因组测序、外显子测序、基因组DNA测序、RNA测序等多种方式。
基因芯片是一种基于高密度微阵列技术构建的，可以实现同时检测数百上千种基因突变的方法。
PCR技术可以扩增基因的部分序列，然后检测其序列信息。
DNA片段检测是一种基于PCR技术扩增特定DNA片段进行分析的方法。
3. 基因突变检测的应用基因突变检测已经被广泛应用于疾病的诊断、预测和治疗。
它可以用于遗传病的筛查和诊断，如唐氏综合症、地中海贫血等遗传病的检测。
此外，在临床医学中，基因突变检测也具有一定的指导意义。
医疗工作者可以通过基因突变检测结果，帮助患者制定个性化的治疗方案，提高治疗效果和治愈率。
4. 基因突变检测存在的问题基因突变检测的研究和应用还存在一些问题和挑战。
首先是技术的局限性和不稳定性。
基因突变检测技术的发展仍处于快速变化的阶段，技术参数和标准尚未完全统一。
其次是信息安全问题。
基因数据是一种极其私密的信息，泄露或被滥用将给个人或社会带来严重的风险。
最后是审查机制的缺失。
目前基因检测市场存在一些无资格的机构和产品，需要严格的监管和审查。
基因突变和基因重排的检测方法
基因突变和基因重排的检测方法基因突变和基因重排是影响生命过程的两个关键机制。
突变是指DNA序列发生了错误，而重排则是指基因组中的一段DNA序列被移动或复制到另一个位置。
这些变化会导致有害的影响，如导致癌症、自身免疫性疾病和遗传病等。
因此，检测这些变化变得极其重要，以便及早发现并防止这些疾病的发生。
在过去几十年里，科学家已经开发出了多种基因突变和基因重排的检测方法，其中一些方法在诊断遗传性疾病和癌症等方面证明了非常有效。
下面是一些常见的基因突变和基因重排检测方法。
1. Sanger测序Sanger测序是第一种可靠的DNA测序技术，通过分析DNA序列来检测突变和重排。
将DNA反复复制并添加特定的荧光标记，然后测量不同荧光信号的强度来确定DNA序列。
这种方法可以检测单个基因的突变以及一些基因的重排，并已广泛用于诊断遗传性疾病和癌症等。
2. PCRPCR是另一种常见的基因检测方法，它使用聚合酶链反应技术来扩增DNA片段。
通过扩增目标DNA片段，可以检测基因突变和重排。
PCR可以用于从血液、唾液和口腔黏膜等样本中提取DNA，并且已成为诊断基因突变和重排的主要工具。
3. FISHFISH是一种高度特异性的细胞遗传学方法，可用于检测基因重排。
通过将荧光标记的DNA探针与细胞的染色体配对，科学家可以识别染色体上的重排。
这种方法已被广泛用于癌症分析和遗传诊断等领域。
4. CGHCGH是一种用于检测基因重排的分子遗传学技术。
它可以检测整个基因组上的DNA重排，而不是单个基因。
CGH技术基于比较样品DNA和控制DNA之间的差异，以检测DNA重排的部位和类型。
这种方法已被广泛用于研究人类基因组的变异，并在癌症和遗传性疾病诊断中得到应用。
5. NGSNGS是一种DNA测序方法，可以快速、准确地测定DNA序列。
它通过将样品DNA纳入微型反应器中，然后生成数以百万计的DNA片段。
NGS技术可以同时检测多个基因的突变和重排，并已广泛用于快速检测基因变异。
临床常用基因突变及融合基因检查方法
临床常用基因突变及融合基因检查方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：临床常用基因突变及融合基因检查方法随着基因组学和分子生物学的发展，基因检测技术在临床诊断中的应用日益广泛。
基因突变和融合基因是许多疾病的发生和发展的关键因素，因此对其检测越来越受到重视。
本文将介绍一些临床常用的基因突变及融合基因检查方法，希望能够帮助读者更深入了解这一领域的知识。
1. PCR技术PCR技术是一种常用的基因检测方法，通过扩增特定基因片段，可以检测到基因的突变。
PCR技术具有高灵敏度和高特异性的优点，可以快速、准确地检测基因突变。
在临床诊断中，PCR技术经常用于检测与疾病相关的基因突变，如遗传性疾病、肿瘤等。
2. 高通量测序技术高通量测序技术是目前最流行的基因检测技术之一，可以同时测序大量基因，并快速高效地识别突变。
高通量测序技术具有高灵敏度、高准确性和高通量的优点，可以帮助医生更准确地诊断疾病，并指导个体化治疗方案的制定。
3. 质谱技术质谱技术是一种基于质量-电荷比的物质分析技术，可以用于检测DNA、RNA等生物分子。
质谱技术具有高灵敏度、高分辨率和高准确性的优点，可以用于检测基因突变、基因表达水平等，对于肿瘤的早期诊断和治疗、药物敏感性的评估等方面具有重要的意义。
1. FISH技术FISH技术是一种常用的融合基因检测方法，通过用荧光染料标记特定基因，可以直接观察到基因的融合情况。
FISH技术具有高分辨率、高灵敏度和高特异性的优点，可以帮助医生准确诊断某些特定的融合基因相关的疾病，如慢性髓性白血病、胃肠道间质瘤等。
在临床实践中，基因突变和融合基因的检测对于疾病诊断、治疗和预后评估具有重要的意义。
随着基因检测技术的不断发展和完善，相信在未来会有更多更高效、更精准的检测方法出现，为临床诊断和治疗带来更多的帮助和改善。
希望本文能为读者对基因突变及融合基因检查方法有更深入的了解和认识。
第二篇示例：临床常用基因突变及融合基因检查方法基因突变是指基因组中的某个基因发生了突变，使其序列发生了改变，导致基因的功能发生变化或失去功能。
点突变疾病的常用基因诊断方法
点突变疾病的常用基因诊断方法随着现代医学的发展，基因诊断方法在疾病的早期诊断、风险评估和个体化治疗等方面发挥着重要作用。
对于突变疾病的基因诊断，有一些常用的方法。
1. 基因测序法：基因测序是一种准确地检测目标基因序列的方法。
基因测序分为Sanger测序和高通量测序两种。
Sanger测序是一种经典的测序方法，它通过DNA链延伸和终止反应来确定目标DNA的序列。
目前，高通量测序（Next-generation sequencing, NGS）技术发展迅猛，能够快速测序整个基因组或特定基因的全部序列，提供大量的基因突变信息。
2.直接测序法：直接测序法用于检测已知可能存在突变的基因，通过将目标基因的PCR产物直接测序来确定其序列。
这种方法可以检测出一些特定基因的位点突变，适用于一些单基因突变疾病的诊断。
3. 突变特异引物扩增法：突变特异引物扩增法 (Mutation-specific amplification, MSA) 是一种用于检测已知特定突变的方法。
它通过设计特异引物来扩增仅在特定突变位点产生扩增产物的DNA片段，从而检测特定突变的存在。
4. 限制性片段长度多态性分析：限制性片段长度多态性分析（Restriction fragment length polymorphism, RFLP）是一种常见的突变检测方法。
它利用限制性内切酶特异性切割DNA，根据突变与否改变DNA片段长度，然后通过凝胶电泳进行分离和检测突变。
5. 剪切酶切片段长度多态性分析：剪切酶切片段长度多态性分析（Restriction site length polymorphism, RFLP）是一种常用的突变检测方法。
它通过特定限制酶识别DNA序列，根据突变位点是否改变限制酶切割位点而产生不同片段长度。
6. 点杂合检测法：点杂合检测法（Heteroduplex analysis）是一种通过比较突变和正常基因产生的杂交双链DNA的迁移模式来检测突变的方法。
检测耐药基因突变的金标准
金标准通常指的是在某个领域中被广泛接受和认可的最可靠、最准确的检测方法或标准。
在检测耐药基因突变方面，金标准通常是指能够提供高度准确、可重复性和敏感性的分子生物学方法或测序技术。
对于检测耐药基因突变，一些常见的金标准包括：
1. **基因测序：** 使用高通量测序技术，如全基因组测序或靶向测序，能够全面而准确地检测基因突变。
这种方法通常能够发现单个碱基的变化，并提供详细的遗传信息。
2. **PCR（聚合酶链式反应）：** 特异性PCR方法能够扩增目标基因片段，然后通过分析PCR产物来检测耐药基因的突变。
这可以是定性或定量的，具体取决于实验设计。
3. **质谱法：** 质谱法可以用于检测特定的蛋白质或核酸序列，因此可以用于耐药基因的检测。
质谱法的高分辨率和准确性使其成为一种可靠的金标准。
需要注意的是，金标准可能会因特定应用领域、实验条件和技术的不同而有所差异。
在选择适当的金标准时，应该考虑到实验室的设备和专业知识，以确保选择的方法在具体情境中能够提供最
可靠的结果。
此外，不同的领域和学科领域可能会有不同的金标准。
人pole基因突变的新型测定方法及试剂与流程
人pole基因突变的新型测定方法及试剂与流程【原创版4篇】《人pole基因突变的新型测定方法及试剂与流程》篇1目前，关于人pole 基因突变的新型测定方法、试剂及流程尚处于研究阶段。
pole 基因突变与多种疾病相关，如癌症、自身免疫性疾病等。
然而，现有的检测方法在灵敏度、特异性和精确度等方面仍有待提高。
因此，研究人员正在努力开发更先进、高效的检测方法。
在新型测定方法的研究中，可能包括以下几种技术：1. 高通量测序（NGS）：通过检测基因组DNA 序列，发现pole 基因的突变。
这种方法具有高灵敏度和高通量，可同时检测多个样本。
2. 基因芯片：利用基因芯片对pole 基因进行检测，具有快速、简便、高灵敏度等优点。
3. 质谱分析：通过质谱分析技术，检测pole 基因突变导致的蛋白质表达异常。
这种方法具有高精度，但操作较为复杂。
试剂方面，可能包括：1. 核酸提取试剂盒：从样本中提取DNA，进行后续检测。
2. 聚合酶链反应（PCR）试剂盒：对pole 基因的特定区域进行扩增，以便进行后续检测。
3. 基因测序试剂盒：用于对pole 基因进行高通量测序。
检测流程可能包括以下步骤：1. 收集样本：获取患者血液、组织等样本。
2. 核酸提取：使用核酸提取试剂盒从样本中提取DNA。
3. PCR 扩增：使用PCR 试剂盒对pole 基因的特定区域进行扩增。
4. 高通量测序：将扩增后的DNA 进行高通量测序，发现pole 基因突变。
5. 数据分析：对测序结果进行生物信息学分析，确认pole 基因突变的类型和位点。
6. 质谱分析：对突变导致的蛋白质表达异常进行质谱分析，以进一步确认突变的功能影响。
7. 结果解读：根据检测结果，为患者提供诊断和治疗建议。
《人pole基因突变的新型测定方法及试剂与流程》篇2目前，关于人pole 基因突变的新型测定方法及试剂尚处于研究阶段。
然而，已经出现了一些用于检测基因突变的常见方法，例如Sanger 测序、高通量测序（如NGS）等。
基因突变与遗传疾病的诊断方法
基因突变与遗传疾病的诊断方法遗传疾病是由基因突变引起的疾病，其对人类健康和生命质量产生了严重的影响。
随着科学技术的发展，基因突变的诊断方法也得到了极大的进步和发展。
本文将介绍一些常见的基因突变与遗传疾病的诊断方法，以及它们在临床实践中的应用。
一、核酸序列分析核酸序列分析是一种常见的基因突变诊断方法。
它通过对疾病相关基因的DNA序列进行测定和分析，来确定是否存在基因突变。
这种方法的优势在于可以准确地验证基因突变的类型和位置，从而为疾病的早期诊断提供重要依据。
目前，核酸序列分析已经在许多遗传疾病的诊断中得到了广泛应用。
二、基因组测序基因组测序是一种高通量测序技术，可以对个体的整个基因组进行测序和分析。
通过对基因组的测序，可以发现遗传疾病相关基因的突变情况，从而为疾病的诊断和治疗提供重要的信息。
基因组测序技术的不断发展，使得大规模基因突变筛查成为可能，为遗传疾病的早期诊断和个体化治疗打下了坚实基础。
三、PCR（聚合酶链式反应）PCR是一种高效、敏感的DNA扩增技术，被广泛应用于基因突变的检测与诊断。
通过PCR技术，可以在短时间内扩增出特定基因片段，从而检测其中的突变情况。
PCR技术的优势在于可以快速、准确地检测出基因的突变，并且可以在微量样本中进行分析。
因此，PCR技术成为了遗传疾病诊断中常用的方法之一。
四、扩增基因位点分析扩增基因位点分析是一种针对已知突变位点进行检测的方法。
通过引物的设计和PCR扩增的方式，可以精确地筛查出特定位点中的突变情况。
扩增基因位点分析的优势在于可以快速、准确地检测出特定基因位点的突变，为遗传疾病的诊断提供了可靠的依据。
综上所述，基因突变与遗传疾病的诊断方法包括核酸序列分析、基因组测序、PCR以及扩增基因位点分析等。
这些方法在临床实践中的应用为遗传疾病的早期诊断和个体化治疗提供了重要的技术支持。
随着科学技术的不断进步，相信未来基因突变的诊断方法还会得到更加精确和高效的发展，为保障人类健康做出更大的贡献。
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基因突变的检测方法基因突变的检测方法基因突变的研已成为当今生命科学研究的热点之一，检测方法也随之迅速发展。
人类细胞癌基因的突变类型已如上所述，对于基因突变的检测，1985以前，利用Southern印迹法，可以筛选出基因的缺失、插入和移码重组等突变形式。
对于用该法法不能检测的突变，只能应用复杂费时的DNA序列测定分析法。
多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术是突变研究中的最重大进展，使基因突变检测技术有了长足的发展，目前几乎所有的基因突变检测的分子诊断技术都是建立于PCR的基础之上，并且由PCR衍生出的新方法不断出现，目前已达二十余种，自动化程度也愈来愈高，分析时间大大缩短，分析结果的准确性也有很大很提高。
其中包括单链构象多态性（single-strand comformational polymorphism,SSCP）和异源双链分析法（heteroduplex analysis,HA）。
下面分别介绍几种PCR衍生技术及经典突变检测方法，可根据检测目的和实验室条件选择时参考。
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。
其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。
由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。
用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能会存在1％的假阳性率。
应用PCR-SSCP法应注意电泳的最佳条件，一般突变类型对检测的灵敏度无大的影响，同时该法不能测定突变的准确位点，还需通过序列分析来确定。
Sarkar等认为对于大于200bp的片段，用其RNA分子来做SSCP会提高其录敏度。
应用PCR-SSCP检测点突变已见报道于人类大部分的肿瘤组织或细胞，如乳腺癌、食管癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌等。
检测的基因包括多种癌基因及抑癌基因，也是检测抑癌基因p53突变最常用的方法，仅检测第5-8外显子即可发现85％以上的p53基因突变。
由于该法简便快速，特别适合大样本基因突变研究的筛选工作。
异源双链分析法（HA） HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一野生型DNA双链。
由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起，在非变性凝胶中电泳时，会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。
该法与SSCP相似，所不同的是SSCP分离的是单链DNA，HA法分离的是双链DNA，也只适合于小片段的分析。
但HA对一些不能用SSCP 检出的突变有互补作用，两者结合使用，可使突变检出率提高到近100％。
突变体富集PCR法（mutant-enriched PCR）本法的基本原理是利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点，如K-ras基因第12密码子的BstNI位点，第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。
用链续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段，在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段，野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增，而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物的富集。
变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradinent electrophoresis,DGGE） DGGE法分析PCR 产物，如果突变发生在最先解链的DNA区域，检出率可达100％，检测片段可达1kb，最适围为100bp-500bp。
基本原理基于当双链DNA在变性梯度凝胶中进行到与DNA变性湿度一致的凝胶位置时，DNA发生部分解链，电泳适移率下降，当解链的DNA链中有一个碱基改变时，会在不同的时间发生解链，因影响电泳速度变化的程而被分离。
由于本法是利用温度和梯度凝胶迁移率来检测，需要一套专用的电泳装置，合成的PCR引物最好在5`末端加一段40bp-50bp的GC夹，以利于检测发生于高熔点区的突变。
在DGGE的基础上，又发展了用湿度梯度代替化学变性剂的TGGE法（温度梯度凝胶电泳temperature gradient gelelectrophoresis,TGGE）。
DGGE和TGGE均有商品化的电泳装置，该法一经建立，操作也较简便，适合于大样本的检测筛选。
化学切割错配法（chemical cleavage of mismatch,CCM）CCM为在Maxam-Gilbert测序法的基础上发展的一项检测突变的技术，其检测突变的准确性可与DNA测序相仿。
其基本原理为将待测含DNA片段与相应的野生型DNA片段或DNA和RNA片段混俣变性杂交，在异源杂合的双链核酸分子中，错配的C能被羟胺或哌啶切割，错配的T能被四氧化饿切割，经变性凝胶电泳即可确定是否存在突变。
该法检出率很高，也是检片段最长的方法，已有报功检测了片段，如果同时对正、反义链进行分析，检出率可达100％。
应用荧光检测系统可增强敏感度，可检测到10个细胞中的1个突变细胞。
该法中的化学试剂有毒，又发展了碳二亚胺检测法（catodiimide,CDI）,CDI为无毒物质，也可检测大片段DNA的点突变。
等位基因特异性寡核苷酸分析法（allele-specific oligonucleotide,ASO） ASO为一种以杂交为基础对已知突变的检测技术。
以PCR和ASO相结合，设计一段20bp左右的寡核苷酸片段，其中包含了发生突变的部位，以此为探针，与固定在膜上的经PCR拉增的样品DNA杂交。
可以用各种突变类型的寡核苷酸探针，同时以野生型探针为对照，如出现阳性杂交带，则表运河样品中存在与该ASO探针相应的点突变，ASO需严格控制杂交条件和设置标准对照避免假阳性和假阴性。
目前已有商品化的检测盒检测部分癌基因ASO突变。
DNA芯片技术（DNA chip） DNA芯片技术是90年代后发展的一项DNA分析新技术，它集合了集成电路计算机、激光共聚焦扫描、荧光标记探针和DNA合成等先进技术。
可用于基因定位、DNA测序、物理图谱和遗传图谱的构建等。
在基因突变检测方面DNA芯片也有广阔的前景，其基本原理为将许多已知序列的寡核苷酸DNA排列在1块集成电路板上，彼此之间重叠1个碱基，并覆盖全部所需检测的基因，将荧光标记的正常DNA和突变DNA发别与2块DNA 芯片杂交，由于至少存在1个碱基的差异，正常和突变的DNA将会得到不同的杂交图谱，经过共聚集显微镜分别检测两种DNA分子产生的荧光信号，即可确定是否存在突变，该方法快速简单、片动化程度高，具有很大的发展潜力，将在基因突变检测中心发挥非常重要的作用。
连接酶链反应（ligase chain reaction,LCR）与其他核酸扩增技术比较，其最大特点为可准确区分基因序列中单个基因突变，由Landegree于1988年首次应用于镰刀奖细胞贫血的分子诊断。
LCR是以DNA连接酶将某一DNA链的5`-磷酸与另一相邻链3`-羟基连接为基础，应用两对互补的引物，双链DNA经加热变性后，两对引物分别与模板复性，若完全互补，则在连接酶的作用下，使相邻两引物的5`-磷酸与3`-羟基形成磷酸二酯二酯键而连接，前一次的连接产物又作为下一次循环反应的模板，如果配对的碱基存在突变则不能连接和扩增。
LCR产物检测最初是通过这32p标记上游引物3`未端，经变性凝胶电泳分离后放射自显影加以鉴定，其检测敏感性达到200个靶分子。
也可设计1个横跨两引物的检测探针，用它与LCR产物进行杂交检测。
近年有应用荧光素、地高辛等非核素标记方法。
Batt在1994年发展了一种更为简的方法，好微孔板夹心杂交法。
由于LCR的快速、特蛋和敏感的特性，以及能检测单个碱基突变的能力，因此被应用于肿瘤基因突变的分子诊断，并与PCR结合用以提高其敏感性。
等位基因特异性扩增法（Allele-specific amplification,ASA）ASA于1989年建立，是PCR 技术应用的发展，也称扩增阻碍突变系统（amplification refractory mutation system,ARMS）、等位基因特性PCR（allele-specific PCR,ASPCR）等，用于对已知突变基因进行检测。
该法通过设计两个5`端引物，一个与正常DNA互补，一个与突变DNA互补，对于纯合性突变，分别加入这两种引物及3`端引物进行两个平行PCR，吸有与突变DNA完互补的引物才可延伸并得到PCR扩增产物。
如果错配位于引物的3`端则导致PCR不能延伸，则称为ARMS。
ARMS和ASPCR借鉴多重PCR原理，可在同一系统中同时检测两种或多种等位基因突变位点。
ASA法的检出率依赖于反应条件的优化和可能发生的引物与靶DNA有氏配时错配延伸，特别是当错配碱基为G：T时，这时可通过调整实验条件如引物靶DNA，Taq DNA 聚合酶的浓度等来得高瓜在特异性。
在反应体系中加入甲酰胺也可减少非特异性扩增。
还可通过在引物3`端的第二个碱基引入一个错配碱基，使之与模板之间形成双重错配以阻止错误延伸。
RNA酶A切割法（RNase A cleavage）在一定条件下，氨基源双链核酸分子RNA：RNA或RNA：DNA中的错配碱基可被RNaseA切割，切割产物可通过变性凝胶电泳分离。
当RNA探针上错配的碱基为嘌呤时，RNaseA在错配处的切割效率很低，甚至不切割，而当错配碱基为嘧啶时，则其切割效率较高。
故如果仅分析被检DNA的一个条链，突变检出率只有30％，如同时分析正义和反义二条链，检出率可达70％。
该法需要制备RNA探针，增加了操作的复杂性，但可用于1-2kb的大片段进行检测，并能确定突变位点。
于这些优越性，它仍被作为一种经典方法用于对未知突变进行分析。
染色体原位杂交（In situ hybridization of chromosome）染色体发现距今已有150多年的历史，染色体检测被广泛用于动、植物及人类的细胞遗传学研究，随着染色体分技术和分子生物学技术的发展。
染色体研究范围也不断扩大，特别是用于肿瘤分子诊断。
肿瘤细胞的染色体变化是一非常普遍的现象，可分为原发和继发两类。
在肿瘤形成的生物学基础方面，原发性的染色体变化与引起肿瘤的直接原因有关，肿瘤细胞中可以发现各种形式的染色体畸变，如缺失、重复、易位、重排、单体断裂及核内复制等；继发性变化主要是肿瘤细胞核型的改变。
染色体的检测对于肿瘤的诊断、鉴别诊断、生物学行为判别等方面都重要意义。
染色体的检测方法进展很快，检测的精确率也不断提高，这里主要介绍荧光原位杂交和PRINS 法。