实验样品采集运输保存方法
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1. RNA实验样品采集、保存方法
1.1 使用范围及样品量
类别:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Array& PCR Service
样本量:
样本样本量
动物组织样品50-100mg
哺乳动物培养细胞样品(悬浮细胞)1*107个
哺乳动物培养细胞样品(贴壁细胞)15cm2
植物组织样品100mg-1g,根据植物不同部位的组织决定组
织需要量,尽可能多些,但不必超过1g
1.2 动物组织样品
1.2.1 新鲜组织样品
A. 使用RNAlater试剂
取新鲜组织(注:动物死亡后尽快在10min内取材),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,所用组织必须切至厚度在0.5cm一下,然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管(或冻存管)中。
4度孵育过夜,此时样品管需要横臵以便组织块充分接触到RNAlater,然后转入-20中保存,样品在-20不会冻结,但溶液中可能会有一些晶体出现,这并不影响后续的RNA抽提。
B. 使用Trizol试剂
取新鲜组织(1min以内),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,最好冰上进行操作。
匀浆的裂解液4度短期保存(1month),-20或者-70度长期保存。
1.2.2 冻存组织
生物体死亡后尽快(10min以内)切取新鲜组织,并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块;培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞,弃去上清液。
细胞沉淀(1*107个)中加入1ml Trizol裂解液
反复吸打几次后,目视可见细胞层溶液完全
-70保存
1.3 贴壁细胞
从培养容器中吸出并弃去培养液
培养瓶直接加入Trizol试剂,Trizol用量与细胞贴壁面积有关,15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。
反复吸打几次后,目视可见细胞层溶解完全。
-70度保存。
1.4 植物组织样品
准确取得所需新鲜组织后,如有必要可用PBS清洗干净,将所用组织切碎,装入冻存管中或者用锡箔包裹好。
立即投入液氮中保存。
2.血液类样品采集、保存方法
2.1 适用范围及样品量
全血/血细胞:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Array& PCR Service
血清/血浆:Microarray Service;PCR Array& PCR Service
样本量
样本样本量
全血1-2ml (即每份样品2-4管)
血浆1-2ml (即每份样品2-4管)
血清1-2ml (即每份样品2-4管)
在样品保存及转移过程中,应避免反复冻融样品
一般建议用新鲜的血液标本进行试验,如果标本已经保存较长时间,请先联系技术部门确认样本是否适合进行实验。
2.2 全血
采集好全血,转移至单独的冻存管中,按照每400-500ul/管分装。
短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。
2.3 血浆
使用抗凝管采集全血,并尽快进行血浆分离:1000g 离心10min,分离血浆和细胞组分(抗凝剂一定不能是肝素)
将采集好的血浆转移至单独的冻存管中,按照每400-500ul/管分装。
短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。
2.4 血清
使用凝血管采集全血,采血后两小时内分离血清;
采血后轻轻倒转采血管混合4-5次,直立臵于室温待血液完全凝固,1000g离心10min,分离血清。
将采集好的血清转移至单独的冻存管,按照每400-500ul/管分装。
短期保存可以再-20度或者-70度冰箱;长期保存放入液氮。
2.5从全血中提取白细胞
2.5.1 抗凝血收集
取无菌的15ml离心管一只,首先用EDTA或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁,使离心管壁完全接触到该溶液,而后在管底留下少许该溶液(200ul左右)收集5ml全血后迅速用枪混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分血液凝固。
2.5.2 全血白细胞分离(以3ml抗凝血为例说明)
向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血,而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖,温柔的颠倒混匀数下,不要剧烈震荡
将离心管臵于室温放臵10min
将离心管以2500g 离心5min
弃上清,尽可能将上清吸净,勿吸到管底白色斑块细胞
弃去上清后在管底出现可见的白色斑块,此斑块为富集的白细胞。如果裂解不完全加入1mlPBS缓冲液重悬,然后重复第一步
充分裂解后,加入1mlPBS缓冲液清洗一次2500g离心5min
弃上清,可获得血液样品中全部白细胞的80%以上,而后可加入适量的Trizol,用移液枪充分吹打,混匀,直至出现清亮不粘稠的液体。
而后可以将以上的Trizol试剂存在生物冰(0-4度)寄送,或者直接干冰寄送。
3.DNA实验样品采集、保存方法
3.1 适用范围及样品量
适用范围:Microarray Service;Sequencing Service; PCR Service
样品量
样本样本量
细胞1*107个
组织50-100mg
3.2 悬浮细胞
约1*107个细胞,低速离心收集,弃去培养液;
加入2-5ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中;
低速离心沉淀细胞,弃去PBS;
放入-70度冰箱保存。
对于ChIP-chip实验为了获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品取107个悬浮细胞低速离心,用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中;
加入270ul 37%的甲醛,轻轻混匀,室温孵育10min;该步骤最好在通风橱完成
加入1ml 1.25M的甘氨酸,轻轻混匀,室温孵育5min,中和甲醛;
2000g离心5min,弃上清,用预冷的PBS/EDTA 洗细胞两遍
2000g 离心5min,弃上清;
收集到的样品-80度冻存。
3.3 贴壁细胞
约1*107个贴壁细胞,胰酶消化;
加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去液体;
加入2-5 ml PBS 悬浮细胞,转入小离心管中;
低速离心沉淀细胞,弃去PBS
放入-70度冰箱保存。
对于ChIP-chip实验为了获得理想结果,建议根据下述方法处理及保存贴壁细胞样品3.4组织
采集新鲜组织(生物体死亡后10min内取材并保存好)
组织块以PBS或生理盐水清洗干净,切为小块
放入液氮或-70度冰箱保存
4.蛋白实验样品采集、保存方法