对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析
用高效液相色谱法测定对羟基苯甲酸酯类含量
１ ２ ７ 标 准工作溶液 ：分别 吸取 上述 贮备液 １ ｍ ，用 ５ ％乙醇溶液 ．． ＯＬ ０
定容至 １ Ｏ Ｌ，此溶液浓度 为 １ ０ １ ｇ ｍ 。再分别吸取 ０ Ｏｍ Ｏ ／ Ｌ ２ 、５ ０ １ 、 、１ 、 ５ ２ｍ ０ Ｌ，用 ５ ％乙醇 溶液 定容至 １ Ｏ Ｌ，标 准工作溶液浓 度分别为 ０ ０ ０ｍ 、５ 、
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趁 验 方 法
紫 定
甲
的
类
效 液相 色谱 法 测定
基 苯 甲 酸 酯 类 合 星
口 陈枚 刘 洋 ／ 文
对 羟 基 苯 甲 酸 酯 即 尼 泊 金 酯 ， 主 要 品 种 有 对 羟 基 苯 甲酸 甲酯 、对 羟 基 苯 甲酸 乙酯 、 １ 实 验 部 分 ． １ １ 方 法 ．
优级纯
１２ ２ 乙醇溶液 ５ ％ ．． ０
Ｈ Ｌ ＰＣ
费 时 ，且 样 品 处理 不 当 ，对 羟 基 苯 甲酸 酯就 不 能 被 完 全 提 取 ，影 响 检 测 结 果 的准 确 性 。
另外 ，该 方法 采 用 气相 色 谱 法 ， 仪器 条 件较
１ ２ ４ 盐酸溶 液 １ ．． ：１ １ ． 标准物质 ：对 羟基苯 甲酸 乙酯 、对 羟基苯 甲酸丙酯 ；纯度 ≥ ２ ５
１４ 样 品处 理 ．
次取平均值 。 以对羟 基苯 甲酸酯浓度 为横
坐 标 ， 以 峰 面 积 为 纵 坐 标 ， 得 对 羟 基 苯 甲
酸 乙酯回归方程为 ｙ Ｏ ０ ８ ６ 一 ． ２ ，其 ＝ ．０９ ｘ０４ ２
相 关系 数 为 ０ ９ ９ 对 羟 基 苯 甲 酸 丙 酯 回 归 ．９８ 方 程 为 ｙ Ｏ ０ ９ ５ 一 ． ９ ，其 相 关 系 数 为 ＝．０ ７ｘ０ ３５
对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析
保留时间tR，并填于下表中：
组分名称 保留时间tR /min
3 ．测量未知试样色谱图上各组分的峰高 h ，半峰宽 Y1/2 ， 计算各组分的峰面积A及其含量wi，并将数据列于下表中：
出峰 顺序 组分 峰高 h/mm 半峰宽 Y1/2/mm 峰面积 含量 w i%
A
103.6 注意事项
（1）严格按照规定使用仪器，防止因错误操作造成
作流动相。
由于在一定的实验条件下，酯类各组分的保留值保 持恒定，因此在同样条件下，将测得的未知物的各组分 保留时间，与已知纯酯类备组分的保留时间进行对照， 即可确定未知物中各组分存在与否。
本实验采用归一化法定量，归一化法使用条件及计 算公式，与气相色谱分析法相同。而对羟基苯甲酸酯类 混合物属同系物，具有相同的生色团和助色团，因此它 们在紫外光度检测器上具有相近的校正因子，可用下式：
wi
ห้องสมุดไป่ตู้Ai
A
i 1
n
100 %
i
103.3 实验条件
溶液的配制
(1)标准贮备液：
配制浓度均为1000 μ g·mL-1的上 述四种酯类化合物的甲醇溶液
四只100 mL容 量瓶
(2)标准操作液：
上述四种 标准贮备液 配制浓度均为10μ g·mL-1的 四种酯类化合物的甲醇溶液 四只10 mL容 量瓶
（3）高效液相色谱分析的流动相为何要脱气，不脱
气对实验有何妨碍？
103.8 参考答案
（1）色谱定量分析采用归一化法定量有何优缺点 ?本
实验为什么可以不用相对质量校正因子?
答：归一化法的优点是：简便、准确，当操作条件 如进样量、流速等变化时，对结果影响小。但若试样中 的组分不能全部出峰，则不能应用此法。本实验样品为 同系物，若各组分的相对校正因子值相近，所以可以略
食品中对羟基苯甲酸酯类的检测
食品中对羟基苯甲酸酯类的检测摘要：文章采用超声提取-高效液相色谱法同时测定食品中3种对羟基苯甲酸酯（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯）含量的方法。
对羟基苯甲酸酯类属于防腐剂，按gb/t5009.31-2003国家推荐方法检测[1]，样品提取比较繁琐、费时，且回收效果欠佳。
本文利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济、灵敏，又能保证一定精度的测定方法。
本方法加标回收率在86.08%～112.71%之间，线性系数r>0.9998，检出限可达0.10ug/ml，分析时间短，完全能够满足分析要求，可广泛应用于食品中对羟基苯甲酸酯类检测分析。
关键词：对羟基苯甲酸酯类；高效液相色谱法中图分类号：o657.7+2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0064-21 实验部分1.1 仪器和试剂1.1.1 仪器 shimadzu lc 10vp plus高效液相色谱系统（日本shimadzu公司），配紫外检测器及lc solution色谱工作站；分析天平：感量0.1mg；氮吹仪：美国organomation n-evap112型；均质机：ikar werke t25型均质机；溶剂过滤装置；0.45μm和0.22μm过滤膜和过滤头；milli-q超纯水机。
1.1.2 试剂甲醇、乙腈为hplc级；乙醇为分析纯；水为超纯水。
标准品：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯，纯度为99.0%，美国进口，购于上海安谱。
1.2 标准溶液的配制[2]标准贮备液：精密称取三种标准物质0.05g，用无水乙醇溶解并定容于50ml容量瓶中，配制成浓度为1mg/ml的标准贮备液，贮于4℃冰箱中备用。
标准使用液：用刻度吸管准确吸取三种标准贮备液，根据需要用无水乙醇配制成不同浓度的标准溶液系列，待用。
1.3 色谱条件色谱柱：diamonsil c18，粒度5μm，4.6mm×250mm（id×l）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；进样量：20 μl；流动相：水-乙腈（体积比为45：55）；柱温：室温。
高效液相色谱法测定酱腌菜中对羟基苯甲酸酯
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｐ —ｈｙ ｄｒ ０ ｘ ｙ ｂ ｅ ｎｚ ０ ｉ ｃ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｓ
ｉ ｎ ｐ ｉ ｃ ｋ ｌ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｓ ａ ｕ ｅ ｒ ｋ ｒ ａ ｕ ｔ ｓ ｂ ｙ ＨＰ ＬＣ
ＺＨＡＯ Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ—ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ Ｚ ｈ ｏ ｕ ｋ ｏ ｕ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ，Ｚ ｈ ｏ ｕ ｋ ｏ ｕ ，Ｈｅ ｎ ａ ｎ ４ ６ ６ ０ ０ ０，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
摘要： 目的 建立高效液相色谱法测定酱腌菜中对羟基苯甲酸酯的检测方法。方法 样品经酸化 、 甲醇 一 水溶
液提取 ， 采用 高效 液相 色 谱 仪 Ｃ １ ８柱 分离 ， 紫 外 检 测器 测 定 。结果 标 准 曲 线线 性 范 围 ： ２ ． ０～ｌ Ｏ ０ ￣ ｇ ／ ｍ ｌ ， ｒ ：
ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｒ ｅ ｖ ｅ ａ ｌ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ａ ｓ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ， ｒ ａ ｐ ｉ ｄ， ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ ｌ Ｏ Ｗ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ｉ ｍｉ ｔ ， ｉ ｔ ｗ ａ ｓ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｏｒ ｆ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ －
对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析
大
学
3．测量未知试样色谱图上各组分的峰高h，半峰宽Y1/2，
通 用
计算各组分的峰面积A及其含量wi，并将数据列于下表中：
化 学
实
验
出峰 顺序
组分
峰高
h/mm
半峰宽
Y1/2/mm
峰面积
A
含量
wi%
技 术
7/13
在线答疑： wy-fxhx@ lhfdlx@
对 反羟 相基 高苯 效甲 液酸 相酯 色类 谱混 分合 析物
的
大
学
通
103.6 注意事项
用
化
（1）严格按照规定使用仪器，防止因错误操作造成 学
实
仪器损坏。
验
技
（2）流动相使用前应用微滤膜过滤并充分脱气。
术
（3）样品溶液若不清澈透明，应用微滤膜过滤。
8/13
（4）实验结束后，应冲洗色谱柱30 min以上。
对 反羟
相基
高苯
效甲
液酸
相酯
色类
谱混
分合
析物
的
在线答疑： wy-fxhx@ lhfdlx@
四只10 mL容 量瓶
混匀 备用
对 反羟 相基 高苯 效甲 液酸 相酯 色类 谱混 分合 析物
的
大
色谱条件：
学
(1)色谱柱
长25 cm、内径3 mm 装填C-18烷基键合相
通 用 化
粒度为10 μm的固定相
学
实
验
(2)流动相
甲醇︰水=55︰45流量
技
1 mL·min-1
术
4/13
(3)检测器
紫外光度检测器检测波长
的
在线答疑： wy-fxhx@ lhfdlx@
食品中对羟基苯甲酸酯类的测定 高效液相色谱法
食品中对羟基苯甲酸酯类的测定高效液相色谱法1 范围本标准适用于酱油、醋、果酱、糕点、腌制品、果酒及饮料等食品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。
本标准检出限：对羟基苯甲酸甲酯：1.8 mg/kg；对羟基苯甲酸乙酯：1.2 mg/kg；对羟基苯甲酸丙酯：0.9 mg/kg；对羟基苯甲酸丁酯：1.3 mg/kg。
2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 原理试样用乙醇超声波提取，取上清液过滤，以高效液相色谱法分离，二极管或紫外检测器检测，外标法定量。
4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲醇（色谱纯）。
4.2 乙酸铵（分析纯）。
4.3 20 mmol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54 g乙酸铵（4.2）用水定容至1000 ml，过0.45μm 滤膜。
4.4 无水乙醇（分析纯）。
4.5 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯：99 %以上。
4.6 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准储备溶液：准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯各0.050 g于50 mL容量瓶中，用甲醇（4.1）稀释至刻度，该溶液每毫升相当于1 mg的对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。
4.7 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准工作溶液：将混合标准溶液用甲醇（4.1）依次稀释成1.0 μg/ml、10.0 μg/ml、25.0 μg/ml、50.0 μg/ml、100.0 μg/ml的系列标准溶液，使用前配制。
高效液相色谱串联质谱测定鱼肉中2种对羟基苯甲酸酯类化合物
高效液相色谱串联质谱测定鱼肉中2种对羟基苯甲酸酯类化合物作者：毛慧悦来源：《科学大众》2018年第12期摘; ;要：文章应用QuEChERS-高效液相色谱串联质谱技术，建立了鱼肉中2种对羟基苯甲酸酯类化合物（对羟基苯甲酸甲酯MeP和对羟基苯甲酸乙酯EtP）的检测方法。
样品经乙腈萃取及吸附剂净化后，以高效液相色谱串联质谱进行定性和定量分析。
方法验证结果如下：MeP和EtP在1.0～200 μg/L的线性范围内，显示良好的线性关系，相关系数分别为0.999 7和0.997 3。
在加标水平为20 ng/g时，MeP和EtP的加标回收率分别为112.78%和95.07%;检出限分别为1.10 ng/g和0.64 ng/g。
关键词：QuEChERS;液质联用;鱼肉;对羟基苯甲酸酯类化合物对羟基苯甲酸酯类是对羟基苯甲酸的酯类衍生物，其中，使用最广泛的是对羟基苯甲酸甲酯（Methyl Parahydroxybenzoats，MeP）和对羟基苯甲酸乙酯（Ethyl P-hydroxybenzoate，EtP），常作为辅料添加在药物中，防止微生物污染以及药物有效成分的分解[1]，由于成本低、具有广谱抗菌活性和相对安全性，较之其他的防腐剂而言是更理想的选择[2]。
然而，有研究表明对羟基苯甲酸酯可能存在一定的毒副作用。
一些体内实验表明，暴露于对羟基苯甲酸酯会增加小鼠子宫的重量，减少雄性啮齿动物的睾丸激素分泌并改变其生殖系统[3]。
由于在日常生活中的大量使用，大量文献报道在环境中检测到了一定质量浓度的MeP和EtP[4-7]，MeP和EtP能随着水体、植物等通过渗透和食物链等方式富集到鱼体内，鱼作为人类最重要的蛋白质来源之一，其污染情况与人类健康息息相关，需要对鱼肉进行检测。
本研究采用乙腈提取，PSA和C18净化及液相色谱串联质谱法检测，建立了同步分析鱼肉中MeP和EtP的方法，并进行了方法验证。
1; ; 实验部分1.1; 主要仪器与试剂Agilent 1260型高效液相色谱仪，配有Agilent 6460质谱检测器（ESI源）;UPC-Ⅱ-10T型纯水仪，中国;HYQ-3110型涡旋混匀器，中国;MeP（纯度99%）和EtP（纯度99%）购自中国Macklin公司;氘代对羟基苯甲酸甲酯（MeP-d4）。
实验十一 对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法、GC---白酒中酒精度的测定
实验报告课程名称：环境监测实验实验类型：综合实验实验项目名称：对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法、GC---白酒中酒精度的测定实验地点：环资B座实验日期：2018年12月06日一、实验目的和要求1.掌握HPLC的保留值定性方法与归一法定量2.熟悉液相色谱仪的操作过程二、实验内容和原理<对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法>1.高效液相色谱HPLC：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广。
其组成包含“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。
2.测定原理：在一定的实验条件下，组分的保留值保持恒定，测得的来知物的各纽分保留时间，与已知纯物质各组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各纽分存在与否。
这种利用纯物质对照进行定性的方法，适用于来源已知。
且组分简单的混合物。
3.归一法定量：要求试样中的各个组分都能得到完全分离。
并且在色谱图上应都能出峰，计算公式:c1=fiAi/ΣfiAi*100。
因为对羟基苯甲酸酯类属于同系物，它们在紫外光度检测器上具有相同的校正因子，故上式可简化为: c1=Ai/ΣAi*100< GC---白酒中酒精度的测定 >1. 气相色谱：气相色谱（gas chromatography 简称GC）是指用气体作为流动相的色谱法。
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对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析液相色谱分析是一种常用的分离和定量化合物的方法。
在对羟基苯甲酸酯类混合物进行液相色谱分析时，需要选择合适的色谱柱、流动相和检测方法，以实现有效的分离和定量。
首先，选择合适的色谱柱非常重要。
对于羟基苯甲酸酯类混合物的分析，可以选择反相色谱柱。
反相色谱柱具有较好的选择性和分离能力，可以有效分离羟基苯甲酸酯类化合物。
在选择色谱柱时，需要考虑样品的性质、分析目标以及分离需求。
其次，选择合适的流动相也非常重要。
在反相色谱中，流动相通常是由有机溶剂和水组成的混合物。
不同的羟基苯甲酸酯类化合物对流动相的溶解度和解离常数有所不同，因此需要根据样品的特性来选择合适的流动相。
通常情况下，可以通过尝试不同比例的有机溶剂和水来找到合适的流动相条件。
同时，还可以探索其他添加剂如缓冲剂、pH调节剂来改善分离效果。
在液相色谱分析中，还需要选择合适的检测方法。
对羟基苯甲酸酯类混合物的定量分析，常用的检测方法包括UV-Vis吸收检测、荧光检测和电化学检测等。
UV-Vis吸收检测是最常用的检测方法之一，可以通过样品对紫外或可见光的吸收来定量分析。
荧光检测可以增强灵敏度，适用于分析浓度较低的样品。
电化学检测可以通过电化学信号（如电流、电势）来定量分析。
在进行液相色谱分析时，还需要优化一些实验条件来提高分离和定量的准确性和重复性。
例如，需要确定合适的进样量、流速和柱温等实验参数。
还可以采用梯度洗脱方法来进一步改善分离效果。
最后，在分析结束后，对数据进行处理和解释也是非常重要的。
可以使用标准曲线法来定量分析得到的色谱峰，通过峰面积或高度与标准品的浓度进行线性拟合，计算出样品中羟基苯甲酸酯类化合物的含量。
同时，还可以采用质谱联用技术对色谱峰进行鉴定和确认。
总之，对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析需要选择合适的色谱柱、流动相和检测方法，并进行实验参数的优化和数据处理，以获得准确的分离和定量结果。
这些方法可以用于不同范围内的样品检测，如医药、环境和食品等领域的分析研究中。