B16小鼠黑色素瘤细胞贴壁培养

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和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及黑色素合成的影响

【ｂｔａｔＯｂｅｔｅｏｉｖｓｇｔｔｈｂｔｎｏｈｎｋｏｏｒｉｒｔｎａｄｍｌｉｂｏｙｔｅｉｉ１Ａｓｃ】ｒｊｃｖＴｅｔａｅｉｉｉｏｆｏｏｉｌｎｐｏｆａｏｎｅａｎｉｓｎｈｓＢ６ｉｎｉｅｈｎｉｌｅｉｎｓｎ
ｔｎｆ１２ｎ８ｈＡｏｔｓｓｏ６ｃｌｅｅｉｄｃｄｗｔｏｏｉｌｉＡＰｔｉｉｇｕｔｅｍｏｅ，ｔｅｍｅａｉｉｓｏ２。４ａｄ４．ｐｐｏｉｆＢ１ｅｌｗｒｎｕｅｈｈｎｋｏｎＤＩｓａｎｎ．Ｆｒｒｒｏｓｉｈｈｌｎｎｂｏｙｔｅｉｓｉｈｂｔｄｗｔｏｏｉｌｗｉｏｃｎｒｔｏｖｒ２￣ｍｏ／ｉｓｎｈｓｓｗａｎｉｉｉｈｎｋｏｔｃｎｅｔａｉｎｏｅ０ｅｈｈｌＬ．ＣｏｃｕｉｎＨｏｏｉｌｅｆｃｉｅｙｉｈｂｔｎｌｓｏｎｋｏｆｔｌｎｉｉｅｖｓｔｅｐｏｉｒｔｎｏ６ｉｏｅ— ａｄｔｈｒｌｅａｉｆＢ１ｎｄｓｆｏｎｉｍｅ—ｄｐｎｎｎｒ．Ａｐｐｏｉｏｉｓｗｒｂｅｖｄｉ６ｃＨｅｔｄｗｉｅｅｄｍａｅｓｏｔｔｂｄｅｅｅｏｓｒｅｎＢ１ｅｓｔａｅｔｃｒｈｈｎｋｏ．Ａｌｏｇｌｎｎｂｏｙｔｅｉｓａｓｎｉｉｄｂｏｏｉｌｈｓｅｅｔｉｎｉｎｆａｔｏｏｉ１ｔｕｈｍｅａｉｉｓｎｈｓｓｉｌｏｉｈｂｔｙｈｎｋｏ，ｔｉｆｃｓｉｓｇｉｃｎ．ｈｅｉ

B16黑素瘤细胞增值测定方法

B16黑素瘤细胞的增殖活性测定
一．实验材料
（一）仪器：倒置显微镜、96孔板（平底板）、微量移液器（枪及枪头）、恒温培养箱、培养平皿、喷壶、封口膜、培养瓶100ml、点滴瓶(250ml、500ml)、烧杯（500ml、50ml）、量筒（500ml，100ml，10ml），滤器及滤膜（0.22um）、酒精灯、移液管、吸球、吸管架及瓶架、镊子、标签贴、双蒸器、超净台、酶标仪、摇床
（二）试剂：胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、PBS液、75%酒精、MTT（四甲基偶氮唑蓝）、DMSO（二甲基亚砜）
二．实验方法
采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）。

取对数期的B16黑素瘤细胞，弃去培养液，用
PBS液清洗2次，加入培养液，调节细胞浓度为0.5×104
—1×10
4
/孔相当于干细胞悬液5
×104
—10×10
4
个（ml
-1
）,加入96孔板中，每孔加入100ul。

于37摄氏度5%CO2恒温培养
箱中培养，至细胞单层铺满孔底（大概20h左右），吸去培养液，加入等体积不同浓度的药物培养基，每个浓度组设置5个复孔，并设置对照组（细胞+培养基）和空白对照组（培养
基），培养基中均含5%胎牛血清，于37摄氏度5%CO2恒温培养箱中培养56h，于56时前20min
每孔加入20ul MTT（5mg/ml）液，继续培养4h，吸去培养液。

加入二甲基亚砜（DMSO）150ul/孔，摇床震荡10min.置于酶标仪上在波长490nm处测各孔吸光度A，以A表示细胞的增殖。

（计算细胞增殖率，细胞增值率=（A含药组-A空白组）/(A对照组-A空白组)×100%）。

黑色素细胞培养方法

黑色素细胞培养方法黑色素细胞是一类具有黑色素合成能力的细胞，主要存在于皮肤、眼睛和内耳等组织中。

研究黑色素细胞在生理和病理过程中的作用对于了解皮肤色素变化、黑色素瘤的发生机制以及开发相关药物具有重要意义。

因此，黑色素细胞的培养方法成为研究人员关注的焦点之一。

一、黑色素细胞的来源黑色素细胞可以来源于多个渠道，主要包括：1. 人体组织中的黑色素细胞：从人体皮肤、眼睛以及其他含有黑色素细胞的组织中获取。

2. 原代培养：从新鲜组织中分离黑色素细胞，进行原代培养，获得纯化的黑色素细胞。

3. 细胞系：已建立的黑色素细胞细胞系，如SK-MEL-28、A375等。

二、黑色素细胞的培养基选择黑色素细胞的培养基应当提供适宜的营养物质和环境条件，以维持细胞的正常生长和功能表达。

常用的黑色素细胞培养基成分包括：1. 基础培养基：如DMEM、MEM等，提供细胞生长所需的营养物质和能量。

2. 补充物质：如胎牛血清、细胞生长因子等，可以促进细胞增殖和分化。

3. 抗生素：如青霉素、链霉素等，用于防止细菌和真菌污染。

三、黑色素细胞的分离与培养1. 组织分离：从人体组织中分离黑色素细胞的方法有多种，如酶消化法、机械分离法等。

其中，酶消化法是常用的黑色素细胞分离方法，通过酶的作用，将组织中的细胞分散为单细胞悬浮液。

2. 细胞培养：将分离得到的黑色素细胞接种于预先制备好的培养基中，放置于恒温培养箱中，提供适宜的温度、湿度和CO2浓度等条件进行培养。

初始培养过程中，可以添加生长因子和血清等促进细胞增殖和分化。

四、黑色素细胞的鉴定与纯化1. 形态学鉴定：利用显微镜观察黑色素细胞的形态特征，如细胞形状、大小、色素颗粒分布等。

2. 免疫细胞化学鉴定：通过染色技术检测黑色素细胞特异性标记物，如Melan-A、TYR等。

3. 流式细胞术：利用流式细胞仪检测黑色素细胞表面标记物的表达情况，如CD117、CD166等。

4. 纯化方法：通过细胞培养和细胞分选技术，如细胞贴壁法、免疫磁珠法等，可获得纯化的黑色素细胞。

阿维A抑制鼠黑素瘤B16细胞的增殖作用

ＤＩＮＧｅｇｙｎＺｈｎ — ｕ，ＹＡＮＧＹａｇｎ，ＷＡＮＧｕＩｎＩＪａＳ，ＬＵＹａ，Ｌｕｎ
（ｅａｔｎｏｅｍｔｌｙｈｏｒｏｐｔｅｅＭｅｉａＵｉｒｉ，ＳＯａｈａｇ００１，ＣｉａＤｐｒｔｆＤｒａｏｇ，ｔｅＦｕｔＨｓｉｌｏＨｂｉｄｌｎｖｓｙｈ＇ｚｕｎ５０１ｈｎ）ｍｅｏｈａｆｃｅｔｉ
ｃｌｉｅｓｗｌａｈｎｅａｔｎｂｔｅｃｔｔｎｉｐａｉ．Ｍｅｈｄ：Ｂ１ｅｌｅｅｔａｅｔｉｅｅｔｃｎｅｔａｅｌｌ，ａｅｌｓｔｅｉｔｒｃｉｅｗｅｎａｉｅｉａｄｃｓｌｔｓｎｏｒｎｎｔｏｓｃｌｗｒｒｔｄｗｉｄｆｒｎｏｃｎｒ — ６ｓｅｈｆ
维Ａ浓度为０１１、００１００ｔｌ）ＮＳ（（．、．１．、０．ｘ／、ｎ（０ｍｏＬ浓度为２４８／）、、Ｌ及两药联合处理Ｂ６细胞，ｍｇ１对照组Ｂ６细胞培养不加上述药１
物。在显微镜下观察细胞形态变化，以四甲基偶氮唑蓝（ｒ法检测细胞存活率，Ｍｒ）应用两药相互作用指数（Ｄ）阿维Ａ与顺ＣＩ分析
ＭＩａｓｙｔｗｓｎｌｚｄｗｉｉｓｆｒｌ．ＴｅｃｅｉｉｎｏｒｇｉｔｒｃｉｎＣ１ｒ１ｓａ．ＩａａａｙｅｔＪｎ’ ｏｍｕａＩＴｈｈｏｆｃｅｔｆｄｕｎｅａｔｆＤＩｏｗａｕｅｏａａｙｅｔｅｉｔｒｃｉｎｓｓｄｔｎｌｚｈｎｅａｔｏ

细胞贴壁实验报告

一、实验目的1. 掌握细胞贴壁生长的基本原理和方法。

2. 了解细胞培养过程中细胞贴壁生长的重要性。

3. 观察细胞在不同条件下的贴壁生长情况，分析影响细胞贴壁生长的因素。

二、实验原理细胞贴壁生长是细胞在体外培养过程中的一种重要生长方式。

细胞在培养皿表面贴附，通过细胞与培养皿表面的相互作用，细胞逐渐伸展、增殖。

细胞贴壁生长对于细胞培养、细胞实验和药物筛选等具有重要意义。

三、实验材料1. 细胞：小鼠心肌细胞（HL-1细胞）2. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清3. 培养工具：培养皿、移液枪、吸球、无菌操作台、显微镜、盖玻片、载玻片4. 实验试剂：0.5%多聚赖氨酸、PBS缓冲液、胰蛋白酶四、实验步骤1. 预处理：将细胞从培养瓶中取出，用胰蛋白酶消化后，用PBS缓冲液清洗细胞，收集细胞悬液。

2. 细胞贴壁：将细胞悬液加入培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

3. 贴壁条件优化：1）将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟，自然晾干后，将其放置于培养皿底部。

2）将细胞悬液加入盖玻片上，使其均匀铺展。

3）将培养皿置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

4. 观察与记录：1）每隔一定时间（如1小时、2小时、4小时等），在显微镜下观察细胞贴壁生长情况。

2）记录细胞贴壁生长速度、细胞形态、细胞数量等指标。

5. 数据分析：1）根据观察结果，绘制细胞贴壁生长曲线。

2）分析影响细胞贴壁生长的因素，如培养时间、细胞密度、培养条件等。

五、实验结果与分析1. 细胞贴壁生长曲线：细胞在培养皿中贴壁生长，随着时间的推移，细胞数量逐渐增加，细胞形态逐渐伸展。

2. 影响细胞贴壁生长的因素：1）培养时间：细胞贴壁生长速度随培养时间的延长而增加，但过长的培养时间会导致细胞密度过大，影响细胞生长。

2）细胞密度：细胞密度越高，细胞贴壁生长速度越快，但过高的细胞密度会导致细胞相互挤压，影响细胞生长。

3）培养条件：适当的温度、pH值、气体环境等有利于细胞贴壁生长。

营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一--DMEM培养基使黑色素瘤B16细胞的恶性生长抑制

营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一--DMEM培养基使黑色素瘤B16细胞的恶性生长抑制吴江涛【期刊名称】《烟台大学学报（自然科学与工程版）》【年(卷),期】2002(015)001【摘要】对小鼠黑色素瘤B16细胞在DMEM和RPMI1640两种培养基中培养产生的活细胞数和黑色素量进行了检测.结果显示,该癌细胞在DMEM培养基中培养产生的活细胞数比在RPMI1640培养基中培养产生的活细胞数平均减少87.9%,而黑色素量平均增加795%.以"黑色素量/活细胞数"计算分化指数,再以"DMEM中的分化指数/1640中的分化指数"计算DMEM相对于1640的对B16细胞的分化指数,显示DMEM中的分化指数平均是1640中的分化指数的67.8倍.提出营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一.【总页数】7页(P35-41)【作者】吴江涛【作者单位】烟台大学,生物化学系,山东,烟台,264005【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.Bcl-2抑制剂S1通过内质网途径对小鼠黑色素瘤B16细胞移植瘤生长抑制作用[J], 李亚平;吴瑶;颜晓羽;薛亚楠;路圣垚;苏静2.三氧化二砷抑制恶性黑色素瘤B16细胞生长及对端粒酶活性的影响 [J], 王丽;陈治文;夏俊3.口腔恶性黑色素瘤中血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的表达与癌细胞增殖的关系 [J], 李晓光;王延秀;任绪华;李毅;杨宪勇;侯刚;王青4.高聚金葡素对非小细胞肺癌细胞株A549的生长抑制及其治疗恶性胸腔积液的效果观察 [J], 柯军;葛海燕5.RPMI-1640和DMEM培养基中肝癌细胞系BEL-7402与HepG-2的生长状态比较 [J], 赵翔;张沙;肖军军;林明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

黑色素瘤小鼠高转移模型体内筛选和细胞系的建立的开题报告

黑色素瘤小鼠高转移模型体内筛选和细胞系的建立的开题报告I. 研究背景和意义黑色素瘤是一种高度恶性的恶性肿瘤，具有高度侵袭性和转移性。

由于黑色素瘤缺乏有效的治疗手段，其治疗效果非常有限，因此对于黑色素瘤的研究尤为重要。

针对黑色素瘤的研究目前主要采用小鼠高转移模型及其细胞系建立。

小鼠高转移模型是一种重要的研究工具，在筛选治疗药物、探究黑色素瘤转移机制等方面具有重要的意义。

本研究旨在建立一个稳定的小鼠黑色素瘤高转移模型及其细胞系，并通过体内筛选方法寻找针对黑色素瘤的有效药物。

II. 研究内容和方法1. 建立小鼠黑色素瘤高转移模型选用B16-F10小鼠黑色素瘤细胞株，将细胞注射至小鼠的血液循环系统中，待细胞成功转移至小鼠肺部后，取出肺部肿瘤组织建立小鼠黑色素瘤高转移模型。

2. 建立小鼠黑色素瘤细胞系取出小鼠黑色素瘤高转移模型的肿瘤组织进行单细胞悬浮液培养，筛选出稳定的小鼠黑色素瘤细胞系。

3. 体内药物筛选将建立的小鼠黑色素瘤高转移模型分为实验组和对照组，实验组分别注射不同浓度的药物，观察肺部转移情况和肿瘤大小。

III. 预期结果1. 成功建立小鼠黑色素瘤高转移模型并建立稳定的小鼠黑色素瘤细胞系。

2. 体内药物筛选结果，筛选出对黑色素瘤具有有效抑制作用的药物。

3. 对黑色素瘤转移机制进行探究，提供治疗黑色素瘤的新思路和新方案。

IV. 研究意义和价值1. 建立小鼠黑色素瘤高转移模型及其细胞系，为开展黑色素瘤的基础和应用研究提供重要的研究工具。

2. 体内药物筛选，为发现治疗黑色素瘤有效药物提供了新方法和思路。

3. 探究黑色素瘤转移机制，为黑色素瘤的发生、发展和转移提供新认识和新理解。

几种复配美白剂的美白功效研究

几种复配美白剂的美白功效研究文/罗婷婷孙祥灵赵昆段国梅李土桂何秋星本文通过对7种不同美白剂原料进行复配研究，采用单因素试验、正交试验以及综合评价，优选最佳美白复配组合，通过B16细胞试验评价美白复配组合的美白功效，以此探讨美白复配原料对皮肤色素沉着的改善作用，旨在为今后美白复配化妆品的开发提供依据。

关键词美白剂；复配；黑色素瘤细胞中国素有“一白遮三丑”的审美观念，追求“肤如雪，凝如脂”历来是中国女性关注的热点话题。

目前，大多数美白剂的美白作用机制主要通过抑制酪氨酸酶活性、阻断黑色素合成过程、加速黑色素角质细胞脱落、抑制黑色素向角质细胞迁移、清除自由基等方面来改善皮肤黑色素沉着、肤色暗沉等问题[1-2]。

因此，美白型护肤品在化妆品领域的研究中具有较为广阔的市场和发展潜力。

实验部分01试剂与仪器烟酰胺、熊果苷、维生素C、凝血酸、光甘草啶、谷胱甘肽、白藜芦醇，广州品赫生物技术有限公司；FeSO4、水杨酸，天津市福晨化学试剂厂；三羟甲基氨基甲烷，上海润捷化学试剂有限公司；DPPH、邻苯三酚、酪氨酸酶，上海宝曼生物科技有限公司；B16小鼠黑色素瘤细胞株，北京北纳创联生物技术研究院；DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶、胎牛血清，美国Gbico公司；DMSO、MTT、TritonX-100，美国MP Biomedicals公司。

UV-2600，CH紫外分光光度计，岛津公司；SC-3610低速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；二氧化碳细胞培养箱，上海圣科仪器设备有限公司；Infinite M200 PRO酶标仪，帝肯贸易有限公司。

02实验方法2.1 单因素试验将维生素C(0.10、0.12、0.14、0.16、0.18mg/mL)、白藜芦醇(0.04、0.08、0.12、0.15、0.20mg/mL)、谷胱甘肽(0.03、0.05、0.08、0.10、0.12mg/mL)、光甘草叮(0.05、0.08、0.10、0.12、0.15mg/mL)、凝血酸(0.02、0.05、0.08、0.12、0.14mg/ mL)、熊果苷(0.25、0.30、0.35、0.40、0.45mg/mL)和烟酰胺(0.14、0.16、0.18、0.20、0.25mg/mL)分别以DPPH 自由基清除率为指标，考察7种美白原料的浓度对DPPH 自由基的抗氧化作用，根据其结果筛选出对DPPH自由基清除效果最好的3种美白原料，其为组合1。

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北京索莱宝科技有限公司
B16小鼠黑色素瘤细胞贴壁培养
细胞名称：小鼠黑色素瘤细胞；B16
形态特性：梭形
生长特性：贴壁生长
培养条件：高糖DMEM，10%FBS。

传代方法：1:3~1:6传代
传代情况：P23
冻存条件：细胞冻存液
特征特性：该细胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤，可以产生黑色素，同基因小鼠体内移植可成瘤。

细胞处理方法：
1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超
净台中操作。

2.如细胞生长至70%-80%，将瓶中的培养基移入无菌瓶中留作培养使用，保留5-8mL培养基在37℃、5%
的CO2的温箱中继续培养。

细胞培养至90%-100%后，按要求消化传代。

3.弃去培养基，用无菌PBS或者其他缓冲液清洗细胞2次，加入适量胰蛋白酶消化（EDTA胰酶），待细胞
完全脱壁后加培养基吹打混匀，分瓶培养。

特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1.我们使用自产培养基及进口血清培养细胞，在您拿回细胞后，如想更换其它品牌培养基，请依照逐次替换的原则，先保留培养瓶中的培养基，多日多次代逐步更换，以减轻对细胞的刺激。

2.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系售后。

3.细胞任何售后问题，均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。

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