安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案
安捷伦1260全自动高效液相操作规程
安捷伦1260全自动高效液相操作规程
1.样品的准备：最好使用流动相溶解样品；进样前样品需过滤膜，除去悬浮不溶杂质。
2.流动相的选择和处理：使用高纯度试剂，所有含盐或含水溶剂必须膜过滤，100%色谱纯有机试剂，滤膜过滤后方可使用；流动相现配现用，剩余的流动相（水相）及时清理，实验间隔>2天，建议倒掉；任何溶剂，如果有可见悬浮物、菌丝，不可使用；更换流动相之前，必须事先阅读色谱柱的说明书；除非有说明，反相柱不得使用100%水。
3.开机注意事项：先开HPLC仪器开关、脱气机、泵和紫外检测电源；等各电源开启后（30s），打开在线软件；冲柱子和平衡时，暂不开紫外灯；平衡完后，打开紫外灯，设置梯度和波长或引用方法。
4.实验结束：C18反相柱应用色谱甲醇保存，不能含任何酸、盐；用甲醇替换通道，四个过滤头均存放于有机溶剂瓶中，以防长菌；流速调零，再关闭软件，最后依次关闭脱气机、泵和紫外检测器的电源。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。
（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
（4）编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。
（5）排气。
旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。
一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。
关泵，关闭排气阀（顺时针）。
（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。
（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。
（2）编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。
（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。
（3）谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。
（4）积分。
从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
Agilent-1260LC液相色谱仪使用、维护保养规程
实用文档Agilent 1260-LC液相色谱仪使用、维护操作规程目录一、目的 (2)二、适用范围 (2)三、内容 (2)四、附件 (18)五、变更历史 (18)一、目的明确Agilent 1260 LC型液相色谱仪硬件使用、维护保养操作方法，使质量部检验人员有章可循。
二、适用范围本规程适用于公司Agilent 1260-LC型液相色谱仪使用、维护保养操作。
三、内容1.制定依据《Agilent 1260 LC system Operating Manual》《Agilent OpenLAB Control Operating Manual》2.工作原理：2.1.高效液相色谱法是用高压输液泵，将具有不同特性的单一溶液或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，用泵压入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入色谱柱内，在色谱柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由色谱工作站进行记录处理。
利用色谱图色谱峰面积或峰高大小可对待测样品进行定性定量分析。
Agilent 1260 LC型液相色谱仪主要由G1329B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G1316柱温箱、G4212B二极管阵列检测器和Open LAB色谱工作站等部件组成。
3.基本操作步骤3.1.开机准备3.1.1.启动计算机：打开计算机电源，登陆windows操作系统。
3.1.2.启动工作站：打开Agilent1260LC各模块电源。
待Agilent 1260LC各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击屏幕左下角“开始”，选择“所有程序”，选择”Agilent Technologies”选择“OpenLAB”，选择OpenLAB Control,或单击桌面图标则会进入到上图的界面。
上面步骤如果已经配置过，则不需要操作。
3.2.仪器配置：3.2.1.通过点击菜单左上方的，可以分别创建位置和仪器，得到如下的界面：3.2.2.输入相关信息，注意仪器类型一栏要选择 Agilent LC System，输入完后点击确定。
(完整版)Agilent1260液相色谱系统操作规程
1目的规范Agile nt 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。
2适用范围适用于Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。
3职责实验室分析人员负责Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4系统组成4.1 Agile nt 1260 系列四元泵（G1311C）和脱气机；4.2可变波长紫外检测器（VWD G1314F ；4.3 Chemstation A.01.04 色谱工作站4.4国产柱温箱（AT-550）色谱柱；4.5电脑、打印机等辅助设备。
5定义无6操作程序6.1开机前的准备6.1.1检查仪器校验标识，确认仪器处于校验周期内。
6.1.2检查上次《实验室仪器设备使用记录表》和仪器状态，确认仪器处于正常状态；6.1.3流动相的制备：6.1.3.1按《高效液相色谱法流动相配制标准操作规程》配制需要的流动相。
6.1.3.2用前超声脱气（一般10〜20min）。
6.1.4更换流动相：6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出，用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中，并盖好瓶盖；6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中，并盖好瓶盖。
6.1.5供试溶液的配制：6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。
6.1.5.2定量测定时，对照品溶液和供试品溶液均应分别配制 2份。
6.1.5.2如有必要，样品需预处理，如过滤等，以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。
6.1.6选择色谱柱： 6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱；6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同，若不同则需进行更换。
6.1.7更换色谱柱6.1.7.1拆卸原色谱柱：先握住色谱柱，再松动色谱柱出口端螺帽，取下出口端的管线；松动色谱柱入口端螺帽，取下入口端的管线；用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后，将色谱柱放回原专用包装盒内6.1.7.2安装新色谱柱：从专用包装盒内取出色谱柱，松动并取下色谱柱出入口的止动塞；将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端，拧紧螺帽；（注意：安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流动相流向一致。
安捷伦1260型HPLC使用操作PPT课件
脑卒中患者康复训练的关键时期脑卒中，这个让人闻之色变的疾病，不仅给患者的身体带来了巨大的伤害，也给他们的生活和心理造成了严重的影响。
然而，在面对这一困境时，康复训练成为了患者重获健康、回归正常生活的重要途径。
而在整个康复过程中，有一些关键时期，把握好这些时期，对于患者的康复效果起着至关重要的作用。
脑卒中发生后的早期阶段，通常被认为是康复训练的黄金时期。
在这个阶段，患者的身体和大脑还具有较强的可塑性和恢复能力。
一般来说，在病情稳定后的 48 小时内，如果患者的生命体征平稳，没有进行性加重的情况，就可以开始进行康复训练。
早期康复训练的重点在于预防并发症，如肺部感染、深静脉血栓、压疮等。
同时，通过被动活动患者的肢体，如关节屈伸、肌肉按摩等，可以保持关节的活动度，防止肌肉萎缩和关节僵硬。
这个时期的康复训练需要医护人员和家属的密切配合。
医护人员会根据患者的具体情况制定个性化的康复方案，包括正确的体位摆放、定时翻身、呼吸训练等。
家属则要积极参与，协助医护人员完成训练，并给予患者心理上的支持和鼓励。
在脑卒中后的几周内，患者逐渐进入了康复训练的关键阶段。
此时，患者的身体功能开始有所恢复，主动运动的能力逐渐增强。
康复训练的重点也从被动活动转向主动训练。
比如，患者可以开始进行床上的平移、翻身坐起等训练，逐渐过渡到站起、行走等更复杂的动作。
在这个阶段，康复训练的强度和难度需要逐步增加，但要注意避免过度疲劳和受伤。
同时，康复训练不仅仅局限于肢体运动，还包括认知功能、语言功能等方面的训练。
对于存在认知障碍的患者，可以通过一些简单的认知游戏、记忆训练来提高他们的认知能力。
对于语言障碍的患者，则需要进行发音练习、语言理解和表达训练。
脑卒中后的 3 6 个月，仍然是康复训练的重要时期。
虽然患者的恢复速度可能会逐渐减慢，但只要坚持科学合理的康复训练，仍然能够取得一定的进步。
这个时期的康复训练需要更加注重精细化和功能性的训练。
比如，对于手部功能的恢复，可以进行拿捏物品、书写等训练；对于行走功能，可以通过上下楼梯、跨越障碍物等训练来提高其稳定性和协调性。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程? 开机1(把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。
2(打开计算机，打开主机各模块电源(从上至下)，再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。
3(旋开排气阀(逆时针)，右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。
4(依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。
? 数据采集1. 编辑样品信息:由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。
2. 编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。
在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。
3. 四元泵参数设定:在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。
4. TCC(柱箱)参数设定:在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。
5. VWD检测器参数设定:在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。
6. 仪器曲线设置:默认即可。
7. 关闭排气阀(顺时针)，冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时(定量环体积为20uL)，用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。
安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程
一、开机1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。
A瓶：为水相B瓶：为有机相。
2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成：——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；——中下部为动态监测信号；——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。
2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。
单击OK，进入下一画面。
3、泵参数设定：进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相 1260 高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清晰样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项：① 避免使用高粘度的溶剂作为流动相；② 所选用的流动相一定要与样品相溶；③ 各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a. 正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或者其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对照固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
b. 反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
2.准备工作① 用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm 过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；② 流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm 过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③ 在连接柱子和色谱仪之前，阀件或者管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或者娃哈哈纯净水；B、C、D 泵根据需要添加。
安捷伦液相色谱仪1260Chemstation RSD计算
注意方法的路径，校正表中要完全，如化合物名称和含量等
3.编辑序列参数，确认在运行方法部分parts of method to run， 选择reprocessing only。
4.编辑序列，注意方法选择为含有校正表的方法。
5.从序列菜单中选择sequence output， 选择print sequence summary report。在其中选择report to printer 和report to file， 输入最终输出信号的名称。然后ok
6.在sequence菜单中选择sequence summary。选择将样品运 行统计选定为扩展统计extended statistics。
7. 从sequence菜单中选择extended statistics。确认选中需要的选项 （通常是保留时间。峰面积、峰高和含量，半峰高处的峰宽、峰 对称性），在option中选择RSD。
8.在sequence菜单中选择partial sequence来选择要运行的样品， 再运行序列。
9.在计算机硬盘上相应的路径下找到sequence输出的文件名
Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程
Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程一、目的：建立Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程，保证正确使用。
二、适用范围：适用于Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作。
三、职责：研发部对本标准的实施负责。
四、正文：1 仪器组成及电源：1.1 仪器组成：本仪器由四元泵、真空脱气机、DAD检测器、安捷伦化学工作站组成。
1.2 电源：泵为110V稳压电源，检测器为220V稳压电源，工作站为220V稳压电源。
1.3开机运行前，更换溶剂瓶中的流动相，若管道为第一次使用，先用针管排空各管道中的气泡。
2 仪器硬件开启：自上而下或自下而上顺序开启各模块（真空脱气机、四元泵、自动进样器、VWD检测器、荧光检测器），打开电源指示灯，指示灯亮，显“绿色”；状态指示灯指示当前的状态，各模块进行自检（自动进样器的门板必须关上）。
3安捷伦化学工作站的操作：3.1开机运行步骤3.1.1 待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面，各模块的软件图标均为绿色。
3.1.2从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，点击”视图”菜单中的”样品视图”、”系统视图”、“命令行”，来调用所需界面（或直接从“视图”菜单中选择“全部菜单”来调用全部界面。
3.1.3把流动相放入溶剂瓶中。
3.1.4打开“Purge”阀，点击泵图标，点击“设置泵”，进入泵编辑画面，设置流速为3-5ml/min，点击“确定”，则系统开始排空管道内的气泡，切换通道继续排空，直至所有要用的通道无气泡为止。
3.1.5点击泵图标，选“控制”选项，选中“关闭”关泵，关闭“Purge”阀。
3.1.6点击泵图标，设置流速冲洗柱子。
3.1.7点击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，点击“确定”。
3.2数据采集方法编辑3.2.1从“方法”菜单中选择“编辑完整菜单”项，选中除“数据分析”外三项，点击“确定”，进入下一画面。
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安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案分发QA/QC1.0目的通过建立Agilent 1260 HPLC的确认方案，以运行确认主要检查Agilent 1260 HPLC各单元的性能及整机运行是否达到供货单位设计要求;性能确认主要检查Agilent 1260 HPLC四元泵、进样器、柱温箱、检测器的性能符合设计要求，保证仪器在后续运行检测的准确性。
2.0范围本方案适用于位于制剂厂区质量管理部三楼仪器室固定资产编号为F02-QC00014的Agilent 1260型高效液相液谱仪的确认。
3.0概述可变波长检测器(VWD)联用，主要用于实验室日常检测。
与示差折光检测器(RID)联用，主要用于依诺肝素钠原料药及注射液等分子量及分子量分布的检测。
4.05.0确认前准备5.1参与测试人员培训确认根据确认方案内容涉及的文件、仪器、人员的情况，以检查参与确认方案的人员是否都参加过相关文件、仪器及本方案的培训，记录培训号和相关的培训内容于附录1“测试人员培训记录”中。
接受标准：参与仪器确认的人员均应参加过方案涉及的文件、仪器、方案的培训。
5.2测试用试剂、试液确认检查确认中使用到的标准品、试剂、计量容器信息，可用于仪器确认。
检查内容包括如下：标准品:名称、规格、批号、含量、来源等信息。
( 自制标准品还应包括复标日期。
)试剂:名称、规格、批号、有效期、生产厂家等信息。
以上确认信息应详细记录于附录2“测试用试剂液确认”。
接受标准：所有使用的物料应在有效期内或可用状态。
5.3测试用仪器、仪表确认检查确认中使用到的仪器信息，可用于仪器确认，记录仪器的名称、编号、有效期等信息于附录3“测试用仪器、仪表确认”。
接受标准：所有使用到的仪器，如需校验或者计量的，均有在校验或者计量的有效期内。
5.4文件检查确认核查待确认的仪器具有相关的操作文件，IQ/OQ确认前应至少具备使用说明书，PQ确认前应至少具备SOP草案，并将其填写在附录4“待确认仪器相关文件检查”。
6.0运行确认以上确认信息应详细记录于附录5：“Agilen t 1260 HPLC运行确认”。
7.0性能确认此次性能确认包括如下确认模块:四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD检测器、RID 检测器;测试项目包括:流速准确度/精密度、梯度混合准确性和波动、进样精密度、进样残留、温度准确性、响应值线性(VWD)、波长准确度(VWD)、基线噪音(VWD)、基线漂移(VWD)、基线噪音(RID)、基线漂移(RID)7.1四元泵性能确认7.1.1流速准确度/精密度确认在仪器控制界面分别设定流速为1.00mL/min, 0.5mL/min，以超纯水为流动相，不安装色谱柱。
于废液出口用洁净的10ml容量瓶收集，用秒表开始计时，到容量瓶装满至刻度停止, 记录所用的时间。
重复测量5次，结果记录于附录6“Agilent 1260 HPLC性能确认-流速准确度/精密度”。
由超纯水体积与时间的比值计算得测量流速，准确度计算公式为: 准确度=|平均流速?设定流速|设定流速×100%接受标准:计算所得结果准确度应在±5%，RSD 应≤0.50%。
7.1.2 梯度混合准确性和波动确认在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min ，以超纯水为流动相A, 0.5%丙酮为流动相B, 不安装色谱柱，检测波长为265nm.程序梯度设置如下表，分别对A-B ，A-C, B-D 通道进行梯度洗脱:测试前，先用流动相A 平衡系统至少10分钟，然后按上述方法和梯度设置运行，记录色谱图。
以程序开始B 比例为0%时的值为基线值,手动测量出B 占整个混合梯度段的10%、50%、90%、100%时对应的高度h (各梯度开始时的高度)，计算时以B 占100%时的高度为H 。
结果记录于附录7“Agilent 1260 HPLC 性能确认-梯度混合准确性和波动” 计算公式: 准确度=|hH×100%?各混合段B 所占比例| 混合波动=Nh 50×100%式中N: B 占50%时梯度时的噪音值，在梯度内选1min 计算; 接受标准:计算所得结果准确度应在±2%，混合波动应≤0.2%. 7.2 自动进样器性能确认 7.2.1 进样精密度和残留确认流动相配制:色谱级甲醇与超纯水按体积比6:4混匀，即得60%的甲醇水溶液。
样品溶液配制过程:对照溶液a:称取15mg 尼泊金丙酯溶于100 00mL 流动相中;对照溶液b ：吸取1.0mL 对照溶液a 于流动相中并定容至10.00mL:对照溶液C:吸取1.0mL 对照溶液b 于流动相中并定容至100.00mL.结果记录于附录8“Agilent 1260 HPLC 性能确认-进样精密度和残留”。
仪器设定条件及进样顺序见下表:接受标准:进样精密度:对照溶液b 色谱图中所有峰的峰面积，RSD 应S1.0%。
进样残留:第1针空白中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶液b 中尼泊金丙酯峰面积的10倍的比值不超过0.5%;对照溶液c 中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶液b 中尼泊金丙酯峰面积的比值在0.9~1.1%之间。
7.3 柱温箱性能确认 7.3.1 柱温箱温度准确性确认设定柱温箱的温度分别为20C.30"C. 40C 、50C.等待约30min 平衡系统，将校正过的多点巡回检测仪(或者校正过的温度计)放入柱温箱，等待10min 后，每隔一分钟记录一次柱温箱内左侧、右侧的温度,连续记录10次。
实验结果记录于9“Agilent 1260 HPLC 性能确认-柱温箱温度准确性”。
接受标准:平均值与设定值之差应在±2C 。
7.4 VWD 检测器性能确认 7.4.1 响应值线性确认(WWD)咖啡因标准溶液配制方法:标准溶液5 (50.0μg/mL) :称取9.0mg 至11.0mg 咖啡因标准品，用色谱级甲醇稀释至200.0mL ，混匀。
标准溶液4 (25.0μg/mL) :取5.0ml 标准溶液5，用色谱级甲醇稀释至10.00mL,混匀。
标准溶液3 (5.0μg/mL) :取1.0ml 标准溶液5，用色谱级甲醇稀释至10.00mL,混匀。
标准溶液3 (5.0μg/mL) :取1.0ml 标准溶液5，用色谱级甲醇稀释至10.00mL,混匀。
标准溶液1 (0.5μg/mL) :取1.0ml标准溶液3,用色谱级甲醇稀释至10.00mL ，混匀。
仪器设定及进样顺序见下表:以浓度为横坐标，峰面积作纵坐标，建立线性回归曲线，计算r 值，实验结果记录于附录10“Agilent 1260 HPLC 性能确认-响应值线性(WWD)”。
接受标准：2应大于等于0.999.注:由于此检测中要注入不同浓度，因此也包括了自动进样器样品瓶位置正确性的确认。
7.4.2 波长准确性确认(VWD)在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min ，柱温箱温度设为40C ，超纯水为流动相，进样体积为20μL ，进样时间为1min ，按照附录11“Agilent 1260 HPLC 性能确认-波长准确性”设置波长，每次增加1nm ，依次进25μg/mL 的咖啡因溶液(具体配制见7.4.1响应值线性确认标准溶液4)，记录各个波长处的峰面积，分别记录波长为197nm~213nm 之间峰面积最大处的波长.237m~253nm 之间峰面积最小处的波长、265nm~281nm 之间峰面积最大处的波长，实验结果记录于附录11“Agilent 1200 HPLC 性能确认-波长准确性(VWD)”。
接受标准:标准波长分别为205.0nm ，245.0nm, 273.0 nm,分别计算波长偏差。
波长偏差应在+2nm 。
7.4.3 基线噪音与基线漂移确认(VWD)选用C18色谱柱，在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min, 100%甲醇为流动相，波长设定为254nm ，检测灵敏度调到最灵敏档。
开机预热，待仪器稳定后记录基线30min,选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值，按公式计算基线噪声，用检测器自身的物理量(AU)作单位表示。
基线漂移用30min 内基线偏移起始点最大信号值(AU/30min)表示。
实验结果记录于附录12“Agilent 1260 HPLC 性能确认-基线噪音与基线漂移(WWD)” . 计算公式: N=KB 7.5 RID 检测器性能确认7.5.1 基线噪音与基线漂移确认(RID )将选用C18色谱柱，在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min, 100% 超纯水为流动相，将仪器各部分连接好(检测器接10mv 输出口)，接通电源。
量程范围选择0.01×10-6RIU, 工作站放大倍数为5。
启动泵，待基线稳定后记录基线60min 。
根据检测器衰减的倍数和测得的基线峰高对应的记录仪标度，按下式计算基线噪声和基线漂移。
实验结果记录于附录13“Agilent 1260 HPLC 性能确认-基线噪音与基线漂移(RID)”. 基线噪声= A×0.01× 10?610×5基线漂移=B×0.01× 10?610×5式中：10-检测器输出电压为10mv;5-工作站放大倍数:0.01×10-6 -为设置量程，RIU;A-单一基线波段基线峰高值的变化，mv;B-基线在60min内偏离原点的值，mvh.接受标准:基线噪声≤±2.5×10-9RIU，基线漂移< 200×10-9RIU/h.8.0偏差与变更任何偏差和变更都必须按照SMP-V A-1001.R01“验证偏差处理单”和SMP-V A-1001.R02“验证变更处理单”进行操作，并按照附录14“偏差和变更汇总”进行总结。
9.0再确认周期当仪器正常运行时，规定校验周期为2年，当仪器的安装位置发生变更或仪器更换重要部件时，应及时进行仪器的校验工作，以保证仪器的正常检测。
10.0附录附件1.测试人员培训记录附件2.测试用试剂液确认附件3.测试用仪器、仪表确认附件4.待确认仪器相关文件检查附件5.Agilent 1260 HPLC运行确认附件6.Agilent 1260 HPLC性能确认~流速准确度/精密度附件7.Agilent 1260 HPLC性能确认-梯度混合准确性和波动附件8.Agilent 1260 HPLC性能确认-进样精密度和残留附件9.Agilent 1260 HPLC性能确认-柱温箱温度准确性附件10.Agilent 1260 HPLC性能确认-响应值线性(VWD) 11.0修订历史。