细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程
实验十二 细菌细胞的生化反应实验
实验十二细菌细胞的生化反应实验一、实验目的1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2、通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性；3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4、学习各种接种技术。
二、实验原理各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1、糖发酵实验糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。
不同的细菌在糖的分解能力上存在很大的差异。
有些细菌能分解某种糖并产生酸性物质(如乳酸、丙酸、醋酸等)和气体(如二氧化碳、氢、甲烷等)，而有些细菌只产生酸不产生气体。
例如大肠杆菌分解乳糖和葡萄糖产酸并产气，普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但不能分解乳糖。
酸的产生可利用指示剂来判断。
在培养基中加入溴甲酚紫(pH5．2为黄色，pH6．8为紫色)，当发酵产酸时，使培养基由紫色变为黄色。
气体的产生可由发酵试管中倒置的德汉氏小管中有无气泡的出现来验证．原理：丙酮酸裂解生成乙酰CoA与甲酸，甲酸在酸性条件下在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H2和CO2—产酸产气缺少甲酸氢解酶—产酸不产气步骤：配制糖发酵培养基—接种—培养（约24h)—观察结果结果：紫色无气泡，既不产酸也不产气用 - 表示；黄色无气泡，产酸不产气，用 + 表示；黄色且有气泡，产酸产气，用 0 表示。
2、甲基红实验（M.R实验）原理：微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸—pH下降—加入指示剂甲基红—红色步骤：配制蛋白胨水培养基—接种—培养（约24h) —加入指示剂甲基红1-2滴—观察结果结果：红色— M.R实验阳性，用 + 表示；不变色—M.R实验阴性，用 - 表示；3、V.P实验(伏―普试验)V.P.试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
细菌的生理生化反应实验报告
细菌的生理生化反应实验报告【实验目的】了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
【实验原理】通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为.反应阳性。
有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。
某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。
【实验材料和用具】1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。
2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。
【实验方法】（一）V-P反应1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。
空白对照不接种。
置37度恒温培养箱中培养24-48h。
3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。
放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。
（二）甲基红实验于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化（三）吲哚实验1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
实验六 细菌的生化试验
实验六细菌的生化试验目的要求1．通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解；2．掌握常规细菌生化试验操作方法。
操作步骤一、糖类发酵（分解）试验原理：细菌含有分解不同糖（醇、苷）类的酶，因而分解各种糖（醇、苷）类的能力也不一样。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由兰变黄（指示剂溴麝香草酚兰由兰遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为兰色。
（一）适用于需氧菌的方法培养基用邓亨氏（Dunham）蛋白胨水溶液（蛋白胨1g，氯化钠0.5g，水100ml，pH7.6按0.5～1％的比例分别加入各种糖），每100ml加入1.2ml的0.2％溴麝香草酚蓝（或用1.6％溴甲酚紫酒精溶液0.1ml）作指示剂。
分装于试管（每一个试管事先都加有一枚倒立的小发酵管），10磅高压灭菌10分钟。
如在培养基中加入琼脂达0.5～0.7％，则成半固体，可省去倒立的小发酵管。
0.2％溴麝香草酚蓝溶液配法：溴麝香草酚蓝0.2g0.1N NaOH 5ml蒸馏水95ml方法：从琼脂斜面的纯培养物上，用接种环取少量被检细菌接种于糖发酵管培养基中（如为半固体，应穿刺），在37℃培养，一般观察2～3天，观察时用上述符号标记之。
（二）适用于厌氧菌的方法培养基：蛋白胨20g氯化钠5g琼脂1g1.6％溴甲酚紫酒精溶液1ml糖10g硫乙醇酸钠1g蒸馏水1000ml将胨、盐、硫乙醇酸钠、琼脂和水放于烧瓶内，加热使融化，再加入所需的糖，调整pH到7.0，加入指示剂，分装试管，在10磅高压灭菌15分钟后，做成高层。
方法将厌氧菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部，于37℃培养。
结果观察同需氧菌。
二、V－P试验（二乙酰试验）原理：某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇（Acetymethyl carbinol）→2，3-丁烯二醇（2，3-bytaylene cylycol），在有碱存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用，产生粉红色的化合物。
沙门氏菌检测操作规程
沙门氏菌检测操作规程1 原理沙门氏菌的检测需要四个连续的阶段见下图：1.1 用非选择性液体培养基预增菌将试料接种到缓冲蛋白胨水（BPW），在36℃±1℃下培养16~20h。
（样品中可能存在少量的沙门氏菌却含大量的肠杆菌科的其他菌，所以选择性增菌是必须的；为了检测受伤的沙门氏菌，常须进行预增菌。
）1.2 在选择性液体培养基上增菌将1.1中的培养物接种到四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液和亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液中。
于TTB增菌液内42℃±1℃培养18h～24h；SC 增菌液内36℃±1℃培养18h～24h。
1.3 初步筛选将1.2的培养物接种到以下两个选择性培养基：亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂，于36℃±1℃分别培养40h～48h（BS 琼脂平板）或18h～24h（XLD 琼脂平板），根据菌落特性，辨别可疑沙门氏菌菌落。
1.4再次筛选挑出1.3中的可疑沙门氏菌菌落，在沙门氏菌显色培养基中培养再次筛选，再用合适的生化和血清学试剂进行鉴定。
2 试剂与仪器2.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基2.3.1缓冲蛋白胨水培养基（BPW）称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。
2.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。
将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。
2.3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液取SC培养基23g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装锥形瓶，冷至常温备用。
普通细菌培养鉴定操作规程
普通细菌培养鉴定操作规程1检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
2原理人体很多部位与外界相通，存在栖息菌群，但不致病，当菌群失调或分离到致病菌则具有临床意义；另外机体某些部位是无菌的，如检出细菌则视为致病菌。
并排除采样及操作污染。
3标本要求(1)标本类型：血液，骨髓，脑脊液，胸水，腹水，尿液，等体液；痰液，前列腺液，脓液，组织分泌物或穿刺液等。
(2)标本采集：见标本采集手册(3)标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。
人泌尿生殖道标本如白带前列腺液等需临床标本接种于巧克力平板或特殊的运送培养基并置保温设备中送检。
(4)标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。
4容器和添加剂类型均使用灭菌器InI盛放标本5试剂(1)试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等(2)试剂生产厂家：XX生物技术有限公司6仪器设备：(1)接种针、接种环、酒精灯、(2)BACTTST黑马微生物鉴定系统。
(3)显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SWYJTF超净工作台、MCoT5A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7校准程序(送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤(1)血液、骨髓、脑脊液等标本按照培养目的增菌培养12T8小时后盲目接种或待自动分析仪报警后接种。
(2)接种：以上增菌标本及其他临床标本用接种环取标本接种环划线血平板及其他选择性培养基上,35℃培养过夜，观察结果。
(3)涂片：肉眼见细菌生长，取生长物涂片做革兰氏染色；(4)纯培养：根据需要接种血平板、巧克力、中国蓝/麦康凯或厌氧平板过夜培养以获得纯培养。
(5)鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，细菌的鉴定见BACTTST黑马微生物鉴定系统10质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动11生物参考区间血液，骨髓，脑脊液等无菌部位采取的标本未见细菌生长；其他标本如大便，痰液为正常菌群或未见致病菌。
细菌的生化试验
细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1% 1.6%澳甲酚紫酒精溶液0.1% 分装10*100mm小试管，每管3-41^,内置一密闭端向上的发酵管， 10磅10分灭菌。
方法: 用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果: 产酸则培养基由兰紫变黄，用“ + ”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“。
”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理: 指示剂澳甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
培养基：蛋白胨水蛋白胨1%氯化钠0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml, 10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇95ml浓盐酸20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。
结果：乙醚层现红色为阳性，以“ + ”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖0.5%磷酸氢二钾0.5%蛋白胨0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4 滴。
3.4细菌生化鉴定技术卫生微生物检验实验方法与技能
附录
(1) 菌种 • 大肠埃希菌、伤寒沙门
菌、产气肠杆菌、变形 杆菌。
(2) 培养基、试剂 • 微量生化反应管，KIA
斜面，MIU半固体 • 靛基质试剂、甲基红试
剂、VP试验甲/乙液。
【思考题】
• 简述IMVC组试验的原理、结果判断及应用。 • 简述KIA复合试验的原理及结果判断。
2023/12/28
1. 糖发酵试验
【原理】
– 各种细菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，对糖 （苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的 分解后仅产酸，有的分解后产酸产气，故可用来鉴别 细菌。
【方法】
– 将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖发 酵管，35℃培养18-24h 观察结果。
【结果】
– 首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状： – 不分解糖，培养基顔色与接种前无变化，以“-”表示；
6. 克氏双糖铁（KIA）复合试验
【原理】
– 该培养基用酚红指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色。 – 含葡萄糖和乳糖，前者是后者的1/10。 – 能发酵乳糖或同时发酵G，产酸量大，底层和斜面均变黄。 – 只发酵G，产酸量少，斜面部分挥发、氧化，恢复红色。
底层缺氧，酸不被氧化依然黄色。 – 产气，琼脂出现裂隙。 – 产硫化氢，遇铅或铁离子形成黑色沉淀。
VP 试验 左侧：产气肠杆菌阳性（变红）；
右侧：大肠埃希菌阴性
5. 枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验（C）
【原理】
– 当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时柠檬酸盐 为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，分解 柠檬酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香 草酚蓝由绿色变为深蓝色为阳性，培养基不变色 （绿色）为阴性。
细菌生化反应实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理。
2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
3. 熟悉生理生化反应在细菌鉴别中的实际应用。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长代谢过程中，通过酶催化作用，将底物转化为产物的化学反应。
这些反应能够反映细菌的代谢类型和生理特性，从而用于细菌的鉴定。
常见的细菌生理生化反应包括吲哚试验、甲基红试验、V-P试验、糖发酵试验等。
三、实验材料与仪器1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管。
四、实验步骤1. 接种：将菌种接种于相应的培养基中，37℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 吲哚试验：取少量培养液，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
3. 甲基红试验：取少量培养液，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
4. V-P试验：取少量培养液，加入V-P试剂，观察颜色变化。
5. 糖发酵试验：将不同糖类培养基分别接种菌种，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 吲哚试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
2. 甲基红试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
3. V-P试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
4. 糖发酵试验：大肠杆菌和产气肠杆菌对葡萄糖、乳糖和蔗糖均呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌对葡萄糖和乳糖呈现阴性反应。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。
通过对吲哚试验、甲基红试验、V-P试验和糖发酵试验的结果分析，我们可以初步判断出大肠杆菌和产气肠杆菌为阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌为阴性反应。
这表明生理生化反应在细菌鉴别中具有重要的实际应用价值。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程1、氧化-发酵试验（O-F试验）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型。
可以进行无氧降解的，称为发酵型（发酵型细菌在有氧无氧的条件下均能分解葡萄糖）。
不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。
方法：将待检细菌同时穿刺接种两支Hugh-Leifson 培养基，其中一支培养基滴加无菌石蜡（或其它矿物油），高度不少于lcm。
35C, 24小时或更长。
结果：培养基变黄表示细菌分解葡萄糖产酸，两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均均产酸为发酵型。
若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型。
应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵细菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者均为氧化型或产碱型。
也可用于葡萄球菌与微球菌问的鉴别。
2、B -半乳糖苷酶（ONPG）试验原理：细菌产生半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚卩-D- 半乳糖苷（无色）生成邻-硝基酚（黄色）。
结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20-30分钟内显色应用：主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。
3、七叶苷水解试验原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应，生成黑色的化合物。
结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。
应用：主要用于D 群链球菌与其它链球菌的鉴别。
前者为阳性，后者为阴性。
也可用于革兰阴性菌与厌氧菌的鉴别。
4．甲基红试验原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基pH 值降至4.5 以下，加入甲基红呈现红色为阳性。
若细菌分解葡萄糖产生的酸少，或产生的酸进一步转化为其他产物，则培养基pH 值仍在6.2 以上，加入甲基红呈现黄色为阴性。
结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性。
黄色为阴性。
应用：主要用于鉴别大肠杆菌与产气杆菌，前者阳性，后者阴性。
此外肠杆菌科中变形杆菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属和志贺菌属等阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。
5、VP 试验原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中，氧化为二乙酰，与精氨酸中的胍基作用生成红色化合物。
结果：在数分钟内出现红色为阳性，如无红色出现且于35C4h后仍如故者即为阴性。
应用：本试验与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。
6、吲哚（靛基质）试验原理：细菌分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚（靛基质），加入对位二甲基苯甲醛生成红色玫瑰吲哚。
结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科的鉴定。
6、尿素分解试验原理：具有尿素酶（尿酶）的细菌，分解尿素产生大量的氨，培养基变碱。
结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变色为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定，奇异变形杆菌、普通变形杆菌为阳性，克雷伯菌属、枸椽酸菌属、雷氏普罗威登菌和摩根摩根菌为阳性。
7、苯丙氨酸脱氨酶试验原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱氨生成苯丙酮酸，加入FeCl3 生成绿色化合物。
结果：出现绿色为阳性，应立即观察结果，延长会引起退色。
应用：主要用于肠杆菌科的鉴定，变形杆菌属、普罗威登斯菌和摩根摩根菌均为阳性。
肠杆菌科其它菌均为阴性。
8、氨基酸脱羧酶试验原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，分解氨基酸脱羧生成胺和CO2 使培养基变碱，指示剂改变颜色。
结果：对照管应呈黄色，测定管呈紫色（指示剂为溴甲酚紫）为阳性。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
9、氧化酶试验原理：氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。
具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C 氧化，再由氧化型细胞色素C 使对苯二氨氧化。
生成有色醌类化合物。
结果：细菌在与试剂接触10 秒内呈紫色为阳性。
为保证结果准确性，应作阴、阳性对照。
应用：主要用于肠杆菌科与假单胞菌的鉴别，前者为阴性。
后者为阳性。
10、过氧化氢酶试验（触酶试验）原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。
试剂：3％过氧化氢溶液方法：取菌置于洁净的试管或玻片上，然后滴加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养基中，立即观察结果。
结果：有大量气泡产生为阳性。
不产生气泡为阴性。
应用：革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均阳性。
而链球菌均阴性。
11、硝酸盐还原试验原理：包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚哨酸盐和氨。
再由氨转化为氨基酸和细菌内其它含氮化合物。
二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的受氢体，能使硝酸盐还原的细菌从哨酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其它还原性产物。
结果：出现红色为阳性。
若加入试剂后无颜色变化反应，可能是①硝酸盐没有被还原，试验阴性。
②硝酸盐被还原为氨和氮等其它产物而导致假阴性，这时应加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。
若仍不产生红色，表明为试验为假阴性。
应用：本试验在细菌鉴定中应用广泛。
12、氧化酶(改良法)试验试剂：四甲基对苯二胺(TMPD) 6.0g二甲基亚砜(DMSO) 100.oml 溶解TMPD 于DMSO 中，置于避光玻塞瓶中，可在室温中保留几个星期。
方法：被检菌株移种于7 %羊血琼脂上，30 C需氧条件下孵育15〜18h,刮取菌落涂布于无色滤纸片上，加l 滴上述试剂，阳性者在2min 内呈深蓝色。
若被测菌株移种在蛋白胨酵母浸出液琼脂上，至少孵育3天以上，才可检测，阳性反应5〜10min 出现。
13、CAMP 试验原理：B 群链球菌能产生CAMP 因子，可促进葡萄球菌的B -溶血素溶解红细胞活性，因此在两菌的交界处溶血力增加。
出现矢形(半月形)的溶血区。
结果：在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳应用：在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性。
14、O/129 抑菌试验原理：0/129（二氨基喋啶）对弧菌属、邻单胞菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌无抑制作用。
方法：将待检菌均匀涂布于碱性琼脂平板上，镊取0/129纸片（含药40ug）贴于平板上，35C, 18〜24h, 观察结果。
结果：出现抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药应用：弧菌属、邻单胞菌属对0／129 敏感，而气单胞菌属耐药15、杆菌肽试验原理：A 群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其它链球菌绝大多数对其耐药。
16、奥普托欣试验原理：几乎所有的肺炎链球菌对0ptochin 敏感，而0ptochin 对其它链球菌则无抑制作用17、．H2S 试验原理：有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱胺酸、半胱胺酸）产生硫化氢，硫化氢遇到铅或亚铁离子，则生成黑色的硫化铅或硫化铁。
结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科属或种的鉴定。
18、触酶试验(过氧化氢酶试验)试剂：3%H202溶液，置棕色瓶内于4C阴暗处保存。
方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液1〜2滴。
静置之, lmin 内产生大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。
19、葡萄球菌凝固酶和凝聚因子试验葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。
试管法凝固酶试验称为葡萄球菌凝固酶，玻片法为检测凝聚因子。
19.1 凝聚因子试验：取1 滴蒸馏水于洁净的玻片上，用接种环挑取待检菌一环置于蒸馏水中，制成浓的菌悬液，无自凝现象。
然后加一环家兔血浆混合，10s 内观察结果，出现明显细菌凝块为阳性，否则为阴性。
如超过10s可出现假阳性，有10%〜15%金黄色葡萄球菌呈假阴性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。
操作过程中的注意点：(1)10s内观察结果。
(2)必须制备浓厚的均匀菌悬液。
(3)用EDTA 抗凝的兔血浆为最好。
(4)加血浆后不要再混搅，以免细菌凝块分散变小。
(5)生长在高盐培养基上的菌落可出现自凝或假阳性。
19.2 葡萄球菌凝固酶试验：用生理盐水将血浆4 倍稀释，取0.5ml。
然后挑取3〜5个菌落于稀释血浆中，成浓菌悬液。
置37C水浴，3〜4h后读取结果，凝固者为阳性。
若阴性，继续观察到24h，不凝固者为阴性。
试验应同时作阳性、阴性对照。
试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝固，应判为阴性。
中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时间孵育，才可出现阳性。
凝固酶试验应考虑下述情况：①某些金黄色葡萄球菌产生溶纤维蛋白酶，溶解纤维蛋白凝块。
②所用血浆缺乏纤维蛋白原。
③试验菌株不纯。
结果：玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象判为阳性；试管法以血浆凝固为阳性。
应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验20、新生霉素耐药试验方法：挑取待检菌菌落数个，制成相当0.5 号麦氏管（McFarland）浓度菌液，棉拭子浸透，挤去多余液，均匀涂在M-H平板上，贴上含5ug/片的新生霉素纸片，35°C 孵育16〜20h,抑菌环直径W 16为阳性（耐药）。
试验时应以金黄色葡萄球菌ATCC25923做阴性（敏感）对照，以确认纸片是否有效。