涂片染色常用的方法
细菌涂片制备及革兰氏染色
实验内容：
1、 单菌革兰氏染色 2、 三区混合染色
A菌
A、B混合区
B菌
五、实验结果
记录所观察到的三种细菌革兰氏染色结 果
绘出显微镜下三种细菌的形态
六、问题与讨论
要得到正确的革兰氏染色结果必须注意 哪些操作？哪一步是关键？Why?
思考题：
P84：2（1）（2）（4）
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请值日同学留下值日 下周再见！
铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。
3. 媒染：先用新配的卢戈氏碘液冲 去残水，而后用其覆盖涂面1分 钟，后水洗。
4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约15－20秒，后立即 用流水冲洗。
5. 复染：滴加番红染色液，染3－5 分钟，水洗后用吸水纸吸干。
6. 镜检：观察染色结果并绘图。
革兰氏染色
丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构
G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂 质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质，增加了细胞的通透性，使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙 黄复染呈红色。
G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后， 肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细 菌仍保留初染时的紫色。
实验二步掌握细菌的革兰氏染色 法。
了解革兰氏染色法的原理及其在细 菌分类鉴定中的重要性。
二、实验原理
单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等。
三、实验材料
革兰氏染色技术关键操作步骤
革兰氏染色技术关键操作步骤革兰氏染色技术（Gram staining）是微生物学中常用的染色方法，利用这种方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
它是由丹麦细菌学家Christian Gram于1884年发明的，被广泛应用于细菌的鉴定和分类。
革兰氏染色技术的关键操作步骤包括以下几个方面：一、准备细菌培养物在进行革兰氏染色之前，首先需要准备细菌培养物。
通常使用处于对数生长期的细菌培养物，用无菌技术从培养物中取一小滴液体，均匀涂抹在玻璃片上，制备细菌涂片。
二、固定细菌涂片细菌涂片需要进行固定，以保持细菌的形态特征。
常用的固定剂是甲醇或乙醇，将涂片逐渐浸入固定剂中，浸泡数分钟至数十分钟，然后取出晾干。
三、染色1. 注碘液处理在固定的细菌涂片上滴加碘液，覆盖整个涂片。
碘液可以使细菌细胞内的格拉氏阳性菌染成紫色。
2. 酒精洗涤用酒精溶液冲洗细菌涂片，直至涂片上的紫色不再出现，一般持续几秒至十几秒钟。
这一步是关键的洗涤步骤，通过酒精的洗涤，可以去除革兰氏阴性菌的多余染色。
3. 闪碱洗涤用闪碱洗涤涂片，一般可以持续几秒至十几秒钟。
闪碱的作用是去除细菌涂片上的酒精和碘溶液，同时使革兰氏阳性菌继续保持紫色。
4. 洗涤与干燥最后用清水冲洗细菌涂片，使其干燥。
四、观察与解读完成染色步骤后，可以使用显微镜观察细菌涂片。
革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色。
观察细菌的形态、大小、排列方式等特征，进一步判断和鉴定细菌。
总结与回顾：革兰氏染色技术是微生物学中常用的染色方法，它可以通过染色结果将细菌分为两大类：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色的关键操作步骤包括准备细菌培养物、固定细菌涂片、染色、观察与解读。
其中，注碘液处理、酒精洗涤和闪碱洗涤是整个染色过程中的核心步骤，通过这些步骤的操作，可以使革兰氏阳性菌保持紫色，革兰氏阴性菌去除多余染色。
对于细菌的鉴定和分类来说，革兰氏染色技术是一个简单、快速且有效的方法。
实验四静脉采血血涂片的制备与染色
取血
待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出， 勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端 中4～5毫米处，注意手指 持握载片的边缘 ，勿触及其表面。不能使载片接触取血部 位的皮肤。
推片 取一块边缘光滑的载片做推片。将其一
端置于血滴前方，向后移动到接触血滴， 使血液均匀分散在推片与载片的接触处。 然后使推片与载片呈30°～40°角，向另 一端平稳地推出。涂片推好后，迅速在空 气中挥干，使之自然干燥。
标记试管
在试管上贴上标签，著名患者姓名、项目名 称、采集日期、门诊或住院号。
消毒双手
采血前，操作人员应用肥皂或消毒液和水洗手。
选择静脉
采血前，要求受检者坐在实验台前。将前臂放在 实验台上，掌心向上，并在肘下放一枕垫。卧床 受检者要求前臂申展，暴露穿刺部位。常用采血 位置是肘前静脉，因其粗大、容易辨认。
检查注射器
静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固， 针筒内是否有空气和水分。所用针头应锐利、光 滑、通气，针筒不漏气。抽血时针栓只能向外抽 ，不能向静脉内推，以免形成空气栓塞，造成严 重后果。
扎压脉带
采静脉血时止血带压迫时间不能过长 、绑扎不能过紧，以避免淤血和血液浓缩 ，最好不超过1min，否则会影响某些试验 结果，如造成血红蛋白和血细胞比容增高 。
醇所固定;
3、 加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量 超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5-10分钟;
4、 水洗、吸干、镜检。
血涂片染色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟
勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混匀静置10分钟
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液）
皮肤丝状菌的染色方法
皮肤丝状菌的染色方法
皮肤丝状菌的常用染色方法有：
1. 石蜡切片染色法：将皮肤样本进行固定、脱水、浸透、包埋等处理后，制备石蜡切片。
然后使用通常的革兰氏染色法，将切片进行染色，观察丝状菌的形态和结构。
2. KOH湿涂片法：将皮肤样本取少量于玻璃片上，加入一滴10%的KOH溶液，用盖玻片压平，然后在显微镜下观察。
利用KOH的碱性溶解作用，可以清晰地观察到丝状菌。
3. 木霉素或苏木精染色法：将处理好的皮肤样本使用木霉素或苏木精染色，然后进行观察。
丝状菌大多数能被这两种染色剂染色，从而显示出其形态和结构。
4. PAS染色法：使用PAS(Periodic Acid-Schiff)染色法可以染色丝状菌的菌丝和孢子。
该方法能够显示出丝状菌的特征性红色染色。
以上就是一些常用的皮肤丝状菌的染色方法。
根据实际需要和研究目的，可以选择合适的染色方法进行观察和分析。
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
1.痰液涂片染色：这是最常用的方法之一、将痰液制备成涂片，进行
酸性染色，如抗酸杆菌染色和耐酸染色。
结核分枝杆菌是抗酸杆菌，其细
胞壁富含脂质，可以抵抗酸性染料的脱色作用。
这种方法可以快速检测出
结核分枝杆菌的存在。
2.结核分枝杆菌的培养：这是鉴定结核分枝杆菌的“金标准”。
痰样
品通常会涂在含有富含营养物质的培养基上，并在适当的温度和湿度条件
下孵育。
结核分枝杆菌需要一个相对较长的孵育时间（通常需要数周）才
能生长和生成可见的菌落。
分枝杆菌的培养是确诊结核病的关键步骤，同
时还可以进行对特定抗结核药物的药敏试验。
3.伊红染色：这种方法旨在鉴定酸酒杆菌属分枝杆菌和其他酸杆菌的
超微结构。
伊红染色可使细胞壁和细胞内储存的色素显现为红色或粉红色。
该方法可以帮助确定分枝杆菌的类属。
4.PCR检测：聚合酶链反应（PCR）能够通过扩增目标基因片段来检
测和诊断结核分枝杆菌。
这种方法具有高度特异性和灵敏度，并可以通过
荧光标记的探针来定量检测。
5.蛋白质组学：蛋白质组学技术通过检测和分析结核分枝杆菌内部蛋
白质的组成和变化，可以为诊断和治疗提供信息。
质谱法是一种常用的蛋
白质组学技术，可以通过检测菌落样品中的特定蛋白质来鉴定结核分枝杆菌。
总的来说，微生物学诊断方法在结核分枝杆菌检测和鉴定中起着至关
重要的作用。
这些方法可以帮助医生确定结核病的诊断和治疗方案，并对
结核分枝杆菌的流行病学研究和控制提供重要的科学依据。
血液涂片操作方法
血液涂片操作方法
血液涂片是一种常见的血液检查方法，以下是血液涂片的操作方法：
1. 准备工作：准备一块清洁的玻片、一支无菌的注射器、一瓶生理盐水或无菌注射用水、一个安全的容器用于废弃材料。
同时，确保工作区域干净整洁并消毒。
2. 抽取血液：用一支无菌的注射器从患者的静脉或指尖抽取适量的血液，并将其缓慢注入到无菌注射用水或生理盐水中。
注意不要接触到玻片或其他污染物。
3. 涂片：将一枚干燥、清洁的玻片水平放置在工作台上。
取一滴已稀释的血液，将其从玻片边缘的一个角度滴在玻片上，然后用另一枚玻片轻轻地向前移动，使血液均匀地分布在玻片上。
4. 固定：立即将涂片浸入75%的乙醇中，固定红细胞和白细胞。
浸泡时间约为1-2分钟。
5. 染色：从乙醇中取出涂片，并用染色剂（如格拉姆蓝染液）浸泡数秒钟。
染液的浸泡时间会根据具体的染色剂而有所不同，需根据说明进行操作。
6. 除色：将浸有染色剂的涂片轻轻冲洗于自来水下，直至水变清澈为止。
7. 风干：将除色后的涂片自然风干，通常需要数分钟至数小时。
8. 镜检：完成风干后，涂片可以通过显微镜进行观察。
使用显微镜进行适当的调节，检查红细胞、白细胞、血小板等细胞的数量、形状和结构。
注意事项：
- 操作过程中需要注意个人防护，如佩戴手套、实验室外套和面罩等。
- 操作过程应尽量避免气泡的产生，以免干扰观察结果。
- 涂片的制作需要尽快进行，以避免血细胞的凝聚或变形。
医学真菌生化鉴定方法
医学真菌生化鉴定方法关键词：真菌生化试剂甲醇亚甲蓝假丝酵母标准溶液化学试剂北京标准物质网医学真菌的生化鉴定主要指通过生化试剂对真菌进行着色，随后显微镜下检测其菌丝和孢子的形态特征，进行分类鉴定。
常用的医学真菌染色方法如下：1.吉姆萨染色主要用于组织或血涂片中的荚膜组织胞质菌和马尔尼菲青霉菌酵母细胞染色。
将血液样本推片或组织涂片，自然干燥：100％甲醇脱水固定后，滴加吉姆萨染色剂，蒸馏水洗片后自然干燥后镜检。
2.乳酸酚棉蓝染色用于多种真菌的染色，显微观察真菌时，乳酸酚棉蓝溶液常作为固定液。
将接种物在载玻片上涂片：滴加乳酸酚棉蓝染色剂；彻底分散真菌，加盖玻片，进行镜检。
3.亚甲蓝染色主要用于检测汗斑皮屑的病原菌。
将感染皮屑置于载玻片上，滴加亚甲蓝染液：混合充分，加盖玻片进行镜检，可进行油镜检测。
4.过碘酸雪夫（PAS）染色主要用于组织内真菌染色，在PAS染色下真菌为淡红色或紫红色。
使用清蛋白涂布载玻片，制备的玻片可长期保存。
5.显色鉴别培养是近年来真菌诊断的新技术，其原理是利用真菌特异的生化反应，即真菌分解培养基中的底物，致使真菌菌落呈现不同的颜色，因此也属于医学真菌生化鉴定方法的范畴。
该种方法可以方便快速地分离鉴定主要的致病性真菌，同时不影响药敏实验结果，目前在临床上被应用于假丝酵母等真菌的检测。
科玛嘉念珠菌显色培养基(CHROMagar)结合VITEK2Compact-YBC全自动微生物鉴定仪可以实现医学真菌的快速高通量的鉴定。
采取患者的痰、尿、分泌物、咽拭子等标本，于沙保弱培养基上37℃培养1～2天，初步镜检确定有孢子和菌丝的真菌阳性标本。
将阳性标本分别接种CHR显色培养基和VITEK2Compact-YBC 鉴定卡，37℃培养1～2天记录结果，比照CHROMagar直接鉴定法与VITEK2Compact仪器法的鉴定结果，可以确定医学真菌的鉴定结果。
[汇编]精子形态学分析
![[汇编]精子形态学分析](https://img.taocdn.com/s3/m/1e59a21853ea551810a6f524ccbff121dd36c50f.png)
精子形态学分析正常形态精子百分率是评价精子受精能力的重要指标之一。
目前，用于精子形态学分析的染色方法有：改良巴氏染色法、苏木精-伊红（HE）染色法、瑞氏染色法、瑞-吉氏染色法、Diff-Quik染色法和Shorr染色法。
1 涂片的制备一般用新鲜的液化精液或生理盐水洗涤过的精子悬液进行涂片，通常每份标本涂双份片子，以备染色或操作出问题。
载玻片应洁净，可用70%酒精洗涤并干燥后使用；涂片的厚薄应根据精子密度而定，精子密度高者涂片应薄些，而精子密度低者涂片应尽可能厚些。
涂片的方法有多种，WHO推荐的方法有拉薄技术和滴管法，拉薄技术即用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液；滴管法即水平持滴管使一滴精液沿载玻片的表面展开。
由于精液有一定粘稠度，这两种方法都很难涂成均匀的涂片。
可建议用以下方法涂片：用滴管将一滴精液置于载玻片上，然后从液滴中央向周围循环吸净多余的精液，注意滴管的头要平整，滴管与载玻片垂直，缓慢吸去多余的液体。
低密度、粘稠的、或充满碎屑的标本，建议先离心去除精浆，沉淀的精子团重新悬浮在适当体积中，以获得尽可能高的密度，但不应超过80×106/ml。
正常精子密度且液化良好的精液标本亦可以洗涤后用精子悬液进行涂片，但离心操作对精子形态分析有无影响，尚需要进一步验证。
精子涂片可进行空气干燥并固定。
固定程序取决于染色方法。
2 改良巴氏染色法这是WHO手册推荐的方法。
它可以使精子和其他细胞很好地染色，可使精子头部的顶体和顶体后区、胞浆小滴、中段和尾部着色。
染液中的俾士麦棕为盐基性染料，伊红、亮绿、橙黄等为酸性染料，能与细胞中具有相反电荷的蛋白质结合，而染成各种不同的颜色，从而能清楚地区分各种细胞成分。
以往用巴氏染色法进行染色时，操作步骤繁琐，目前已有改良的单一的巴氏染色液出售，操作非常简单，只需在自然干燥的精子涂片上滴加1~2滴巴氏染液，染15分钟即可。
流水冲洗后自然晾干，显微镜油镜下观察精子形态。
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涂片染色常用的方法
涂片染色是一种常用的生物学实验技术，用于观察和研究细胞的形态、结构和功能。
涂片染色的方法有很多种，下面将介绍几种常用的涂片染色方法。
一、吉姆萨染色法
吉姆萨染色法是最常用的涂片染色方法之一。
它使用的染料是吉姆萨染料，可以染色细胞核和胞质。
这种染料具有亲水性，可以与细胞内的核酸结合，使细胞核呈现出深蓝色或紫色，胞质呈现出粉红色或橙色。
吉姆萨染色法简单易行，染色效果好，常用于观察细胞核的形态和分布。
二、偏碱性吉姆萨染色法
偏碱性吉姆萨染色法是一种常用的胚胎染色方法。
它在吉姆萨染色法的基础上，将染料中的酸性成分换成偏碱性成分。
这样做的好处是可以更好地染色胚胎细胞，使其呈现出更清晰的染色效果。
偏碱性吉姆萨染色法适用于胚胎发育研究和胚胎畸形筛查等领域。
三、格里姆萨染色法
格里姆萨染色法是一种特殊的涂片染色方法，主要用于染色细菌。
它使用的染料是格里姆萨染料，可以染色细菌的细胞壁和细胞膜。
格里姆萨染色法将细菌染成紫色，背景染成粉红色，使细菌的形态和结构更加清晰可见。
格里姆萨染色法在细菌学研究中广泛应用，
有助于鉴定细菌属种和观察细菌的形态特征。
四、朗格汉斯染色法
朗格汉斯染色法是一种特殊的涂片染色方法，用于染色寄生虫和血液细胞。
它使用的染料是朗格汉斯染料，可以染色红细胞、白细胞和寄生虫等。
朗格汉斯染色法将红细胞染成橙红色，白细胞染成蓝紫色，寄生虫染成深紫色，使它们在显微镜下更易于观察和区分。
朗格汉斯染色法在医学和病原生物学研究中具有重要的应用价值。
五、抗体染色法
抗体染色法是一种基于免疫反应的涂片染色方法。
它利用特异性抗体与目标分子结合，再通过染料或荧光素标记的二抗染色，实现对目标分子的染色。
抗体染色法可以用于检测和定位特定蛋白质、细胞器或细胞表面分子，具有高度的特异性和灵敏性。
抗体染色法在细胞生物学、免疫学和病理学等领域得到广泛应用。
以上介绍了几种常用的涂片染色方法，每种方法都有其适用的领域和特点。
涂片染色技术的发展为生物学研究提供了重要的工具，使我们能够更好地观察和理解细胞的结构和功能。
随着科学技术的不断进步，相信涂片染色方法会越来越完善，为科研工作和医学诊断提供更多的可能性。