高效液相色谱法测定华蟾素片中华蟾素毒基和脂蟾毒配基含量
２０１０年第ｌ９卷第ｌＯ期 长寿长乐口服液中３味药材的薄层鉴别研究 药物鉴定 王锦红，吴朦俊 （贵州省毕节地区药品检验所，贵州毕节 ５５１７００） 摘要：目的建立长寿长乐口服液的薄层鉴别方法。方法用薄层色谱（ＴＬＣ）法对长寿长乐口服液中枸杞子、菟丝子、桑椹进行定性鉴别。 结果在薄层层析色谱中均能检出枸杞子、菟丝子、桑椹，阴性对照无干扰。结论建立的ＴＬＣ法简便易行、专属性强、分离度重现性好．可 用于长寿长乐口服液的质量控制。 关键词：长寿长乐口服液；薄层色谱法；枸杞子；菟丝子；桑椹 中图分类号：１１２８４．１；Ｒ２８６．０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１０）１０—００３７一Ｏ１ 长寿长乐口服液是由枸杞子、菟丝子、五味子、覆盆子、车前 子、桑椹６味中药组成的复方制剂，具有提高人体免疫功能、增进 食欲、改善睡眠、增强体质、延缓衰老等功能，为中药保健品，原标 准中只有五味子鉴别。笔者对方中其他味药材进行了薄层研究，建 立了枸杞子、菟丝子、桑椹的薄层色谱（ＴＬＣ）鉴别方法。 １ 仪器与试药 薄层层析硅胶Ｇ（青岛海洋化工厂）；ＺＦ—Ｉ型三用紫外分析 仪（上海顾村电光仪器厂）。长寿长乐口服液（市售品，批号分别为 ０８０８０１，０８０８０２，０８０８０３）；枸杞子对照药材（批号为１２１０７２— ２００４０４），菟丝子对照药材（批号为１２０９５８—２００６０５），桑椹对照药 材（批号为１２１４０４—２００５０４）均由中国药品生物制品检定所提供。 试剂均为分析纯。 ２ 方法与结果 ２．１ 枸杞子… 取样品３０ ｍＬ，加乙酸乙酯２０ ｍＬ，振摇提取，提取液挥至１ ｍＬ， 作为供试品溶液；另取缺枸杞子的阴性样品，同法制成阴性对照溶 液；再取枸杞子对照药村０．５ ｇ，加水煎煮３０ ｒａｉｎ，滤过，滤液加乙 酸乙酯，同法制成对照药材溶液。照ＴＬＣ法［２００５年版《中国药典 （一部）》附录ⅥＢ】试验，吸取上述３种溶液各１０ ，分别点于同 一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以甲苯一乙酸 乙酯一甲醇一甲酸（４：３：０．８：０．２）为展开剂，展开，取出，晾干， 置紫外光灯（３６５ ｎｍ）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶 液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色 谱则无此斑点（图１ Ａ）。 ２．２ 菟丝子… 取样品３０ｍＬ，蒸干，残渣用甲醇１ ｍＬ溶解，作为供试品溶液； 另取缺菟丝子的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；再取菟丝子 对照药材０．５ ｇ，加甲醇５ ｍＬ，冷浸２４ ｈ，滤过，滤液挥至ｌ ｍＬ，作为 对照药材溶液。照ＴＬＣ法【２００５年版《中国药典（一部）》附录ⅥＢ】 试验，吸取上述３种溶液各１０ Ｌ，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以苯一乙酸乙酯一甲酸（５：４：２） 为展开剂，展开，取出，晾干，氨熏显色。供试品溶液色谱中，在与对 照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品 Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ柱），结果以Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ色谱柱分离效果最好；比较 了０．５％磷酸二氢钾溶液一乙腈（５０：５０）和０．５％磷酸二氢钾溶液～ 乙腈（５５：４５）两种流动相（均用磷酸调ｐＨ至３．２），结果后者的分 离效果好；也考察了３种流速（１．０，０．８，０．６ ｍＬ／ｍｉｎ），０．８ ｍＬ／ｍｉｎ 时分析时间较短，分离效果好。 在选定的色谱条件下，华蟾酥毒基（保留时间１２．２０８ ｍｉｎ）与 相邻峰的分离度分别为５．５１３和２．０９６，脂蟾毒配基（保留时间 １３．７７３ ｒａｉｎ）与相邻峰的分离度分别为２．０９６和１．８１９；理论塔板 中国茎 业Ｃｈｉｎａ 口ｒＪ ｎｃ 口ｆｆｃ口 溶液色谱则无此斑点（图１ Ｂ）。 ２．３ 桑椹… 取样品３０ ｍＬ，蒸干，残渣用甲醇１ ｍＬ溶解，作为供试品溶液； 另取缺桑椹的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液；再取桑椹对照 药材１ ｇ，加甲醇１０ ｍＬ，超声处理１５ ｒａｉｎ，滤过，滤液挥至ｌ ｍＬ，作 为对照药材溶液。照ＴＬＣ法【２００５年版《中国药典（一部）》附录ⅥＢ】 试验，吸取上述３种溶液各ｌＯ Ｌ，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲醇一甲酸 （４：３：０．８：０．２）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以３％三氯化铝乙 醇溶液，置紫外灯（３６５ ｎｍ）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照 药材溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品 溶液色谱则无此斑点（图１ Ｃ）。 Ａ １．对照药材溶液 Ａ．枸杞子 Ｂ Ｃ ２．供试品溶液 ３．阴性对照品溶液 Ｂ．菟丝子 Ｃ．桑椹 图１ 薄层色谱图 ３ 讨论 用ＴＬＣ法鉴别长寿长乐口服液中枸杞子、菟丝子、桑椹，色谱 分离度好，阴性对照无干扰，该法简便易行，专属性强，可用于该制 剂的质量控制。 参考文献： ［１】苗明三，李振国．现代实用中药质量控制技术【Ｍ】．北京：人民卫生出 版社，２０００：７１５，８６４，８５８． （收稿日期：２００９—０５—２５；修回日期：２００９—０８—０３） 数以华蟾酥毒基计为６ ６１３，以脂蟾毒配基计为６ ７３９。采用ＨＰＬＣ 法测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量，样品处理方法简单，结果 准确，有效成分分离较好，故该法可作为华蟾素片的质量控制方 法。 参考文献： ［１】中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准・ 中药成方制剂（第１４册）【Ｍ］．北京：化学工业出版社，１９９７：３１． （收稿日期：２００９—０７—０７；修回日期：２００９—１０—２０） ・３７・
高效液相色谱法在几种中药制剂有效成分含量测定中的方法分析
世界最新医学信息文摘 2019年 第19卷 第74期119
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zuixinyixue@·药物研究·高效液相色谱法在几种中药制剂有效成分含量测定中的方法分析白少静，徐晓阳，武晓媛，李晶晶（神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430）
0 引言中药制剂是当前临床常见的一种药物制剂，且不良反应较少，治疗效果好，但是制作过程十分繁琐复杂，一旦制剂成分和剂量控制偏差，极易严重降低制剂质量，因此需要选择一种准确的质量检测方法，合理评估中药制剂的质量、成分，保证中药制剂有效性和安全性，如下主要介绍高效液相色谱法在几种中药制剂中的测定。1 在羚羊清肺散4种有效成分含量测定中的应用羚羊清肺散是一种具有化痰息风、凉血解毒、清热泻火等功效的中药制剂，当前，许多文献报报告仅对其显微特征进行研究，未深入分析其有效成分含量[1]，因此需要采用高效液相色谱法中的双波长HPLC法测定羚羊清肺散中的甘草苷（镇痛、改善肝功能、抗菌、抗溃疡、抗肿瘤）、芍药苷（调节免疫、抑制肿瘤、抗伤害性疼痛、保护神经）、栀子苷（保肝利胆、抗氧化、抗炎、抗菌）、绿原酸（利胆降糖、抗氧化、抗病毒、抗菌、增强免疫）等四种有效成分含量，即采集羚羊清肺散中的上述四种有效成分，采用双波长HPLC法进行线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、回收率试验、样品含量测定，同时优化了色谱条件与样品提取条件，结果显示，双波长HPLC法具有重复性好、准确性高、操作简便、快速等特点，能为羚羊清肺散多项指标质量控制提供科学的参考和指导。2 在疏风散热胶囊4种有效成分含量测定中的应用疏风散热胶囊中含有12味药材，发挥着疏风散热、清热解毒的药效，其中主要包括牛蒡苷、甘草苷、栀子苷、绿原酸等四种有效成分，多适用于咽喉疼痛、咳嗽口干、发热头痛、风热感冒等症状，为了强化控制该产品质量，需采用HPLC法测定疏风散热胶囊上述四种有效成分，即采集疏风散热胶囊中的牛蒡苷、甘草苷、栀子苷、绿原酸等四种有效成分，应用HPLC法进行线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加标回收率试验、样品含量测定，同时考察了样本提取时间、温度、料液比等对提取率的影响，经过波长切换与梯度洗脱，实验结果表明，HPLC法中的响应曲面法优选4种成分，分析结果合理，数据模型可靠，且预测结果与实际值相比，偏差较小，且方法回收率较高、准确，可给予疏风散热胶囊后续研究准确的参考和指导。3 在通宣理肺口服液3种有效成分含量测定中的应用通宣理肺口服液是一种咳嗽类中药制剂，主要适用于肢体酸痛、头痛无汗、鼻塞流涕、发热恶寒、咯痰不畅、风寒感冒咳嗽等症状，其中主要有黄芩苷（抗病原体、消炎、抗菌、镇静、降压）、橙皮苷（增强毛细血管壁、改善微循环、抗癌、抗菌、抗炎）、柚皮苷（改善局部微循环、镇痛、抗病毒、抗炎）等3种有效成分，故采用HPLC法中的响应曲面法优化成分最佳提取条件，测定3种成分含量，即应用HPLC法进行线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加标回收率试验、样品含量测定，同时考察了甲醇浓度、提取温度、提取时间对萃取效果的影响，结果得出，HPLC法中的RSM优化分析可靠合理，回归模型可靠，有助于分析通宣理肺口服液有效成分的最佳工艺参数[2]。4 在小儿感冒宁糖浆4种有效成分含量测定中的应用小儿感冒宁糖浆是由15味药材组合而成的中药制剂，可清热止咳、疏散风热，多适用于小儿外感风热感冒、咳嗽咽痛、鼻塞流涕、出汗不爽、发热等症状，现有的文献也仅仅说明了单一成分黄芩苷含量测定[3]，为了强化对产品质量的控制，需采用HPLC法中的系统内标测定法检测小儿感冒宁糖浆中的牛蒡苷、黄芩苷、栀子苷、绿原酸等4种有效成分，即应用系统内标测定法进行校正因子测定、校正因子耐用性考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加标回收率试验、样品含量测定，实验结果表明，系统内标测定法能同时测定小儿感冒宁糖浆中的多种有效成分，且科学性和准确性高，具有操作简便、测定成本低的特点，与外标法相比，差异并不显著，可作为中药制剂质量控制主要发展方向之一。5 结论高效液相色谱法（HPLC）是一种分辨率高、操作简便、快速、灵敏度高、重现性高、用量少的制剂成分质量检测方法，随着近几年高效液相色谱法（HPLC）检测技术不断改进、发展，该方法在各种中药制剂成分含量测定中得到广泛应用，且准确性高、结果可靠，能清晰测定出羚羊清肺散、疏风散热胶囊、通宣理肺口服液、小儿感冒宁糖浆中的有效成分含量，可为羚羊清肺散、疏风散热胶囊、通宣理肺口服液、小儿感冒宁糖浆等中药制剂的质量控制提供科学的参考和支持。参考文献[1] 姜晖,李开智,王绍志,等.高效液相色谱法测定养阴降糖片4种成分的含量[J].中国药业,2017,26(7):32-36.[2] 陈燕军,吴有根,方海红,等.高效液相色谱法同时测定香连丸中5种成分的含量[J].中国医院药学杂志,2016,36(12):972-975.[3] 高苏亚,张韫,王黎,等.反相高效液相色谱法测定精制冠心颗粒中7种有效成分的含量[J].理化检验(化学分册),2017,53(4):462-464
蟾酥抗肿瘤机制的研究
摘要
- - I 摘要
蟾酥作为一种传统中药，具有镇痛、消炎、麻醉等作用。近年来研究表明，蟾酥具有确切的抗肿瘤活性，能够诱导肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞的分化，还有逆转耐药性、抑制肿瘤血管形成及增强免疫的作用。本文主要就蟾酥及其活性成分抗肿瘤作用的研究进展作一综述。
关键词 蟾酥;华蟾酥毒基;抗肿瘤药 Abstract
- - II Abstract
Venenum bufonis, as one of the traditional Chinese material medica, has functions in
analgesia, eliminating inflammation and narcosisetal. Recent studies indicated that venenum
bufonis has the distinguished anticancer activity. It could induce apoptosis, inhibit the cell
proliferation, promote the cell differentiation, reverse the drug resistance, restrain
neovacularization and enhance the immunity system. This review mainly summarizes the
antitum or effects of venenum bufonis and its active components in recent years.
Keywords venenum bufonis ; cinobufagin ; antineoplastic drugs
目录
- - III 目录
摘要 ............................................................................................................................................... I
华蟾素抗肿瘤
华蟾素的抗肿瘤药理作用研究及临床应用进展
QQ978602878 （泰山医学院）
摘要
华蟾素作为我国自行研制的二类新药,具有调节免疫、抑制肿瘤细胞增殖、抗乙肝病毒的药理作用,在抗肿瘤、治疗慢性乙型肝炎以及其他疾病的临床治疗上已经得到广泛的应用。运用中西医结合的方法,进一步深入药理机制的研究,探讨新的用药途径,充分发挥中医药的独特疗效,仍是今后进一步研究的方向。其抗肿瘤的机制主要为抑制肿瘤细胞DNA和RNA的生物合成、诱导肿瘤细胞凋亡、免疫调节作用、影响癌基因表达、干扰细胞周期、抑制血管内皮细胞生长[1]。
关键词:华蟾素;药理作用;临床应用
华蟾素(cinobufotalin)为蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufobufo gargarizans cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo
melanostictusSchneider)等的全皮提取制剂,是我国自行研制的二类新药,现已开发出注射液、口服液及片剂,已列为国家级中药保护品种并已广泛应用于临床。华蟾素注射液(简称华蟾素,下同)是我国传统药材中华大蟾蜍阴干全皮加工制成的水溶性注射剂,从20世纪80年代上市,至今已广泛用于肝癌等多种恶性肿瘤的治疗,和癌性疼痛、肿瘤热、癌性胸腔积液、顽固性呃逆等肿瘤相关并发症的辅助治疗,已被列为国家级中药保护品种。华蟾素具有清热解毒,利水消肿,化瘀溃坚等作用,现代药理研究发现其主要的两种生物活性成分是: (1)吲哚类生物碱(蟾毒色胺、蟾毒色胺内盐,去羟基蟾毒色胺等; (2)甾类强心苷(蟾蜍灵、华蟾蜍素、蟾蜍他灵等),目前主要测定华蟾素中总生物碱的含量来控制质量[2]。现将其在肿瘤治疗上的应用及其抗肿瘤机制的研究进展综述如下。
1药理机制
1.1免疫调节作用
赵兴梅等[3]报道, 12.5g/L(原液浓度)的华蟾素溶液能促进植物血凝素刺激健康献血者的单个核细胞分泌白细胞介素-2,白细胞介素-2主要是由T辅助细胞产生的细胞因子,对巨噬细胞、NK细胞、T细胞、B细胞等多种免疫效应细胞有促进其活化作用,并能增强淋巴因子活化的杀伤细胞的活性,具有很强的免疫增强作用,因此华蟾素具有免疫促进作用。也有研究表明将0·0625~0.5mg/L(吲哚生物碱的浓度)的华蟾素作用于小鼠脾淋巴细胞,能促进脾淋巴细胞分泌IL-2,从而增强T细胞免疫功能,诱导肿瘤免疫[4]。
华蟾素联合紫杉醇对骨肉瘤U_(2)OS细胞抑制作用的研究
甘肃医药2021年40卷第6期GansuMedicalJournal，2021，Vol.40，No.6
华蟾素联合紫杉醇对骨肉瘤U2OS细胞抑制作用的研究
马秀才1李晶2马晓燕1罗国栋1王建澍2绽春蕊1俞永智1宋建民1
1.甘肃省人民医院，甘肃兰州730000；2.甘肃省肿瘤医院，甘肃兰州730050
【摘要】目的：探讨华蟾素联合紫杉醇对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用及机理。方法：体外培养人骨肉瘤U2OS细胞，按照实验设计分为对照组、华蟾素组、紫杉醇组、华蟾素联合化疗药组，每组在不同实验条件下按不同时间点（24，48，72h）进行检测。MTT法检测各组骨肉瘤细胞生长的抑制率，TUNEL染色观察细胞凋亡程度并计算其凋亡率，免疫荧光染色检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的含量并计算其比值，RT-PCR、WesternBlot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果：MTT结果显示，华蟾素联合化疗药组细胞生存率明显降低，该组细胞被药物作用48h后生存率是（24.58±1.65）%，相当于紫杉醇组同期（40.85±1.34）%的1/2（P<0.01）。TUNEL染色显示，与作用于细胞24，48h相比，作用72h后凋亡率达到（60.35±1.57）%，凋亡率明显增加（P<0.01）。免疫荧光、RT-PCR及WesternBlot法结果提示，随着药物作用时间的延长，华蟾素联合化疗药组Bax的表达逐渐增加，而Bcl-2的表达逐渐减少，Bax/Bcl-2含量的比值也逐渐增加。同时，Wnt/β-catenin通路关键蛋白β-catenin、caspase-3的表达也逐渐增加。结论：华蟾素具有抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖和诱导其凋亡的作用，其联合化疗药在疗效上呈时间依赖性，而其机制可能与激活Wnt/β-catenin通路相关。【关键词】华蟾素；紫杉醇；骨肉瘤U2OS细胞；Wnt/β-catenin通路
中图分类号：R738.1文献标识码：A文章编号：1004-2725（2021）6-0481-06
抗癌药物“华蟾素”的药理作用
抗癌药物“华蟾素”的药理作用
[拼音名] Chán Sū
[英文名] VENENUM BUFONIS
[别名] 蛤蟆酥、蛤蟆浆、癞蛤蟆酥
[来源]
蟾蜍科动物中华大蟾蜍 Bufo bufo gargarizans Cantor 或黑眶蟾蜍 Bufo melanostictus Schneider 的干燥分泌物，多于夏、秋二季捕捉蟾蜍，洗净，挤取耳后腺及皮肤腺的白色浆液，加工，干燥。
[产地分布]
主产河北、山东、四川，湖南，江苏，浙江等省。
[药材特征]
呈扁圆形团块状或片状。棕褐色或红棕色。团块状质坚，不易折断，断面棕褐色，角质状，微有光泽；片状质脆，易碎，断面红棕色，半透明，气微腥，味初甜而后持久的麻辣感，粉末嗅之作嚏。本品按干燥品计算，含华蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的总量不得少于6.0％。
[功能主治]
解毒，止痛，开窍醒神。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑吐泻，腹痛神昏，手术麻醉等。
【性味归经】辛，温；有毒。归心经。
【功能主治】解毒，止痛，开窍醒神。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑神昏，腹痛吐泻。
【用法用量】 0.015～0.03g，多入丸散用。外用适量。
【注意】孕妇慎用。
【贮藏】置干燥处，防潮。
【摘录】《中国药典》
【药理作用】
1.强心作用：
蟾毒配基类和蟾蜍毒素类化合物均有强心作用，但蟾毒配基类化合物作用更为明显，其化学结构与强心作用有一定的关系。对猫离体心脏乳头肌标本，蟾毒灵及日蟾毒它灵的强心作用的最低有效浓度为10（-8）g/ml；脂蟾毒配基、华蟾毒精的强心作用的最低有效浓度为10（-7）g/ml。华蟾毒与化蟾毒精的作用相似，以适宜浓度灌注蛙心，可使其停止于收缩期，给麻醉猫、狗静脉注射引起心博减慢，收缩振幅变大，心律不整，继而心动过速而死亡；在麻醉狗所得的心电图呈现P-R间期延长、心室率变慢、异性节律、期外收缩、束枝传导阻滞、T波变平或倒置，继而室性心动过速，室性纤维而死亡；认为蟾毒配基对心脏的作用系通过迷走神经中枢或末梢，并可直接作用于心肌，与洋地黄相比，可能因无糖基存在，蟾毒配基与蟾毒的强心作用较弱并缺乏持久性，因此无积蓄作用，亦有报告精氨酸能延长其强心作用。六神丸的强心作用提示，它能加强心肌功能，随着剂量的变化而呈现反向转向的调节效应，对改善局部组织和修复是有益的。实验证明，蟾毒配基及蟾毒的强心作用主要表现在增大心肌收缩力，增加心博出量，减低心率，消除水肿与呼吸道困难。在日本它主要作为呼吸兴奋剂用于临床，而在我国以兴奋呼吸、升压药物用于临床。它增强心肌收缩力的作用不是反射性的，而是直接作用于心肌细胞的结果，多数认为蟾毒配基能加强心肌收缩力是由于蟾毒配基抑制心肌细胞膜上的Na+-K+-ATP酶，从而使心肌细胞内的Na+浓度相对增高，钙离子则通过 Na+-Ca2+交换而进入心肌细胞、结果使心肌收缩力加大。亦有实验证明，蟾酥能增加人体单核白细胞的环磷腺苷的水平，而由于环磷腺甙的增加，提高心肌磷酸化酶激酶的活性，在磷酸化酶激酶的作用下，使无活性的磷酸化酶b转变成有活性的磷酸化酶a，因此促进糖元分解，促使产生更多的ATP，ATP作为心肌收缩的原动力，使心肌充分发挥作用。
蟾酥抗肿瘤作用的研究进展
时珍国医国药２０１０年第２１卷第１期ＬＩＳＨＩＺＨＥＮＭＥＤＩＣＩＮＥＡＮＤＭＡＴＥＲＩＡＭＥＤＩＣＡＲＥＳＥＡＲＣＨ２０１０ＶＯＬ．２１ＮＯ．１关系，是鸡生蛋，天经地义。而中医的发展呢？哲学思想和医学经验构成了中医的两大支柱。它植根于中国古代文化土壤之中，是富有中国文化特色的医学。现在大家一说到中医，就会想到“黄帝内经”“阴阳五行”“天人合一”等等。《汉书・艺文志》记有“医经七家”“经方十一家”。可见当时不仅有人在研究基础医学理论，也有人在总结临床医学经验，但两者没有很好的结合。“医者巫也”“医者易也”，研究基础医学理论的古人将当时的主流文化“易”引入中医学，来解释许多临床现象。而中医的临床发展经历了“症状一药、类病一方、（方）证一方”三个阶段，最后
◇文献综述◇才由张仲景将两者进行了某种结合，创立了辨证论治体系。由此可知，中医是经验总结、理论升华的产物，是非线性对等关系。我们说，中医是先有临床经验，再对临床经验加以归纳演绎。它是蛋生鸡，必须满足三个条件：鸡信息＋蛋信息＋一定条件。中医的证候包含了“类病信息＋病机信息”，也就是说，中医的“方”除了可以“方证相应施治”，出现什么方证就用什么方；还可以“病机辨证论治”，但必须注意“类病信息”，同时必须注意因人、因地、因时。
蟾酥抗肿瘤作用的研究进展
周慧，韩玉梅（重庆工学院・化学与生物工程学院，重庆４０００５０）摘要：蟾酥为我国的传统中药，临床上用于肿瘤的治疗并取得了良好的效果。文章综述了蟾酥抗肿瘤作用及近年来的研究进展。关键词：蟾酥：抗肿瘤中图分类号：Ｒ２８５．５文献标识码：Ｂ文章编号：１００８－０８０５（２０１０）０１－０２０４－０２中药蟾酥（ＶｅｎｅｎｕｍＢｕｆｏｎｉｓ）足蟾蜍科动物中华大蟾蜍８咖降…。６咖ｇａｒｇａｒｉｚａｒ醇Ｃａｎｔｏｒ或黑眶蟾蜍８ｕｆｏｍｅｌａｎｏｓｔｉｃｔｕｓＳｃｈｎｅｉｄｅｒ的耳后腺或皮肤腺所分泌的白色浆液，多于夏、秋二季捕捉蟾蜍，挤取，干燥，加工而成‘“。其性味甘、辛，温，有毒，具有解毒、止痛、开窍醒神之功能，用于痈疽疔疮、咽喉肿痛、中暑神昏、腹痛吐泻等症。蟾酥临床应用广泛，是喉症丸、六神丸、牛黄消炎片等中成药的主要成分。蟾酥自２０世纪８０年代投入临床应用以来，在抗肿瘤的治疗中取得一定疗效。现将蟾酥抗肿瘤作用的研究综述如下。１蟾酥的活性成分蟾酥的化学成分复杂，目前已确定结构的化合物主要有以下几类：蟾毒配基类（ｂｕｆｏｇｅｎｉｎｓ）：为脂溶性成分。蟾酥中含有其中１５种成分，其中含量最高的前３种成分：华蟾毒精（ＣＢ）（４．１％～５．６％）、脂蟾毒配基（ＲＢＧ）（１．７％一５．５％）和蟾毒灵（ＢＬ）（１．２５％～２．４％）‘引。蟾蜍毒素类（ｂｕｆｏｔｏｘｉｎｓ）：为水溶性成分。该类化合物包括：蟾蜍甾二烯类、强心甾烯蟾毒类、吲哚碱类、醇类及多糖、氨基酸、肽类、。肾上腺素等ｐＪ。蟾毒色胺类（ｂｕｆｏｔｅｎｉｎｅｓ）：为水溶性成分。已明确的化合物有５一羟色胺、蟾毒色胺、蟾毒季胺、蟾蜍塞宁、脱氢蟾毒色胺、蟾毒色胺氢溴酸盐等‘３Ｊ。见图１。２蟾酥的抗肿瘤作用及作用机制蟾酥对小鼠肉瘤Ｓ。。、兔ＢＰ瘤、子宫颈癌、腹水型肝癌等均有抑制作用。，延长患精原细胞癌、腹水癌和肝癌小鼠的生存期，试管中对自血病细胞有抑制作用。蟾酥能不同程度地防治化疗和放疗引起的白细胞下降，对正下降者用蟾酥可回升，且不再下收稿日期：２００９－０２－２２；修订１５１期：２００９－０５－２１基金项目：重庆市教委项目（Ｎｏ．ＫＪ０８０６０６）作者简介：周慧（１９８４一），女（汉族），山西忻州人，现为重庆理工大学在读硕士研究生，主要从事天然药物研究与开发工作．・２０４・２．１肝癌范健等用乳化聚合法制备的华蟾酥精明胶微球选择性地栓寨肝窦前动脉，显示了较好的抗肝癌作用。用华蟾素注射液与蟾蜍注射液治疗原发性肝癌有效率５２．１％、治疗肝癌有效率６４．４％。复方蟾龙丸治疗原发性肝癌１３７例，有效率４８．２％；复方蟾酥片治疗肝癌１２０例，有效率达５０％∞１。蟾毒灵（ＢＬ）对ＳＭＭＣ７７２１细胞具有显著的细胞毒作用，形态学和ＤＮＡ片段化检测证实ＢＬ诱导的细胞死亡以凋亡为主；抑癌基因ｐ２１ｗａｆｌ／ｅｉｐｚ在ＢＬ诱导下表达上调。初步证实，ＢＬ通过上调ｐ２１ｗａｆｌ／ｃｉｐｚ表达，下调增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达，从而抑制肝癌细胞生长ＭＪ。黄应申等一。探讨ｒ脂蟾毒配基（ＲＧ）诱导人肝癌Ｂｅｌ－７４０２细胞凋亡的作用机制，结果表明，ＲＧ可诱导人肝癌细胞Ｂｅｌ－７４０２细胞凋亡，其诱导作用可能是通过线粒体通路实现的。
蟾蜍在肿瘤病中的对症辅助治疗作用
・９Ｏ・ 中国现代药物应用２００９年ｔ月第３卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｏｄ’Ｄｒｕｇ ａｐｐｌ。Ｊａｎ ２００９，Ｖｏ１．３，Ｎｏ．１ 加人ｌ ｌ１１ｌ，１．５ ｍｌ，２０ ｍｌ，２．５ ｍｌ，３．０ ｎｄ的１，８－二羟基蒽醌标准 品液，以下按ｚ １项下操作。ａ ５％醋酸镁．甲醇液溶液显色后， 计算平均回收率为１０１．４５％，ＲＳＤ为２．７１％，（ｎ＝５） ２．９样品含量测定分别准确量取３组待测样品储备液各 ５ ｍｌ，在水浴上挥去甲醇后，残渣加０．５％醋酸镁一甲醇液溶 解并稀释至１Ｏ ｍｌ，各组待测样品平行测定３次，平均含量为 ２６．２７ｕｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．１２％。 ３讨论 查阅文献知对苍耳子中总葸醌的含量测定未见报道。 本研究选用醋酸镁－甲醇法显色，显色后在９０ ｍｉｎ内测定稳 定性好，结果可靠。本法较之曹氏法与罗氏法简便快速 ， 更易于推广。 参考文献 ［１］ 刘玉红，郝震峰．苍耳子化学成分及药理作用研究进展．山东 医药工业，２００３，２２（１）：２２－２３． ［２］ 肖培根．新编中药志．第二卷．北京：化学工业出版社， ２００２：２６５． ［３］ 黄文华，余竞光，孙兰，等．中药苍耳子化学成分的研究．中国 中药杂志，２００５，３０（１３）：１０２７－１０２８． ［４］ 王慧，高晓霞，张立伟．决明子复方降脂茶总蒽醌含量测定．光 谱实验室。２００７，２４（１）：１９－２１． ［５］许雄飞，叶铭．大黄总蒽醌含量测定的对比实验．海峡药学， ２００１，１３（增刊）：１．２． 蟾蜍在肿瘤病中的对症辅助治疗作用 种振吴颖颖 疼痛、发热、呃逆等症状以及放化疗后的白血球下降，都 是肿瘤发病及治疗过程中较常见的现象，蟾蜍不但能直接治 疗肿瘤，还能改善这些症状，提高肿瘤患者的生活质量。 １治疗癌性疼痛 《中药大辞典》中说蟾蜍、蟾酥具有“定痛”的功效；蟾 蜍、蟾酥用来麻醉止痛，在古代方剂文献中也早有记载。如： 《医宗金鉴》的琼酥散、《种福堂方》的孙武散、《伤科补要》的 定痛散等等。 现代药理实验亦对此予以证明：吉田诚一郎等人研究了 十种蟾毒配基及蟾蜍毒素类化合物的表面麻醉实验用豚鼠 角膜进行实验，眼内滴人等量药物后，每隔５ ｍｉｎ刺激６次， 共３０ ｍｉｎ，统计３０ ｍｉｎ内刺激角膜不发生反应的次数，以无 反应的百分率作为局麻过程的指标，发现其局麻作用大部分 比可卡因强，其中蟾毒灵的局麻作用较可卡因大３０—６ｏ倍， 且无局部刺激作用 其作用机制与肌细胞的缓慢除极和释放 乙酰胆碱的机制有关…。亦有实验证明蟾酥提取物甾醇类 物质对小鼠实验性疼痛能提高痛域，有较明显的镇痛作用。 ８０％的蟾酥醇提取物表面麻醉作用最强，可为可卡因的９ｏ 倍 。金其泉等报导，华蟾素对小鼠热板刺激有温和持久的 镇痛作用 Ｊ。朱世浩等用鲜蟾皮外敷治疗晚期癌痛２０例， 全部均在２ ｈ后疼痛逐渐缓解，２４ ｈ达到完全止痛，１次帖敷 可止痛达２４ ｈ以上，连续贴敷５－７次，疼痛几乎可消失，无需 吃止痛药，亦无不良毒副作用 Ｊ。张盘根治疗癌性疼痛３０ 例，给予华蟾素２０ ｍｌ加入５％葡萄糖注射液２５０ ｍｌ中，静脉 滴注，１次／ｄ连用１０ｄ为１疗程 ，发现有减轻疼痛，增强食 欲，起到了稳定病情、改善症状、延长生命的作用。王庆才等 用蟾雄膏治疗晚期癌痛１０３例，完全缓解５４例，部分缓解４０ 例，无效９例，总有效率为９１．２６％ 。姜焱等用冰蟾消肿止 痛膏治疗癌痛４ｏ例，显效ｌ０例，有效２４例，无效６例，显效 率２５％，总有效率８５％ 。陈映霞等用华蟾素３Ｏ Ｉｎｌ加入 ５％Ｇｓ５００ ｍｌ中缓慢静脉滴注，治疗骨转移癌疼痛３Ｏ例，ＣＲ ５例，ＰＲ ｌ４例，ＭＲ ４例，ＮＲ ７例，总有效率为７６．７％，一般在 ２—４ ｄ显效，停药后止痛效果可维持５～３０ ｄ Ｊ。 ２放、化疗的保护作用 蟾蜍能补虚，治疗虚痨，在祖国医学中早有记载。《日华子 作者单位：２３５０００安徽金蟾生化股份有限公司 本草》记载蟾酥能“治腰肾冷，并助阳气”；古代方剂文献中亦常 用蟾蜍、蟾酥配伍来治疗虚痨证，如：《博济方》的延龄膏，《良朋 汇集》的百灵丹、壮阳膏，《纲目拾遗》的神效乾丹等。 现代实验研究证明蟾蜍有提高机体免疫力，升高白细胞 等作用。刘家伟等用体内扩散盒琼脂培养法、体内扩散盒血 浆凝块培养法和外源性脾结节法研究了蟾酥针剂对小鼠造 血功能的影响。结果显示蟾酥可促进骨髓红系细胞集落 （ＣＦＵ—Ｅ）、粒系细胞集落（ＣＦＵ－Ｃ）和脾集落形成单位（ＣＦＵ— ｓ）的形成。提示蟾酥针剂内含有促进小鼠造血干细胞增殖 和分化的物质 Ｊ。进一步揭示出蟾酥免疫增强作用的机制 所在。 ． 临床上常用蟾蜍来防治化、放疗引起的毒副作用。乐蓓 蓓等用华蟾素联合化疗治疗恶性血液病时发现：加用大量华 蟾素组治疗前后白细胞及粒细胞的数值变化无显著差异，而 单纯化疗组则差异显著；加用华蟾素后急性白血病和恶性淋 巴瘤患者的感染显著减少，并且平均使用抗生素时间缩短。 说明该药有助于减轻恶性血液病化疗时对骨髓的抑制，对骨 髓正常造血细胞的恢复有一定的帮助；且能预防联合化疗时 感染的发生，并增加抗生素抗感染的效果Ｉ１ 。李新民等的 研究亦证明蟾皮制剂能不同程度地防治放、化疗引起的白血 球下降，对已下降者可使之回升，且不再下降 。 此外还有人报导用蟾蜍来治疗肿瘤引起的发热、顽固性 呃逆等症状取得良好效果“ ，但其作用机制尚未见文献 报道。 参考文献 ［１］解景田．脂蟾毒配基对人和犬心肌细胞膜反应性与后电位的 影响．中国药理学报，１９８５；６（４）：２５４－２５８． ［２］ 江苏新医学院《中药大辞典》编写组．中药大辞典．上海人民出 版杜，１９７５：２７１３－２７１４． ［３］金其泉，顾丽英，谢秋心等．蟾皮制剂的毒性安全和对中枢神 经系统作用的研究．蚌埠医学院学报，１９８２，７（３）：２５－２８． ［４］ 朱世浩，束永前，沈丽琴．鲜蟾皮外敷控制晚期癌痛的评估（摘 要）．实用中医内科杂志，１９９４，８（４）：４６． ［５］张盘根．华蟾素治疗癌性疼痛３Ｏ例．中国临床康复，２００３，７ （６）：９７６． ［６］ 王庆才，胨爱平，李苏，等．蟾雄膏外敷治疗癌性疼痛１０３例．陕 西中医。１９９３，１４（５）：１９５．
高效液相色谱法在中药制剂有效成分含量测定中的应用
北方药学2016年第13卷第2期
高效液相色谱法在中药制剂有效成分含量测定中的应用
陈华（鄂尔多斯市中心医院鄂尔多斯017000）
摘要：中药所含成分多样复杂，为质量标准的研究带来挑战。高效液相色谱法以其高效准确、灵敏、应用范围广等特点，在中药含量测定中发挥着重大作用。本文对高效液相色谱法在中药制剂有效成分含量测定中的应用展开介绍，其中包括生物碱类、中药苷类、黄酮类、萜类成分含量测定。关键词：高效液相色谱法中药制剂有效成分含量测定
中图分类号：R927.1 文献标识码：A 文章编号：1672-8351（2016）02-0019-01
近年来，高效液相色谱法（HPLC）在多种结构类型的中药活
性成分含量测定中的应用较为广泛。这是由于HPLC与其他分
离分析方法相比，具有灵敏度高、柱效高、分离速度快、重现性
好、用范围广、操作方便等优点。因此，HPLC成为中药制剂有效
成分质量控制的重要手段。以下对其在生物碱类、中药苷类、黄
酮类、萜类有效成分含量测定中的应用进行介绍。
1生物碱类成分含量测定
生物碱在中药界分布较广、种类较多、化学结构复杂，大多
数生物碱化合物具有药理活性，成为中药的有效成分之一。目
前，临床中的生物碱成分大约80多种，由于生物碱存在形式不
同（游离型与成盐型），碱性强弱不同。采用HPLC法能够准确测
定生物碱的有效成分含量。侯伟雄等[1]利用HPLC法测定苦参碱
分散片中苦参碱的含量，得出的结论是HPLC测定苦参碱含量
准确、操作简便、结果可靠、方法可行。朱丹妮等[2]采用蒸发光散
射检测器和Shimadzu-10A高效液相色谱仪，对贝母类药材中
生物碱成分进行了测定，结果表明，贝母类生物碱HPLC-ELSD
图谱有明显差异，样品制备简便，分离度较好，重现性佳，可用
于贝母类药材的质量控制。
2中药苷类成分的含量测定
苷类在中药界分布广泛，生理活性多种多样，如芍药苷、苯
甲酰芍药苷类具有抗氧化、抗炎、抗肝损害、调节免疫等作用。
采用高效液相色谱法测定中药苷类成分的含量，国内外均有文
华蟾素联合TP方案治疗晚期肺癌28例近期疗效观察论文
华蟾素联合TP方案治疗晚期肺癌28例近期疗效观察
【摘要】 目的 了解华蟾素联合tp方案治疗晚期肺癌近期疗效。方法与资料 选取来我院就诊的患者自2008年4月——2011年3月共计28例患者，我科以华蟾素注射液联合tp方案化疗治疗晚期肺癌28例[2]。研究组化疗第一天开始每天应用华蟾素20ml，14天为一疗程，对照组单纯放疗。其中对比分析了两组患者不同的治疗方法有效性及不同反应情况。结果 经治疗后28例病例中2例显著疗效，13例有效，13例无效。总有效率53.57%，显著有效率占10.71%。在治疗期间，部分症状有所改善，主要是咳嗽、咳痰减轻者占64.28%（18/28），胸痛及肝区疼痛明显减轻者占46.43%（13/28），其余改善不明显。研究组在咳嗽、胸痛等主要症状缓解方面明显优于对照组。结论 [3]华蟾素联合tp方案治疗晚期肺癌近期疗效明显优于对照组。通过大量的临床实践研究证实，值得进行临床推广应用。
【关键词】 华蟾素；紫杉醇；顺铂；晚期肺癌；近期疗效
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.06.513 文章编号：1004-7484（2013）-06-3278-01
原发性支气管肺癌是发生于支气管黏膜上皮的恶性肿瘤，在恶性肿瘤中发病率最高，大多数患者确诊时已失去手术治疗机会。晚期肺癌的主要治疗有很多新疗法、新设备、新理念都用在了临床医疗上。这些设备、医药在给患者减轻痛苦，也给她们对抗疾病，治愈疾病增添了不少的信心和动力。肺癌晚期怎么治疗，通过目前的临床研究和探索总结，我们都有了一套比较完整的治疗法。就华蟾素[1]联合tp（pdx，ddp）方案治疗晚期肺癌疗效做了以下总结。
1 临床资料
1.1 一般资料 选取来我院就诊的28例患者均经病理学或细胞学多方诊断后确诊，所有病例均有可测量肿块，kps评分≥60分，预计生存期在半年以上，其中男性19例，女性9例，男性患者占68%，患者年龄32-70岁不等，而50岁以上患者23例，占总人数的82%，所以患者心脏及肝肾功能均无异常。均为iiib-iv期患者，其中20例为鳞癌，8例为腺癌，所有患者均是手术无法切除的晚期患者。
华蟾素治疗原发性肝癌的多种作用机制
华蟾素治疗原发性肝癌的多种作用机制
王宁宁;姚海燕;杨阳;张玉影;雒静静(综述);齐玲(审校)
【摘 要】华蟾素是自中华大蟾蜍提取出的，它具有低毒高效的特性，由于它对多种肿瘤细胞都有作用，因此，它成为抗肿瘤药物研究的热点。肝癌是我国最常见的恶性肿瘤，本文就华蟾素对肝癌的作用机制进行一一综述。
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】2015(000)003
【总页数】3页(P229-231)
【关键词】华蟾素;肝癌;机制
【作 者】王宁宁;姚海燕;杨阳;张玉影;雒静静(综述);齐玲(审校)
【作者单位】吉林医药学院2012级检验本科班，吉林 吉林 132013;吉林医药学院2012级检验本科班，吉林 吉林 132013;吉林医药学院2012级临床本科班，吉林 吉林 132013;吉林医药学院2012级预防本科班，吉林 吉林 132013;吉林医药学院2012级预防本科班，吉林 吉林 132013;吉林医药学院病理教研室，吉林
吉林 132013
【正文语种】中 文
【中图分类】R285
中华大蟾蜍是我国传统的中药材，将其阴干皮经提取加工制成的灭菌水溶液即为华蟾素。华蟾素的主要生物活性成分为蟾毒内酸类，如蟾酥毒素、脂蟾蜍配基、华蟾素毒基等［1］。华蟾素因其具有低毒、高效，并且对多种肿瘤都具有良好的治疗效果而受到国内外研究人员的广泛关注。肝癌绝大多数为原发性肝癌，原发性肝癌是指原发于肝细胞的恶性肿瘤，它是人体最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率逐年上升。因此，深入研究华蟾素对肝癌的作用机制对肝癌的治疗有着重大的意义［2］。
1 通过调控bcl-2/bax 影响肝癌细胞生长
细胞凋亡是一种细胞主动性死亡模式，在肿瘤的形成和演变过程中起着重要的作用。现已知多种基因与细胞凋亡信号转导有关，包括bcl-2 家族基因、p53、FAS、FASL 等都参与了凋亡的调控［3］。bcl-2 家族蛋白是编码能抑制或激活凋亡的膜结合蛋白。其中以bcl-2 蛋白最为主要，bcl-2 蛋白是一种与细胞凋亡密切相关的蛋白质，主要分布在线粒体外膜、细胞核及内质网上［4］。在肿瘤发生过程中，bcl-2 是非常重要的一种促癌基因，它与bax 结合，形成二聚体，使bax 不能形成bax-bax 二聚体，从而阻止bax 启动凋亡程序，抑制细胞凋亡［5］。