用离子交换法预处理的高效液相色谱―电化学检测法测定尿中儿茶酚胺
用高效液相色谱―电化学检测器测定人血浆中儿茶酚胺浓度
检测器：ＬＣ－４Ｂ电化学检测 器，Ａｇ／ＡｇＣｌ 为参比电极，ＴＬ－５玻璃碳电极为工作电极，设置 电位＋０．７２Ｖ Ｒａｎｇｅ０．２ｎＡ／Ｖ。
积分仪：ＡＴ＝１６，ＣＳ＝０．１ｃｍ／ｍｉｎ。
（四）样 品处理 ： 在１．０ｍｌ血浆中加入１．０ｍｌＴ ｒｉｓ缓冲液（ｐＨ８．６）， 再加入固体氧化铝２０ｍｇ，轻轻振摇１０ｍｉｎ，放置，弃 上清液，用５ｍｌ重蒸水洗涤沉淀三次并将沉淀转移 至微过滤瓶中，用０．５ｍ１０ ．１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌｏ 洗脱吸 附于氧化铝上的儿茶酚胺，洗脱液２０ 用于注射， 根据外标法定量。
实验部分
（一 ）仪器 美 国 Ｂｅｃｋｍａｎ公 司 ３４４型 色 谱系统，４２７型积分仪；美国ＢＡＳ公司ＬＣ－４Ｂ电 化学 检测器 。
（二）试剂 １．５ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－２％ ＥＤＴＡ缓 冲液 （ｐＨ８．６），０．１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌＯ４酸洗氧化铝， 儿茶酚胺标准混合液。
（三）色谱条件 柱：ＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅＯ ＤＳ （２．０ １５０ｍｍ， 流动相： ０，１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨＰＯ４＋０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴ Ａ＋０．５ｍｍｏｌ／Ｌ 庚基磺酸钠，ｐＨ５．０，０．２２
应用 实例
用高效液相色谱—电化学检测器测定人血浆中儿茶酚胺浓度
向春
（第 三军医大学野战外科研究所，重庆 ，６３００４２）
国内外文献已报道过很多测定儿茶酚胺 的 方 法，作者在此基础上用反相离子对色谱电化学检测
器，也达到了分离测定人血浆儿茶酚胺浓度 的要
求，结果与文献报道基本一致［１－３］，可用于临 床 及科研中人血浆儿茶酚胺浓度的测定。
乙酸乙 酯（７０：３０）；流 速：２．５ｍｌ／ｍｉｎ；ＵＶ检 测 器 ： ＝２８０ｎｍ；纸速 ：５．０ｍｍ／ｍｉｎ；进样 量：１００
高效液相法测定血中儿茶酚胺性能评价
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（三）高效液相法测定血中儿茶酚胺性能评价
1.由于血中儿茶酚胺生理浓度较低，一般采用较敏感的电化 学方法或荧光检测仪进行测定。由于血浆和尿液中各种成 分较多，多采用氧化铝吸附法或微小柱常规分离。 2. 儿茶酚胺类物质本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可 以利用其荧光进行检测，但是由于儿茶酚胺类物质的自然 荧光相对较弱，因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物 质，借此提高检测灵敏度。
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二、骨型碱性磷酸酶测定
4．电泳法 有亲和电泳法和琼脂凝胶电泳等。亲和电泳 是利用麦胚凝集素(WGA)特异地与B-ALP结合形成WGA-BALP复合物,该复合物在电场中不泳动或泳动很慢,从而将 骨、肝型ALP清楚地分开。
5.其他方法 热失活法和化学抑制法，方法灵敏度和特异 性较差，目前只用作鉴别某些病理血清中ALP组织来源的 过筛试验。
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二、骨型碱性磷酸酶测定
2.麦芽凝集素沉淀法 由于ALP同工酶的糖基化不同，麦芽 凝集素能选择结合B-ALP的N-乙酰氨基葡萄糖和唾液酸残 基，离心沉淀，测定上清液中B-ALP的活性。 3.酶免疫活性分析法 将抗-B-ALP包被在固相载体上，标 本中抗原ALP与抗体特异性结合，与抗体结合的B-ALP催 化对硝基酚磷酸二钠，405nm比色。
4.血浆和尿儿茶酚胺的检测，需特别注意检测前因素的影响。 E和NE都是主要的应激激素，任何应激状态都可导致其大 量释放，如由卧位突然变为站位，血中E和NE可立即升高 2~3倍。E和NE极易氧化，在采血后若不立即分离红细胞， 室温下E和NE浓度将迅速下降。故采血后需尽快分离血清。 多数降压药都可影响儿茶酚胺的释放，故在采血前3~7天 应停用降压药。
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（一）测定方法概述
正常情况下,体内儿茶酚胺浓度很低,需要用高灵敏的分析 方法。常用的有HPLC法、荧光法、放射酶学法、气相色谱 法等，其中以HPLC法应用较多，主要是因为它的高分离效 率，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前普遍的 方法。 VMA的测定早期有化学比色法、纸层析、薄层层析、醋酸乙 酯高压电泳法等,精确性差,费时。近年来, HP（二）麦胚凝集素亲和层析法性能评价
儿茶酚胺测定方法
儿茶酚胺测定方法儿茶酚胺(也称为生物胺)是一类含有芳香胺结构的有机化合物，包括组胺、色胺、肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等。
它们在人体内起着重要的生理功能，包括调节血压、控制神经传递、参与免疫反应等。
因此，准确测量儿茶酚胺的含量对于临床诊断、药物研发以及食品安全等方面具有重要意义。
目前，有多种方法可以用来测定儿茶酚胺的含量，其中最常用的方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和电化学法。
下面将详细介绍这些方法的原理和优缺点。
1. 高效液相色谱法(HPLC)是测定儿茶酚胺含量最常用的方法之一。
它基于样品中的儿茶酚胺在液相中的化学行为进行分离和检测。
首先，样品经过合适的前处理步骤，如固相萃取、酸解等，以提取出儿茶酚胺。
然后，将提取液注入高效液相色谱仪中，通过固定相的相互作用与待测儿茶酚胺发生分离。
最后，使用紫外光检测器或电化学检测器在特定波长下进行检测和定量。
这种方法的优点是分离效果好、测量灵敏度高，具有较高的选择性和准确性。
然而，HPLC方法需要复杂的仪器装置和操作技术，在分析过程中可能会受到杂质的干扰。
2. 气相色谱法(GC)是另一种常用的儿茶酚胺测定方法。
与HPLC类似，样品需要经过前处理步骤来提取儿茶酚胺。
然后，将提取液注入气相色谱仪中，通过气相载气流动相与待测儿茶酚胺发生分离。
最后，使用火焰离子化检测器或电子捕获检测器进行检测和定量。
气相色谱法的优点是分离效果好，分析速度快，且对样品矩阵的干扰较小。
然而，这种方法对于热稳定性较差的儿茶酚胺样品可能会导致峰形变形或降解，同时需要较高的操作技术水平。
3. 电化学法是一种测定儿茶酚胺含量的简便方法。
基于儿茶酚胺的电化学活性，在适当的电极上触发与儿茶酚胺的氧化或还原反应，并利用产生的电流或电势信号进行测定和定量。
电化学法的优点是样品前处理简单，测量速度快，操作简便。
同时，电化学法对儿茶酚胺的测量灵敏度较高，且具有良好的选择性。
然而，由于儿茶酚胺具有不同的氧化还原性质，在不同pH值和电极材料条件下可能会出现不同的电化学行为，因此需要根据具体的分析对象选择适当的电极和工作条件。
检测24H尿液中儿茶酚胺代谢物含量的液质分析方法[发明专利]
![检测24H尿液中儿茶酚胺代谢物含量的液质分析方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/4720f795a26925c52dc5bf82.png)
专利名称：检测24H尿液中儿茶酚胺代谢物含量的液质分析方法
专利类型：发明专利
发明人：刘春冉,翟瑞雪,倪君君,贾永娟
申请号：CN201910287366.4
申请日：20190411
公开号：CN109932455A
公开日：
20190625
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明检测24H尿液中儿茶酚胺代谢物含量的液质分析方法是用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对标准溶液进行标定，拟合出标准曲线方程为y＝a*x+b、y＝c*x+d和y＝e*x+f，在该待检测24H尿液经过处理后，同样使用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对待测尿液进行检测，得到待测尿液y、y和y值，将y、y和y值代入标准曲线方程中，通过计算得到待测尿液中儿茶酚胺三种代谢物相对浓度x、x和x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该尿液中待检测24H尿液中的儿茶酚胺三种代谢物浓度，该方法检测过程简便快速，检测灵敏度高，利于对患者体内儿茶酚胺三种代谢物进行测定。
申请人：北京和合医学诊断技术股份有限公司
地址：101111 北京市大兴区经济技术开发区经海六路5号东尚E园14号楼
国籍：CN
代理机构：北京双收知识产权代理有限公司
代理人：解政文
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液相色谱串联电化学检测器测定人体血浆和尿液儿茶酚胺浓度
液相色谱串联电化学检测器测定人体血浆和尿液儿茶酚胺浓度作者：王玲阳愿望来源：《现代养生·下半月》2015年第12期【摘要】目的：建立一种简便、快速、灵敏、准确的测定人体血浆、尿中儿茶酚胺的方法，为临床检测和研究提供技术支持。
方法：采用活性氧化铝（AL2O3）对血浆和尿液标本中的儿荼酚胺进行酸解吸附、净化，利用离子对反相高效液相色谱串联电化学检测器法（RP-HPLC-ECD）对其测定，工作电压+0.80V，灵敏度50nA，以外标法定量。
结果：去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺分离良好，出峰时间分别为8分钟、9分钟、11分钟，且不受体内其他内源性物质及代谢物干扰。
样本在2.0-100ng/ml浓度范围内有良好线性关系，分离参数R≥1.5，其方法绝（相）对回收率分别为82.5-104.4%、83.4-100.7%、77.0-91.8%，最低检测浓度1.0ng/ml。
结论：RP-HPLC-ECD检测人体血浆、尿中儿茶酚胺具有操作简便，分析快速，特异性高，重复性好的优点。
【关键词】儿茶酚胺；反相高效液相色谱；嗜铬细胞瘤单胺类神经递质儿茶酚胺类（Catecholamines，CAs）化合物，主要包括去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）。
它是人类中枢神经重要的信息传递物质，不仅直接参与植物神经功能的调控，还与许多功能型疾病有关。
血浆和尿液中的CAs含量不但可作为嗜铬细胞瘤的诊断依据，而且可应用于其他与儿茶酚胺有关疾病的研究，对研究这类神经递质的生理功能及其代谢变化具有重要意义。
传统的荧光法与放射免疫测定法（Radio-immunassay，RIA），气相色谱法（GC），或步骤繁琐，或价格昂贵不易实现。
由于电化学检测器的高灵敏度，使该类化合物体内微量分析得以应用。
本文建立的RP-HPLC-ECD测定人体血浆及尿中的儿茶酚胺，具有方法简单，快速，专一，在应用中重复性较好，适用于临床测定及研究人体内儿茶酚胺的代谢分析。
高效液相-荧光检测法测定尿液中儿茶酚胺类化合物的含量
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安 徽 医 药 Ａ ｈ ｉ ｅ ｉ ｌ ｎ ｈ ｒａｅｔ ａ Ｊｕｎｌ ０ ７Ｊｎ ａｙ１ （ ） ｎ ｕ Ｍ ｄｃ ｄＰ ａｍ ｃｕｉ ｌ ｏｒａ ２０ ａ ｕｒ；１ １ ａａ ｃ
高效液相－ 荧光检测法测定尿液中儿茶酚胺类化合物的含量
Ｃｏ ｃｕ ｉｎ Ｔ ｅｍｅｈ ｄ ｉ ｒｐｄ，ａ ｃ ｒｔ ｔａ ｙａ ｄ ｗｔ ｏ ｄ ｒｐ ａａ ｉ ｔ． ｎ ｌ ｓ ｈ ｔｏ ｓ ａ ｉ ｏ ｃ ｕａｅ，ｓｅｄ ｎ ｉ ｇ ｏ ｅ ｅ ｔｂｌｙ ｈ ｉ Ｋｅ ｒ ｓ：ａｅ ｈ ｌｍｉｅ ： ｕ ｎ ｕ ｎ ； ＬＣ Ｆ ｙ ｗｏ ｄ ｅ ｔｅ ｏａ ｎ ｓ ｈ ｍａ ｒ ｅ ＨＰ － Ｄ ｉ
超高效液相色谱串联质谱法检测晨尿中儿茶酚胺及其代谢产物的价值
作者简介:闫亚娟,女,技师,主要从事临床生化研究.㊀ә㊀通信作者,E Ｇm a i l :l u n l m q d ＠１６３．c o m .本文引用格式:闫亚娟,黄猛,张丹,等．超高效液相色谱串联质谱法检测晨尿中儿茶酚胺及其代谢产物的价值[J ]．国际检验医学杂志,２０２１,４２(１０):１２２８Ｇ１２３２．论㊀㊀著超高效液相色谱串联质谱法检测晨尿中儿茶酚胺及其代谢产物的价值闫亚娟１,黄㊀猛２,张㊀丹２,刘慧琳２,伦立民２ә１．青岛大学医学部,山东青岛２６６０００;２．青岛大学附属医院检验科,山东青岛２６６０００㊀㊀摘㊀要:目的㊀建立一种稳定㊁灵敏㊁可靠且可以同时检测尿儿茶酚胺及其代谢产物的方法.方法㊀采用超高效液相色谱串联质谱法(U P L C ＧM S /M S )检测晨尿标本中儿茶酚胺及其代谢产物.采用固相萃取的前处理方法,对液相色谱条件及质谱条件进行优化,并对该方法的检测限㊁定量下限㊁线性㊁精密度㊁准确度和基质效应及稳定性进行性能验证.检测１００例体检健康者晨尿及其中２０例体检健康者２４h 尿液,根据肌酐检测值对稀释差异进行归一化,考察晨尿与２４h 尿液收集这两种不同采样方法之间检测儿茶酚及其代谢产物的相关性,并建立了晨尿检测６种分析物的参考区间.结果㊀６种分析物在相应的浓度范围内均线性关系良好,精密度㊁准确度㊁基质效应均＜１０％,室温放置２４h ㊁４ħ放置２４h ㊁４ħ放置４８h 及 ８０ħ放置７d 稳定性均较好,变化ɤ６．２％.晨尿与２４h 尿液标本检测结果呈正相关(r ＝０．９３~０．９７,P ＜０．０００１),６种分析物的参考区间去甲肾上腺素为２．６~１４０．４μg /g C r ,肾上腺素为０．３~３７．２μg /g C r ,多巴胺为４３．４~５６１．８μg /g C r ,３Ｇ甲氧酪胺为１８．０~１６５．７μg /g C r ,甲氧基去甲肾上腺素为１５．１~２４１．５μg /g Cr ,甲氧基肾上腺素为６．８~１９２．０μg /g C r .结论㊀建立了一种方便快速㊁灵敏㊁特异的U P L C ＧM S /M S ,一次进样可同时检测晨尿中６种儿茶酚胺及其代谢产物,可为儿茶酚胺的常规检测及临床应用提供一种简单㊁可靠的新手段.关键词:液相色谱串联质谱法;㊀儿茶酚胺;㊀甲氧基肾上腺素;㊀３Ｇ甲氧酪胺D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１６７３Ｇ４１３０．２０２１．１０．０１７中图法分类号:R ４４６．９文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０２１)１０Ｇ１２２８Ｇ０６文献标志码:A D e t e r m i n a t i o nv a l u e o f c a t e c h o l a m i n e s a n d t h e i rm e t a b o l i t e s i nm o r n i n g u r i n e b y u l t r ah i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y Ｇt a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r yY A N Y a j u a n １,HU A N G M e n g ２,Z HA N G D a n ２,L I U H u i l i n ２,L U N L i m i n ２ә１．M e d i c a lC o l l e g e ,Q i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n g d a o ,S h a n d o n g ２６６０００,C h i n a ;２．D e pa r t m e n t o f C l i n i c a lL ab o r a t o r y ,t h eA f f i l i a t e d H o s p i t a l o f Q i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n g d a o ,S h a n d o n g ２６６０００,C h i n a A b s t r a c t :O b j e c t i v e ㊀T o e s t a b l i s ha s t a b l e ,s e n s i t i v e a n d r e l i a b l em e t h o d f o r t h e d e t e c t i o no f u r i n a r y c a t e Ｇc h o l a m i n e s a n d t h e i rm e t a b o l i t e s ．M e t h o d s ㊀T h e c a t e c h o l a m i n e s a n d t h e i rm e t a b o l i t e s i n m o r n i n g ur i n e s a m Ｇp l e sw e r e d e t e c t e db y u l t r ah i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y Ｇt a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y (U P L C ＧM S /M S )．S o l i d p h a s e e x t r a c t i o nw a s u s e d a s t h e p r e t r e a t m e n tm e t h o d ,a n d o p t i m i z e d t h e c o n d i t i o n s o f l i qu i d c h r o Ｇm a t o g r a p h y a n dm a s s s p e c t r o m e t r y ,a n dv e r i f i e d t h e p e r f o r m a n c e o f t h em e t h o d ,i n c l u d i n g li m i t o f d e t e c t i o n ,l i m i t o f q u a n t i t a t i o n ,l i n e a r i t y ,p r e c i s i o n ,a c c u r a c y ,m a t r i xe f f e c t a n d s t a b i l i t y ．M o r n i n g u r i n e o f １００a p p a r e n t l y h e a l t h y s u b je c t s a n d ２４hu r i n e of ２０c a s e s o f t h e m w e r em e a s u r e d ．T h e d i f f e r e n c e o f d i l u t i o nw a s n o r m a l i z e d a c c o r d i ng t o th e c r e a ti n i n em e a s u r e d v a l u e ．T h e c o r r e l a t i o nb e t w e e n t h e r e s u l t s o f ６k i n d s o f a n a l yt e s d e t e c t e d b y m o r n i n g u r i n e a n d ２４hu r i n ew e r e a n a l y z e d ,t h e ne s t a b l i s h e d t h e r e f e r e n c e i n t e r v a l o f ６k i n d so f a n a l yt e s d e t e c t e db y m o r n i n g u r i n e ．R e s u l t s ㊀W i t h i nt h ec o r r e s p o n d i n g c o n c e n t r a t i o nr a n g e ,t h e l i n e a r r e l a t i o n s h i p o f t h e ６k i n d s o f a n a l y t e sw a s g o o d ,t h e p r e c i s i o n ,a c c u r a c y a n dm a t r i x e f f e c tw e r e a l l l e s s t h a n １０％．T h e s t a b i l i t y o f t h e a n a l y t e sw a s g o o dw h e n p l a c e d a t r o o mt e m pe r a t u r ef o r ２４h ,a t ４ħf o r ２４h ,a t ４ħf o r ４８ha n da t －８０ħf o r ７d ,w i t h t h e c h a ng e e q u a l o r l e s s th a n ６．２％．T h e r e s u l t s o fm o r ni n g u r i n e a n d ２４hu r i n e s a m pl e s s i g n i f i c a n t l y co r r e l a t e d (r ＝０．９３ ０．９７,P ＜０．０００１)．T h e r e f e r e n c e i n t e r v a l o f c a t e c h o l a m i n e sw e r e a s f o l Ｇl o w s ,n o r a d r e n a l i n e ２．６－１４０．４μg /g C r ,a d r e n a l i n e０．３ ３７．２μg /g C r ,d o p a m i n e４３．４ ５６１．８μg /g C r ,３Ｇm e t h o x y t y r a m i n e １８．０ １６５．７μg /g C r ,n o r m e t a n e p h r i n e１５．１ ２４１．５μg /g C r ,m a t a n e ph r i n e６．８ １９２．０８２２１ 国际检验医学杂志２０２１年５月第４２卷第１０期㊀I n t J L a bM e d ,M a y ２０２１,V o l ．４２,N o ．１０μg/g C r．C o n c l u s i o n㊀Ac o n v e n i e n t,r a p i da n ds e n s i t i v eU P L CＧM S/M S m e t h o df o r t h ed e t e r m i n a t i o no f６k i n d s o f c a t e c h o l a m i n e s a n d t h e i rm e t a b o l i t e s i s e s t a b l i s h e d,w h i c h i s e x p e c t e d t o p r o v i d e a s i m p l e,c o n v e n i e n t, a c c u r a t e a n d s e n s i t i v en e w m e t h o d f o r t h e r o u t i n e d e t e c t i o na n d c l i n i c a l a p p l i c a t i o no f c a t e c h o l a m i n e s．K e y w o r d s:l i q u i dc h r o m a t o g r a p h yＧt a n d e m m a s ss p e c t r o m e t r y;㊀c a t e c h o l a m i n e s;㊀m e t a n e p h r i n e;㊀３Ｇm e t h o x y t y r a m i n e㊀㊀尿液儿茶酚胺及其代谢产物的检测对嗜铬细胞瘤的诊断具有重要意义[１Ｇ２].近年来,国内外已建立了多种液相色谱串联质谱法(L CＧM S/M S)用于定量检测尿液中的儿茶酚胺及其代谢产物[３Ｇ６].这些方法大多留取患者２４h的尿液进行检测,存在诸多不足之处,如标本用量多㊁检测耗时长㊁标本前处理操作复杂等,限制了儿茶酚胺及其代谢产物检测的临床应用.因此,本研究旨在建立一种快速且可同时检测尿液儿茶酚胺及其代谢产物的超高效液相色谱串联质谱法(U P L CＧM S/M S),采用简单㊁特异的微量尿样固相萃取,一次进样同时检测尿液中多种儿茶酚胺及其代谢产物,并建立健康成年人群尿液儿茶酚胺及其代谢产物的参考区间,为临床嗜铬细胞瘤的诊断提供帮助.１㊀资料与方法１．１㊀一般资料㊀选择青岛大学附属医院体检健康者１００例为研究对象,其中男５１例,年龄１９~６５岁;女４９例,年龄２２~５２岁.纳入研究对象均同时满足以下条件:(１)２０２０年１ ７月来青岛大学附属医院健康体检的１８~６５岁成人;(２)经体格检查未见异常;(３)血常规㊁尿常规㊁血清生化检测均未见异常;(４)影像学检查肾上腺未见异常.纳入研究对象排除具有以下任意一项条件者:(１)有严重心㊁肺㊁肝㊁肾等器质性疾病,身体状况差;(２)不愿意参与本研究,拒绝签署知情同意书;(３)既往或目前患有或疑似患有肾上腺疾病.本研究获得青岛大学附属医院医学伦理委员会的批准,所有研究对象均自愿参与本研究,并签署知情同意书.１．２㊀仪器与试剂㊀A g i l e n tT e c h n o l o g i e s１２９０I n f i nＧi t yⅡ超高效液相色谱仪(安捷伦,美国);Q T R A P ５５００三重四极杆质谱仪(A BS C I E X,美国);色谱柱(A g i l e n tP u r s u i tP F P２ˑ１５０mm);P W C X９６孔固相萃取板.试剂:标准品肾上腺素(E)盐酸盐㊁去甲肾上腺素(N E)盐酸盐㊁多巴胺(D A)盐酸盐㊁甲氧基肾上腺素(MN)盐酸盐㊁甲氧基去甲肾上腺素(NMN)盐酸盐㊁３Ｇ甲氧酪胺(３ＧMT)盐酸盐㊁高香草酸(H V A)㊁香草扁桃酸(VMA)及其对应的同位素内标EＧd３㊁N EＧd６㊁D AＧd４㊁MNＧd３㊁NMNＧd３㊁３ＧMTＧd４㊁H V AＧd３㊁VMAＧd３(S i g m a,美国),醋酸铵(北京化工,中国),乙腈(色谱级,a n a q u a,美国),甲醇(色谱级, a n a q u a,美国),实验用水为超纯水(１８．２MΩ c m,２５ħ),由B u r e WA T E R超纯水仪制备.尿肌酐检测采用日立７１８０全自动生化分析仪,试剂盒购自北京利得曼生化股份有限公司.１．３㊀方法１．３．１㊀工作液制备及质控品㊀采用０．２m o l/L的盐酸溶液配制１０μg/m L的儿茶酚胺及其代谢产物的储备液,并配制成不同浓度的标准品,浓度范围为０．５~１０００．０n g/m L.１．３．２㊀标本采集㊀嘱所有研究对象在研究过程中不食用或饮用任何富含儿茶酚胺的食物及饮料,不服用任何药物,不进行剧烈运动,并保持日常生活方式,嘱其体检前一天晚上８点后禁食㊁禁饮,体检当天清晨６:００采集晨尿,并选择其中２０例志愿者采集２４h尿液,采用６mm o l/L盐酸防腐,标本于 ８０ħ冰箱保存.１．３．３㊀标本前处理㊀将标准品㊁质控品及尿液标本取出放置至室温,并混匀,将９６孔固相萃取板预先用甲醇和水各１m L进行活化和平衡.(１)患者标本:采用０．２２μm尼龙滤膜过滤得到尿滤液,取４８０μL,加入２０μL内标工作液和１m L０．５m o l/L的乙酸铵溶液,涡旋５s.(２)标准品及质控品:取２０μL不同浓度的标准品和质控品,加入４６０μL超纯水,混匀后分别加入２０μL混合内标工作液和１m L０．５m o l/L的乙酸铵溶液,涡旋５s.将尿液标本㊁标准品及质控品分别加入９６孔固相萃取板中,之后分别用１m L２０mm o L/L的乙酸铵溶液和１m L甲醇进行洗脱,最后用５００μL的乙腈水溶液进行洗脱,收集洗脱液７０μL 至９６孔固相萃取板内,上机检测.１．３．４㊀色谱分析条件㊀色谱柱柱温为４０ħ,流速为６００μL/m i n,流动相A为水(０．１％甲酸),流动相B 为乙腈(０．１％甲酸),梯度洗脱程序为０m i n,５％B;２．５m i n,５０％B;３．０m i n,９５％B;３．５m i n,５％B;５．０m i n,５％B.１．３．５㊀质谱分析条件㊀电喷雾离子源(E S I),正离子M R M扫描分析,使用气体为高纯氮气,离子源电压为５５００V,脱溶剂气温度为５００ħ,气帘气为２５p s i,雾化气(G S１)为６０p s i,辅助加热气(G S２)为５５p s i,碰撞气(C A D)为m e d i u m,取上清液上机检测,每次进样量１５μL,其他部分质谱检测参数见表１.１．４㊀方法验证１．４．１㊀检出限(L O D)及定量下限(L O Q)㊀用标准曲线的最低浓度连续重复检测１０次,可计算出L O D９２２１国际检验医学杂志２０２１年５月第４２卷第１０期㊀I n t J L a bM e d,M a y２０２１,V o l．４２,N o．１０和L O Q ,公式如下,L O D＝３ˑS D /S l o pe ,L O Q＝１０ˑS D /S l o p e .其中S D 为这１０次最低浓度的响应标准差,S l o p e 为校准曲线的斜率.１．４．２㊀线性评估和标准曲线的建立㊀使用不同浓度的标准品,每个浓度重复检测３次,对６种分析物分别建立多元回归方程进行线性评估,分别记录６种分析物的线性方程和相关系数.表１㊀㊀儿茶酚胺及其代谢产物质谱参数优化分析物Q １(D a )Q ３(D a)去簇电压(V )碰撞能量(e V )碰撞室出口电压(V )E１６６１３５．１８５２３９E Ｇd ３１６９１３５．１９０２３９N E １５２１０６．９８５２４９N E Ｇd ６１５８１３９．２９０２２９D A１３７９１．１９０２４８D A Ｇd ４１４１１２２．２９０２２８MN １８０１４８．２８０２４１０MN Ｇd ３１８３１５１．１８５２４１０NMN１６６１３４．０７０２３１０NMN Ｇd ３１６９１３７．０７５２２１０３ＧM T１５１１１９．１８０２３９３ＧM T Ｇd ４１５５１２３．１８０２３９１．４．３㊀精密度㊀取５例体检健康者的尿液标本分成３等份,分别加入高㊁中㊁低３个浓度的标准品,每个浓度每天重复检测５次,连续检测３d ,用重复检测的变异系数(C V )表示精密度.１．４．４㊀准确度㊀用回收实验进行评估,取５例体检健康者的尿液标本分成３等份,检测目的分析物浓度后,分别加入高㊁中㊁低３个浓度的标准品,检测加入标准品后的浓度.检测值应在理论值的ʃ１５％以内,低浓度点在理论值的ʃ２０％以内.准确度＝尿液标本加入标准品后测定的浓度/样品中内源性分析物与加入标准品浓度之和.１．４．５㊀基质效应㊀尿样和空白溶剂用相同的固相萃取程序处理,取５例体检健康者的尿液标本分成３等份,检测目的分析物浓度后,分别加入高㊁中㊁低３个浓度的标准品,检测加入标准品后的浓度,比值应为０．８５~１．１５.基质效应＝(本底加入标准品后的目的分析物浓度 本底中目的分析浓度)/溶剂中目的分析物浓度.１．４．６㊀稳定性㊀取１０例体检健康者的尿液标本,分成５等份,１份立即检测,１份室温下放置２４h 后检测,１份于４ħ冰箱中保存２４h 后检测,１份于４ħ冰箱中保存４８h 后检测,１份于 ８０ħ冰箱中保存７d后检测.分别分析标本在室温及４ħ冰箱的短期稳定性及 ８０ħ长期保存的稳定性.一般认为浓度变化＜１５％时分析物是稳定的.稳定性(％)＝(放置后检测的浓度 立即检测的浓度)/立即检测的浓度.１．５㊀临床应用１．５．１㊀晨尿检测儿茶酚胺及其代谢产物的有效性㊀分析晨尿与２４h 尿液收集这两种不同采样方法之间检测结果的相关性,选择２０例研究对象,收集其晨尿及２４h 尿液,根据肌酐输出值对稀释差异进行归一化,表示为分析物与肌酐的比值(μg /g C r ).１．５．２㊀参考区间㊀采用建立的方法检测１００例研究对象晨尿中各种儿茶酚胺及代谢产物,每种分析物的尿排泄量以其浓度与肌酐浓度的比值表示,单位为μg /g C r .１．６㊀统计学处理㊀所有数据处理和量化均采用A B ＧS C I E X 公司的A n a l y s t１．６．１软件包进行,使用S P S S ２６．０进行其他统计分析.采用K ＧS 正态性检验对检测结果进行正态性检验,由于６种目的分析物均呈非正态分布,因此参考区间采用P ２．５和P ９７．５分别作为下限值㊁上限值,采用P e a r s o n 相关和L o g i s t i c 线性回归分析评价晨尿与２４h 尿分析物的相关性.２㊀结㊀㊀果２．１㊀L O D ㊁L O Q 和线性评估㊀L C ＧM S /M S 检测各种儿茶酚胺及其代谢产物的L O D 和L O Q ,在相应的浓度范围内,比较各种分析物浓度及其响应的线性和二次多项式回归,经１/x 加权拟合的二次多项式回归显示,线性评估决定系数(r ２)均＞０．９９,且标准偏差均较小,因此所有６种分析物均采用１/x 加权的二次多项式回归.每种分析物的L O D ㊁L O Q 和线性参数见表２.表２㊀㊀儿茶酚胺及其代谢产物的L O D 、L O Q 和线性参数分析物L O D (n g/m L )L O Q (n g/m L )斜率截距r２线性范围(n g /m L )E０．０９１０．３０３０．０９９３０．００８７０．９９７６０．５~４００．０N E ０．３１３１．０４３０．０３７２０．００７２０．９９８３２．５~４００．０D A０．４９５１．６５００．０４７４０．００１４０．９９７５２．５~１０００．０MN０．１９６０．６５３０．０２１９０．００４３０．９９６９０．５~１０００．０NMN０．４６８１．５６００．００８５０．００５８０．９９９１２．５~１０００．０３ＧM T０．１８９０．６３００．０１９７０．０１３６０．９９８４５．０~８００．００３２１ 国际检验医学杂志２０２１年５月第４２卷第１０期㊀I n t J L a bM e d ,M a y ２０２１,V o l ．４２,N o ．１０２．２㊀精密度㊀L C ＧM S /M S 检测６种分析物在３种浓度下的重复性均较好,批内精密度和总精密度为１．１％~８．５％,均能满足临床检测要求,见表３.表３㊀㊀L C ＧM S /M S 检测儿茶酚胺及其代谢产物的精密度分析物低浓度平均浓度(n g /m L )批内精密度(％)总精密度(％)中浓度平均浓度(n g /m L )批内精密度(％)总精密度(％)高浓度平均浓度(n g /m L )批内精密度(％)总精密度(％)E０．５２．９７．５５．３２．３３．８４１１．２１．１１．７N E ２．７３．１６．４１０．４１．５２．９３９９．１２．４３．５D A２．８４．６６．９２６．８２．４３．４９９２．７１．８２．３MN０．６１．６８．１２６．３１．９４．５１０１０．０１．２１．９NMN２．５３．３７．８２４．９１．７２．７１００９．２１．４２．４３ＧM T５．２６．８８．５４０５．５３．２５．３８０７．８２．６４．１２．３㊀准确度和基质效应㊀６种儿茶酚胺及其代谢产物的准确度为９７．２％~１０８．５％,s 均在１０％以内,均符合检测值应该在靶值的ʃ１５％以内的标准,见表４.６种分析物的基质效应为９３．７％~１０８．５％,基质效应的C V 为３．４％~７．３％,符合基质效应的C V 应小于１５％的标准,见表４.表４㊀㊀L C ＧM S /M S 检测儿茶酚胺及其代谢产物的㊀㊀㊀准确度和基质效应分析物添加标准品(n g /m L )准确度x(％)sC V(％)基质效应x(％)sC V(％)E ０．５１０６．１２．８２．６１０２．３４．７４．６５．０１０２．６６．３６．１１０４．５３．６３．４４００．０１０３．２５．０４．８９９．２５．１５．１N E２．５１０４．８５．５５．２９３．７４．９５．２１００．０９８．１４．９５．０９４．１５．３５．６４００．０９７．４２．２２．３９７．３３．６３．７D A ２．５１０５．４６．４６．１１０７．９６．８６．３２５．０１０４．８５．７５．４１０６．３４．９４．６１０００．０９７．２４．３４．４１０４．８７．６７．３M N０．５１０６．３５．８５．５１０６．２６．７６．３２５．０１０２．９４．５４．４１０５．２５．３５．０１０００．０９８．３３．１３．２１０２．７５．９５．７N M N２．５１０８．５７．１６．５１０５．４５．８５．５２５．０１０２．９６．４６．２１０７．７４．２３．９１０００．０１０１．４４．３４．２１０８．５４．５４．１３ＧM T５．０１０７．８７．６７．１１０８．３６．７６．２４００．０１０５．３５．９５．６１０７．６４．４４．１８００．０１００．９６．２６．１１０５．１４．２４．０２．４㊀稳定性㊀不同情况下尿液标本中儿茶酚胺及其代谢产物的稳定性,见表５.稳定性均较好,所有目的分析物浓度变化均ɤ６．２％.表５㊀㊀儿茶酚胺及其代谢产物的稳定性(％)分析物室温放置２４h４ħ冰箱放置２４h ４ħ冰箱放置４８h ８０ħ冰箱放置７d E１．５０．８１．１１．４N E ２．４ １．６１．９１．８D A０．８２．１３．３０．８MN１．３０．４０．８０．９NMN０．７ １．１ １．６０．７３ＧM T ０．２２．８６．１５．４HV A５．１５．５６．２４．６VMA ４．１５．２５．５４．１２．５㊀临床应用２．５．１㊀晨尿检测儿茶酚胺及其代谢产物的有效性㊀晨尿与２４h 尿液收集这两种采样方法之间所有的分析物检测结果呈正相关(n ＝２０,P ＜０．０００１,r :０．９３~０．９７,斜率:０．５２~１．０５).晨尿与２４h 尿儿茶酚胺及其代谢产物的相关性结果如下:N E 线性回归分析斜率为０．６８３,r ＝０．９５２,P ＜０．０００１;E 线性回归分析斜率为０．５２２,r ＝０．９０５,P ＜０．０００１;D A 线性回归分析斜率为０．９４１,r ＝０．９６４,P ＜０．０００１;３ＧMT 线性回归分析斜率为０．９８０,r ＝０．９６３,P ＜０．０００１;NMN 线性回归分析斜率为０．６２２,r ＝０．９３７,P ＜０．０００１;MN 线性回归分析斜率为１．０５０;r ＝０．９６９,P ＜０．０００１.２．５．２㊀参考区间㊀儿茶酚胺及其代谢产物检测结果箱形图见图１,取P ２．５和P ９７．５建立参考区间,参考区间N E 为２．６~１４０．４μg /g C r ,E 为０．３~３７．２μg /g C r ,１３２１ 国际检验医学杂志２０２１年５月第４２卷第１０期㊀I n t J L a bM e d ,M a y ２０２１,V o l ．４２,N o ．１０D A为４３．４~５６１．８μg/g C r,３ＧMT为１８．０~１６５．７μg/g C r,NMN为１５．１~２４１．５μg/g C r,MN为６．８~１９２．０μg/g C r .图１㊀㊀１００例健康体检者儿茶酚胺及其代谢产物检测结果箱式图３㊀讨㊀㊀论㊀㊀嗜铬细胞瘤是一种罕见的神经内分泌肿瘤,起源于肾上腺髓质细胞,发病率约为０．０５％[７].嗜铬细胞瘤可大量释放儿茶酚胺,因此患者可出现各种严重的并发症,如果不能尽早诊断和治疗,会导致致命的后果[８Ｇ１０].儿茶酚胺及其代谢产物的联合检测可提高对嗜铬细胞瘤诊断的敏感性和选择性,可辅助诊断仅分泌D A的特殊类型嗜铬细胞瘤,对不同生化表型嗜铬细胞瘤的鉴别也发挥着重要作用[１１Ｇ１２].临床通常通过检测尿液或血浆中的儿茶酚胺对疑似嗜铬细胞瘤患者进行筛查.然而,由于儿茶酚胺在体液中水平极低㊁极性高,使其准确检测十分困难[１３].另一方面,血浆儿茶酚胺水平很低,受试者采集标本时的姿势对检测结果影响很大,准确检测采集条件要求高,如不能充分满足采集条件则不能达到临床检测性能要求[１４].２４h尿液采集繁琐,收集过程非常耗时且容易出错,与其相比,晨尿的留取更加方便,并且利用了与夜间卧床休息时交感肾上腺系统活性降低的优势,避免了较多原因造成的交感肾上腺系统的激活,可以提高诊断性能[１５Ｇ１６].㊀㊀目前,用于儿茶酚胺及其代谢产物检测的常用方法有酶免疫检测法㊁液相色谱电化学分析法㊁L CＧM S/ M S.L CＧM S/M S较前两者具有诸多优势,与酶免疫检测法相比,L CＧM S/M S的灵敏度和特异度更高,前处理时间更短,并且能够准确检测前者无法检测的３ＧMT;与液相色谱电化学分析法相比,L CＧM S/M S采样更便捷,标本前处理更简单,并且能够避免前者在分析时无法避免的干扰.本研究建立了检测晨尿儿茶酚胺及其代谢产物的U P L CＧM S/M S,该方法具有简单㊁快速㊁灵敏度高㊁选择性高的优点,用晨尿标本代替２４h尿液收集进行检测,使标本采集更加简单方便,简化了p H值调节过程,并获得了更高的萃取效率,优化了梯度洗脱程序,在较短的运行时间内将潜在的干扰降至最低,并能获得较好的分离效果.本研究建立了一种简单㊁快速,同时检测尿儿茶酚胺及其代谢产物的U P L SＧM S/M S,并且进行了方法评价.这种方法采用晨尿标本替代２４h尿液收集,标本采集更加简单㊁方便.良好的验证数据和对实际尿样检测的成功应用表明,该方法灵敏㊁特异㊁可靠,可用于儿茶酚胺及其代谢产物排泄量的监测和嗜铬细胞瘤的鉴别及辅助诊断.参考文献[１]E I S E N HO F E R G,P E I T Z S C H M,M C WH I N N E Y B C．I m p a c t o f L CＧM S/M S o n t h e l a b o r a t o r y d i a g n o s i s o f c a t eＧc h o l a m i n eＧp r o d u c i n g t u m o r s[J]．T r e n d s A n a l y tC h e m,２０１６,８４:１０６Ｇ１１６．[２]R O D RÍG U E ZＧM O R A TÓJ,P O Z OÓJ,M A R C O S J．T a r g e tＧi n g h u m a nu r i n a r y m e t a b o l o m eb y L CＧM S/M S:ar e v i e w[J]．B i o a n a l y s i s,２０１８,１０(７):４８９Ｇ５１６．[３]S H E N Y,C H E N G L,G U A N Q,e ta l．D e v e l o p m e n ta n d v a l i d a t i o no f a l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y t a n d e m m a s s s p e cＧt r o m e t r y m e t h o df o rt h e m e a s u r e m e n to fu r i n a r y c a t eＧc h o l a m i n e s i n d i a g n o s i s o f p h e o c h r o m o c y t o m a[J]．B i o m e d C h r o m a t o g r,２０１７,３１(１１):１Ｇ７．[４]B E R GMA N N M L,S A D J A D IS,S C HM E D E S A．A n a l yＧs i s o f c a t e c h o l a m i n e s i nu r i n eb y u n i q u eL C/M Ss u i t a b l e i o nＧp a i r i n g c h r o m a t o g r a p h y[J]．JC h r o m a t o g rB A n a l y tT e c h n o l B i o m e dL i f eS c i,２０１７,１０５７:１１８Ｇ１２３．[５]彭颖斐,吴炯,郭玮,等．尿儿茶酚胺L CＧM S/M S检测方法的建立[J]．检验医学,２０１５,３０(５):４３３Ｇ４３６．[６]X I O N G X,Z HA N G Y．S i m p l e,r a p i d,a n dc o s tＧe f f e c t i v e m i c r o e x t r a c t i o nb y t h e p a c k e d s o r b e n tm e t h o d f o r q u a n t iＧf y i n g o f u r i n a r y f r e e c a t e c h o l a m i n e s a n dm e t a n e p h r i n e s uＧs i n g l i q u i d c h r o m a t o g r a p h yＧt a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y a n d i t sa p p l i c a t i o ni nc l i n i c a la n a l y s i s[J]．A n a lB i o a n a lC h e m,２０２０,４１２(１２):２７６３Ｇ２７７５．[７]F A R R U G I A F A,C HA R A L AM P O P O U L O S A．P h e oＧc h r o m o c y t o m a[J]．E nd o c rRe g u l,２０１９,５３(３):１９１Ｇ２１２．[８]G U Y W,P O S T EJ,K U N A L M,e ta l．C a r d i o v a s c u l a r m a n if e s t a t i o n so f p h e o c h r o m o c y t o m a[J]．C a r d i o lR e v,２０１７,２５(５):２１５Ｇ２２２．[９]D A V I S O N AS,J O N E SD M,R U T HV E NS,e t a l．C l i n iＧc a l e v a l u a t i o na n dt r e a t m e n to f p h a e o c h r o m o c y t o m a[J]．A n nC l i nB i o c h e m,２０１７,５５(１):３４Ｇ４８．[１０]G U N AWA R D A N E P,G R O S S MA N A．P h a e o c h r o m o c yＧt o m aa n d p a r a g a n g l i o m a[J]．A d v E x p M e dB i o l,２０１７,９５６:２３９Ｇ２５９．(下转第１２３７页)２３２１ 国际检验医学杂志２０２１年５月第４２卷第１０期㊀I n t J L a bM e d,M a y２０２１,V o l．４２,N o．１０[５]F U R U H A S H IM．F a t t y A c i dＧB i n d i n gp r o t e i n４i n c a r d i o v a sＧc u l a r a n dm e t a b o l i c d i s e a s e s[J]．JA t h e r o s c l e r T h r o m b,２０１９,２６(３):２１６Ｇ２３２．[６]T A N M,K O R KMA Z H,A Y D I N H,e t a l．F A B P４l e v e l s i nh y p o t h y r o i d i s m a n di t sr e l a t i o n s h i p w i t h s u b c l i n i c a l a t h e r o s c l e r o s i s[J]．T u r kJ M e dS c i,２０１９,４９(５):１４９０Ｇ１４９７．[７]李苑,陈文玲,刘岚,等．子痫前期孕妇胎盘组织中P P A R㊁F A B PＧ４的表达及其与孕妇预后的相关性[J]．中华妇产科杂志,２０１７,５２(７):４４３Ｇ４４８．[８]谢幸,苟文丽．妇产科学[M]．８版．北京:人民卫生出版社,２０１３:６６．[９]白晶,孙丽,张智峰．子痫前期患者血清胎盘生长因子㊁胱抑素C水平变化及其诊断价值分析[J]．山东医药,２０１９,５９(３２):６４Ｇ６６．[１０]OH K U C H IA,H I R A S H I MAC,T A K A HA S H IK,e t a l．P r e d i c t i o n a n d p r e v e n t i o n o fh y p e r t e n s i v e d i s o r d e r so f p r e g n a n c y[J]．H y p e r t e n sR e s,２０１７,４０(１):５Ｇ１４．[１１]廖桂英,段庆红,周舟,等．彩色超声多普勒检测脐动脉血流动力学在子痫前期诊疗中的价值[J]．贵州医科大学学报,２０１９,４４(１２):１４５３Ｇ１４５７．[１２]M E L I N E O,D E R E K EJ,T HU N A N D E R M,e t a l．S o l uＧb l eC D１６３w a sl i n k e dt o g a l ec t i nＧ３,d i a be t i cr e t i n o p a t h y a n da n t i d e p r e s s a n t s i nt y p e１d i a b e t e s[J]．E n d o c rC o nＧn e c t,２０１８,７(１２):１３４３Ｇ１３５３．[１３]M E D E I R O SL T,P E R AÇO L I JC,B A N NWA R TＧC A SＧT R O C F,e ta l．M o n o c y t e sf r o m p r e g n a n tw o m e n w i t h p r eＧe c l a m p s i a a r e p o l a r i z e d t oa M１p h e n o t y p e[J]．A mJR e p r o d I mm u n o l,２０１４,７２(１):５Ｇ１３．[１４]N U N E SP R,R OMÀOＧV E I G A M,P E R AÇO L IJC,e ta l．D o w n r e g u l a t i o n o f C D１６３i nm o n o c y t e s a n d i t s s o l ub l ef o r mi n t h e p l a s m a i s a s s o c i a t e dw i t h a p r oＧi n f l a mm a t o r yp r o f i l e i n p r e g n a n tw o m e nw i t h p r e e c l a m p s i a[J]．I mm uＧn o lR e s,２０１９,６７(２/３):１９４Ｇ２０１．[１５]刘聪,曲冬颖．子痫前期孕妇血清可溶性血红蛋白清道夫受体及炎性因子水平变化[J]．临床军医杂志,２０２０,４８(６):６７９Ｇ６８１．[１６]K E L L YCB,HO O K HAM M B,Y UJY,e t a l．C i r c u l a tＧi n g a d i p o k i n e s a r e a s s o c i a t e d w i t h p r eＧe c l a m p s i a i nw o m e nw i t ht y p e１d i a b e t e s[J]．D i a b e t o l o g i a,２０１７,６０(１２):２５１４Ｇ２５２４．[１７]Q I A O G H,S U N XZ．I n c r e a s e d p l a s m a f a t t y a c i db i n dＧi n gp r o t e i n４c o n c e n t r a t i o na t t h e f i r s t p r e n a t a l v i s i t a n d i t s r e l e v a n c e t o p r e e c l a m p s i a[J]．H y p e r t e n sR e s,２０１８,４１(９):７６３Ｇ７６９．[１８]毛彩艳,张辉,李旭生,等．F A B P４在妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞免疫炎性反应中的作用研究[J]．中国药理学通报,２０１７,３３(８):１１２６Ｇ１１３１．[１９]杜伟平,张瑞．子痫前期孕妇血清G a s６㊁S D FＧ１水平变化及其临床意义[J]．山东医药,２０１９,５９(３１):１Ｇ４．[２０]Y A N GA,Z H A N G H,S U N Y,e t a l．M o d u l a t i o no fF A B P４h y p o m e t h y l a t i o nb y D N M T１a n d i t s i n v e r s e i n t e r a c t i o nw i t hm i RＧ１４８a/１５２i n t h e p l a c e n t a o f p r e e c l a m p t i c r a t s a n dH T RＧ８c e l l s[J]．P l a c e n t a,２０１６,４６(１):４９Ｇ６２．(收稿日期:２０２０Ｇ０９Ｇ１２㊀修回日期:２０２０Ｇ１２Ｇ２３)(上接第１２３２页)[１１]R A OJU,E N G E L K E U F H,R O D E N B U R G RJT,e t a l．G e n o t y p eＧs p e c i f i c a b n o r m a l i t i e s i nm i t o c h o n d r i a l f u n cＧt i o na s s o c i a t ew i t hd i s t i n c t p r o f i l e so f e n e r g y m e t a b o l i s m a n d c a t e c h o l a m i n e c o n t e n ti n p h e o c h r o m o c y t o m a a n dp a r a g a n g l i o m a[J]．C l i nC a n c e rR e s,２０１３,１９(１４):３７８７Ｇ３７９５．[１２]刘庆香,周伟燕,张传宝．儿茶酚胺及其代谢物的检测现状及标准化期望[J]．中华检验医学杂志,２０２０,４３(３):３２２Ｇ３２７．[１３]E I S E N HO F E R G,P R E J B I S ZA,P E I T Z S C H M,e t a l．B iＧo c h e m i c a l d i a g n o s i s o f c h r o m a f f i nc e l l t u m o r s i n p a t i e n t s a t h i g h a n d l o wr i s k o f d i s e a s e:p l a s m a v e r s u s u r i n a r y f r e eo rd e c o n j u g a t e doＧm e t h y l a t e dc a t e c h o l a m i n e m e t a b o l i t e s[J]．C l i nC h e m,２０１８,６４(１１):１６４６Ｇ１６５６．[１４]E I S E N HO F E R G,P E I T Z S C H M．L a b o r a t o r y e v a l u a t i o n o f p h e o c h r o m o c y t o m a a n d p a r a g a n g l i o m a[J]．C l i nC h e m,２０１４,６０(１２):１４８６Ｇ１４９９．[１５]DÄR R R,P AM P O R A K IC,P E I T Z S C H M,e ta l．B i oＧc h e m i c a ld i a g n o s i s o f p h ae o c h r o m o c y t o m au s i n gp l a s m aＧf r e e n o r m e t a n e p h r i n e,m e t a n e p h r i n e a n d m e t h o x y t y r aＧm i n e:i m p o r t a n c e o f s u p i n e s a m p l i n g u n d e r f a s t i n g c o n d iＧt i o n s[J]．C l i nE n d o c r i n o l,２０１４,８０(４):４７８Ｇ４８６．[１６]D A V I E SS L,D A V I S O N A S．L i q u i dc h r o m a t o g r a p h y t a n d e m m a s ss p e c t r o m e t r y f o r p l a s m a m e t a d r e n a l i n e s[J]．C l i nC h i m A c t a,２０１９,４９５:５１２Ｇ５２１．(收稿日期:２０２０Ｇ０９Ｇ１２㊀修回日期:２０２０Ｇ１２Ｇ２３)７３２１国际检验医学杂志２０２１年５月第４２卷第１０期㊀I n t J L a bM e d,M a y２０２１,V o l．４２,N o．１０。
阴离子固相萃取结合高效液相色谱技术检测尿儿茶酚胺
ｔ ｎ ｃ ｌ ｍｎ， ｎ ｓ ｄ ｆ ｒｃ ｉ ｉａ ａ ｌ ｓ Ｍ ｅｈ ｄ ２ － ｏ ｒｕ ｉｅ ｏ ４ ｐ ｔ ｎ ｓ ｗｉ ｈ ｏ ｈ ｏ ｃ ｔ ｍａ ａ ｄ １ ｅ ｌ ｙ ｉ ｏｕ ｏ ａ ｄ ｕ ｅ ｏ ｌ ｃ ｌｓ ｍｐ ｅ ． ｔ ｏ ｓ ｎ ４ ｈ ｕ ｒｎ ｆ １ ａ ｉ ｔ ｔ ｐ ｅ ｃ ｒ ｍｏ ｙ ｏ ｎ ５ ｈ ａ ｔ ｅ ｈ ｈ
２ ｈ ＤＡ２５ ７ 土１ ４ ８ ｇ ２ ｈ 嗜铬 细 胞 瘤 组 的 结 果 为 ＮＥ ０ ． ９ １． ９￣ ／４ ， ｌ ． ６ ． ８ｐ ／ ４ ， Ａ２ ５ ４ 士 ４， ２ ． ６ ０ ．３ｐ ／ ４ 。 ３ ０ ２ 士２ ２ ７ ｇ ２ ｈ Ｅ １ ７ 士７ ５ ｇ ２ ｈ Ｄ ３ ． ９
（ ｅ ａ ｔ ｎ ｎ ｏｒｎｌｇ Ｐｅ ｉｇＵｎｏ ｅ ｉ ｌ ｏｌ ｅＨｏｐ ｔｌＢ ｉ ｎ ０ ７ ０ Ｃ ｉａ Ｄｐ ｒ ｍｅ ｔ ｆ Ｅ ｄ ｃｉｏｏｙ， ｋｎ ｉ Ｍ ｄｃ ｌ ｇ ｓｉ ， ｅ ｉｇ １ ０ ３ ， ｈｎ ） ｏ ｎ ａＣ ｅ ａ ｊ
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。