甲胎蛋白 AFP 操作规程
细胞与分子免疫学：酶联免疫吸附试验(ELISA)——测甲胎蛋白(AFP)
一、ELISA双抗体夹心法测AFP原理
用抗AFP抗体包被固相载体，加入待检标本， 标本中的AFP与固相载体上的抗体结合，再 加入酶标记的抗AFP抗体，形成抗体-抗原酶标抗体复合物，加底物显色，颜色的深 浅与相应AFP的量呈正相关。
二、试剂材料
2、37℃反应20min。
3、洗涤：各孔加入2滴洗涤液，混匀后倾去，用DW或自来水 加满各孔，甩掉，反复5次，最后在吸水纸上拍干酶标板。
4、每孔加入酶结合物2滴（37℃孵育15min）
5、洗涤：重复步骤“3”
6、显色：每孔加底物和显色液各1滴，轻轻振摇，室温暗处 避光显色5min，加入2M H2SO4 100l（2滴）终止反应。
1、AFP检测试剂盒 2、AFP参考标准液（0、25、50、100、200、
400ng/ml）。 3、DW 4、终止液（2M H2SO4）。 5、酶标测定仪、37℃温箱。 6、微量加样器、滴管、吸水纸等。
三、方法
1、加样：取一条包被好的酶标板（7孔），标记后，第1-6 孔分别加入AFP参考标准液（0、25、50、100、200、 400ng/ml）各100l。第7孔加入样品100l。
7、在波长（450nm）用酶标仪测OD值
四、结果判断
用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔 为空白孔，在波长450nm处分别读取各标准 孔和样本孔OD值，以OD值为横坐标，AFP含 量为纵坐标，在半对数坐标纸上画出标准 曲线，以测定孔的OD值在标准曲线上查出 相应标本的AFP含量。
参考范围：正常成人AFP含量＜20ng/ml。
酶联免疫吸附试验（ELISA） ——测甲胎蛋白（AFP）
原理：
抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其 活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体 后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。
甲胎蛋白检测SOP文件(iFlash3000)
1.检验目的：本试剂盒用于定量测定人血清和（或）血浆中的甲胎蛋白。
2.检验原理：3.性能参数：3.1线性范围：用线性参考品进行测定，在1.0ng/mL ～1500.0ng/mL 范围内。
3.2最低检测限：≤1.0 ng/mL 。
3.3准确度：测量结果的相对偏差应在±10.0%范围内。
3.4重复性:变异系数（CV ）应不大于10.0%。
3.5批间差:3个批号试剂之间的批间变异系数（CV ）应不大于15.0%。
4.样品要求：4.1检测标本：血清和血浆（肝素锂、肝素钠、EDTA 和柠檬酸钠抗凝）是推荐使用的样本类型。
尚未验证其他抗凝剂能否适用。
4.2采集及处理：在进行离心操作前需让血清样本完全凝结（凝结时间不小于1小时）。
所有的待测样本在测试前均应进行离心操作。
顶部含脂质的离心样本，需转移澄清、无脂质的部分到新的样本管中。
在测试前，确保已去除了残余的纤维蛋白和细胞类物质。
应小心处理患者样本，避免交叉污染。
在测试前，确保患者样本、校准品、质控品均已平衡至环境温度（20-25°C ）。
为避免蒸发可能带来的影响，样本和校准品应在上机后2小时内完成测试。
4.3样品储存：在室温（20-25°C ）下，样本保存时间不得超过8小时。
若在8小时内无法完成测试，应将样本在2～8°C 冷藏保存。
在2～8°C 的保存情况下，标本保存时间不得超过3天。
长期保存，应将样本在-20°C 保存。
冷冻样本在融化后必须进行充分混匀。
样本冷冻次数不得超过1次。
5.设备和试剂：5.1仪器：iFlash 3000化学发光免疫分析仪。
5.2试剂：甲胎蛋白测定试剂盒（化学发光法）；包装量：2×50人份/盒； 5.3储存要求：（1）储存：存放在2-8°C ，保持竖直向上。
（2）有效期：试剂瓶及校准品未开封存放于2-8°C：可稳定365天；试剂瓶使用后存放于2-8°C或在机存储：可稳定28天；校准品复溶后在-20°C保存：可稳定28天（仅可冻融一次）。
甲胎蛋白标准
甲胎蛋白标准甲胎蛋白标准（AFP）是一种特定的蛋白质，是胚胎和胎儿发育过程中所产生的一种蛋白质，同时也是一种肿瘤标志物。
AFP作为一种生物标志物，可以用来诊断某些疾病，如胎儿畸形和某些癌症。
本文将介绍AFP的特点、检测方法、临床应用和标准化的重要性。
一、AFP的特点AFP是一种单链糖蛋白，由4个多肽单元组成。
它主要在胚胎和胎儿的肝脏、胃肠道和卵巢中合成，是一种胚胎发育的标志。
AFP的含量在胎儿出生后会逐渐降低，成人体内的AFP含量通常很低。
然而，某些情况下，如某些肝病和某些癌症，AFP的含量会升高。
二、AFP的检测方法AFP的检测方法有很多种，包括免疫测定法、放射免疫测定法、酶免疫测定法等。
其中，免疫测定法是最常用的方法。
这种方法利用免疫学原理，通过检测样本中AFP与抗AFP抗体的结合情况，来测定AFP的含量。
放射免疫测定法则是利用放射性同位素标记的抗体与样本中的AFP结合来测定AFP的含量。
酶免疫测定法则是利用酶标记的抗体与样本中的AFP结合来测定AFP的含量。
这些方法都有其优缺点，医生和病人需要根据实际情况选择适合的方法。
三、AFP的临床应用AFP在临床上有广泛的应用，主要用于以下方面：1. 诊断胎儿畸形：AFP是一种胚胎发育的标志，如果胎儿出现某些畸形，如神经管畸形、腹壁缺陷等，AFP的含量会升高。
因此，通过检测母体血液或羊水中的AFP含量，可以帮助医生诊断胎儿畸形。
2. 诊断某些癌症：AFP在某些癌症中也会升高，如肝癌、睾丸癌等。
因此，通过检测血液或其他体液中的AFP含量，可以帮助医生诊断这些癌症。
3. 监测治疗效果：AFP可以用来监测某些癌症的治疗效果，如肝癌、睾丸癌等。
如果治疗有效，AFP的含量会降低，反之则升高。
四、标准化的重要性AFP的检测结果对于病人的诊断和治疗非常重要，因此需要制定相应的标准来保证检测结果的准确性和可靠性。
标准化可以使不同实验室之间的检测结果具有可比性，这对于医生的诊断和病人的治疗非常重要。
AFP监测及信息报告管理
通过该预警系统的应用，某国家进一 步提高了AFP预警的准确性和及时性 ，为政府制定预防和控制措施提供了 更加有力的支持。
案例五：某国际组织AFP监测的推动与支持
背景介绍
推动与支持内容
应用效果
某国际组织为了促进全球AFP 监测工作的发展，加强各国之 间的合作与交流，启动了AFP 监测的推动与支持工作。
02
CATALOGUE
AFP监测技术
实验室检测技术
免疫学检测方法
基于抗原-抗体反应的检测技术，具有高特异性、高灵敏度等特点 ，可广泛应用于各类病原微生物的检测。
分子生物学检测方法
基于核酸序列的检测技术，具有高灵敏度、高特异性、快速等特点 ，可用于病原微生物的检测和分型。
生物传感器技术
利用生物传感器对生物样本进行检测和分析的技术，具有高灵敏度 、高特异性、快速等特点，可用于病原微生物的检测。
监测技术
AFP监测技术包括病例报告、主 动监测和被动监测等，这些技术 能够及时发现和追踪疾病流行和 暴发的趋势，为疾病控制提供科
学依据。
疾病控制策略
AFP监测数据可以帮助制定和实 施有效的疾病控制策略，如隔离 传染源、切断传播途径、保护易 感人群等，以遏制疾病的扩散和
传播。
预警系统
AFP监测数据可以用于构建预警 系统，通过数据分析和模型预测 ，提前发现潜在的公共卫生威胁 ，及时采取应对措施，防止疾病
现场监测技术
个体监测
对个体进行实时监测的技术，包括生理指标监测、行为监测等，可及时发现异 常情况并采取相应措施。
群体监测
对群体进行监测的技术，包括流行病学调查、健康状况监测等，可评估疾病流 行趋势和风险，为决策提供依据。
遥感监测技术
甲胎蛋白测定注意事项
甲胎蛋白测定注意事项甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）是一种胎儿发育过程中产生的蛋白质，在成人体内也有少量存在。
甲胎蛋白测定是一种常见的肿瘤标志物检查方法，可以用于提供肿瘤的诊断、评估治疗效果和监测肿瘤复发的重要参考指标。
下面是甲胎蛋白测定的注意事项：1. 检测前准备：在进行甲胎蛋白的检测前，患者应该告知医生是否有任何慢性疾病和正在使用的药物，因为某些药物可能会影响甲胎蛋白的测定结果。
医生会根据患者的情况来决定是否暂停某些药物的使用。
2. 妊娠和妇科疾病：女性在妊娠期间甲胎蛋白的水平会显著升高，因此对于怀孕的女性来说，甲胎蛋白测定的结果并不准确。
此外，某些妇科疾病如子宫内膜异位症、子宫肌瘤等也可能导致甲胎蛋白水平的升高。
3. 肝病和肝肿瘤：甲胎蛋白在肝脏病变中是一个重要的标志物。
患有肝炎、肝硬化或肝癌的患者常常具有较高的甲胎蛋白水平。
然而，甲胎蛋白水平的升高并不一定意味着肝癌，因为其他疾病如肾脏病、胃癌等也可能导致甲胎蛋白的增加。
4. 肾脏病和胃癌：患有肾脏疾病的患者常常伴随着甲胎蛋白的升高，这是因为肾脏功能不全会导致甲胎蛋白的清除减少。
胃癌也可能导致甲胎蛋白水平的升高，因此，在评估甲胎蛋白检测结果时，需要考虑到患者是否有这些疾病。
5. 年龄和性别：甲胎蛋白的正常值在不同的年龄和性别之间有所差异，因此，在评估甲胎蛋白检测结果时，需要参考相关的参考值范围。
一般来说，成人的甲胎蛋白正常值应该在10 ng/mL以下。
6. 合并其他检测：单纯进行甲胎蛋白的测定可能无法完全确定肿瘤的存在与程度，因此在临床中一般会联合其他检测方法来综合评估患者的情况。
常见的联合检测方法包括超声波检查、肝功能检查、肿瘤标志物检测等。
7. 甲胎蛋白的监测：对于已经确诊肿瘤的患者来说，甲胎蛋白的测定可以用于监测肿瘤治疗后的疗效和肿瘤复发的风险。
定期进行甲胎蛋白的监测有助于早期发现复发和转移，提高肿瘤治疗的效果。
afp检查方法
afp检查方法The AFP test, also known as Alpha-fetoprotein test, is a blood test used to screen for certain types of cancers, particularly liver cancer. AFP is a protein produced by the liver and yolk sac of a developing baby during pregnancy. In adults, AFP levels in the blood are normally low, but they can be elevated in certain types of cancer, liver diseases, and some other conditions.AFP检测，也称为甲胎蛋白检测，是一种用于筛查特定类型癌症，尤其是肝癌的血液测试。
AFP是胎儿在怀孕期间肝脏和卵黄囊产生的一种蛋白质。
在成年人中，血液中的AFP水平通常很低，但在某些类型的癌症、肝脏疾病和其他一些病情中，它们可能升高。
Firstly, the AFP test can be used to monitor the effectiveness of cancer treatment. If a person has been diagnosed with liver cancer and is undergoing treatment, regular AFP tests can help to track the response to treatment. If the levels of AFP in the blood decrease, it may indicate that the treatment is working. On the other hand, if the levels of AFP remain elevated or increase, it may suggest that thecancer is not responding to the treatment, and adjustments to the treatment plan may be necessary.首先，AFP测试可用于监测癌症治疗的有效性。
甲胎蛋白
甲胎蛋白(AFP)病人会长期出现AFP达到上千，但多年都没有肝癌的迹象；同时发现约20%的晚期肝癌病人，直至病故前，AFP仍不超过10。
阳性原因甲胎蛋白是肝癌的特异性标志，但血清甲胎蛋白阳性未必都是肝甲胎蛋白癌。
什么情况甲胎蛋白会出现阳性呢？甲胎蛋白由新生的幼稚肝细胞分泌，胎儿的肝细胞没有发育（分化）完全，分泌的甲胎蛋白量很大，所以孕妇的甲胎蛋白会阳性。
肝癌是尚未分化的肝细胞，当然能大量分泌甲胎蛋白。
孕妇在分娩1年后体内的甲胎蛋白就会恢复正常，正常值为每升血内甲胎蛋白含量不超过20微克，如果甲胎蛋白升高到每升血400微克以上，那么患肝癌的机率就很大了，这时还要进行超声波检查，因为有30%~40%肝癌患者的甲胎蛋白不会升高，所以需要进行综合检查。
双胎孕期甲胎蛋白值比单胎高一些，所测350ng/ml在正常范围，高于正常值三倍以上才有临床意义。
单胎妊娠有参考值：孕21周均值82.3，3 倍值246.9，双胎应大于493以上才有意义。
用测甲胎蛋白值来筛查神经管畸形，孕21周以后一般不做这项检查。
可用B 超监测神经管畸形的。
建议检测甲胎蛋白检测甲胎蛋白的方法有好几种，放射免疫法测得的甲胎蛋白大于甲胎蛋白500微克/升、且持续4周者，或甲胎蛋白在200～500微克/升、持续8周者，在排除其它引起甲胎蛋白增高的因素如急、慢性肝炎、肝炎后肝硬化、胚胎瘤、消化道癌症后，需再结合定位检查，如B 超、CT、磁共振（MRI）和肝血管造影等即可作出诊断。
不过，正常怀孕的妇女、少数肝炎和肝硬化、生殖腺恶性肿瘤等情况下甲胎蛋白也会升高，但升高的幅度不如肝癌那样高。
肝硬化病人血清甲胎蛋白浓度多在25～200微克/升之间，一般在2 个月内随病情的好转而下降，多数不会超过2个月；同时伴有转氨酶升高，当转氨酶下降后甲胎蛋白也随之下降，血清甲胎蛋白浓度常与转氨酶呈平行关系。
如果甲胎蛋白浓度在500 微克/升以上，虽有转氨酶升高，但肝癌的可能性大，转氨酶下降或稳定，而甲胎蛋白上升，也应高度怀疑肝癌。
甲胎蛋白基因
甲胎蛋白基因(alpha-fetoprotein，AFP)的异常表达与肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤有关，请根据基因表达的检测方法，设计实验方案从翻译水平检测AFP的表达情况。
实验方案包括：实验目的、实验方法及原理、技术路线、可能的结果分析及应用等。
实验目的•1、复习基因表达检测的几种方法•2、探究AFP的异常表达与恶性肿瘤的关系基因表达检测方法•1、转录水平：RT-PCR，real-time PCR，northern blot •2、翻译水平：western blot•3、直接检测：报告基因、融合荧光蛋白等•PS：RT-PCR是反转录PCR，是半定量方式。
real-time PCR可以精确定量。
二者不同。
后者为了区别于RT-PCR，一般不缩写。
Western Blot•生物中含有一定量的目的蛋白。
先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，将蛋白质样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。
然后加入特异抗性体（一抗），膜上的目的蛋白（抗原）与一抗结合后，再加入能与一抗专一性结合的带标记的二抗（通常一抗用兔来源的抗体时，二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗体），最后通过二抗上带标记化合物（一般为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）的特异性反应进行检测。
根据检测结果，从而可得知被检生物（植物）细胞内目的蛋白的表达与否、表达量及分子量等情况。
•检测甲胎蛋白的方法有好几种，放射免疫法测得的甲胎蛋白大于•500微克/升、且持续4周者，或甲胎蛋白在200～500微克/升、持续8周者，在排除其它引起甲胎蛋白增高的因素如急、慢性肝炎、肝炎后肝硬化、胚胎瘤、消化道癌症后，需再结合定位检查，如B超、CT、磁共振（MRI）和肝血管造影等即可作出诊断。
不过，正常怀孕的妇女、少数肝炎和肝硬化、生殖腺恶性肿瘤等情况下甲胎蛋白也会升高，但升高的幅度不如肝癌那样高。
AFP
一、甲胎蛋白 (Alpha fetoprotein, AFP)甲胎蛋白(AFP)是一种来源于胚胎肝细胞的糖蛋白，属于白蛋白家族，在胎儿的生长发育过程中具有重要的生理功能。
胎儿血清AFP从13 周开始升高，30周达到最高峰，最高可达3-4g/L，出生后迅速下降，周岁时接近成人水平[4]。
健康成年人血清AFP浓度应低于25μg/L[5]。
血清AFP含量检测方法简单，成本低廉，而且具有重要的诊断价值。
(一) 参考范围(ng/ml)[1]出生时：60000 – 120000 ng/ml0-2个月：25 – 1000 ng/ml2-6个月：25 – 100 ng/ml6个月：20 ng/ml成人：<20 ng/ml妊娠3个月：18 – 113 ng/ml妊娠4 - 6个月：160 – 550 ng/ml妊娠7 - 9个月：100 – 400 ng/ml(二) 甲胎蛋白偏高的的生理因素妊娠妇女和新生儿会出现甲胎蛋白的一时性升高，因为甲胎蛋白是胎儿的正常血浆蛋白成分，是胚胎早期的主要蛋白质，妊娠期妇女甲胎蛋白会明显升高，一般在妊娠后3个月，甲胎蛋白就明显升高，到7-8月孕妇母血中AFP量达到最高峰并相对稳定，但仍低于400μg/L，约在产后3周逐渐恢复正常水平。
研究表明，吸烟导致人体血清AFP水平增高，在女性吸烟者中更为明显，并且吸烟量越大，血清AFP含量越高[3]。
(三) 甲胎蛋白偏高的病理因素：(1) 肝癌是常见的造成甲胎蛋白偏高的原因之一，一般正常人血清中甲胎蛋白的含量不到20μg/L，但当肝细胞发生癌变时，却又恢复了产生这种蛋白质的功能，据调查发现约有80%的肝癌患者血清中甲胎蛋白会升高，通常以400μg/L为标准，高于此数值应该考虑肝癌的可能性，一般在肝癌出现症状之前的8个月甲胎蛋白就已经升高，所以肝硬化、慢性肝炎病人、家族中有肝癌患者的人应该根据自己的情况做定期的检查。
因此，甲胎蛋白对肝癌的早期诊断具有一定的意义。
AFP临床应用及其检测
AFP临床应用及其检测AFP临床应用及其检测1. 简介AFP（Alpha-fetoprotein），又称甲胎蛋白，是一种在胎儿中产生的蛋白质。
AFP在正常情况下在胎儿怀孕期间被产生，然后在出生后迅速下降至低水平。
然而，在一些疾病状态和恶性肿瘤中，AFP的水平会显著升高。
因此，AFP检测在临床中被广泛应用于早期肿瘤筛查和肝癌、睾丸癌等疾病的诊断和监测。
2. AFP检测方法2.1 血清AFP测定血清AFP测定是最常用的检测方法之一。
通过血液样本中的酶免疫化学发光法（ECLIA）或免疫层析法等技术手段，测定血清中的AFP浓度。
结果可快速得出，具有简便、快速、非侵入性等优点。
2.2 妊娠前诊断在孕妇妊娠期间，AFP水平的异常变化可以用于妊娠并发症的早期筛查，如神经管缺陷等。
妊娠期AFP的检测常通过血清AFP测定或羊水中的AFP测定实现。
2.3 肝癌检测与诊断AFP的水平在肝癌患者的血清中常常升高。
因此，在高危人群中的AFP检测常用于早期肝癌的筛查和诊断。
结合其他检测指标如肝功能、超声、磁共振等，能提高肝癌的检测准确性。
2.4 睾丸癌检测与监测AFP的水平在睾丸癌患者的血清中往往升高。
AFP的检测可以用于睾丸癌的早期诊断、疗效评估和预后监测。
3. AFP检测的临床应用3.1 肿瘤筛查AFP的测定常用于肿瘤筛查，旨在早期发现和诊断肝癌、睾丸癌等恶性肿瘤。
3.2 肝癌患者的监测AFP的水平可以用于监测肝癌患者的疗效和复发情况。
通过定期检测AFP，可以及早发现疾病的进展和复发。
3.3 妊娠并发症筛查AFP的检测可以用于早期筛查妊娠期间的并发症，如神经管缺陷等。
4. 附件本文档涉及下列附件：- 附件1：AFP检测结果表格样本- 附件2：AFP测定方法详细说明5. 法律名词及注释- AFP（Alpha-fetoprotein）：甲胎蛋白的英文缩写，是一种在胎儿和少数成人中产生的蛋白质。
- ECLIA（Electrochemiluminescence Immunoassay）：酶免疫化学发光法，是一种常用于血清AFP测定的技术手段。
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甲胎蛋白 AFP 操作规程
一、测定原理
两位点的免疫发光法（夹心法原理），两个不同的高度特异的单克隆抗体分别用于固相的（磁颗粒）包被及示踪物。
二、试剂组成
2.3ml磁颗粒磁颗粒表面包被单克隆抗体
1.0ml定标液，低1.0ml定标液，高
23ml示踪物溶液：标记上异鲁米那的单克隆抗体
25ml缓冲液；25ml稀释液
三、操作步骤
1.按仪器操作要求准备好仪器。
2.试剂准备
在揭开密封纸之前，先轻轻地水平摇晃试剂整盒（为了防止泡沫形成！）。
揭开密封纸，来回地转动磁颗粒区的小轮，直到悬浮液的颜色变成棕色。
该步骤使磁颗粒重新悬浮。
将试剂盒放入仪器试剂区，等待30分钟。
在此期间，磁颗粒自动地被搅拌并完全地重新悬浮。
3.样本准备
按标准程序采集离心样本，在2-8℃下可保存24小时，如需保存更长时期：冷冻至–20℃，避免反复冰冻和解冻，被保存的样本在使用之前应被彻底地混匀。
4.定标
通过测量定标物，预先定义的主曲线上的每个定标点将被调整（重新定标）为一个新的、仪器特异的测量水平。
有下列情况需重新定标：
每改变一次批号（指试剂整盒或者激发试剂而言）；每过两星期或每使用一个新的试剂盒；LIAISON分析仪的每次维护之后；当质控值不在期望范围之内时，房间温度的变化过大时。
5.编写标本号，选定项目AFP，放置标本，按下开始工作键。
6.结果的计算
LIAISON分析仪借助于由主曲线两点定标而得到的一条定标曲线，自动地计算每一个样本的AFP浓度，结果以IU/ml表示。
1 ng AFP = 0.83 IU AFP。
五．测量范围
LIAISON分析仪AFP试剂能准确测量的浓度值在0.2 – 1000 IU/ml 之间。
六．参考范围
1.血清中的AFP值﹤20ng/ml。
2.怀孕期间，母体血液中的AFP值不断升高，在第28周与32 周之间达到最大值，第32 周之后再次下降。
七．干扰物质
该方法不受黄疸（胆红素<12.5mg/dl）、溶血（血红蛋白<16mg/dl）、脂血（甘油三酯<12.5mg/ml）等干扰
八．临床意义
AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。
70－95%的原发性肝癌患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高。
但尚未发现AFP 含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系。
AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。
在转移性肝癌中，AFP一般低于350-400 IU/ml。
AFP 中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。
孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂,无脑症,食管atresia或多
胎,AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down's综合征的危险性。
九．参考文献
1.LIAISON分析仪AFP试剂说明书。
2. 全国临床检验操作规程（第二版）。