甲胎蛋白(化学发光法)检测操作规程
甲胎蛋白( AFP )标准操作程序SOP文件
3，蒸溜水洗板5次。
4，加入酶标液150 ul，混和5秒。
5，室温放置30分钟，洗板5次。
6，加入已配好显色剂200 ul,室温放置20分钟。
7，加入终止液50 ul，450 nm比色。
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-26
甲胎蛋白( AFP )
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
2、试剂盒用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
4、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。
5、若浓缩洗涤液出现结晶，可于37℃放置至溶解。洗涤要充分，各孔均需加满，防止孔口内游离酶不能洗净。
[原理]
本试剂盒采用针对不同抗原决定簇的双单克隆抗体制备成包被板和酶标记物，利用夹心法检测人血清或血浆中AFP含量，具有灵敏度高、特异性强等优点。
[试剂厂家]
Everlong Inc.
[试剂盒组成]
1、包被板条96孔4、AFP标准品：0,5,20,50,150,300 ng/ml
2.标本稀释液5.显色剂A，B
6、对AFP弱阳性，建议复查并定期动态观察。检测AFP为辅助诊断指标之一，确诊需结合临床等综合判断。
3、酶标记物溶液6.终止液
[标准品]
试剂盒配置的标准物
[试剂的稳定性与贮存]
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。
[标本的收集与处理]
标本为血清、肝素或EDTA抗凝血浆。
[校准方法]
利用标准品制备曲线。
[操作步骤]
1.加入20 ul标本及标准品后，再加入100 ul标本稀释液，混和10秒。
甲胎蛋白(AFP)测定
授课对象：06级检验1-5班
课时：2学时
甲胎蛋白（AFP）测定
目标：1.掌握ELISA法测定AFP的原理及注意事项
2.熟练地进行AFP测定
3.了解AFP测定的主要临床意义
实验用品：AFP测定试剂盒、酶标仪
内容：
原理：
本试剂盒采用针对抗原不同，决定簇的双单克隆抗体分别制备成包被板和酶结合物，利用ELISA双抗夹心法原理检测人血清中AFP含量。
操作步骤：
1. 加样：将包被孔编号，留1孔作空白对照，其余孔用微量加样器依次加入标准及待测样品各100ml。
2．孵育：置37℃温育30min。
3．洗涤：甩去孔内液体，在各孔内加入洗涤液2滴，轻轻震荡3~5次，
弃之，然后用蒸馏水加满各孔，甩掉；反复5次最后在吸干纸上拍干。
4．加酶结合物：每孔加入酶结合物100ml，空白孔不加。
5．置37℃温育15min。
6．重复步骤“3”。
7．显色：每孔加入底物50μl，再加显色剂50μl，充分混匀，室温避光反应2~5min。
8．终止：每孔加终止液50μl，终止反应。
参考范围：0~20 μg/L
注意事项：
1．操作前请仔细阅读说明书，应严格控制反应温度和时间。
2．试剂盒使用前要充分恢复到室温。
3．洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗涤过猛过急，而致假阴性。
课后小结：。
甲胎蛋白(AFP)测定(化学发光法)
4 操作步骤
1 开机前检查
a 察看电源是否正常安全通电
b 推主机下部的前门，打开后检查洗净水与分注液的用量是否满足当日
用量废试样杯与废吸嘴是否丢弃
2 开机
a更换75%酒精，放置基质液
b 打开电脑主机及AIA-1800电源, 点击主业面进入root
c 试样吸嘴的设置及酶标识试剂，检体稀释液的设置，按主机操作版面
Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩，将酶
标识试剂，检体稀释液设置在试剂托架上，将条形码
标识面朝前
d 试剂杯的设置，按主机操作版面的Cup Sorter键，LED指示灯
变为绿色，拉开分类器抽屉将试剂托盘设置在分类器托盘上，将分类器
抽屉推到底
3 开机日检
4 日检通过后，进行标本检测，在树形菜单上进入界面设置标
本检测项目，Assay键点击开始测定
5 测定完毕后，按主机操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip键，LED指
示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩及分类器抽屉，收集试剂放入冰箱，
更换基质液，放置75%酒精
6 点击关机，待窗口消失，关闭AIA-1800电源，在关闭电脑及主电
源
5 质量控制：
每批试剂都要使用东曹公司标准品作质量控制，请参见AIA-1800仪器操作手册。
AFP(甲胎蛋白)标准操作程序SOP文件
存放在2-8度，切莫倒置。
未开封，可稳定至标明的保质期。
开封后，2－8度，12周；
放在Elecsys2010，8周；（室温20－25度；开盖时间累计不超过20小时）。
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-02-03
AFP（甲胎蛋白）
版序：ABCD
页码：第3页，共4页
标本采集和准备：
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
试剂：
M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。含防腐剂。
R1：生物素化的抗AFP单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。含防腐剂。
R2：Ru(bpy)32＋标记的抗AFP单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。含防腐剂。
连续性低阳性患者1年内肝癌发生率比正常者高。对低阳性患者的随访有助于早期诊断。低阳性性患者同时伴有肝硬变及慢性肝炎时，肝癌的危险性更大。
孕妇血清/羊水AFP检测
反映胎儿状态。母体血清AFP异常增高时可能提示胎儿患低氧症、宫内死亡、遗传缺陷、先天性神经管缺损、无脑儿、脊柱裂等。
胎儿有先天性肾病综合症、先天性食管及十二指肠闭锁、性染色体异常、脑积水、及法乐四联症时，羊水中AFP可明显增高。
·Elecsys2010分析仪
·Elecsys系统缓冲液（ProCell）
·Elecsys测量池清洗液（CleanCell）
·Elecsys添加剂液（SysWash）
·Elecsys系统清洗液支架（Adapter for SysClean)）
·Elecsys 2010反应杯（Assay Cup）
·Elecsys 2010吸样头（Assay Tip）
甲胎蛋白检测SOP文件(iFlash3000)
1.检验目的：本试剂盒用于定量测定人血清和（或）血浆中的甲胎蛋白。
2.检验原理：3.性能参数：3.1线性范围：用线性参考品进行测定，在1.0ng/mL ～1500.0ng/mL 范围内。
3.2最低检测限：≤1.0 ng/mL 。
3.3准确度：测量结果的相对偏差应在±10.0%范围内。
3.4重复性:变异系数（CV ）应不大于10.0%。
3.5批间差:3个批号试剂之间的批间变异系数（CV ）应不大于15.0%。
4.样品要求：4.1检测标本：血清和血浆（肝素锂、肝素钠、EDTA 和柠檬酸钠抗凝）是推荐使用的样本类型。
尚未验证其他抗凝剂能否适用。
4.2采集及处理：在进行离心操作前需让血清样本完全凝结（凝结时间不小于1小时）。
所有的待测样本在测试前均应进行离心操作。
顶部含脂质的离心样本，需转移澄清、无脂质的部分到新的样本管中。
在测试前，确保已去除了残余的纤维蛋白和细胞类物质。
应小心处理患者样本，避免交叉污染。
在测试前，确保患者样本、校准品、质控品均已平衡至环境温度（20-25°C ）。
为避免蒸发可能带来的影响，样本和校准品应在上机后2小时内完成测试。
4.3样品储存：在室温（20-25°C ）下，样本保存时间不得超过8小时。
若在8小时内无法完成测试，应将样本在2～8°C 冷藏保存。
在2～8°C 的保存情况下，标本保存时间不得超过3天。
长期保存，应将样本在-20°C 保存。
冷冻样本在融化后必须进行充分混匀。
样本冷冻次数不得超过1次。
5.设备和试剂：5.1仪器：iFlash 3000化学发光免疫分析仪。
5.2试剂：甲胎蛋白测定试剂盒（化学发光法）；包装量：2×50人份/盒； 5.3储存要求：（1）储存：存放在2-8°C ，保持竖直向上。
（2）有效期：试剂瓶及校准品未开封存放于2-8°C：可稳定365天；试剂瓶使用后存放于2-8°C或在机存储：可稳定28天；校准品复溶后在-20°C保存：可稳定28天（仅可冻融一次）。
SOP文件：甲胎蛋白(AFP)1
宁城县中蒙医院赤峰市精神病防治院检验科CLinLab.NCXZMYY(CFSJSBFZY)甲胎蛋白（AFP）标准操作程序编号：日期：版本：第页共页1、变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。
2、范围：测定人血清、血浆、体液中的甲胎蛋白。
3、操作程序：使用仪器：日本东曹AIA-600II型全自动化学发光免疫分析仪生产厂商名称：日本东曹株式会社注册号：国食药监械（进）字2007第2400371号3.1、测定原理:本试剂盒使用的是高亲合性抗AFP抗体，并采用一步EIA夹心法定量检测人血清和体液中的AFP含量，可用于原发性肝细胞癌、肝炎、肝硬化、怀孕后期的诊断，治疗过程中的监视以及治疗后的效果评价3.2、试剂：E-test（TOSOH）Ⅱ（AFP）免疫反应试剂3.3 操作步骤3.3.1、在试剂Cup中加入100微升缓冲液和25微升标准品或稀释后的样品溶液，在磁石磁珠振动器上搅拌，在37℃下使抗原抗体反应进行10分钟3.3.2、用洗脱液冲洗试剂Cup，除去其中游离的酶联标记抗体和样品成分（B·F分离）。
3.3.3、加入基质液后，在磁石磁珠振动器上搅拌同时用荧光检测器检测荧光物质的荧光强度，激发波长363nm，荧光吸收波长447nm，并计算出荧光物质的生成速度。
3.3.4、根据标准液检测绘制的荧光物质生成速度标准曲线，计算出样品中AFP的浓度。
3.3.5、如果检测结果超过400ng/mL时，要用样品稀释液提高稀释倍数重新稀释，并按照（1-4）步骤检测。
3.4、结果判定3.4.1、应用E-test（TOSOH）Ⅱ（AFP）标准品试剂盒绘制标准曲线，从曲线中计算出样品中AFP的浓度。
3.4.2、分析225例健康者血清中AFP浓度的检测结果，所得的参考标准范围是0.9-7.6ng/ml。
其中，参考标准范围因为很容易受其他各种因素影响，所以希望各单位自行设定。
4、注意事项：1. 本品是一种体外诊断用试剂，禁止以其他目的使用。
AFP(甲胎蛋白)标准操作程序SOP文件
孕妇血清/羊水AFP检测
反映胎儿状态。母体血清AFP异常增高时可能提示胎儿患低氧症、宫内死亡、遗传缺陷、先天性神经管缺损、无脑儿、脊柱裂等。
胎儿有先天性肾病综合症、先天性食管及十二指肠闭锁、性染色体异常、脑积水、及法乐四联症时，羊水中AFP可明显增高。
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-02-03
AFP（甲胎蛋白）
版序：ABCD
页码：第4页，共4页
定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：
·一个月（同一批号试剂）
·7天（放置仪器上的同一试剂盒）
·根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。
3）年龄因素：AFP对原发性肝癌的诊断率随患者年龄的增加而逐渐下降。对老年人AFP正常或轻微升高不能排除肝癌的可能性。
4）预后：原发性肝癌血清AFP水平与预后有关。肝癌切除后AFP能否正常或上升是判断预后的关键因素。
其他肿瘤
部分卵黄囊肿患者血清AFP上升；
胃癌、结肠癌等内胚层衍生的组织发生的癌，即使未发生肝转移也合成AFP；
·Elecsys2010分析仪
·Elecsys系统缓冲液（ProCell）
·Elecsys测量池清洗液（CleanCell）
·Elecsys添加剂液（SysWash）
·Elecsys系统清洗液支架（Adapter for SysClean)）
·Elecsys 2010反应杯（Assay Cup）
·Elecsys 2010吸样头（Assay Tip）
甲胎蛋白操作规程sop
甲胎蛋白测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：甲胎蛋白测定（缩写AFP）；组合项目申请：肿瘤标志物检查。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆标本，用肝或EDTA抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在60min内将标本离心分离出血清(浆), 避免溶血。
离心必须达到4000rpm×15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定2d，在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。
3 方法原理甲胎蛋白测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：第一步：将标本与包被着AFP单克隆抗体的超顺磁性磁珠和另外一种小鼠AFP 单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵化，标本中的AFP和包被在磁珠上的AFP抗体结合，同时AFP抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中同一AFP 上不同的抗原结合位点结合。
在反应管内孵化完成后，结合在固相上的物质将之与一个磁场内被吸住，洗去未结合的物质。
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甲胎蛋白检测操作规程
【检验原理】
产品采用双抗体来心法定量测定人血清中的甲胎蛋白(AFP)的含量。
在微孔版的孔内先包被了识别抗AFP的单克隆抗体,用辣根过氧化酶标记另一株与之配对的单克隆抗体。
待测孕妇血清样本中的AFP与包被的和酶标记的两株单克隆抗体形成夹心抗原抗体反应。
再加上发光底物,用微孔板发光分析仪读取发光数值,发光值与待测血清中AFP含量成正比。
【储存条件及有效期】
试剂盒于2-8℃避光贮存，不得冻存,有效为12个月。
开封有效期:板条开封后2-8C存放效期为3个月,其他液体组份同成品试剂盒效期。
【检测仪器及试剂】
仪器：重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪
试剂：潍坊康华甲胎蛋白检测试剂盒（化学发光法）
【样本要求】
抽取静脉血3mL,置一次性采血管内,充分离心,吸取血清,不应有溶血及细胞颗粒:血清标本4℃存放最好不要超过3天,若不能及时检测,应-20℃冻存,检测时应将标本融化后混合均匀,并避免反复冻融。
【检验方法】
手工操作步骤:
1、将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡30分钟
2、,将浓缩洗涤液按1:40的比例稀释,摇匀备用,作为应用洗涤液
3、根据AFP参考品、质控品及待测标本确定所需孔数。
4、直接取AFP参考品、质控品及标本各25微升加入相应孔内,再每孔加入50 微升AFP酶结合物,用振荡器振荡30秒钟(此步非常重要),盖上封板膜,置37℃温浴1小时。
5、取出,用应用洗涤液洗涤5次,洗涤时每孔注满洗涤液,停留10秒后吸尽拍干。
6、根据使用量,将底物液A、B按1:1混匀,现用现配。
每孔加入50微升,用振荡器振荡20秒钟,设定每孔测量时间为1秒,于10-20分钟内测定结果。
仪器操作步骤：
按照重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪操作规程检测。
【参考区间】
测定正常人血清样本并结合参考文献的报道,建议正常参考值范围如下:
正常人血清中AFP浓度<20ng/mL
若用于产前筛查,应结合相应的风险分析评估软件使用。
由于地区及人群的差异,以上范围仅供参考,各实验室在长期实践中应建立本实验室自己的正常参考值范围。
【检验结果的解释】
AFP质控品Q1浓度应为2.5-7.5ng/mL,质控品Q2应为105~195ng/mL
【检验方法的局限性】
1、每次检测必须做AFP标准曲线,不能使用以前做过的标准曲线。
2、含大量脂质、严重黄及溶血或加热灭活之标本均可能影响检测结果。
3、建议按《产前诊断技术管理办法》的有关规定使用本品
4、本品仅用于人血清的测定,不得使用抗凝血浆。
5、用其他方法得出的AFP浓度值与本品测定结果不具有直接的可比性,应结合其他有关的临床诊断结果作
解释
6、本试剂盒超出标准曲线范围的样品应适当稀释后测定其准确值。
【产品性能指标】
1、最低检测限:不高于1.ong/mL
2、剂量-反应曲线的线性:在线性区间1.0ng/mL-600ng/mL内,剂量反应曲线相关系数(r)不小于0.9900。
3、准确度:相对偏差不超过士10.0%。
4、精密度:分析内精密度:手工操作试剂盒CV不高于10.0%,全自动操作的试剂盒CV不高于8.096:分析间精密度(仅限手工操作试剂盒)CV不高于15.0%;批间精密度CV不高于15.0%。
5、特异性:10份正常血清的检测结果均不高于20.0ngmL
【注意事项】
1、本试剂盒仅限于体外诊断用,一个试剂盒应作为整体应用,并请在有效期内使用。
2、浓缩洗涤液会有结晶析出,可于37℃水浴溶解,不影响使用。
3、试剂用前应摇匀,标本不可反复冻融。
4、请将拆封后未用完的包被板条,放入自封袋内封紧保存,请勿受潮。
5、洗涤时各孔需加满洗涤液,防止孔中有游离酶不能洗净。
6、样本中加入120IU/mL类风湿因子、80mgdL胆红素、3000mgdL甘油三酯对检测结果未产生影响:样本中含2000mg/dL血红蛋白导致假阳性,建议不使用溶血样本。
7、试剂各组分皆经灭活处理,但仍应视为具有潜在感染性。
8、本试剂盒仅供体外筛查用,高危者必须依靠染色体分析做最终判断。