分光光度计标准曲线法和标准管法的优缺点
02 生物化学实验--酚试剂法(改良Lowry法)测定血清蛋白质含量
酚试剂法（改良 Lowry 法）测定血清蛋白质含量【目的】1 ．掌握酚试剂法测定蛋白质含量的含量与操作技术。
2 ．熟悉标准曲线的制作方法和分光光度计的应用。
【原理】蛋白质分子中所含的肽键在碱性溶液中与 Cu 2+ 络合产生紫红色化合物 ( 双缩脲反应 ) ，同时使肽链展开，其中带有酚基的酪氨酸残基充分暴露，后者在碱性条件下使酚试剂中磷钨酸 - 磷钼酸还原，生成钼蓝和钨蓝的化合物，其蓝色深浅与蛋白质含量成正比，与已知浓度的标准蛋白质溶液进行比色，即可计算出测定样品中蛋白质的含量。
酚试剂法测定样品中蛋白质的含量，其特点为方法简便，灵敏度高，能够测定2 ～100 μ g 的微量蛋白质。
其方法比凯氏定氮法操作简便，其灵敏度比双缩脲法高 100 倍左右。
因此经常被用于科研与临床检验。
【器材】1 ．座标纸2 ． 50ml 容量瓶3 ． 722 型分光光度计【试剂】1 ．碱性铜试剂甲液称取无水碳酸钠 2 . 0g ，溶于 0 . 1mol ／ L 氢氧化钠溶液 100ml 中。
乙液取硫酸铜(CuSO 4 ·5H 2 O) 0 . 5g 溶于 1 ％酒石酸钾溶液 100ml 中。
临用前取甲液 50ml, 乙液 1ml 混合，即为碱性铜试剂。
2 ．标准蛋白质溶液 ( 0.25g /L)准确称取结晶人血清清蛋白 25mg ，溶于 0 . 9 ％氯化钠溶液中，以容量瓶定容至 100ml 。
3 ． 0 . 9 ％氯化钠溶液4 ．酚试剂（有成品出售）取钨酸钠(Na 2 WO 4 ·2H 2 O) 100g 和钼酸钠(Na 2 MO 4 ·2H 2 O) 25g , 溶于 700ml 蒸馏水中，再加入 85 ％磷酸 50ml 和浓盐酸 100ml 混合，置于1500ml 圆底烧瓶中温和地回流 10h ，回流结束后加入硫酸锂(LiSO 4 ·H 2 O) 150g ，水 50ml ，溴 3 ～ 4 滴，除去回流装置，继续沸腾 15min ，以除去剩余的溴，冷却后稀释至 1000ml ，过滤，溶液应呈黄色或金黄色 ( 如带绿色者不能使用，应继续加溴煮沸 ) 。
原子吸收光谱测定自来水中钙,镁的含量——标准曲线法
(5)计算机系统：将电信号以适当形式（如峰形、数值）表现出
来。Βιβλιοθήκη 石墨管 石墨炉分光现象
3.原子吸收分光光度计的应用： --------金属元素的含量测定（定量）
原子吸收定量基础 朗伯-比耳定律
吸光系数
A lg I0 KLN I
火焰中被测元素 的基态原子数
光程：光经过原子 蒸气的距离
原子吸收光谱测定自来水中钙镁的含量标准曲线法原子吸收标准曲线氨氮的测定标准曲线葡糖糖标准曲线的测定trolox标准曲线的测定原子吸收镍标准曲线氨的测定标准曲线原子吸收光谱法测定铅标准曲线标准曲线怎么做
原子吸收光谱法测自来水中钙镁含量 目的要求：
1.掌握原子吸收分光光度法的基本原理 2.了解原子吸收分光光度计的主要结构及操作方法 3.学习使用标准曲线法进行定量分析
空白
1
样品浓度 mg/L
吸光度A
5、做Ca的A～C曲线，求得自来水中钙的含量。
问答题 ：
• 1.简述原子吸收光谱的基本原理？ • 2.标准曲线法测定样品浓度时,应注意哪些
事项？ • 3.开机、关机顺序？为什么？
原子吸收光谱分析
1.基本原理： AAS是基于待测基态原子对特定的谱线(通常是待测
元素的特征谱线)的吸收作用的一种定量分析方法。
2.原子吸收分光光度计的基本构造及主要功能：
☆光源 ☆原子化系统 ☆分光系统 ☆检测系统 ☆计算机系统
(1)光源：发射待测元素的锐线特征共振线 (2)原子化系统：产生待测元素的原子蒸气 (3)光学系统：将待测元素所需的共振吸收线与邻近谱线分开 (4)检测系统：将光信号转换成电信号，将信号放大并对检测数
(3) 自来水样，直接取自来水为样，不需稀 释。
原子吸收分光光度法
特点：常温测量；灵敏度、准确度较高（汞可达10-8g）
四、分光系统：单色器
1.作用 将待测元素的共振线与邻近线分开。 2.组件 色散元件（棱镜、光栅），凹凸镜、狭缝等。 3.单色器性能参数 （1）线色散率（D）两条谱线间的距离与波长差的比值 ΔX/Δλ。实际工作中常用其倒数 Δλ/ΔX （2）分辨率 仪器分开相邻两条谱线的能力。用该两条 谱线的平均波长与其波长差的比值λ/Δλ表示。 （3）通带宽度（W）指通过单色器出射狭缝的某标称波 长处的辐射范围。当倒色散率（D）一定时，可通过选择 狭缝宽度（S）来确定： W=DS
该法可消除基 体干扰；不能消 除背景干扰；
使用标准加入法应注意以下几点： （1）标准加入法的基础是待测元素浓度与其吸光度 成正比，因此待测元素的浓度应在此线性范围内。 （2）为了得到较为准确的外推结果，最少应采用4 个点来作校准曲线。加入标准溶液的量应适当，以 保证曲线的斜率适宜，太大或太小的斜率，会引起 较大的误差。 （3）本法能消除基体效应带来的影响，但不能消除 背景吸收的干扰。如存在背景吸收，必须予以扣除， 否则将得到偏高的结果。
二、基态与激发态原子的分配
共振线 波长/ nm Cs 852.1 Na 589.0 Nj/N0 T=2000 K 4.44×10-4 9.86×10-6 T=3000 K 7.24×10-3 5.88×10-4 T=4000 K 2.98×10-2 4.44×10-3 T=5000 K 6.82×10-2 1.51×10-2
2.标准加入法
取若干份体积相同的试液（cX），依次按比例加入不同 量的待测物的标准溶液（cO），定容后浓度依次为： cX ， cX +cO ， cX +2cO ， cX +3cO ， cX +4 cO …… 分别测得吸光度为：AX，A1，A2，A3，A4……。 以A对浓度c做图得一直线，图中cX点即待测溶液浓度。
磷酸根分光光度法
磷酸根分光光度法1. 简介磷酸根分光光度法是一种常用的分析方法，用于测定水溶液中磷酸根离子的浓度。
该方法基于磷酸根离子与特定试剂之间的化学反应，通过测量反应产物的吸光度来确定磷酸根离子的浓度。
2. 原理磷酸根分光光度法的原理基于磷酸根离子与钼酸根离子在酸性条件下反应生成磷钼酸盐，该盐在紫外可见光区域有明显的吸收峰。
反应的化学方程式如下：[ PO_4^{3-} + 12MoO_4^{2-} + 12H^+ Mo_{12}P_2O_{40} + 6H_2O ]磷钼酸盐的吸光度与磷酸根离子的浓度成正比，因此可以通过测量吸光度来确定磷酸根离子的浓度。
3. 仪器与试剂3.1 仪器•分光光度计：用于测量吸光度。
•常规实验室设备：如容量瓶、移液管等。
3.2 试剂•磷酸根标准溶液：已知浓度的磷酸根溶液，用于制备标准曲线。
•钼酸铵溶液：用于与磷酸根离子反应生成磷钼酸盐。
•硫酸：用于调节反应体系的酸碱度。
4. 操作步骤4.1 制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的磷酸根标准溶液，浓度范围应覆盖待测样品的浓度范围。
2.取一定体积的每个磷酸根标准溶液，加入容量瓶中，用去离子水稀释至相同体积。
3.分别使用分光光度计测量每个稀释后的磷酸根标准溶液的吸光度。
4.绘制磷酸根标准曲线，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。
4.2 测定待测样品中磷酸根离子的浓度1.取一定体积的待测样品，加入容量瓶中，用去离子水稀释至相同体积。
2.使用分光光度计测量稀释后的待测样品的吸光度。
3.使用标准曲线确定待测样品中磷酸根离子的浓度。
5. 注意事项•操作过程中应严格控制实验条件，如温度、pH值等，以保证实验结果的准确性。
•使用分光光度计时，应先进行零点校准，确保测量结果准确。
•试剂的选用应符合实验要求，并保证其纯度和稳定性。
6. 应用与优缺点6.1 应用磷酸根分光光度法广泛应用于环境监测、水质分析等领域，用于测定水体中磷酸根离子的浓度。
磷酸根离子是废水中的一种重要污染物，其浓度的测定对于环境保护和水质治理具有重要意义。
分光光度法实验报告
一、实验目的1. 理解分光光度法的基本原理及其在定量分析中的应用。
2. 掌握分光光度计的使用方法，包括光源的选择、波长调节、比色皿的清洗和校准等。
3. 通过实验，学会如何根据样品的吸光度与浓度之间的关系绘制标准曲线，并利用标准曲线测定未知样品的浓度。
二、实验原理分光光度法是一种基于物质对特定波长光的吸收特性进行定量分析的方法。
根据朗伯-比尔定律，当一束单色光通过均匀的溶液时，溶液的吸光度与溶液中溶质的浓度和光程成正比。
公式表示为：A = εlc，其中A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程（通常为比色皿的厚度），c为溶液的浓度。
三、实验仪器与试剂仪器：1. 分光光度计2. 比色皿3. 移液管4. 容量瓶5. 烧杯试剂：1. 标准溶液：已知浓度的待测物质溶液2. 未知溶液：待测浓度的溶液3. 水为GB/T 6682规定的二级水或去离子水四、实验步骤1. 仪器准备：- 开启分光光度计，预热30分钟。
- 调节光源，选择合适的波长。
- 清洗比色皿，并用待测溶液润洗3次。
2. 标准曲线绘制：- 取若干个比色皿，分别加入不同浓度的标准溶液。
- 用移液管准确移取一定体积的标准溶液于比色皿中，加入适量的溶剂，摇匀。
- 将比色皿放入分光光度计中，记录吸光度值。
- 以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 未知溶液浓度测定：- 取若干个比色皿，分别加入一定体积的未知溶液。
- 用移液管准确移取一定体积的未知溶液于比色皿中，加入适量的溶剂，摇匀。
- 将比色皿放入分光光度计中，记录吸光度值。
- 在标准曲线上找到对应的吸光度值，即可得到未知溶液的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：通过实验，成功绘制了标准曲线，证明了朗伯-比尔定律在分光光度法中的应用。
2. 未知溶液浓度测定：根据标准曲线，准确测定了未知溶液的浓度。
六、实验总结本次实验通过分光光度法测定了未知溶液的浓度，成功实现了定量分析。
实验过程中，掌握了分光光度计的使用方法，学会了如何绘制标准曲线和测定未知溶液的浓度。
原子吸收分光 光度法
一、 原子吸收分光光度法的特点
❖ 特点：
1. 灵敏度高，检出限低，10-10～10-14g； 2 .准确度高，1%～5%； 3. 选择性高，一般情况下共存元素不干扰； 4. 仪器简单价格低廉 ； 5 .分析速度快,仪器简单价格低廉； 6 应用范围广，可测定70多个元素，常用于微量
试样分析。
一、 原子吸收分光光度法的特点
园林构图的基本规律
❖ 节奏与韵律
所谓韵律与节奏即是某些组成因素作有规律的重复 ，在重复中又组织变化。韵律与节奏能赋予园林以 生气活跃感，表现出情趣和速度感。重复是获得韵 律的必要条件，但只有简单的重复则易感单调，故 在韵律中又要有节奏上的变化。
园林构图中的韵律与节奏方式：简单韵律 、交替韵 律 、渐变韵律、起伏韵律、拟态韵律、交错韵律
产生共振吸收线（简称共振线） 吸收光谱
激发态-基态 发射出一定频率的辐射。
产生共振发射线（也简称共振线） 发射光谱
（2）元素的特征谱线
❖ 各种元素的原子结构和外层电子排布不同 基态第一激发态:
❖ 跃迁吸收能量不同——具有特征性。 ❖ 各种元素的基态第一激发态 ❖ 最易发生，吸收最强，最灵敏线。特征谱线。 ❖ 利用原子蒸气对特征谱线的吸收可以进行定量分析
❖ 园林中的景
是指在园林绿地中，自然或经人工创造的，以能引 起人的美感为特征的一种供作游憩观赏的空间环境 。
❖杭州西湖十景（断桥残雪、苏堤春晓、平湖秋月、三潭 映月、柳浪闻莺、雷峰夕照、曲院风荷、双峰插云、花 港观鱼、南屏晚钟）、燕京八景、圆明园四十景、避暑
赏景的方式
❖ 动态观赏——游
注重景观的体量、轮廓和天际线，沿途重点景物 应有适当的视距，注意景物的连续性、节奏性和 整体性。
水分析化学-第7章--分光光度法全篇
7.5 分光光度法在水质分析中的应用
7.5.4 水中氰化物的测定 预处理：将水样在酸性介质中进行蒸馏，把能形成氰化氢
的氰化物(全部简单氰化物和部分络合氰化物)蒸出，使之 与干扰组分分离。 异烟酸一吡唑啉酮分光光度法：
介质：中性 异烟酸—巴比妥酸分光光度法：
介质：弱酸性
7.5 分光光度法在水质分析中的应用
和10.00mL铵标准使用液（0.010 mg NH4+-N/mL）于50mL 比色管中，用无氨水稀释至标线，加1.0mL酒石酸钾钠溶 液，混匀。加1.5mL纳氏试剂，混匀。放置10min，在波 长420nm处，用光程2cm比色皿，以无氨水为参比，测量 吸光度。经空白校正后，绘制标准曲线。
7.4 光度测量误差和测量条件的选择
入射光波长、温度等有关。
L：吸光液层的厚度，光程，cm。 c：吸光物质的浓度，g/L或 mol/L。
7.1.2 溶液的吸光定律
3.朗伯比尔定律的局限性 定律本身的局限性：只适于稀溶液<0.01mol/L 化学偏离：被分析物质与溶剂发生缔合、离解、溶剂化反应，
产生不同的吸收光谱 仪器偏离：单色光不纯引起
7.1.2 溶液的吸光定律
4.朗伯比尔定律的适用条件
1)单色光：应选用max处或肩峰处测定，此时干扰组分、溶
剂等不吸收或有很弱的吸收 2)吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系，应控制条件(酸度、浓
度、介质等)。 3)稀溶液：浓度增大，分子之间作用增强
7.1.2 溶液的吸光定律
7.2 比色法和分光光度法
7.2.1目视比色法
用眼睛直接比较标准溶液
和待测溶液颜色的深浅，
来确定被测物质含量的方
法叫目视比色法，常用的 方法标准色阶法。
分光光度分析法
重庆大学化学化工学院
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2015年1月30日
在可见光，KMnO4溶液对波 长525 nm附近绿色光的吸收 最强，而对紫色和红色的吸 收很弱。λmax=525 nm。 浓度不同时，光吸收曲线形 状相同，λmax不变，吸光度不 同。
重庆大学化学化工学院
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2015年1月30日
* 单色器 单色器的作用是将光源发出的连续光谱分解为单色光 的装臵。分为棱镜和光栅。 * 比色皿也称吸收池或样品池。用于盛放试液的容器。 它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、厚度相 等的玻璃或石英制成，按其厚度分为 0.5cm ， lcm ， 2cm，3cm和5cm。 使用比色皿时应注意保持清洁、透明，避免磨损透 光面。 紫外光只能用石英比色皿； 可见光可用石英或玻璃比色皿。
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2015年1月30日
12.3.2 标准曲线法 借助分光光度计来测量一系列标准溶液的吸光度，绘制 标准曲线，根据被测试液的吸光度，从标准曲线上求得被 测物质的浓度或含量。
A
标液 A
1 C1 A1
2 C2 A2
3 4 5 C3 C4 C5 A3 A4 A5
2015年1月30日
12.3 光度分析的方法和仪器 12.3.1 目视比色法 用眼睛观察、从管口垂直向下观察（比色管），比较待 测溶液和标准溶液颜色的深浅，以确定物质含量的方法。
优点是仪器简单，操作简便，适宜 于大批试样的分析。灵敏度高，因为 是在复合光-白光下进行测定，故某 些显色反应不符合朗伯-比尔定律时， 仍可用该法进行测定。 主要缺点是准确度不高，标准系列 不能久存，需要在测定时临时配制。
第八章分光光度法
1.电磁波谱紫光波长：400~450nm红光650~750nm一、光的基本性质吸光光度法（分光光度法）：根据物质对光的选择性吸收来进行测定的一种方法可见光教材：199页，表8-1光学光谱区（真空紫外）远红外中红外近红外可见近紫外远紫外10nm~200nm200nm ~380nm 380nm ~780nm 780 nm ~2.5 µm 2.5 µm ~50 µm 50 µm ~300 µm2. 光的波粒二象性波动性：λ=νC 粒子性：E波粒二象性：λC E=h ν=h结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)，光量子的能量越低。
单色光：具有相同能量(相同波长)的光。
混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起，例如白光。
h 为普朗克常数：6.63×10-34J.s二、物质对光的选择性吸收1.物质对光的选择性吸收青（蓝绿）红橙黄绿绿蓝蓝紫物质的分子具有一系列不连续的特征能级，通常分子处于能量最低的基态，吸收了一定入射光的能量后产生能级跃迁，进入能量较高的激发态，当入射光的能量与物质分子的某一能级差恰好相等时，才有可能发生能级跃迁（1）（2）基态第一激发态第一激发态λC E=h ν=hλ/nm:650~700λ/nm:400~450λmax 440nm540nmAλnmK 2Cr 2O 7KMnO 4K 2Cr 2O 7和KMnO 4的吸收曲线定量分析基础定性分析基础c增大2．吸收曲线三、吸光光度法的特点1.灵敏度高（0.01克黄金/吨矿石）2.操作简便，测定速度快3.应用广泛，几乎可测所有无机离子，广泛应用于冶金，环境，生物，医学等领域吸收光谱峰的位置（λmax ）定性峰的高矮（吸收程度的大小）定量I a =I 0 -I一、朗伯-比尔定律I oIbSdx I a当一束平行单色光垂直照到某均匀溶液时，假设：液层厚度b ，截面积为s ，溶液浓度为c ，入射光强度为I 0，该溶液吸收光的强度为I a ，透过光的强度为I将b 切割为dx ，薄层中所含吸光质点数为dN ，入射光强度为I b ，穿过薄层后光的强度减弱了dI b-dI b = K 1I b dN dN = 6.02×1023cSdx -dI b = K 16.02×1023S cI b dx 令:K 2= 6.02×1023K 1S ∴-dI b = K 2I b cdx ，cdx K I dI 2b b =−∫∫=−bI I b b cdx K I dI20cb K I I20ln=−Kcb I I=−∴0lg303.22K K =令：液层厚度b ，截面积S ，吸光物质浓度c ，薄层中所含吸光质点数为dNI 0dx bII bI t根据光的量子理论：透光率或透射比T (0~1, 0~100%)定义透光率：I I T =定义吸光度：有意义的取值范围为∞-0KbcI I T A =−=−=0lglg 透过光强度入射光的强度朗伯-比尔定律的数学表达式Kcb I I=−0lgI II I A 00lg lg =−=朗伯-比尔定律朗伯-比耳定律是吸光光度法的理论基础，是用光度法进行定量测定的依据朗伯-比耳定律的物理意义：当一束平行单色光垂直通过某均匀溶液时，溶液的吸光度A 与液层厚度b 及吸光物质的浓度c 成正比：A= Kbc单色平行光均匀溶液注意：A=-lg= KcbI I 0吸光度与光程的关系A = K b c0.10b0.202b0.00光源检测器显示器参比吸光度与浓度的关系A = Kb c0.10c0.202c0.00光源检测器显示器参比二、光度法的灵敏度1．吸光系数a （吸收系数）当液层厚度b 以cm ，吸光物质的浓度c 以g/L 为单位时，朗伯-比尔定律表示为A = abca 称为吸光系数，单位为L/(g ⋅cm)在朗伯-比尔定律A = Kbc 中，系数K 在一定条件下是常数，表明用光度法进行测定的灵敏度KλT吸光物质性质K=cbA 2.摩尔吸光系数εc mol/L b cm εL/(mol.cm)A= bcεε吸光物质的灵敏度吸光物质对光的吸收能力ε=cbA 当液层厚度b 以cm ，吸光物质浓度c 以mol/L 为单位时，朗伯-比尔定律表示为二乙基胺二硫代甲酸钠（铜试剂，DDTC ）双硫腙ε436=12800 L/(mol.cm)CuCuε495=158000 L/(mol.cm)<ελT吸光物质性质λmaxεmaxA= -lgT = -lg0.603 = 0.220c=140×10-6112.4=1.25 ×10-6mol/Lε=bcA =2 ×1.25 ×10-60.220= 8.8×104 L/(mol.cm)例1 （203页，8-1），利用双硫腙光度法测Cd 2+,已知Cd 2+的质量浓度为140µg/L,比色皿厚度为2cm,在520nm 处测得透光率为0.603，求吸光度A 及摩尔吸光系数ε（M cd =112.4g/mol)解：A= εbcε=bc A A= εbc c mol/Lbcmmol/1000cm 3bc/1000mol/cm 2bcM ×1061000S(µg/cm 2)∴S=bcM ×103将代入得bc=εAS=εAM ×103µg/cm 23.桑德尔灵敏度SA=0.001时(检测极限)，单位截面积光程内所能检出吸光物质的最低含量µg/cm 2bc →单位截面积光程所能检出吸光物质的最低含量因为：A=0.001，代入上式：S 灵敏度ε灵敏度S=εM ∴例2（205页，8-2）、已知双硫腙光度法测定Cd 2+时ε520nm =8.8×104L/(mol ·cm)，求桑德尔灵敏度S.A=0.001时，单位截面积光程内所能检出吸光物质的最低含量µg/cm 2解，S=εM cd =8.8×104112.4=1.3 ×10-3µg/cm 2A= εbcS=εAM ×103例3，Fe 2+用邻二氮菲显色，当c=0.76 µg/ml,于波长λ510nm,吸收池厚度b=2.0cm 时,测得T%=50.2,求摩尔吸光系数和桑德尔灵敏度各为多少？(M Fe =55.85 g/mol)c= 0.76 µg/ml=7.6 ×10-4g/L=1.36 ×10-5mol/L由A=εbc 得:解：A=-lgT=-lg0.502=0.299ε=A bc =0.2992.0×1.36 ×10-5=1.1 ×104L/(cm.mol)S=εM Fe =1.1×10455.85= 5.1 ×10-3µg/cm 2三、利用朗伯-比尔定律进行定量分析A= εbc b 一定, λmax 一定，同一种物质，ε一定配制一系列标准溶液，由标准溶液：c 1, c 2, c 3……测得吸光度：A 1, A 2, A 3…...A 对c 作图工作曲线1.工作曲线法（标准曲线法）c (mg/ml)c 1c 2c 3c 4c 5A.....A xc x 工作曲线（标准曲线）A 1A 2A 3A 4A 5A 标A x=ε标b c 标εx b c x2.比较法：四、对朗伯-比尔定律偏离.工作曲线（标准曲线）A= εbccc 1c 2c 3c 4c 5A..原因：仪器或溶液的实际条件与朗伯-比尔定律所要求的前提条件不一致..A 总=-lg I t1+I t2I o1+I o2=-lgI o110-ε1bc +I o210-ε2bc I o1+I o2（一）、由于非单色光引起的偏移∴I t =I o 10-εbcA= εbc =-lgII o假设：入射光I oλ2I o2I t2A 2λ1I o1I t1A 1A 总=-lg10-εbc （I o1+I o2）I o1+I o2= εbc 造成偏离A 总= εbc若λ1与λ2相差很大，ε1= ε2=ε如果λ1和λ2相差不大，即∆λ= |λ1-λ2|很小，可以近似认为ε1= ε2= εA 总=-lg I t1+I t2I o1+I o2=-lgI o110-ε1bc +I o210-ε2bcI o1+I o2克服由非单色光所造成的偏离¾选择单色器（单色性能较好）¾选择入射光波长（λmax )¾选择适当的浓度范围（不应过高）浓度及非单色光的影响λ1λ2abA 5A 1A 4A 2λ3λ/nmA浓度: b>a波长: λ3>λ2>λ1A 3A 6（二）、由于溶液本身的化学和物理性质所引起的偏离1.由于介质不均匀所引起的偏离bI oI I a 发生散射：T 实I o -I a -I r=I o=II o2.由于溶液的化学反应所引起的偏离分析浓度或总浓度C 总吸光质点浓度C 质C工作曲线A=Kcb I r因为：T 实<T 理∴A 实>A 理T 理I o -I a =I o =I I o 吸光物质因解离、络合、缔合等化学变化而改变浓度如：Cr 2O 72-+H 2O 2CrO 42-+2H +λ=375nmλ=350nm单体：SNH +(CH 3)2NN(CH 3)22SNH +(CH 3)2NN(CH 3)22λmax = 660 nm 二聚体：λmax = 610 nmAcλmax = 660 nmAλ660 nm 610 nm亚甲基蓝阳离子（MB ）方便、较灵敏，准确度差（半定量）一、光度分析的几种方法1.目视比色法观察方向空白c 1c 2c 3c 4c x1).可以任意选择某种波长的单色光2).扩大入射光波长的范围3）灵敏度、准确度高2.光电比色法和吸光光度法：共同点：以朗伯-比尔定律为基础的仪器分析方法主要区别：获得单色光的手段不同光电比色法以滤光片为单色器，谱带宽度约有几十纳米吸光光度法以棱镜或光栅为单色器，谱带宽度约有几纳米光源单色器狭缝样品室检测器二、紫外-可见分光光度计氙灯氢灯钨灯1．光源卤钨灯。
分光光度法
♦为克服非单色光引起的偏离，首先应 为克服非单色光引起的偏离，
选择比较好的单色器。 选择比较好的单色器。此外还应将入 射波长选定在待测物质的最大吸收波 长且吸收曲线较平坦处。 长且吸收曲线较平坦处。
七 分光光度计
光源 单色器 样品室 检测器 显示
1. 光源 • 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连 续光谱，具有足够的辐射强度、 续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳 定性、较长的使用寿命。 定性、较长的使用寿命。 • 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范 可见光区：钨灯作为光源， 围在320～2500 nm。 围在 。 • 紫外区：氢、氘灯。发射 紫外区： 氘灯。发射185～400 nm的 的 连续光谱。 连续光谱。
溶液中CrＯ 的颜色不同， 溶液中CrＯ42-、 Cr2Ｏ72-的颜色不同，吸 Cr 光性质也不相同。 此时溶液pH 光性质也不相同。故：此时溶液pH 对测定有 重要影响。 重要影响。
3 物理性因素 • 朗伯—比耳定律的前提条件之一是入射光 朗伯— 为单色光。 为单色光。 • 难以获得真正的纯单色光。分光光度计只 难以获得真正的纯单色光。 能获得近乎单色的狭窄光带。 能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导 致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 • 非单色光、杂散光、非平行入射光都会引 非单色光、杂散光、 起对朗伯—比耳定律的偏离， 起对朗伯—比耳定律的偏离，最主要的是 非单色光作为入射光引起的偏离。 非单色光作为入射光引起的偏离。
三 紫外可见吸收光谱与有机分子 结构的关系
• 有机化合物的紫 可见吸收光谱， 外—可见吸收光谱， 可见吸收光谱 是其分子中外层价 电子跃迁的结果 三种）： 电子、 ）：σ电子 （三种）： 电子、 π电子、n电子。 电子、 电子 电子。 电子 • 分子轨道理论
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分光光度计是化学分析中常用的一种仪器，用于测量吸光度、透射率、反射率等参数，从而定量分析物质浓度。
在使用分光光度计进行分析时，有两种常用的方法：标准曲线法和标准管法。
本文将从深度和广
度方面对这两种方法进行全面评估，并探讨它们各自的优缺点。
一、分光光度计标准曲线法
1. 基本原理
标准曲线法是通过建立一系列浓度已知的标准溶液，测定它们的吸光度，然后绘制标准曲线（吸光度与浓度的关系曲线）。
利用标准曲线，可直接通过待测溶液的吸光度值确定其浓度。
2. 优点
（1）精确度高：标准曲线法通过多点拟合，可以得到较精确的浓度值。
（2）灵活性强：可以根据需要调整标准曲线的范围和斜率，适用于不同测量要求。
3. 缺点
（1）耗时耗材：建立标准曲线需要大量标准溶液和实验时间。
（2）可能存在误差：标准曲线法容易受到实验条件、操作技巧等因素的影响，导致测量误差。
二、分光光度计标准管法
1. 基本原理
标准管法是通过直接比较待测溶液的吸光度与标准溶液的吸光度来确定浓度。
通常是在同一仪器上分别测定标准溶液和待测溶液的吸光度值，然后进行比较计算。
2. 优点
（1）简便快捷：不需要建立标准曲线，节省了大量时间和实验操作。
（2）操作方便：只需进行一次测量，减少了实验中的操作环节和可能引入的误差。
3. 缺点
（1）精确度受限：标准管法受限于仪器本身精度和灵敏度，可能影响测量结果的精确度。
（2）适用范围窄：只适用于浓度较小的待测溶液，不适用于浓度较高或较低的情况。
总结回顾
分光光度计的标准曲线法和标准管法各有优缺点。
标准曲线法精确度高、灵活性强，但耗时、耗材，并且容易受误差影响；标准管法简便快捷、操作方便，但精确度受限，适用范围窄。
在实际应用中，可以根据实验要求和条件选择合适的方法进行分析。
个人观点和理解
在我看来，标准曲线法和标准管法各有其适用的场景。
对于需要高精
确度和灵活性的分析，我会首选标准曲线法；而在日常实验中，为了
节省时间和提高效率，标准管法也是一个不错的选择。
在实际实验中，可以根据实际情况进行灵活选择，以获得准确可靠的实验结果。
在本文的陈述中，我们深入探讨了分光光度计标准曲线法和标准管法
的优缺点，并共享了个人观点和理解。
通过这篇文章，希望我能更全面、深刻和灵活地理解这个主题。
时间不容许，文章写到这里作为初稿。
希望对你有所帮助，有需要再
继续完善。
分光光度计是一种广泛应用于化学分析领域的仪器，可以
用于测量物质的吸光度、透射率、反射率等参数，从而实现对物质浓
度的定量分析。
在使用分光光度计进行分析时，常用的方法包括标准
曲线法和标准管法。
接下来，我们将深入探讨这两种方法的原理、优
缺点，并结合个人观点和理解，为读者提供更全面的信息和参考。
让我们来深入了解分光光度计标准曲线法。
这种方法的基本原理是通
过建立一系列浓度已知的标准溶液，测定它们的吸光度，并绘制标准
曲线（吸光度与浓度的关系曲线）。
通过标准曲线，可以直接通过待
测溶液的吸光度值确定其浓度。
标准曲线法的优点包括精确度高和灵
活性强。
通过多点拟合，可以得到较精确的浓度值，且可以根据需要调整标准曲线的范围和斜率，适用于不同测量要求。
然而，标准曲线法也存在一些缺点，包括耗时耗材和可能存在的误差。
建立标准曲线需要大量的标准溶液和实验时间，同时容易受到实验条件、操作技巧等因素的影响，导致测量误差。
接下来，让我们来探讨分光光度计标准管法。
这种方法的基本原理是通过直接比较待测溶液的吸光度与标准溶液的吸光度来确定浓度。
通常是在同一仪器上分别测定标准溶液和待测溶液的吸光度值，然后进行比较计算。
标准管法的优点包括简便快捷和操作方便。
不需要建立标准曲线，节省了大量时间和实验操作，只需进行一次测量，减少了可能引入的误差。
然而，标准管法也存在一些缺点，包括精确度受限和适用范围窄。
受限于仪器本身精度和灵敏度，可能影响测量结果的精确度，且只适用于浓度较小的待测溶液，不适用于浓度较高或较低的情况。
总结回顾，分光光度计的标准曲线法和标准管法各有优缺点。
标准曲线法精确度高、灵活性强，但耗时、耗材，并且容易受误差影响；标准管法简便快捷、操作方便，但精确度受限，适用范围窄。
在实际应用中，可以根据实验要求和条件选择合适的方法进行分析。
个人观点和理解方面，我认为标准曲线法和标准管法各有其适用的场景。
对于需要高精确度和灵活性的分析，我会首选标准曲线法；而在
日常实验中，为了节省时间和提高效率，标准管法也是一个不错的选择。
在实际实验中，可以根据实际情况进行灵活选择，以获得准确可靠的实验结果。
分光光度计标准曲线法和标准管法都是化学分析中常用的方法，它们各有优缺点并适用于不同的分析要求。
在实际应用中，我们需要根据实际情况进行选择，并灵活运用这些方法，以获得准确可靠的分析结果。
希望本文的介绍和分析可以帮助读者更好地理解和应用这两种方法。